目的:探讨大黄素在D-氨基半乳糖胺（D-galactosamine，D-GalN）/脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的急性肝损伤中的保护作用及其机制。方法:将40只BALB/c雄性小鼠按随机数字法分为5组（ n=8），对照组、大黄素组、D-GalN/LPS组、大黄素+ D-GalN/LPS组和自噬抑制剂3-MA+大黄素+ D-GalN/LPS组。经小鼠腹腔注射D-GalN （700 mg/kg）/LPS （10 μg/kg）诱导急性肝损伤模型。3-MA（15 mg/kg）和（或）大黄素（20 mg/kg）腹腔注射于模型建立前30 min，6 h后在麻醉下处死小鼠并采集血、肝组织标本。采用比色定量法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平、肝组织髓过氧化物酶（MPO）活性，采用ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的水平，HE染色观察肝组织病理学改变，Western blot检测肝组织自噬蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1的表达量，并分析实验动物生存率。定量资料比较采用单因素方差分析，采用SNK- q检验进行两两比较，方差不齐时采用Games-Howell检验。 结果:与对照组相比，D-GalN/LPS组AST、ALT、TNF-α、IL-6水平和MPO活性[（2 476.80±263.14）U/L、（271.71±47.15）U/L、（537.92±89.35）pg/mL、（169.74±25.52）pg/mL、（1.37±0.22）U/mg]显著升高（ P<0.05）。与D-GalN/LPS组相比，大黄素+D-GalN/LPS组AST、ALT、TNF-α、IL-6水平和MPO活性[（1 248.01±380.70）U/L、（142.59±34.63）U/L、（288.91±67.21）pg/mL、（61.83±13.64）pg/mL、（0.80±0.21）U/mg]显著降低（ P<0.05）。与D-GalN/LPS组相比，大黄素+D-GalN/LPS组可明显减轻肝组织肝细胞的病理损伤，提高小鼠生存率。与对照组相比，D-GalN/LPS组肝组织LC3-Ⅱ、Beclin1表达下降；而与D-GalN/LPS组相比，大黄素+ D-GalN/LPS组肝组织LC3-Ⅱ、Beclin1表达升高。联合自噬抑制剂3-MA后大黄素的肝保护效应被逆转，AST、ALT、TNF-α、IL-6水平和MPO活性[（2 398.78±233.57）U/L、（242.79±43.46）U/L、（505.07±67.89）pg/mL、（151.46±14.11）pg/mL、（1.27±0.15）U/mg]升高（ P<0.05），肝组织病理损伤加重。 结论:大黄素减轻D-GalN/LPS诱导的急性肝损伤，这可能与激活LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白恢复自噬有关。

目的:观察4-苯基丁酸(PBA)对创伤性失血休克大鼠肝损伤的保护作用。方法:将60只SD大鼠随机数字表法分为假手术组、模型组和4-PBA组，每组20只，模型组和4-PBA组采用左下肢、胫骨骨折和股部软组织损伤并失血方法制备大鼠创伤性失血休克模型，假手术组仅行麻醉、结扎血管，不进行创伤失血。4-PBA组大鼠每天灌胃4-PBA 0.5 g/kg，假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水。3组大鼠治疗72 h后，观察3组大鼠死亡率；采用苏木精-伊红(HE)染色分析肝脏病理变化；采用自动生化仪检测肝功能生化指标；采用分光光度法测定3组大鼠肝脏丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析3组大鼠内质网应激蛋白表达水平；组间比较采用方差分析。结果:4-PBA组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平[(187.24±31.09)、(364.17±28.98) U/L]明显低于模型组[(367.12±44.19)、(872.34±30.41) U/L]，差异有统计学意义( t＝7.130、6.091， P<0.05)。4-PBA组大鼠肝组织中SOD活性和GSH水平[(30.17±5.41) U/mg、(783.22±25.21) mg/g]高于模型组[(19.30±4.81) U/mg、(551.28±19.38) mg/g]，差异有统计学意义( t＝5.901、3.226， P<0.05)。4-PBA组大鼠肝组织MDA和GSH水平[(4.11±0.38) nmol/mg]低于模型组[(7.02±0.59) nmol/mg]，差异有统计学意义( t＝4.109， P<0.05)。4-PBA组大鼠肝组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、生长阻滞和DNA损伤诱导基因153(GADD153)蛋白表达水平(1.63±0.22、1.99±0.28、1.53±0.20)低于模型组(2.31±0.23、3.09±0.31、2.89±0.27)，差异有统计学意义( t＝3.287、2.943、3.810， P<0.05)。4-PBA组大鼠肝组织凋亡比例[(8.12±0.28)%]低于模型组[(15.32±3.98)%]，差异有统计学意义( t＝3.109， P<0.05)。 结论:4-PBA可显著减轻创伤性失血休克大鼠肝损伤，与其抑制内质网应激和脂质过氧化反应相关。

目的:分析血栓性血小板减少性紫癜（TTP）患者的临床特征、治疗方案及转归。方法:回顾性分析1998年5月至2019年5月83例TTP患者的临床资料。结果:83例TTP患者中，男27例、女56例，中位年龄39（10~68）岁。41例（49.4%）表现为五联征，79例（95.2%）表现为三联征。78.0%（46/59）患者PLASMIC评分≥6分。10例行TTP基因检测，5例TTP基因突变。10例在血浆置换（PEX）前行血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13）活性检测，9例ADAMTS13活性<10%。83例患者均接受PEX/血浆输注（PI）+糖皮质激素治疗，其中35例联合利妥昔单抗和（或）免疫抑制剂。中位随访34（1~167）个月，总体有效率为81.9%，缓解率为63.9%，复发率为（35.7±7.1）%，3年总生存（OS）率为（78.6±4.6）%。单用PEX/PI+糖皮质激素组有效率（72.9%对94.3%， P=0.019）、OS率[（63.8±7.5）%对（94.3±3.9）%， χ2=8.450， P=0.004]低于联合利妥昔单抗和（或）免疫抑制剂组。多因素COX分析显示高龄（ HR=1.111，95% CI 1.044~1.184， P=0.001）、高ALT/AST比值（ HR=1.353，95% CI 1.072~1.708， P=0.011）是影响OS的独立危险因素。 结论:TTP患者多以三联征起病，可伴ADAMTS13活性下降。PEX/PI+糖皮质激素联合利妥昔单抗和（或）免疫抑制剂治疗可提高OS率。高龄和高ALT/AST比值患者预后欠佳。

目的:分析葡萄糖调节蛋白78（glucose regulatory protein 78，GRP78）对肝癌预后及肿瘤细胞增殖的影响。方法:采用实验研究方法和回顾性队列研究方法。采用肝癌组织芯片，体外培养Huh7、Hep3B肝癌细胞和LO2正常肝细胞，结合免疫组织化学染色、细胞转染、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）、Western blot检测、细胞增殖实验、细胞克隆形成实验及高通量转录组学检测分析肝癌细胞GRP78表达情况。Hep3B、Huh7细胞转染GRP78基因特异性shRNA慢病毒设为GRP78-shRNA组，转染阴性对照shRNA慢病毒设为对照-shRNA组。观察指标：（1）肝癌组织和癌旁组织GRP78表达及其与临床病理特征的关系。（2）肝癌病人预后及影响因素分析。（3）抑制GRP78表达对肝癌细胞增殖的影响。（4）抑制GRP78表达对肝癌细胞p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达的影响。（5）HA15对肝癌细胞增殖和p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达的影响。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用 t检验或方差分析。重复测量数据采用重复测量方差分析。计数资料以绝对数表示，组间比较采用 χ2检验。单因素和多因素分析采用COX比例风险回归模型。采用Kaplan-Meier法计算生存时间并绘制生存曲线，采用Log-rank检验进行生存分析。 结果:（1）肝癌组织和癌旁组织GRP78表达及其与临床病理特征的关系：肝癌组织芯片免疫组织化学染色结果显示，GRP78在90例肝癌组织中低表达53例，高表达37例，GRP78在90例癌旁组织中低表达84例，高表达6例，肝癌组织与癌旁组织比较，差异有统计学意义（ P<0.05）。（2）肝癌病人预后及影响因素分析：90例病人均获得随访，随访时间为5～56个月，中位随访时间为49个月。53例GRP78低表达肝癌病人中位总体生存时间和中位疾病无进展生存时间分别为56个月和53个月，37例GRP78高表达肝癌病人上述指标分别为32个月和19个月，两者比较，差异均有统计学意义（ χ2=17.482，12.097， P<0.05）。单因素分析结果显示：丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肿瘤病理学分级、GRP78表达是影响肝癌病人3年总体生存率和疾病无进展生存率的相关因素（风险比=2.168，2.161，3.784和2.254，0.893，3.493，95%可信区间为1.061~4.432，1.069~4.368，1.793~7.989和1.096~4.636，0.438~1.818，1.631~7.252， P<0.05）。多因素分析结果显示：ALT>40 U/L、肿瘤病理学分级为Ⅲ~Ⅳ级、GRP78高表达是影响肝癌病人3年总体生存率和疾病无进展生存率的独立危险因素（风险比=2.317，2.039，3.740和2.194，2.177，2.927，95%可信区间为1.150~4.671，1.201~3.462，2.116~6.612和1.408~4.593，1.093~4.336，1.492~5.742， P<0.05）。（3）抑制GRP78表达对肝癌细胞增殖的影响：①qRT-PCR检测结果显示，GRP78 mRNA在Huh7、Hep3B、LO2细胞中的相对表达量分别为3.06±0.33、4.42±0.60、1.00±0.02，Huh7、Hep3B细胞分别与LO2细胞比较，差异均有统计学意义（ t=6.19，5.42， P<0.05）。②Western blot检测结果显示：GRP78蛋白在Huh7、Hep3B、LO2细胞中的相对表达量分别为1.65±0.01、1.77±0.01、0.99±0.02，Huh7、Hep3B细胞分别与LO2细胞比较，差异均有统计学意义（ t=75.09，108.10， P<0.05）。③细胞增殖实验检测结果显示：Huh7细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组24、48、72、96 h细胞增殖率分别为111.51%±0.35%、144.85%±0.68%、188.71%±3.62%、282.51%±5.25%和190.08%±0.58%、285.76%±2.69%、459.51%±4.29%、597.88%±12.25%，两组比较，差异有统计学意义（ F组间=1 360.000， F时间=668.500， F交互=197.600， P<0.05）。Hep3B细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组上述指标分别为124.47%±0.25%、153.25%±1.25%、195.45%±3.19%、282.51%±10.76%和179.69%±0.33%、322.67%±2.46%、486.27%±5.82%、622.35%±12.58%，两组比较，差异有统计学意义（ F组间=1 222.000， F时间=706.200， F交互=179.600， P<0.05）。④细胞克隆形成实验结果显示：Huh7细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组细胞数分别为（125±3）个和（435±17）个，两组比较，差异有统计学意义（ t=17.86， P<0.05）；Hep3B细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组上述指标分别为（138±3）个和（388±7）个，两组比较，差异有统计学意义（ t=32.29， P<0.05）。（4）抑制GRP78表达对肝癌细胞p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达的影响：高通量转录组学检测结果显示，Huh7细胞GRP78-shRNA组相对于对照-shRNA组的p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6表达率分别为19%、334%、398%、41%、49%。①qRT-PCR检测结果显示：Huh7细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组中，GRP78、p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA的相对表达量分别为0.17±0.03，4.05±0.71，3.73±0.47，0.49±0.09，0.48±0.06，0.36±0.07和1.00±0.05，1.03±0.17，1.00±0.07，1.01±0.09，1.02±0.14，1.00±0.03，两组比较，差异均有统计学意义（ t=14.62，4.17，5.72，4.26，3.49，8.82， P<0.05）。Hep3B细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组上述指标分别为0.11±0.01，4.28±0.43，4.19±0.22，0.44±0.01，0.25±0.03，0.68±0.04和1.01±0.09，1.02±0.15，1.00±0.06，1.01±0.09，1.01±0.08，1.15±0.02，两组比较，差异均有统计学意义（ t=10.19，7.14，13.79，6.37，9.42，9.61， P<0.05）。②Western Blot检测结果显示：Huh7细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组中，GRP78、p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6蛋白的相对表达量分别为0.45±0.01，1.98±0.05，2.31±0.12，0.75±0.03，0.69±0.04，0.82±0.03和1.01±0.05，1.03±0.01，1.00±0.02，1.00±0.01，1.01±0.02，1.00±0.03，两组比较，差异均有统计学意义（ t=11.07，14.56，11.30，11.29，10.55，11.37， P<0.05）。Hep3B细胞GRP78-shRNA组和对照-shRNA组上述指标分别为0.61±0.03，1.98±0.16，2.55±0.12，0.85±0.03，0.78±0.01，0.54±0.02和1.00±0.03，1.05±0.02，1.05±0.01，1.05±0.02，1.00±0.02，1.00±0.02，两组比较，差异均有统计学意义（ t=10.97，13.40，12.35，11.06，12.45，13.78， P<0.05）。（5）HA15 对肝癌细胞增殖和p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达的影响：HA15半抑制浓度（IC50）实验结果显示，Huh7、Hep3B细胞48 h IC50分别为9.98 μmol/L、13.70 μmol/L。①分别以9.98 μmol/L和13.70 μmol/L HA15作用Huh7、Hep3B细胞，细胞增殖实验检测结果显示：HA15-Huh7细胞和正常Huh7细胞24、48、72、96 h细胞增殖率分别为112.81%±0.27%、154.71%±1.45%、237.66%±16.77%、294.40%±14.92%和133.67%±0.49%、352.93%±2.31%、557.17%±4.89%、662.60%±13.31%，两者比较，差异有统计学意义（ F组间=766.800， F时间=518.200， F交互=133.300， P<0.05）；HA15-Hep3B细胞和正常Hep3B细胞上述指标分别为121.27%±2.32%、203.85%±3.18%、240.80%±3.02%、286.50%±7.10%和239.14%±1.02%、362.00%±5.44%、539.37%±10.80%、694.79%±17.13%，两者比较，差异有统计学意义（ F组间=594.300， F时间=317.900， F交互=78.600， P<0.05）。②qRT-PCR检测结果显示：HA15-Huh7细胞和正常Huh7细胞中，GRP78、p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA的相对表达量分别为0.27±0.05，3.64±0.28，4.13±0.41，0.51±0.07，0.39±0.03，0.17±0.02和1.02±0.14，1.00±0.03，1.00±0.05，1.01±0.08，1.01±0.09，1.03±0.17，两者比较，差异均有统计学意义（ t=5.00，9.25，7.63，4.73，6.82，5.01， P<0.05）；HA15-Hep3B细胞和正常Hep3B细胞上述指标分别为0.28±0.03，3.49±0.78，4.31±0.53，0.38±0.05，0.36±0.04，0.24±0.03和1.01±0.11，1.03±0.18，1.01±0.08，1.00±0.06，1.02±0.15，1.00±0.06，两者比较，差异均有统计学意义（ t=6.26，3.08，6.21，7.97，4.26，11.08， P<0.05）。③Western blot检测结果显示：HA15-Huh7细胞和正常Huh7细胞中，GRP78、p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6蛋白的相对表达量分别为0.52±0.05，1.94±0.08，1.58±0.02，0.89±0.00，0.86±0.02，0.74±0.01和1.02±0.03，1.00±0.03，1.02±0.02，1.04±0.03，1.00±0.01，1.01±0.02，两者比较，差异均有统计学意义（ t=11.54，10.28，11.03，12.81，13.67，10.09， P<0.05）。HA15-Hep3B细胞和正常Hep3B细胞上述指标分别为0.57±0.02，1.67±0.04，1.41±0.04，0.82±0.03，0.70±0.02，0.74±0.01和1.03±0.01，0.98±0.03，1.00±0.03，1.03±0.03，1.01±0.01，1.04±0.01，两者比较，差异均有统计学意义（ t=10.81，11.54，12.26，13.62，14.23，10.17， P<0.05）。 结论:GRP78高表达是影响肝癌病人3年总体生存率和疾病无进展生存率的独立危险因素，抑制GRP78表达可抑制肝癌细胞增殖活性及影响p53、p21、CDK2、CDK4、CDK6基因和蛋白表达。

目的:观察松果菊苷(ECH)对盲肠结扎穿刺(CLP)所致脓毒症大鼠肝损伤及糖代谢紊乱的治疗作用，并探讨其可能机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为4组，分别为假手术组(Sham)、模型组(CLP)、治疗组(CLP+ECH)及抑制剂组(CLP+ECH+EX527)。假手术组，仅接受剖腹手术；模型组，进行盲肠结扎和穿刺；治疗组，CLP建模后每天灌胃松果菊苷(30 mg/kg)，持续7 d；抑制剂组，CLP前1 h注射SIRT1抑制剂EX527(5 mg/kg)，后同治疗组。检测各组大鼠空腹血糖、胰岛素及血清生化指标水平；ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平；DCFH-DA染色观察各组大鼠肝脏组织中活性氧(ROS)生成情况；HE染色观察各组大鼠肝组织病理改变；Western blot检测各组大鼠肝组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)、葡萄糖6-磷酸酶(G6Pase)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶(PEPCK)、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达。结果:与假手术组比较，模型组大鼠血糖浓度、血清胰岛素、ALT、AST、ROS、IL-1β、IL-6、TNF-α水平上升，而肝糖原、生存率下降(均 P<0.05)。经松果菊苷治疗后，CLP大鼠血糖浓度、血清胰岛素、ALT、AST、ROS、IL-1β、IL-6、TNF-α水平下降，肝糖原、生存率上升(均 P<0.05)；SIRT1抑制剂干预后，抑制剂组的血清胰岛素、ALT、AST、IL-6、ROS水平升高( P<0.05)。HE染色发现，模型组大鼠肝脏组织存在炎症细胞的浸润及肝细胞坏死，而松果菊苷可减轻局灶性和块状坏死；Western blot检测发现：与假手术组比较，模型组大鼠肝组织中SIRT1、p-STAT3和p-AKT蛋白表达水平下降，而G6Pase、PEPCK蛋白表达水平升高( P<0.05)，而松果菊苷治疗后SIRT1、p-STAT3和p-AKT蛋白表达水平升高，G6Pase、PEPCK蛋白表达水平下降( P<0.05)。SIRT1抑制剂干预后，抑制剂组SIRT1、p-STAT3、p-AKT蛋白表达降低，G6Pase、PEPCK蛋白表达升高( P<0.05)。 结论:松果菊苷是脓毒症相关肝损伤及糖代谢紊乱的潜在治疗剂，其机制可能通过SIRT1介导激活肝脏中STAT3、AKT而起作用。

目的:观察双链RNA依赖的蛋白激酶（PKR）抑制剂2-氨基嘌呤（2-AP）对盲肠结扎穿刺（CLP）的脓毒症模型小鼠器官损伤血浆炎症因子表达及死亡率的影响。方法:无特异病原体（SPF）级C57BL/6小鼠40只，随机分为假手术（Sham）组、CLP组、2-AP组和CLP+2-AP组（ n=10）。术后24 h收集外周血血清，进行丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、血肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）及炎症因子（IL-1β、IL-10和TNF-α）的检测；取肺组织进行病理检测；取外周血和腹腔灌洗液进行细菌清除率检测。另外取60只C57BL/6小鼠，按照上述分组（ n=15）进行7 d生存率观察。组间计量资料比较采用独立样本 t检验。 结果:CLP组和CLP+2-AP组小鼠肝损伤指标（ALT和AST水平）和肾损伤指标（Cr和BUN）均较Sham组显著升高（均 P<0.001）。CLP+2-AP组ALT和AST水平均显著低于CLP组（ t=27.88、11.33，均 P<0.001）；肾功能损伤指标方面，CLP+2-AP组Cr和BUN水平均较CLP组显著下降（ t=11.02、7.15，均 P<0.001）。与Sham组相比，CLP组血浆中促炎（IL-1β和TNF-α）及抑炎（IL-10）细胞因子水平均显著升高（均 P<0.001）；CLP+2-AP组小鼠血浆IL-1β和IL-10水平均显著降低（均 P<0.001），而血浆TNF-α水平下降不明显（ P=0.33）。Sham组小鼠7 d生存率为100%，CLP+2-AP组为13.3%，2-AP组为86.7%，CLP+2-AP组为20.0%。抑制PKR活化可轻微改善CLP模型小鼠7 d生存率趋势（Mantel-Cox检验分析，χ 2=0.0012， P=0.97）。 结论:在脓毒症小鼠模型中，抑制PKR活性可对降低血浆中炎症因子表达，减少血液和腹腔中细菌负荷，对器官损伤具有保护作用，提示抑制PKR活性在脓毒症治疗中具有应用潜力。

目的 探究苏拉明(Sur)在对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠急性肝损伤模型中的作用及机制.方法 将8～10周龄C57BL/6J小鼠随机分为APAP组和APAP+Sur组(提前1 h注射20 mg/kg Sur),饥饿18 h后腹腔注射400 mg/kg APAP建立小鼠急性肝衰竭模型并统计存活情况;小鼠急性肝损伤模型为腹腔注射300 mg/kg APAP(其他条件不变),并增加Control组,分别在APAP处理后0、2、12h收取肝脏组织和血清.ELISA法和CBA技术检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的释放和炎症因子的分泌;HE染色和免疫组化检测肝组织坏死和炎性细胞浸润;DCFA-DH法和ELISA法检测肝组织活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)以及谷胱甘肽(GSH)水平;免疫印迹法检测肝组织中JNK信号通路的活化.结果 苏拉明处理可提高APAP诱导小鼠存活率,降低血清中转氨酶和炎性因子释放,减轻APAP诱导的肝细胞坏死和肝内炎性细胞浸润.机制研究发现,苏拉明处理可延缓APAP诱导的肝内GSH耗竭,降低MDA和ROS水平,并抑制JNK通路活化.结论 该研究证实了苏拉明在对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤中的保护作用,其机制可能与氧化应激、炎症相关.

目的 探索云暴露系统用于吸入毒理体外暴露实验的可行性.方法 采用高、中、低(800、400、200 mg·L-1)3个浓度的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)通过云暴露系统对气液界面(air-liquid interface,ALI)培养的Calu-3细胞进行暴露,磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)暴露作阴性对照组,暴露1次,另取高浓度LPS溶液暴露5次,暴露结束后3 h和24 h分别检测Calu-3细胞的活性、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、跨上皮电阻值(TEER)、黏蛋白MUC5AC以及炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α表达.结果 与PBS阴性对照组相比,高、中、低3种浓度的LPS气液界面暴露于Calu-3细胞模型后,细胞的活性、LDH释放量无显著变化,但细胞电阻值降低,细胞的屏障功能受损;随着暴露浓度的升高,LPS促进细胞黏蛋白MUC5AC的表达,使细胞IL-6、IL-8表达下降,TNF-α表达上升;随着暴露频率的增加,LPS会抑制黏蛋白的表达,使IL-6表达上升;暴露频率增加的同时延长暴露后的检测时间会使细胞IL-8、TNF-α表达上升.结论ALT云暴露的方式可以有效反映细胞对阳性受试物的反应,此体外暴露方法可以用于后续暴露实验来评价化合物的吸入毒性.

糖尿病是一种发病率高且并发症多的代谢性疾病,其中2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)占比较大.目前研究表明,T2DM伴随着肝、肾等脏器损伤引起并发症,严重危害人体健康.铁死亡通过芬顿反应产生大量活性氧(reactive oxygen species,ROS),ROS累积会激活缺氧诱导因子-1 α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α),从而引发血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平升高,铁死亡抑制剂——铁抑素-1(ferrostatin-1,Fer-1)具有强抗氧化能力,所以基于缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子(HIF-1α/VEGF)信号通路,探讨Fer-1对糖尿病中晚期小鼠肝、肾组织的保护作用.实验以21～22周龄db/db小鼠作为糖尿病中晚期模型,铁死亡抑制剂Fer-1为干预药物.db/m小鼠为空白对照组,连续4周测量体重、血糖,实验中还对各组小鼠进食量、饮水量进行记录;测定血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,测定肝 肾组织中ROS、谷胱甘肽(glutathione,GSH)活性以及尿蛋白含量,并用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色处理肝、肾组织切片,光镜观察病理学形态,再通过Western印迹法分别检测肝、肾组织中HIF-1α、VEGF和谷胱甘肽过氧化物酶 4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白质水平.在 db/db 组小鼠中发现,Fer-1(1 mg·kg-1,ig)可明显减少进食量和饮水量,降低小鼠血清中的ALT、AST水平、肝肾组织中ROS生成量以及尿蛋白水平,显著升高GSH活性,显著改善了肝、肾的病理组织状况,并且明显抑制肝肾组织中HIF-1α和VEGF蛋白质指标、提高GPX4蛋白水平.Fer-1虽不能改变糖尿病小鼠的体重和降低血糖,但能对糖尿病中晚期小鼠的肝、肾组织发挥保护作用,其作用机制可能与HIF-1α/VEGF和GPX4有关.

目的 基于c-jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路探讨儿茶素对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导肝损伤的作用及机制.方法 ICR小鼠随机分为对照组、模型组以及儿茶素(50、100mg/kg)组,小鼠连续3dig儿茶素,末次给予儿茶素1h后ip APAP(400mg/kg),6h后采用苏木素-伊红(HE)染色评估小鼠肝脏组织病变,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性及肝脏中谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;考察儿茶素对细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)代谢酶活性的影响.人正常肝细胞L02给予40、80 μmol/L儿茶素,15 min后给予15 mmol/L APAP孵育6 h,检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、线粒体膜电位变化、线粒体呼吸链复合物Ⅰ活性、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量、胞质B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)、第2个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂(second mitochondria-derived activator of caspases,Smac)、凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)蛋白表达以及线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin2,Mfn2)、Bax蛋白表达和p-JNK、JNK蛋白表达.给予JNK激活剂后,考察儿茶素对APAP诱导的肝细胞损伤作用.结果 儿茶素显著降低APAP诱导的肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性(P＜0.05、0.01),显著升高肝脏GSH水平和SOD活性(P＜0.05、0.01),改善肝脏损伤.儿茶素显著升高APAP处理的L02细胞存活率、线粒体膜电位、呼吸链复合物Ⅰ活性和ATP水平(P＜0.05、0.01),显著降低ROS水平(P＜0.05),显著下调线粒体中Drp1、Bax和胞质中Smac、AIF蛋白表达(P＜0.05),显著上调线粒体中Mfn2和胞质Bax的蛋白表达(P＜0.05),并抑制JNK的磷酸化水平(P＜0.05).给予JNK激活剂后,儿茶素的抗氧化作用和对肝脏的保护作用明显减弱(P＜0.05、0.01).结论 儿茶素通过抑制JNK信号通路减轻线粒体氧化应激,进而拮抗APAP诱导的肝损伤.