目的:探讨ASB6在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法:收集山东第一医科大学第三附属医院胃肠外科2015年1月至2018年1月收治的106例结直肠癌患者术后的癌组织以及癌旁组织，通过免疫组织化学染色法检测组织中ASB6的表达情况，并分析其表达与临床病理特征之间的关系。应用实时荧光定量PCR检测组织中ASB6 mRNA的表达情况。应用Kaplan-Meier法分析ASB6的表达与患者预后之间的关系。应用Cox回归模型分析结直肠癌患者预后的影响因素。结果:ASB6在结直肠癌组织中的高表达率（67.9%，72/106）明显高于癌旁组织（10.4%，11/106， χ2=73.67， P<0.001）。ASB6的表达与淋巴结转移（ χ2=7.34， P=0.007）及TNM分期（ χ2=16.85， P<0.001）相关，而与患者的年龄（ χ2=0.42， P=0.516）、性别（ χ2=0.76， P=0.385）、肿块大小（ χ2=0.91， P=0.341）、肿瘤位置（ χ2=2.29， P=0.130）、组织学类型（ χ2<0.01， P>0.999）、分化程度（ χ2=2.54， P=0.111）、远处转移（ χ2=3.38， P=0.066）无关。实时荧光定量PCR结果显示，ASB6在结直肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织（5.37±0.13比3.39±0.09， t=-12.48， P<0.001）。Kaplan-Meier生存分析显示，ASB6高表达组（72例）与ASB6低表达组（34例）患者的5年总生存率分别为45.8%和73.5%（ χ2=6.82， P=0.009）。单因素分析显示，ASB6表达（ HR=3.09，95% CI为1.25~7.65， P=0.015）、淋巴结转移（ HR=0.41，95% CI为0.21~0.82， P=0.011）、远处转移（ HR=0.20，95% CI为0.10~0.42， P<0.001）以及TNM分期（ HR=0.10，95% CI为0.03~0.32， P<0.001）是预后的影响因素，多因素分析发现，远处转移（ HR=0.22，95% CI为0.09~0.50， P<0.001）及TNM分期（ HR=0.25，95% CI为0.11~0.58， P<0.001）是影响预后的独立因素。 结论:ASB6在结直肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织，且ASB6高表达的患者其预后明显差于低表达者，可将ASB6作为未来结直肠癌患者早期监测及术后生存评估的重要指标。

目的 建立测定酸枣仁和理枣仁中6'''-芥子酰斯皮诺素含量的高效液相色谱法(HPLC),以鉴别酸枣仁中掺伪理枣仁.方法 2020年12月至2022年12月,采用HPLC法,选用Agela Venusil ASB C18柱(4.6 mm×200 mm,5μm);以乙腈-0.2％冰醋酸水溶液为流动相梯度洗脱,对酸枣仁及理枣仁中6'''-芥子酰斯皮诺素的含量进行分析测定;检测波长:335 nm;体积流量:1.0 mL/min,柱温为30℃.结果 6'''-芥子酰斯皮诺素在2.32～138.96μg/L(r=1)内呈良好的线性关系.理枣仁平均加样回收率为97.5％,相对标准偏差(RSD)为1.5％.酸枣仁平均加样回收率为97.8％,RSD为1.7％.6'''-芥子酰斯皮诺素在酸枣仁中含量范围为0.0033％～0.0051％,在理枣仁中含量范围为0.0506％～0.0660％.结论 建立的6'''-芥子酰斯皮诺素HPLC含量测定分析方法灵敏度高、专属性强、重现性好,可用于酸枣仁中掺伪理枣仁的鉴别研究.

目的 测定大七厘制剂中砷甜菜碱(AsB)、砷胆碱(AsC)、一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)、亚砷酸根(As Ⅲ)、砷酸根(AsV)6 种砷形态的含量,并进行安全性评价.方法 样品用人工肠液置 37℃水浴中超声提取,采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法检测,色谱条件:Hamilton PRP-X100 阴离子交换柱(250 mm×4.1 mm,10 μm),以 100 mmol·L-1 碳酸铵溶液(含 2%甲醇)-2%甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速:0.8 mL·min-1.结果 方法检测限范围为2.00～6.00 μg·kg-1,在 1～200 ng·mL-1 范围内,r均≥0.999 8,加样回收率范围为 96.15%～101.76%,RSD小于 2%(n=6).大七厘制剂中砷元素主要以毒性较大的无机砷形式存在,其中AsⅤ含量最高,其次是As Ⅲ,AsB、AsC、MMA和DMA均未检出,其潜在的健康安全风险较大.结论 所建立的方法准确、重复性好,可为评价大七厘制剂的安全性提供参考.建议将无机砷(As Ⅲ、AsⅤ)作为大七厘制剂的毒性限量指标.

目的 建立血液和尿液中6种砷形态化合物[AsC、AsB、As(Ⅲ)、DMA、MMA、As(Ⅴ)]的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(high-performance liquid chromatography-inductively coupled plasma-mass spec-trometry,HpLC-ICp-MS)分析方法,并应用于实际案例. 方法 利用曲拉通破坏细胞,以乙二胺四乙酸二钠盐二水合物络合细胞内砷形态化合物,超声水浴加乙腈沉淀蛋白进行样品前处理,采用Hamilton pRp-X100阴离子分析柱,碳酸铵水溶液与超纯水作为流动相,对样品中砷形态化合物进行梯度洗脱后,采用ICp-MS分析样品中砷形态化合物.结果 血液中砷形态化合物检测限为1.66~10 ng/mL,最低定量限为5~30 ng/mL,尿液中砷形态化合物检测限为0.5~10 ng/mL,最低定量限为5~30 ng/mL,日内、日间精密度的相对标准偏差不超过10%,且成功应用于3组案例.结论 本研究建立了血液和尿液中常见6种砷形态化合物的分析方法,该方法适用于涉砷中毒案件的司法鉴定及砷剂治疗患者血液和尿液中砷形态化合物的检测.

ASB11参与胚胎神经祖细胞的发育、再生性肌发生以及泛素化等过程,但其机制仍不清楚.为了进一步研究斑马鱼Asb11基因的作用机制,本研究采用DNA免疫技术制备了ASB11多克隆抗体;利用斑马鱼Asb11的cDNA构建pCAGGS-P7/ASB11重组表达质粒,肌肉注射入6-8周龄的BALB/c小鼠体内,诱导抗原蛋白的表达和免疫应答的发生.结果显示,制备的pCAGGS-P7/ASB11重组质粒具有较好的免疫原性;将提取的抗血清进行Western-blot和免疫荧光检测,显示所制备的多克隆抗体抗体效价为1:400,抗血清抗体能特异的结合ASB11蛋白.本研究为后续的功能研究奠定了基础.

Objectives:To investigate the mechanism of Liuwei Dihuang Pill (六味地黄丸, LDP) in treating postmenopausal osteoporosis (PMOP) with Shen (Kidney) yin deficiency.Methods:In this study,205 cases of PMOP were divided into the PMOP Shen-yin deficiency group (Group A),PMOP Shen-yang deficiency group (Group B),PMOP without Shen deficiency group (Group C),and control group (Group N).Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and Westem blot techniques were used to observe the effects of LDP treatment on the cardiotrophin-like cytokine factor 1 (CLCF1),ankyrin repeat and SOCS box containing 1 (ASB1),and prokineticin 2 (PROK2) genes and the Janus kinase/signal transducer and activator of transcription (JAK/STAT) signaling pathway.Results:The mRNA (P＜0.05) and protein (P＜0.01) expression levels of the CLCF1 gene in Group A were significantly lower than the corresponding levels in Group N.After LDP treatment for 3 months,the mRNA expression levels of the CLCF1 gene were obviously up-regulated (P＜0.01).After 6-month treatment,the expression levels of CLCF1 mRNA and protein were significantly up-regulated (both P＜0.01),and the average bone density of the top femur had significantly increased (P＜0.05).In vitro,CLCF1 overexpression resulted in a significant increase in the total protein and phosphoryiated protein levels of JAK2 and STAT3.Conclusions:The CLCF1 gene is an important gene associated with PMOP Shen-yin deficiency and the therapeutic effects of LDP may be mediated by up-regulation of CLCF1 gene expression and activation of the JAK/STAT signaling pathway.

目的:利用基因表达谱芯片技术筛选正常人血清和心肌淀粉样变患者血清干预培养心肌细胞的差异表达基因,以探讨淀粉样变心肌病发病的可能机制.方法:通过将分离的血清稀释10倍后干预培养SD乳鼠心肌细胞建立模型,采用CCK-8检测各组细胞活性抑制程度,基因表达谱芯片技术筛选两组大鼠差异表达基因,采用实时定量PCR验证相关基因表达量.结果:CCK 8显示与正常control组相比,阴性对照组细胞存活率略有下降,但无统计学意义.与control组相比,实验组细胞存活率明显下降至约70％ (P＜0.05).基因芯片分析显示,患者血清实验组及正常血清对照组两组相比,差异表达的基因有869条,其中上调基因710条,下调基因159条.实验组中胶原形成相关基因Col1a1、Col3a1、Co15a2、Col6a1、Co16a2、Co16a3,促纤维形成相关基因Lama1、It-ga4、Vwf、Mmp14的表达均明显上调(P＜0.05);影响血管重建相关基因Angptl4、Asb4、Cited1表达下调(P＜0.05).经RT-PCR验证,结果一致.结论:心肌淀粉样变患者血清干预影响培养心肌细胞的活性,促进胶原纤维形成并影响血管重建.淀粉样变心肌病的病理机制涉及多个基因,其中基质纤维化、血管重建受阻对淀粉样变心肌病的发生发展起着至关重要的作用,其具体机制还有待进一步研究.

目的 比较解剖位单束(ASB)重建与过顶位单束(OSB)重建前交叉韧带(ACL)的临床疗效.方法 回顾性分析2015年3月-2017年9月该院收治的44例ACL断裂的单膝ACL损伤患者的临床资料.采用ASB重建手术22例(ASB组),采用OSB重建手术22例(OSB组).两组患者性别、年龄、病程、国际膝关节文献委员会(IKDC)评分和Lysholm评分等一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性.结果 两组患者均获得随访,时间为6～12个月,平均8.6个月,术后6个月随访时,在膝关节活动度方面,ASB组无屈曲、伸直受限;OSB组1例伸直受限5°,无屈曲受限;在Lachman试验方面,ASB组均为阴性,OSB组术后Ⅰ度3例,但止点硬.两组Lachman试验阴性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组轴移试验阴性率比较,差异有统计学意义(P<0.05).两组IKDC评分、Lysholm评分术前术后比较,差异均有统计学意义(P<0.05);两组术后6个月IKDC评分、Lysholm评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 关节镜下采用ASB重建ACL,在控制膝关节旋转稳定性方面优于传统OSB重建.

目的 建立离子色谱-电感耦合等离子质谱联用技术分析沉香化气丸中不同形态砷(As)和六价铬Cr(Ⅵ).方法 以0.15 mol·L-1硝酸溶液为萃取剂,80℃恒温箱中热浸提法提取沉香化气丸中砷甜菜碱(AsB)-二甲基砷酸(DMA)、三价砷As(Ⅲ)、砷胆碱(AsC)、甲基砷酸(MMA)、五价砷As(V)等6种不同形态砷,磷酸氢二钾、磷酸二氢钾缓冲溶液与六水合氯化镁以及碱性提取液提取沉香化气丸中Cr(Ⅵ).采用离子色谱-电感耦合等离子质谱直接测定相应含量.结果 沉香化气丸药材中砷的形态主要以As(Ⅲ)、As(Ⅴ)为主,毒性极强的Cr(Ⅵ)含量极低,不同形态As回收率92.4％～105.8％,Cr(Ⅵ)回收率101.29％.结论 该方法灵敏,准确性好,是分离测试沉香化气丸中不同形态As和Cr(Ⅵ)的有效方法.

目的 建立金枪鱼罐头中砷形态分析的检测方法,加强食品安全性评价的技术保障.方法 采用液相色谱-电感耦合等离子体质谱法,测定金枪鱼罐头中6种砷形态化合物(AsⅢ、AsⅤ、MMA、DMA、AsC、AsB).样本经硝酸提取,采用Dionex lonPac AS7色谱柱,30 mmol/L碳酸铵溶液作为流动相进行洗脱,液相色谱分离,电感耦合等离子体质谱进行定性和定量分析.结果 在0～ 50.0μg/L浓度范围内6种砷形态化合物线性良好,相关系数r均优于0.999,方法加标回收率为88.24％～ 100.00％,相对标准偏差＜5％.结论 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法准确、可靠、灵敏度高,适用于金枪鱼罐头中6种砷形态化合物的定量检测.