研究过氧麦角甾醇线粒体靶向衍生物(Mito-EP)对乳腺癌的影响及作用机制.采用MTT法检测不同浓度Mito-EP(0、0.075、0.15、0.3、0.6、1.2、2.4 μmol·L-1)作用于MDA-MB-231细胞后增殖抑制情况.将实验分为空白对照组,低、中、高浓度(0.15、0.3、0.6 μmol·L-1)Mito-EP组及过氧麦角甾醇(EP)0.6 μmol·L-1组,培养48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧水平、线粒体膜电位变化以及细胞周期分布,并在激光共聚焦显微镜下观察细胞凋亡、细胞活性氧及细胞线粒体膜电位变化;通过构建4T1皮下移植瘤模型体内验证Mito-EP对乳腺癌的抑制作用;采用Western blot法检测细胞及肿瘤组织内B 淋巴细胞瘤-2 基因(Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、细胞色素 C(Cyt C)、cleaved caspase-7、cleaved caspase-9 蛋白表达水平.结果表明,Mito-EP可呈浓度依赖性地降低MDA-MB-231细胞增殖率;与空白对照组相比,EP 0.6 μmol·L-1组细胞凋亡率、活性氧水平、线粒体膜电位变化不明显.与空白对照组相比,Mito-EP处理组细胞凋亡率明显增加(P＜0.05);活性氧水平明显升高(P＜0.05);线粒体膜电位明显降低(P＜0.05);Bax、Cyt C、cleaved caspase-7、cleaved caspase-9 蛋白表达显著上调,Bcl-2 蛋白表达显著下调(P＜0.05);肿瘤体积和质量明显减小.综上所述,Mito-EP可能通过激活线粒体凋亡途径促进乳腺癌细胞凋亡.

目的:探讨麦角甾醇对丙泊酚麻醉大鼠海马CA1区神经元的保护作用及机制。方法:将45只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、丙泊酚组和丙泊酚+麦角甾醇组，每组15只。对照组大鼠腹腔注射100 mg/kg脂肪乳溶剂；丙泊酚组大鼠先腹腔注射50 mg/kg丙泊酚，待翻正反射恢复后再次注射50 mg/kg丙泊酚；丙泊酚+麦角甾醇组大鼠腹腔注射30 mg/kg麦角甾醇，随后给予丙泊酚注射(方法同上)，均连续注射7 d。末次注射后大鼠均清醒2 h。采用透射电镜观察大鼠海马CA1区神经元的超微结构；采用HE染色、TUNEL和NeuN染色、免疫组化染色分别检测大鼠海马CA1区神经元的形态学变化、凋亡、突触后密度蛋白95(PSD95)的表达；采用Western blotting法检测大鼠海马CA1区凋亡相关蛋白和磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路蛋白的表达。结果:透射电镜、HE染色结果显示丙泊酚+麦角甾醇组大鼠海马CA1区神经元损伤程度较丙泊酚组减轻。与对照组比较，丙泊酚组大鼠海马CA1区神经元凋亡率升高，活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、Bax蛋白的表达升高，Bcl-2蛋白、PSD95的表达降低，凋亡诱导因子(AIF)、细胞色素C(Cyt-C)蛋白的表达升高，而Sirt1蛋白表达、磷酸化(p)-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt值降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。与丙泊酚组比较，丙泊酚+麦角甾醇组大鼠海马CA1区神经元凋亡率降低[(27.33±1.37)% vs. (17.47±0.87)%]，差异有统计学意义( P<0.05)。与丙泊酚组比较，丙泊酚+麦角甾醇组大鼠海马CA1区活化Caspase 3、Bax蛋白的表达降低，Bcl-2蛋白、PSD95的表达升高，AIF、Cyt-C蛋白的表达降低，而Sirt1蛋白表达、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt值升高，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:麦角甾醇预处理可抑制丙泊酚诱导的海马CA1区神经元凋亡并减轻神经元损伤，其机制可能由PI3K-Akt信号通路介导。

目的:研究18株野生云芝种质资源的农艺性状和药材品质,为筛选可供人工培育的高产优质云芝药材菌种提供理论参考.方法:测定18株云芝菌丝、子实体农艺性状及子实体多糖、浸出物、麦角甾醇含量和重金属含量,并进行综合评价.结果:菌株YUN5、HN04、JL3、NX17首茬子实体生物产量较高;菌株YUN4、YUN5、DB5、NX4子实体多糖含量均超过2020年版中国药典规定的3.2％;14个菌株子实体浸出物含量均超过药典标准规定的18％,YUN1、HN02、NX6、NX18未达药典标准.子实体中麦角甾醇含量最高菌株为NX4,达到0.58 mg/g;菌株YUN5、HN01、DB4、JL2、NX4子实体中Cr、Cu、As、Cd、Pb含量均未超过标准规定的限量值.结论:菌株NX4、DB5、YUN5在加权评分及主成分分析评价中排名前列且符合2020年版中国药典规定的云芝外观、多糖含量和浸出物含量要求,可作为优质云芝种质资源,同时也可作为云芝药材品质优良菌种;加权评分排名靠前的YUN2、YUN4以及主成分分析排名靠前的NX17子实体外观不符合药典要求,但菌株YUN4的多糖含量、菌株YUN2的浸出物和麦角甾醇含量、菌株NX17的麦角甾醇含量和单袋首茬产量上相对于其他菌株具有优势,可分别考虑作为有效成分提取的菌种资源.

目的 研究临床分离念珠菌对常用抗真菌药物的敏感性及耐药机制.方法 从肾结石伴泌尿系统念珠菌感染反复发作患者在药物治疗不同阶段的中段尿中分离得到9株病原菌并鉴定.微量液基稀释法检测药物最低抑菌浓度.PCR扩增ERG11和FKS1基因、测序并分析突变位点.气质联用检测药物作用下菌株的细胞膜甾醇成份及含量.采用实时定量PCR检测细胞膜外排泵相关基因及靶酶基因的表达情况.结果 菌种鉴定为光滑念珠菌.测序结果经比对后显示ERG11存在4处无义突变,FKS1存在18处无义突变.菌株对药物的敏感性及基因表达情况随临床用药而改变.唑类药物处理后细胞膜麦角甾醇减少,提示靶酶ERG11被药物抑制.结论 临床分离菌株的药物敏感性测试可指导临床用药.该光滑念珠菌耐药机制是由于靶酶高表达和外转运蛋白高表达引起.

目的 优化甘草汁制灵芝炮制工艺,评价炮制前后体外抗氧化、抗炎活性变化.方法 基于响应面法,运用层次分析法(AHP)和熵权法确定最佳炮制工艺;采用ABTS+、DPPH、羟自由基清除率的方法,评价多糖组分的抗氧化活性;采用ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α及NO的含量,评价三萜及甾醇组分的抗炎活性.结果 最佳炮制工艺为 1∶13 的甘草汁比例、4.4%的甘草用量以及 33 min的浸泡时间,炮制后总三萜及甾醇、水溶性浸出物的含量升高(P<0.01,P<0.05);炮制后的抗氧化活性增强(P<0.01);对炎症因子的抑制作用也优于生品.结论 所得炮制工艺稳定、可行;甘草汁制可促进灵芝成分溶出,协同其抗氧化、抗炎作用,且其抗炎活性的增强可能与麦角甾醇的溶出增加有关.

基于网络药理学方法探究过氧麦角甾醇(EP)抗乳腺癌的靶点及作用机制,并通过体外实验验证.采用网络药理学对EP作用靶点进行筛选,构建靶点网络及蛋白-蛋白互作(PPI)网络,对EP抗乳腺癌潜在的作用靶点及相关通路进行预测.采用MTT法检测EP对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制活性,克隆形成实验检测EP对MCF-7细胞增殖影响;采用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测细胞的凋亡情况、线粒体膜电位及活性氧水平的变化情况;通过Western blot法检测EP对B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸蛋白酶蛋白(caspase)-7、活化的caspase-7(cleaved caspase-7)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸激酶B(AKT)蛋白表达水平的影响情况.结果显示,经网络药理学预测,得出EP与乳腺癌有173个共同靶点;KEGG富集分析结果显示EP治疗乳腺癌结果主要在癌症通路、PI3K-AKT信号通路、细胞衰老信号通路、病毒致癌作用等信号通路;MTT结果显示,与对照组相比,EP组MCF-7细胞的活性明显降低,呈时间-浓度依赖趋势;EP能够抑制乳腺癌细胞MCF-7集落形成;采用10、20、40 μmol·L-1 的 EP作用MCF-7细胞24 h后,MCF-7细胞总凋亡率均显著升高,线粒体膜电位均显著降低,活性氧水平均显著升高;此外,MCF-7细胞经过EP处理后,细胞内Cyt C、Bax、cleaved caspase-7蛋白的表达水平上升,p-PI3K、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达水平下降.研究表明,EP可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,减少集落形成,其机制可能与PI3K-AKT通路介导线粒体凋亡途径有关.

探讨过氧麦角甾醇(ergosterol peroxide,EP)对人肝癌细胞凋亡的影响及其作用机制.利用cell counting kit-8(CCK-8)法检测 0(空白对照)、2.5、5、10、20、40、80 μmol·L-1的EP作用于HepG2、SK-Hep-1 细胞 24、48、72 h后的细胞活力,并计算24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50).正式实验以 0(空白对照)、10、20、40 μmol·L-1的EP与HepG2 细胞共培养 48 h后,使用活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光探针法检测EP对细胞内ROS的影响,使用线粒体膜电位荧光探针染色检测EP对细胞内线粒体膜电位的影响,使用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡数,使用AO/EB染色法检测不同浓度的EP对细胞凋亡形态的影响.使用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测不同浓度的EP 对线粒体凋亡途径相关蛋白B细胞淋巴瘤 2(Bcl-2)、细胞色素C(Cyt-C)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶 3(caspase-3)、活化的胱天蛋白酶 3(cleaved caspase-3)、胱天蛋白酶 9(caspase-9)、活化的胱天蛋白酶 9(cleaved caspase-9)蛋白表达的影响.结果表明,不同浓度的EP均可抑制肝癌细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性.与空白对照组相比,EP药物处理组ROS水平显著升高(P<0.05),线粒体膜电位显著下降(P<0.05),细胞总凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下调,Cyt-C、Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3 表达均显著上调(P<0.05).综上所述,EP可能通过调控线粒体介导的凋亡途径抑制肝癌细胞增殖,并诱导其凋亡.

糖尿病肾病是糖尿病最常见的并发症之一,是导致终末期肾病的常见原因,严重影响患者的生活质量及寿命.目前临床上主要通过药物控制原发病,延缓肾脏进展,当患者进入终末期肾病时仅能依靠肾脏替代治疗.而中医药在治疗糖尿病肾病时确有疗效,可延缓疾病进展,以冬虫夏草为主要活性成分的中成药在治疗糖尿病肾病的方面取得显著优势,具有补肾益肺、止血化痰的功效,其药用历史悠久且作用广泛.多项网络药理学研究表明,冬虫夏草中通过虫草多糖、核苷、麦角甾醇等活性成分治疗糖尿病肾病.文章通过查阅相关文献,归纳总结冬虫夏草治疗糖尿病肾病的作用机制,从抗氧化应激、降低血糖、抗炎、抗纤维化、调节巨噬细胞活性、调节自噬作用等方面展开综述,明确冬虫夏草治疗该病的主要成分及相关信号通路,为糖尿病肾病的相关治疗及研究提供参考.

目的 优化桑黄蜜炙工艺.方法 采用正交实验设计结合层次分析法,以内在质量(麦角甾醇、原儿茶醛、原儿茶酸含量)和外观性状评分为评价指标,对影响桑黄蜜炙工艺中的关键因素(蜜水比、蜜水与桑黄质量比、炒制温度、炒制时间)进行考察,确定桑黄蜜炙最佳工艺参数.结果 桑黄蜜炙最佳工艺为取桑黄生品(1 cm3方块状),加适量辅料拌匀(每100 kg的桑黄用炼蜜与水各25 kg),闷润2 h至辅料被吸尽,置于炒制容器内,在炒制温度130～140℃下炒制5 min,取出,置于50℃烘箱内2 h,取出,晾凉.3次验证实验结果的RSD为0.68%.结论 优选出的桑黄蜜炙工艺稳定、可行.

本研究以产自安徽的鲍姆桑黄、产自浙江和吉林的瓦尼桑黄、产自山东的粗毛纤孔菌以及采自山西的野生桑树桑黄为研究对象,检测桑黄子实体乙醇提取物中的总多酚、三萜及麦角甾醇含量.结果表明:不同物种和不同来源的桑黄子实体中总多酚、三萜、麦角甾醇含量存在差异,其中总多酚含量最高的是产自浙江的瓦尼桑黄(1.99％),三萜含量最高的是产自山东的粗毛纤孔菌(产孢前,1.32％),麦角甾醇含量最高的是产自吉林的瓦尼桑黄(0.19％).以丙二醛(MDA)为指标比较不同来源桑黄子实体乙醇提取物的抗氧化活性.结果表明,4种桑黄子实体提取物对大鼠肝微粒体脂质过氧化酶MDA的产生均表现出良好的抑制能力,其中浙江桑黄抗氧化活性最佳,MDA抑制率达到96.53％.应用液相色谱-离子阱-飞行时间质谱联用(LC-IT-TOF-MS)技术从桑黄子实体的乙醇提取物中鉴定了 19种化合物,其中浙江的瓦尼桑黄、吉林的瓦尼桑黄和安徽的鲍姆桑黄子实体的化合物组成较为相似,主要为hispidin的衍生物;野生的桑树桑黄子实体主要产物也为hispidin衍生物,但结构类型不同于上述3种桑黄;山东的粗毛纤孔菌子实体中则含有大量的hispidin单体,hispidin衍生物含量很少.综上所述,不同来源桑黄的化合物组成、活性产物含量和抗氧化活性存在较大差异,特别是不同种属桑黄样品所含活性产物的种类以及含量差异较大.本研究为桑黄抗氧化产品的开发提供了科学参考.