目的 从黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)中分离制备出 2 种多糖APS-Ⅰ(相对分子质量＞2×106)、APS-Ⅱ(相对分子质量 1×104),明确APS、APS-Ⅰ、APS-Ⅱ对葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的疗效.方法 对APS-Ⅰ、APS-Ⅱ进行分离制备,并进行相对分子质量、糖醛酸含量、单糖组成以及糖苷键连接方式测定.建立BALB/c小鼠溃疡性结肠炎模型,分别给予APS、APS-Ⅰ、APS-Ⅱ,记录小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分、结肠长度、脾脏指数、肝脏指数;采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;测定结肠组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性和Th1 相关细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)以及Th2 相关细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-10 水平;采用qRT-PCR检测结肠组织TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10 mRNA表达;免疫组化法测定结肠组织T细胞特异性转录因子(transcription factor T-bet,T-bet)、GATA结合蛋白 3(GATA binding protein 3,GATA-3)蛋白表达,比较APS、APS-Ⅰ、APS-Ⅱ疗效.结果 APS中共有 2 个组分APS-Ⅰ、APS-Ⅱ,其相对分子质量分别为＞2×106、1×104,糖醛酸质量分数分别为 26.25%、1.62%.单糖结果显示,APS-Ⅰ和APS-Ⅱ均由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成,APS-Ⅰ中甘露糖、阿拉伯糖和半乳糖占比均大于APS-Ⅱ.糖苷键结果显示,APS-Ⅰ以 1,4 连接的葡萄糖和 1,6 连接的半乳糖为主,APS-Ⅱ以 1,4 连接的葡萄糖为主.与模型组比较,APS-Ⅰ可显著改善结肠长度降低、体质量减轻、DAI 评分增加、脾脏和肝脏指数增加等临床症状(P＜0.05、0.01、0.001),减轻结肠组织病理损伤,降低结肠组织中MPO活性及TNF-α、IFN-γ水平(P＜0.01、0.001),升高结肠组织中IL-4、IL-10 水平(P＜0.05、0.01、0.001),下调结肠组织TNF-α、IFN-γ mRNA表达和T-bet蛋白表达(P＜0.05、0.001),上调IL-4、IL-10 mRNA表达和GATA-3 蛋白表达(P＜0.05、0.01).而APS-Ⅱ在MPO活性、IFN-γ水平以及IL-4、IL-10 mRNA表达和T-bet、GATA-3 蛋白表达方面与模型组相比无显著差异.结果 表明APS-Ⅰ对溃疡性结肠炎的治疗效果优于APS-Ⅱ.结论 APS-Ⅰ是APS治疗溃疡性结肠炎的主要成分,其活性可能与其糖醛酸含量、多糖的种类以及糖苷键连接方式有关,APS-Ⅰ治疗溃疡性结肠炎可能通过调节Th1/Th2 免疫平衡实现.

该研究旨在探讨黄芪多糖可能通过调节细胞自噬提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的化疗敏感性,并探讨其作用的可能机制.该实验将HeLa细胞分为对照组、顺铂组、黄芪多糖组和黄芪多糖联合顺铂组,分别运用MTT法检测各实验组宫颈癌HeLa细胞增殖抑制情况;流式细胞术检测各实验组HeLa细胞的凋亡及周期情况;RT-PCR法检测自噬相关蛋白beclin1,LC3Ⅱ,p62的mRNA表达情况;Western blot法检测自噬相关蛋白beclin1,LC3Ⅱ,LC3Ⅰ,p62的表达水平.MTT结果显示,与对照组相比,各给药组均可明显抑制HeLa增殖(P<0.05),联合给药组的抑制作用更加显著(P<0.01).流式细胞术结果显示,与对照组相比,各给药组HeLa的凋亡率均明显增加(P<0.05),其中联合给药组的凋亡率显著增加(P<0.01);与对照组相比,各给药组HeLa细胞均发生了明显的周期阻滞,以G0/G1期的阻滞最为明显,其中联合给药组G0/G1期的阻滞显著.RT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,beclin1、LC3Ⅱ基因及蛋白表达上调,p62基因及蛋白的表达下调,联合给药组的上述相应变化更加显著.通过以上实验结果的分析,推测黄芪多糖可能通过调节细胞自噬来增加宫颈癌HeLa细胞对顺铂的化疗敏感性,这一作用的可能机制是通过上调自噬相关蛋白beclin1,促进LC3Ⅰ转化为LC3Ⅱ,下调自噬标记蛋白p62,增强HeLa细胞自噬活性,从而增加HeLa细胞对顺铂化疗的敏感性.

目的 研究黄芪多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及可能机制.方法 选取健康成年SD大鼠24只,随机分为假手术组(8只)、缺血再灌注损伤组(8只,模型组)与黄芪多糖50 mg/ml灌注液治疗组(8只).结扎大鼠左冠状前降支制备心肌缺血再灌注模型.测定三组心肌损伤指标肌酸激酶(CK)、心肌钙蛋白-Ⅰ(TNI),比较三组超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)、氧自由基(OFR),并应用多导生理记录仪观察三组大鼠缺血前与再灌注25 min后主动脉压(AP),将左室内压信号放大10倍,读取左室舒张末期压(LVEDP),计算每搏量(SV)、心脏指数(CI)、每搏指数(SI)与等容舒张期心室内压下降的时间常数(T值).结果 模型组与治疗组CK、TNI均显著高于假手术组;治疗组显著低于模型组.模型组与治疗组SOD均显著低于假手术组,治疗组显著高于模型组;模型组与治疗组LPO、OFR均显著高于假手术组(P<0.05);治疗组显著低于模型组.缺血前三组心脏功能指标差异均无统计学意义(P>0.05),再灌注25 min后假手术组各个心脏功能指标除LVEDP外均与缺血前相比差异无统计学意义(P>0.05);模型组与治疗组AP、SV、CI、SI均显著低于假手术组,而T值显著高于假手术组;治疗组AP、SV、CI、SI均显著高于模型组,LVDEP、T值显著低于模型组(P<0.05).结论 黄芪多糖具有显著改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与抗氧自由基、降低心肌钙含量以及减轻心肌舒张功能受损有关.

该文旨在观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对IL-6和TNF-α所致炎性微环境中骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)白介素-6受体(IL-6 receptor,IL-6R)、肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR表达的影响,探讨IL-6和TNF-α导致BMSCs炎性损伤的可能物质基础.首先运用100 ng/mL IL-6和50 ng/mL TNF-α建立炎性微环境.设立对照组(control组)、模型组(D组)和50 μg/rnL黄芪多糖干预组(H组).之后,应用ELISA法检测sIL-6R的表达水平.免疫荧光法检测IL-6R、gp130、TNFR Ⅰ、TNFRⅡ的表达水平.Westem blot技术检测抑癌基因P53、PTEN和原癌基因Ras、C-myc的蛋白表达水平.检测结果显示,与对照组比较,模型组细胞上清液中的sIL-6R含量降低,模型组细胞IL-6R、gp130、TNFR Ⅰ、TNFR Ⅱ、Ras、C-myc表达均升高,P53、PTEN表达均降低.与模型组比较,黄芪多糖组细胞上清液sIL-6R含量升高,细胞IL-6R、gp130、TNFR Ⅰ、TNFR Ⅱ、Ras、C-myc表达均下降,而P53、PTEN表达均升高.结果提示,黄芪多糖能够减弱炎性微环境对刺激BMSCs表达IL-6R、TNFR的影响作用,并且维护肿瘤相关基因表达的相对稳定性.

目的:为进一步研究中药单体的抗癌作用提供参考.方法:以"磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路""中药""中药单体""恶性肿瘤""PI3K/Akt/mTOR""Chinese herbal medicine""Traditional Chinese medicine monomer""Neo-plasm""Tumor"等为关键词,在中国知网、万方数据、维普网、PubMed、Embase等数据库中组合查询2008-2018年发表的相关文献,从抑制癌细胞生长和抗耐药两方面对基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号传导通路的抗癌中药单体的相关研究结果进行归纳总结.结果与结论:共检索到相关文献330篇,其中有效文献39篇.目前研究证实了不少中药单体具有抗癌作用,包括穿心莲内酯、β-榄香烯、麦冬皂苷、桔梗皂苷、芹菜素、青藤碱等中药单体的抗肺癌作用,漆黄素、秦皮素、华蟾素、黑米花青素、鱼藤素等中药单体的抗乳腺癌作用,地肤子皂苷、蛇床子素、异荭草素、姜黄素等中药单体的抗肝癌作用,龙葵碱、五味子乙素、竹节香附素A、石见穿多糖、瓜蒌果实提取物TKP蛋白、姜黄素等中药单体的抗肠癌作用,二氢青蒿素、黄芩苷、人参皂苷Rg3、没食子酸、白藜芦醇等中药单体的抗胃癌作用,重楼皂苷Ⅰ、川芎嗪的抗胰腺癌、抗前列腺癌作用,姜黄素、苦参碱、黄芪皂苷Ⅱ、新型二萜类化合物Jaridon 6的抗耐药作用等.中药单体可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号传导通路,发挥诱导癌细胞自噬死亡、促进细胞凋亡、抑制耐药相关基因表达的作用.鉴于目前中药单体本身作用靶点单一、抗癌谱较窄、缺乏临床上标准用药的"头对头试验"的抑瘤效果对比,今后应通过多途径进一步论证这些单体的抗癌作用.

目的 探索黄芪多糖通过调控TGF-β1/Smads信号通路对大鼠肺纤维化的影响.方法 将大鼠分为空白对照(Control)组、黄芪多糖处理(APS)组、百草枯染毒(PQ)组以及PQ+APS组,百草枯诱导大鼠肺纤维化模型,检测大鼠肺湿重/干重比和羟脯氨酸含量,HE染色检测大鼠肺组织病理变化,Masson染色检测大鼠肺组织胶原沉积,ELISA试剂盒检测大鼠支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的浓度,RT-PCR检测大鼠肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)、胶原蛋白I(CollagenⅠ)和CollagenⅢmRNA表达,蛋白印迹检测大鼠肺组织上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白表达.结果 与Control组比较,PQ组肺湿重/干重比升高(t=12.922,P<0.001),羟脯氨酸含量升高(t=20.920,P<0.001),肺组织出现病理变化和胶原沉积,肺泡灌洗液中TNF-α(t=23.932,P<0.001)、IL-1β(t=34.826,P<0.001)、IL-6(t=17.985,P<0.001)浓度升高,TGF-β1(t=20.934,P<0.001)、Collagen I(t=26.853,P<0.001)、CollagenⅢ(t=18.493,P<0.001)mRNA表达升高,E-cadherin(t=25.456,P<0.001)蛋白表达降低,α-SMA(t=26.980,P<0.001)、Vimentin(t=23.862,P<0.001),TGF-β1(t=39.836,P<0.001)蛋白表达升高、p-Smad3/Smad3比率(t=19.606,P<0.001)升高,Smad7(t=30.904,P<0.001)蛋白表达降低;与PQ组比较,PQ+APS组肺湿重/干重比降低(t=9.174,P<0.001),羟脯氨酸含量降低(t=10.999,P<0.001),肺组织病理变化和胶原沉积减轻,肺泡灌洗液中TNF-α(t=8.654,P<0.001)、IL-1β(t=18.164,P<0.001)、IL-6(t=7.573,P<0.001)浓度降低,TGF-β1(t=8.879,P<0.001)、CollagenⅠ(t=12.687,P<0.001)、CollagenⅢ(t=11.333,P<0.001)mRNA表达降低,E-cadherin(t=14.255,P<0.001)蛋白表达升高,α-SMA(t=16.866,P<0.001)、Vimentin(t=18.439,P<0.001),TGF-β1(t=14.688,P<0.001)蛋白表达下调、p-Smad3/Smad3比率(t=11.384,P<0.001)下调,Smad7(t=13.131,P<0.001)蛋白表达升高.结论 黄芪多糖可减轻百草枯诱导的大鼠肺纤维化,其作用机制与TGF-β1/Smads信号通路相关.

目的:筛选黄芪改善他克莫司慢性肾毒性的活性组分,并初步阐明其作用机制.方法:将48只C57BL/6小鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、黄芪总提取物组、黄芪总黄酮组、黄芪多糖组和黄芪总皂苷组,每组8只.除空白对照组外,其余各组采用他克莫司诱导慢性肾毒性模型,各治疗组同时灌胃给予相应的治疗药物,qd,连续28d.末次给药后,检测各组小鼠尿量、体质量、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN);HE和Masson染色观察肾组织病理改变,Western blot检测肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,应用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平.结果:与模型组相比,黄芪总提取物组、黄芪多糖和黄芪总皂苷可显著降低小鼠SCr、BUN、肾小管间质纤维化程度、TGF-β1 、Collagen Ⅰ和α-SMA的蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),增加抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px的活性(P＜0.05或P＜0.01),显著降低MDA水平(P＜0.05或P＜0.01),而黄芪总黄酮无明显作用(P＞0.05).结论:黄芪多糖和黄芪总皂苷可能是黄芪发挥肾毒性保护作用的活性组分,其作用机制可能与减少氧化应激相关.

目的:建立重芪结肠靶向微丸(PA-CTPC)中黄芪总多糖和重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ、H的含量測定方法;评价PA-CTPC对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的干预作用.方法:采用苯酚-浓硫酸法测定PA-CTPC中黄芪总多糖含量;采用高效液相色谱法(HPLC)測定重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ、H的含量;KM雄性小鼠随机分为正常组、模型组和PA-CTPC高、中、低剂量组(0.4、0.2、0.1 mg/g),采用4.0％DSS溶液自由饮用诱导建立小鼠UC模型,通过疾病活动指数(DAI)评分、结肠组织形态、病理损伤评分及血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-4(IL-4)、D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)水平评价PA-CTPC对DSS诱导的小鼠UC模型的干预作用.结果:苯酚-浓硫酸法测定3批PA-CTPC中黄芪总多糖平均含量分别为158.33、151.20、156.70mg/g;HPLC法测定3批PA-CTPC中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ、H的平均总含量分别为49.56、50.00、50.13 mg/g;PA-CTPC中、高剂量组可明显改善UC模型小鼠一般状况,降低DAI评分、结肠大体形态和组织病理学评分,明显降低血液中IL-6、TNF-α、D-LA、DAO水平,升高IL-10、IL-4水平.结论:建立的PA-CTPC中黄芪总多糖和重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ、H的含量測定方法准确、稳定、可行,可用于PA-CTPC的质量控制.PA-CTPC对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有治疗作用,与调控炎性因子表达,改善肠道黏膜屏障功能有关.

目的 探讨黄芪汤(HQD)对肝纤维化模型小鼠骨形成蛋白和激活素跨膜抑制剂(BAMBI)的作用.方法 以10％ CCl4橄榄油溶液2 g/kg腹腔注射建立C57BL/6小鼠肝纤维化模型;于第4周起将造模组小鼠随机分为模型组(M)和黄芪汤组(HQD),每组12只,干预3周;检测各组小鼠的肝功能、肝组织BAMBI及相关胶原基因表达.体外培养LX-2细胞,观察HQD有效组分黄芪总皂苷(AS)和甘草酸(GA)对转化生长因子-β(TGF-β)信号传导和基因表达的影响.结果 与模型组比较,HQD组血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶活性显著降低(P＜0.01);肝组织炎症坏死、胶原沉积均显著减轻(P＜0.01);肝组织Ⅰ型胶原(Col1a1)和基质金属蛋白酶-12 mRNA水平显著降低(P＜0.05),而Bambi mRNA表达显著增加(P＜0.01).体外实验结果表明,AS和GA可显著抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞活化和胶原合成;显著降低脂多糖诱导LX-2细胞的肿瘤坏死因子-α表达(P＜0.01),且显著增加LX-2细胞BAMBI表达(P＜0.01).结论 黄芪汤抗肝纤维化的作用机制可能与抑制肝脏炎症反应及上调BAMBI表达有关.

目的 探讨黄芪多糖(APS)对老年糖尿病(DM)鼠心肌纤维化的影响.方法 18月龄的C57BL/6J小鼠30只随机分为对照(NS)组、老年DM组和老年APS组,每组10只.老年DM组和老年APS组采用链脲佐菌素腹腔注射法制作DM动物模型.老年APS组予APS 2 g/kg/d灌胃,NS组和老年DM组予等体积生理盐水灌胃.干预16周后,观察小鼠的血糖和心肌酶谱;测定心脏功能及血流动力学指标;评估心肌胶原纤维化程度;检测金属蛋白酶1 (MMP1)、MMP3、MMP9、白细胞介素-1 α(IL-1α)、IL-6、转化生长因子-β(TGF-β)、胞外信号调节激酶(ERK) 1/2、Jun激酶(JNK)、p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)及核因子κB(NF-κB) /p65的蛋白表达.结果 与NS组相比,老年DM组空腹血糖、糖化血清蛋白、心肌酶谱和左心室舒张末期压(LVEDP)升高(均P＜ 0.01);左心室短轴缩短率、左心室收缩压、左室内压最大上升速率(+ dP/dtmax)及左室内压最大下降速率降低(均P＜0.01);Ⅰ型胶原纤维含量和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维比值升高(均P＜0.01),心肌病理结构严重损伤;MMP1、MMP3、MMP9、IL-1α、IL-6和TGF-β蛋白表达升高(均P＜0.01);ERK1/2、JNK、p38 MAPK及NF-κB/p65的蛋白磷酸化水平升高(均P＜0.01).与老年DM组相比,老年APS组p38 MAPK及NF-κB/p65蛋白磷酸化水平降低(均P＜0.01).而NS组与老年APS组的LVEDP、+ dP/dtmax、胶原纤维含量、MMP1、MMP9、NF-κB/p65蛋白磷酸化水平差异均无统计学意义.结论 APS可以改善老年DM鼠的心肌纤维化,可能与其下调心肌p38 MAPK和NF-κB/p65的磷酸化水平相关.