目的:探讨Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在丙泊酚减轻大鼠神经元氧糖剥夺-复氧复糖(OGD/R)损伤中的作用。方法:大鼠原代海马神经元培养成功后，采用随机数字表法分为5组( n＝20)：对照组(C组)、OGD/R组、赋形剂组(D组)、OGD/R＋丙泊酚组(OGD/R＋P组)、OGD/R＋丙泊酚＋Nrf2抑制剂组(OGD/R＋N组)。采用氧糖剥夺6 h复氧复糖20 h的方法制备神经元OGD/R损伤模型。OGD/R＋P组于复氧复糖即刻加入丙泊酚(终浓度10 μmol/L)。OGD/R＋P＋N组于氧糖剥夺前4 h时加入Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇(终浓度100 nmol/L)，于复氧复糖即刻加入丙泊酚(终浓度10 μmol/L)。于复氧复糖结束时测定神经元存活率和凋亡率、ROS活性、Bax、Bcl-2、KEAP1、Nrf2表达水平及Nrf2核转位情况。 结果:与C组比较，OGD/R组神经元凋亡率和ROS活性升高，存活率降低，Keap1、Nrf2及Bax表达上调，Bcl-2表达下调( P<0.05)，Nrf2核转位增多，D组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。与OGD/R组比较，OGD/R＋P组神经元凋亡率和ROS活性降低，存活率升高，Keap1、Nrf2及Bcl-2表达上调，Bax表达下调( P<0.05)，Nrf2核转位增多。与OGD/R＋P组比较，OGD/R＋P＋N组神经元凋亡率和ROS活性升高，存活率降低，Keap1、Nrf2及Bcl-2表达下调，Bax表达上调( P<0.05)，Nrf2核转位减少。 结论:丙泊酚可通过激活Keap1/Nrf2信号通路，减轻氧化应激和细胞凋亡，减轻大鼠神经元OGD/R损伤。

肿瘤内菌群是指存在于肿瘤中并构成肿瘤微环境的一类细菌群落。作为肿瘤微环境的重要组成部分，肿瘤内菌群通过多种机制影响肿瘤的发生和发展，并改变肿瘤对化疗和免疫治疗的反应。此文主要概述肿瘤内细菌的来源和作用机制，重点关注消化系统肿瘤内细菌的组成和功能，并探讨其在抗肿瘤治疗中的应用前景，以期为其临床应用提供参考。

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)是导致人类疱疹性疾病的主要病原体，具有广泛宿主细胞类型、庞大外源基因容量等特点，因此也是一种颇具吸引力的病毒载体。HSV基因组较为庞大，对于病毒基因组的操作技术便成为关键环节。对该病毒基因组的操作先后经历了同源重组(homologous recombination),细菌人工染色体技术(bacterial artificial chromosome, BAC)和CRISPR/Cas9 (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeat/CRISPR-associated nuclease 9 )技术。同源重组具有重组效率低、产物不易纯化等缺点，而且将大型病毒基因组克隆到BAC上是一个耗时耗力的过程。近年来，CRISPR/Cas9技术因其操作简便、重复性好、成本低廉等优势而被越来越多的研究者应用于各种物种的基因工程研究工作中，对于病毒基因组的操作也随之更加精确高效。本文对CRISPR/Cas9技术在HSV基因功能、治疗HSV感染性疾病及HSV载体研究中的应用进行综述，以期对相关的研究工作提供一定参考。

目的:探讨川藏藏族儿童发育性髋关节脱位的影响因素。方法:本研究为回顾性研究。以四川省骨科医院儿童骨科2013年1月至2021年12月收治的99例来自四川省甘孜藏族自治州、阿坝藏族羌族自治州、凉山彝族自治州及西藏自治区的藏族发育性髋关节脱位患儿作为研究对象，对患儿监护人进行问卷调查。按照受试者常住地分为四组：甘孜藏族自治州组(A组)，阿坝藏族羌族自治州组(B组)，凉山彝族自治州组(C组)和西藏自治区组(D组)。问卷调查内容包括受试者相关性因素(受试者是否早产，生产方式为顺产或剖宫产，生产时体位为头位或臀位，受试者是否为头胎或二胎及以上)；以及监护人及家庭相关性因素[监护人是否为15岁以上、不识字且不会写字的成年人(以下简称文盲)，受试者出生后襁褓方式是否绑腿，受试者是否定期接受儿童保健，受试者家庭经济情况]。结果:四组DDH患儿是否早产(χ 2＝7.564、 P<0.05)、生产方式(χ 2＝7.524、 P<0.05)、生产胎位(χ 2＝6.801、 P<0.05)、是否头胎(χ 2＝13.008、 P<0.05)、监护人文化程度(χ 2＝14.114、 P<0.05)、襁褓方式(χ 2＝13.080、 P<0.05)、是否定期进行儿童保健(χ 2＝11.107、 P<0.05)，以及家庭经济状况(χ 2＝11.935、 P<0.05)等因素比较，差异均有统计学意义。儿童受试者相关因素中"早产和臀位产"，监护人及家庭相关性因素中"监护人是文盲"、"襁褓方式为绑腿"、"未定期接受儿童保健"是川藏藏族儿童DDH发病的主要影响因素( P<0.05)。 结论:早产、臀位生产、监护人是文盲、襁褓方式为绑腿、未规范进行儿童保健可能与藏族儿童DDH发病率升高有关。

目的:制备GII.3[P12]型人源诺如病毒(human norovirus, HuNoV)广州株GZ2013-L20的病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)和多克隆抗体，系统表征其免疫原性特征和受体结合能力，为HuNoV防控提供数据支撑。方法:以GZ2013-L20毒株基因组为模板，扩增ORF2并构建重组转座载体，转化至大肠埃希菌 DH10 Bac获得重组杆状病毒质粒Bacmid-L20-ORF2，在昆虫细胞sf9中表达目的VLP，采用透射电镜、SDS-PAGE、Western blot(WB)和受体结合实验等方法对纯化后VLP进行鉴定。此外，将VLP免疫小鼠获得多克隆抗体，通过间接ELISA和受体结合阻断试验进行评价。 结果:构建了重组杆状病毒Bacmid-L20-ORF2，并成功获得目的毒株VLP；透射电镜显示颗粒直径约为30 nm；SDS-PAGE和WB结果显示蛋白相对分子质量(Mr. ×10 3)约58；受体结合实验表明，目的VLP与分泌型唾液受体(A型、B型、AB型和O型)、O型非分泌型唾液受体以及猪胃黏蛋白均能有效结合；VLP多克隆抗体效价达到2×10 5，且与20种(20/28)基因型HuNoV的衣壳蛋白具有交叉免疫反应；受体结合阻断实验显示，多克隆抗体仅对同型VLP具有中和阻断效果，而对GII.2、GII.4、GII.8和GII.17等基因型VLP没有中和作用。 结论:GII.3[P12]型HuNoV广州株VLP与分泌型和非分泌型唾液受体均呈现较强的结合能力，其多克隆抗体具有免疫结合广谱性，但中和阻断效果仅对同型病毒有效，其结果为疫苗研发的理性设计提供基础数据。

目的:目前新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis，NEC)动物模型的构建方式仍不统一，本研究旨在明确更贴切临床NEC患儿实际情况的动物建模方式。方法:随机将54只C57BL/6新生小鼠分为五组，依次为：对照组(Ctrl组，10只)、缺氧+人工喂养组(HF组，10只)、缺氧+人工喂养+冷刺激组(Cold组，12只)、缺氧+人工喂养+脂多糖(lipopdysaccharide，LPS)组(LPS组，11只)、缺氧+人工喂养+NEC肠内细菌组(Bac组，11只)；分别建立NEC动物模型后，评估肠道组织病理、NEC相关肠上皮屏障蛋白(β-catenin、Occludin)和肠上皮细胞死亡标记性分子(CC3、RIPK1、PARP1)以及促炎细胞因子(IL-6、TNF-α、MCP1)的表达变化。结果:按照肠道组织学Nadler评分≥2分视为NEC样肠道损伤。本研究除Ctrl组和HF组外，其余三组NEC造模的肠道组织病理均满足NEC样肠道损伤标准。与HF组(30%)、Cold组(83.3%)和LPS组(81.8%)相比，Bac组的建模成功率最高(100%)，且造模期间Bac组小鼠的精神状况、腹胀腹泻、活动度等与NEC临床情况更为贴切，同时Bac组小鼠的肠道屏障蛋白β-catenin和Occludin表达下降，与Ctrl组相比，差异有统计学意义( P<0.05)。LPS组和Bac组肠上皮细胞死亡标记性分子RIPK1和PARP1表达上调，炎症因子IL-6、TNF-α和MCP1表达水平增加，与Ctrl组相比，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:本研究成功比较了4种NEC动物模型的建立方法，明确了一种更贴近临床NEC患儿实际情况的动物建模方法，即"缺氧+人工喂养+NEC肠内细菌"。该造模方法成功率高，肠道组织病理损伤、肠道屏障蛋白表达和全身炎症反应与临床上NEC患儿特征相似度更高。

目的:应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备共表达H7N9 M2蛋白及高致病性禽流感H5N1 HA蛋白的病毒样颗粒（VLPs）。方法:将H7N9亚型禽流感M2蛋白作为基础蛋白，与禽流感H5N1膜蛋白HA共表达，通过杆状病毒表达系统表达出VLPs，纯化后通过蛋白印迹试验鉴定VLPs中蛋白的表达情况，用透射电镜观察VLPs形态，血凝试验测定VLPs的活性。结果:H5N1 HA、H7N9 M2蛋白可以在昆虫细胞中共表达，相对分子质量为76 000，并组装成流感VLPs；电镜观察到VLPs的形态与流感病毒一致，直径70~80 nm；血凝试验显示该VLPs具有类似流感病毒的血凝活性。结论:该方法可以制备流感VLPs，为H7N9与H5N1高致病性禽流感广谱疫苗研究提供了可行方案。

土壤微生物是连接地上植被和土壤养分循环的关键枢纽,然而对于毛乌素沙地生态恢复过程中植被和土壤对微生物群落的影响还不明确.本研究以流动沙丘为对照(0年),以10、30、50和70年的柠条固沙林土壤为研究对象,将磷脂脂肪酸(PLFA)标记法与灌木、草本植物和土壤因子结合,探究不同恢复年限下土壤微生物群落特征的变化规律及其调控因子.结果表明:随着恢复年限的增加,生态恢复效应指数显著增加.0、10、30、50 和 70 年的总 PLFA 含量分别为 47.75、55.89、63.53、67.23 和 82.29 nmol·g-1.随着生态恢复指数增加,细菌含量和革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌比均显著增加;革兰氏阴性菌群落含量和真菌与细菌比均显著下降.灌木、草本植物和土壤因子能解释土壤微生物群落72.4％的变异,其中土壤因子的贡献高于植被因子.毛乌素沙地土壤微生物群落的总PLFA含量随恢复年限的增加而增加,并且土壤含水量、酸碱度、全氮和土壤有机碳为影响土壤微生物群落特征的主要驱动因子.随着毛乌素沙地柠条固沙林恢复年限的增加,主要由土壤因子驱动的土壤微生物群落结构发生显著变化.

目的:筛选表达量高且具有血凝抑制活性的B/Yamagata系流感病毒血凝素(HA)重组蛋白.方法:以B/Singapore/IN-FTT-16-0610/2016的HA为基础,在HA胞外区C末端分别融合GCN4pLL三聚化基序、GCN4pLL-半胱氨酸及GCN4pLL-七鳃鳗可变淋巴细胞受体-B(VLR-B)抗体C端的肽段序列,分别获得HA突变体基因BY-T、BY-LLc及BY-PLc;分别插入pFast-Bac1,采用杆状病毒昆虫细胞表达系统进行表达.表达鉴定后,Strep-Tactin亲和层析纯化,然后鉴定纯化突变体蛋白的寡聚程度及血凝活性.突变体蛋白免疫小鼠,检测免疫血清HA特异性IgG抗体和血凝抑制(HAI)抗体水平.结果:各HA突变体均能够有效表达,BY-T突变体表达水平最高,易于纯化,纯度好,呈多聚化形式存在;BY-LLc及BY-PLc表达水平次之,呈高聚化形式存在.三种HA突变体蛋白的血凝活性相当,均可有效诱发的HA特异性结合的IgG抗体和HAI抗体.结论:HA蛋白胞外区C端融合寡聚化基序GCN4pLL的突变体易于纯化,具有血凝活性,可诱发小鼠产生HA特异性抗体和HAI抗体.研究为B/Yamagata系流感病毒重组蛋白疫苗的研发策略提供了参考.

目的 了解湖南省脑脊液标本分离细菌的分布及耐药性变迁,为临床正确诊断及合理用药提供参考.方法 收集湖南省细菌耐药监测网2012-2021年各成员单位上报数据,参照全国细菌耐药监测网(CARSS)技术方案执行,应用WHONET 5.6和SPSS 20.0软件对脑脊液标本分离细菌及其药敏结果数据进行分析.结果 2012-2021年湖南省细菌耐药监测网成员单位脑脊液标本共分离细菌11 837株,前5位依次为凝固酶阴性葡萄球菌(6 397株,54.0％)、鲍曼不动杆菌(764株,6.5％)、金黄色葡萄球菌(606株,5.1％)、屎肠球菌(465株,3.9％)、大肠埃希菌(447株,3.8％);耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率为58.9％～66.3％,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率为34.4％～62.1％,未发现对万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁耐药的葡萄球菌属细菌;屎肠球菌检出率高于粪肠球菌,屎肠球菌对青霉素、氨苄西林、高浓度链霉素、左氧氟沙星的耐药率高于粪肠球菌(均P=0.001);肺炎链球菌对青霉素的耐药率为85.0％,处于较高水平;大肠埃希菌对头孢曲松的耐药率＞60％,对含酶抑制剂和碳青霉烯类抗生素的耐药率较低;肺炎克雷伯菌对头孢曲松的耐药率＞60％,对含酶抑制剂哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率＞30％,对碳青霉烯类药物(亚胺培南、美罗培南)耐药率在30％左右;鲍曼不动杆菌对大部分测试药物的耐药率＞60％,对亚胺培南和美罗培南的耐药率为59.0％～79.4％,对多黏菌素B保持较低水平耐药.结论 脑脊液标本分离细菌中,凝固酶阴性葡萄球菌占比最高,病原菌整体耐药情况较为严重,细菌耐药监测对中枢神经系统感染的有效治疗非常重要.