目的:探究18α甘草次酸(18α-GA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的保护作用，为18α-GA的临床应用提供理论依据和实验基础。方法:将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组：DSS模型组，阳性药对照组，18α-GA高、中、低剂量组，每组8只，5组小鼠均采用3% DSS溶液连续喂养7 d建立急性UC动物模型，同时各组分别每天腹腔注射100 mg/kg生理盐水、100 mg/kg柳氮磺吡啶、40 mg/kg 18α-GA、20 mg/kg 18α-GA、10 mg/kg 18α-GA。每天测量并记录小鼠的体重，评估小鼠疾病活动指数(DAI)。第8天处死小鼠，取小鼠结肠测量其长度；切片观察结肠黏膜并进行病理学评分；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路相关蛋白表达；酶联免疫吸附试验(ELISA)测定结肠组织中IL-1β含量。结果:与DSS模型组比较，18α-GA高、中剂量组第7天时的体重减轻幅度明显更小(均 P<0.05)；结肠长度更长(均 P<0.05)，结肠黏膜病理学评分明显更低(均 P<0.05)；结肠组织中GSDMD、cleaved-caspase1及IL-1β的表达显著更低(均 P<0.05)；18α-GA高剂量组DAI评分更低( P<0.05)；结肠组织中NLRP3表达更低( P<0.05)。 结论:18α-GA可通过抑制NLRP3炎症小体通路的激活，改善DSS诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎。

目的 探讨中草药光甘草定(GLA)对 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠认知障碍的改善作用及其作用机制,以及通过参与神经可塑性调节的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路影响对脑皮质、海马组织的保护作用.方法 选择 120 只C57BL//6N小鼠,按随机数字表法分为对照组、模型组、GLA对照组和MPTP+GLA低、中、高剂量组,每组 20 只.采用腹腔注射MPTP 20 mg/kg的方法复制小鼠PD模型,对照组注射相同剂量的生理盐水.GLA对照组给予 50 mg/kg GLA灌胃;MPTP+GLA低、中、高剂量组分别于每次MPTP给药 1h后用 20、30 和 50 mg/kg 的GLA灌胃,均每日 1 次,连用 7d.观察各组小鼠学习、记忆能力和海马组织的病理学改变,以及大脑皮质中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-18(IL-18)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量、酪氨酸羟化酶(TH)和磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)的蛋白表达水平的变化.结果 与对照组比较,模型组大脑皮质中MDA、TNF-α、IL-18含量均明显升高[MDA(nmol/mg):4.68±0.51 比 2.05±0.22,TNF-α(μg/L):116.87±15.65 比 48.52±7.83,IL-18(μg/L):57.52±6.89 比24.26±1.89,均P＜0.05],而SOD活性明显降低(U/mg:77.84±7.84 比 130.89±18.56,P＜0.05);与模型组比较,MPTP+GLA各组TNF-α、IL-18、MDA含量均明显降低,而SOD的活性明显增高(均P＜0.05),以MPTP+GLA高剂量组的变化更明显;MPTP+GLA高剂量组小鼠学习和记忆能力明显改善,海马组织中神经元减少、神经变性改善,胶质细胞增生减少.免疫组化结果显示:与模型组比较,MPTP+GLA高剂量组小鼠皮质和海马组织TH阳性细胞的缺失明显减轻[吸光度(A值):大脑皮质组织为 39.14±3.25 比 23.14±3.10,海马组织为 72.14±4.25 比 52.16±3.32,均P＜0.05],p-ERK1/2 的阳性细胞表达受到明显抑制(A值:大脑皮质组织为63.91±3.55比88.35±6.41,海马组织为73.36±3.52比93.25±6.73,均P＜0.05);蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)显示:与模型组比较,MPTP+GLA高剂量组皮质和海马组织TH的蛋白表达水平明显增加(灰度值:皮质组织为 0.71±0.09 比 0.53±0.06,海马组织为 0.68±0.06 比 0.45±0.03,均P＜0.05),p-ERK1/2 的蛋白表达水平明显受到抑制(灰度值:皮质组织为 0.76±0.10 比 0.96±0.08,海马组织为 0.74±0.06 比 0.96±0.12,均P＜0.05).结论 中药GLA可改善MPTP诱导的PD小鼠学习和记忆能力,防治MPTP诱导的神经元损伤及胶质细胞增生;ERK信号通路与PD脑组织中神经损伤存在关联性;GLA通过抑制ERK信号通路发挥对MPTP所致PD小鼠学习和记忆能力的保护作用.

目的 将微波合成技术应用于高附加值中药单体 18α-甘草次酸的制备,以建立更高效、经济的工艺路线.方法 以天然来源丰富且廉价的 18β-甘草次酸为原料,通过微波辐射促进C-18β的构型翻转,实现18α-甘草次酸的制备,利用HRMS、1H-NMR、13C-NMR、HPLC、旋光和熔点进行结构确认及纯度鉴定;首次实现双键移位副产物的分离并通过X-单晶衍射确认结构,辅助推测反应机制使过程更清晰.结果 相比于传统加热,微波辅助技术极大提高了制备效率,以 5.0 g反应原料为例,反应温度120℃,反应时间20 min;简化了后处理操作,重结晶溶剂200 mL,回流时间 30 min.结论 微波辅助合成法是目前18α-甘草次酸高效、经济的制备方法,符合绿色化学的理念;双键移位副产物的首次分离和结构鉴定,弥补了相关研究的空白,为后续质量控制奠定了基础.

目的 研究连花清瘟胶囊化学成分.方法 采用硅胶、凝胶柱色谱、液相色谱等多种色谱方法对其进行分离和纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定.结果 从连花清瘟胶囊孔树脂70％乙醇部位分离得到20个化合物,分别鉴定为芦荟大黄素(1)、连翘脂素(2)、cepharanone B(3)、松脂醇(4)、表松脂醇(5)、松脂素单甲醚(6)、胡椒内酰胺A(7)、反式对羟基肉桂酸乙酯(8)、刺芒柄花素(9)、异甘草素(10)、柚皮素(11)、山柰酚(12)、ω-羟基大黄素(13)、大黄酸(14)、大黄素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(15)、4,5-dioxodehydroasimilobine(16)、kaempferol-3-O-α-L-ramnopyranosyl-4"-O-E-(4-hydroxy)-cinnamoyl(17)、大黄酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(18)、大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(19)、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(20).结论 化合物2、3、5～17、19、20为首次从该复方中分离得到,为阐明连花清瘟胶囊药效物质奠定了基础.

目的 在雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF-7中观察缝隙连接(GJ)功能的调控对阿霉素抗肿瘤作用的影响.方法 采用MTT法检测0~24.0μmol/L阿霉素对细胞存活率的影响;Western blot和细胞免疫荧光法分别检测细胞中Cx43总蛋白和膜蛋白的表达;细胞接种荧光示踪法检测细胞缝隙连接功能;采用维甲酸增强细胞GJ功能,油酸酰胺和18-alpha-甘草次酸(18-α-GA)抑制细胞GJ功能;Cx43siRNA沉默细胞中Cx43基因.结果 雌激素受体阳性(ER+)细胞中Cx43表达水平及GJ功能显著强于雌激素受体阴性ER(-)细胞,阿霉素显著抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.01),维甲酸可以通过增加细胞GJ功能从而增强阿霉素的细胞毒性(P<0.01),油酸酰胺和18-α-GA可通过抑制细胞GJ功能而降低阿霉素的细胞毒性(P<0.01);采用siRNA沉默细胞Cx43基因,胞内Cx43总蛋白和膜蛋白表达下降,GJ功能降低,阿霉素对MCF-7的细胞毒性降低(P<0.01).结论 ER(+)细胞中Cx43表达水平及GJ功能显著强于ER(-)细胞;维甲酸可以通过增强细胞GJ功能而增加阿霉素细胞毒性,油酸酰胺和18-α-GA通过抑制细胞GJ功能降低阿霉素细胞毒性,Cx43siRNA能沉默MCF-7中Cx43表达,并抑制由其形成的GJ功能,降低阿霉素的细胞毒性.

目的 对中药复方四妙勇安汤水煎液中的化学成分进行研究.方法 利用硅胶、ODS、Sephadex LH-20、AB-8大孔吸附树脂柱色谱等分离技术对四妙勇安汤水煎液中化学成分进行分离,结合理化性质及MS、NMR等谱学数据鉴定其结构.结果 从四妙勇安汤水煎液中共分离并鉴定了22个化合物,分别为5(S)-5-carboxystrictosidine (1)、哈巴俄苷(2)、京尼平苷(3)、甘草次酸(4)、甘草酸(5)、金丝桃苷(6)、甘草苷(7)、异甘草苷(8)、甘草素(9)、异甘草素(10)、木犀草素(11)、槲皮素(12)、2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl) ethyl O-α-arabinopyranosyl-(1→6)-O-α-rhamnopyranosyl-(1→3)-O-β-glucopyranoside (13)、安格洛苷C(14)、类叶升麻苷(15)、桂皮酸(16)、阿魏酸(17)、(E)-aldosecologanin (18)、原儿茶酸(19)、豆甾醇(20)、三十一烷醇(21)、胡萝卜苷(22).结论 化合物1～3、5、6、8、11、13～15、18～21为首次从四妙勇安汤中分离得到.

目的 探讨缝隙连接在维持血管张力及损伤血管修复中的作用.方法 取大鼠主动脉制成血管环分别测量在18α-甘草次酸(18α-GA)作用前后血管环对去甲肾上腺素(NE)和乙酰胆碱(Ach)反应性变化;建立大鼠颈动脉损伤模型,给予生胃酮3 mg/(kg·d)腹腔注射,对照组给予生理盐水腹腔注射(2 mL/d),14天后处死动物,用HE和DAPI-伊文思蓝染色观察新生内膜厚度,细胞免疫荧光染色法及Western blot检测靶血管缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达.结果 单纯给予18α-GA处理血管环并未出现明显的收缩或舒张反应.对照组给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱后血管环发生明显的收缩或舒张反应,而经18α-GA预处理后,去甲肾上腺素或乙酰胆碱引起的血管环收缩或舒张反应显著降低(去甲肾上腺素:0.60±0.03比0.21±0.04;乙酰胆碱:0.15+0.01比0.62+0.03;P＜0.05).损伤2周生胃酮干预组血管新生内膜增生明显减少,血管腔狭窄减轻.生胃酮干预组新生内膜细胞核数量显著低于对照组(89±28比236±15,n=5,P＜0.01).免疫荧光染色显示,在形成的新生内膜中Cx43表达丰富.Western blot结果显示,生胃酮干预组Cx43的表达显著低于对照组(0.38±0.11比0.93±0.06,n=3,P＜0.01).结论 缝隙连接在生理条件下参与维持及调节血管张力,在病理条件下能够促进血管损伤后新生内膜的过度增生,在血管损伤性疾病的发生、发展过程中具有重要作用.

探讨甘草酸二铵(Diammonium glycyrrhi zinate,DG)对刀豆蛋白(Concanavalin A,Con A)致小鼠肝损伤的保护作用及机制.连续给予ICR小鼠各保肝药的临床等效量7天后,再以Con A造成小鼠肝损伤.生化法检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)含量;HE染色观察肝组织病理学特征;通过药物代谢物与转氨酶异常大鼠血清共孵育,检测DG对转氨酶活性的直接作用;免疫组化、Western blot检测肝组织中凋亡蛋白和炎性细胞因子的水平,探讨DG的保肝机制.结果显示,58.5 mg/kg DG能够改善Con A所致小鼠肝脏病理损伤,降低小鼠血清中AST、ALT水平,而对AST、ALT的活性没有直接抑制作用;并且DG可以抑制肝细胞凋亡(下调cleaved Caspase-3、cleaved PARP以及BAX/BCL-2的表达)和炎性反应(降低TGF-β1、COX-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ等炎性因子水平).综上所述,DG可改善Con A致小鼠急性肝损伤,其作用机制可能与抑制细胞凋亡和炎症反应有关.

目的:观察18β-甘草次酸钠(18β-SGA)对变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨18β-SGA对AR的干预机制.方法:106只SPF级Wistar大鼠随机分为空白对照组、AR组、布地奈德组、18β-SGA低剂量组和18β-SGA高剂量组.经卵清蛋白构建AR大鼠模型后给予药物干预,各组大鼠分别在干预2周和4周后处死,取大鼠鼻黏膜行免疫组织化学染色、RT-PCR和免疫蛋白印迹定位、定量大鼠鼻黏膜中TNF-α表达.结果:经免疫组织化学、免疫印迹及RT-PCR发现,与空白对照组相比,AR组大鼠鼻黏膜中TNF-α高表达于鼻黏膜纤毛柱状上皮、血管内皮、腺体及部分炎症细胞胞质中(P＜0.01).经不同剂量的18β-SGA干预后,TNF-α表达量明显下降(P＜0.01),尤以18β-SGA低剂量组干预4周后效果最明显(P＜0.01).结论:不同剂量的18β-SGA对AR有治疗作用,且其发挥作用的机制与抑制TNF-α的高表达有关.

目的 观察缝隙连接蛋白43(Cx43)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)和关节软骨细胞(ACs)共培养中的表达和对软骨分化的影响.方法 取第二代新西兰白兔BMSCs和ACs,细胞总量4×104,以3∶1的比例进行接触共培养21 d为实验组,应用Transwell培养板进行非接触共培养为对照组,向两组添加Cx43阻断剂18α-甘草次酸(GA)50 μmol/L进行干预共培养21 d,酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析糖胺聚糖(GAG)的含量,细胞免疫化学(ICC)和蛋白质印迹法(Westem blot)检测Cx43和Ⅱ型胶原a1(Col2a1)的分布和表达.结果 BMSCs和ACs共培养21 d,实验组GAG含量、Cx43和Col2a1表达明显高于对照组[(327.517 ±24.612) ng/L比(171.612±13.163) ng/L,t=13.683,P＜0.05;0.694 ±0.036比0.522 ±0.036,t =8.203,P ＜0.05;0.684 ±0.046比0.415±0.039,t=10.915,P＜0.05].添加GA共培养21 d,接触共培养+GA组GAG含量和COL2a1表达与非接触共培养+ GA组比较,差异无统计学意义[(144.671±5.229) ng/L比(138.270±5.542) ng/L,t=2.058,P＞0.05;0.240 ±0.028比0.223±0.026,t=1.086,P＞0.05];而与未添加GA比较,两组GAG含量和Col2a1表达均明显降低(t=17.541、6.015,P＜0.05),Cx43的表达(0.671 ±0.029,0.505±0.030)均无明显变化(t=1.454,1.139,P＞0.05).结论 Cx43在BMSCs和ACs接触共培养中的表达上调,Cx43促进共培养细胞的软骨分化,在调控共培养细胞的软骨分化中起主要作用.