为探讨骨形成蛋白（BMP）4及其下游信号通路在低氧性支气管肺发育不良相关肺动脉高压（BPD-PH）的肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖中的作用机制，我们通过BMP4基因敲低（ Bmp4 lacZ/+）小鼠和细胞实验分别验证BMP4对于BMP4-PH心肺组织形态学改变和下游信号的影响。结果显示，低氧性BPD-PH模型中 Bmp4 lacZ/+小鼠心肺病变较野生型减轻；低氧的 Bmp4 lacZ/+和野生型中非Smad通路中的p38和Erk1/2磷酸化水平表达均升高，敲低BMP4后p-Erk1/2下调比p-p38更明显，而Smad通路无此改变。细胞实验结果表明，低氧可促进BMP4、p-Erk表达和PASMCs增殖；头蛋白（noggin）抑制BMP4表达后可下调低氧中高水平表达的Erk，进一步沉默Erk可下调低氧以引起PASMCs增殖。因此，在BPD-PH中低氧可以引起BMP4上调，主要通过Erk引起PASMCs过度增殖，参与到BPD-PH的血管重塑过程，降低BMP4表达可以下调Erk减少PASMCs过度增殖引起的心肺病变。

目的:探究骨形成蛋白4(BMP4)在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的肺动脉重塑中的作用及其机制。方法:本研究为实验研究。使用细胞活力检测、蛋白活力测定、蛋白质印迹法、siRNA干扰技术等方法研究BMP4对肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的作用。烟雾连续暴露12周小鼠构建肺动脉重塑的动物模型，免疫荧光检测肺动脉BMP4的表达。结果:相较于PDGF组，PDGF+BMP4组能够抑制Ⅰ型胶原蛋白的合成( P<0.001)和钙蛋白酶活性( P<0.001)。相较于对照组，蛋白激酶A(PKA)的活性增加( P<0.001)。已知PKA是钙蛋白酶活性的负调控因子。使用PKA激活剂后，PDGF诱导的钙蛋白酶活性下降( P<0.01)。siRNA沉默PKA，由BMP4下调的钙蛋白酶活性得以恢复( P<0.001)，并增加了Ⅰ型胶原蛋白的表达量( P<0.001)。与PDGF组相比，PDGF+BMP4抑制转化生长因子β 1(TGF-β 1)的活化( P<0.001)和Smad2/3的磷酸化( P<0.001)。在烟雾暴露的小鼠肺动脉中，BMP4蛋白表达降低( P<0.001)。 结论:BMP4通过激活PKA抑制钙蛋白酶-TGF-β 1信号轴，导致PASMC Ⅰ型胶原蛋白合成下降。BMP4作为一种保护因素阻碍肺动脉重塑。

目的:研究黄连素干预对糖尿病大鼠牙槽骨吸收的影响及可能机制。方法:通过一次性腹腔注射链脲佐菌素（35 mg/kg）建立糖尿病大鼠模型。将60只健康无特定病原体级雌性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为正常组、糖尿病组和黄连素组，每组20只。黄连素组和糖尿病组大鼠建立糖尿病模型后分别给予黄连素（200 mg/kg）和等体积的氯化钠注射液灌胃，每天1次，连续灌胃4周；正常组大鼠不予任何处理。检测大鼠的空腹血糖、空腹胰岛素（Fins）水平，计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和胰岛素敏感指数（ISI），并检测大鼠的血清钙、磷、碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素水平。苏木精-伊红染色观察大鼠牙周组织的病理学变化，反转录PCR和蛋白质印迹法（Western Blot）检测大鼠牙槽骨组织中骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、Smad1、Smad4基因的mRNA和蛋白表达变化。结果:与糖尿病组相比，黄连素组大鼠空腹血糖水平[（9.88±1.23）mmol/L比（21.66±2.41）mmol/L]、Fins水平[（11.63±3.63）mIU/L比（21.64±5.58）mIU/L]和HOMA-IR（7.58±0.96比20.85±1.95）均降低，ISI（-5.10±0.16比-6.15±0.18）以及血清钙[（1.855±0.125）mmol/L比（1.317±0.104）mmol/L]、磷[（3.087±0.278）mmol/L比（2.526±0.226）mmol/L]、ALP[（130.681±18.963）U/L比（99.874±31.968）U/L]和骨钙素水平[（112.368±9.752）ng/ml比（78.645±10.973）ng/ml]均升高，差异均具有统计学意义（均 P<0.05）。苏木精-伊红染色结果显示，正常组大鼠牙槽骨未见骨质吸收，糖尿病组大鼠牙槽骨可见骨质吸收，而黄连素组大鼠牙槽骨骨质吸收较糖尿病组明显减轻。反转录PCR和Western Blot结果显示，与糖尿病组相比，黄连素组大鼠牙槽骨组织中BMP-2、Smad1、Smad4基因的mRNA和蛋白表达均明显升高（均 P<0.05）。 结论:黄连素干预可降低糖尿病大鼠的空腹血糖水平，并改善胰岛素抵抗，其可能通过上调BMP-2/Smad信号通路减轻糖尿病大鼠的牙槽骨吸收。

目的:探索骨形态发生拮抗蛋白1(Gremlin-1)在脂毒性介导的胰岛β细胞功能障碍中的作用和机制。方法:利用棕榈酸(palmitic acid, PA)处理小鼠胰岛β细胞(MIN6)作为脂毒性介导胰岛β细胞功能障碍模型，首先考察PA引起的脂质沉积及胰岛素分泌水平改变，明确脂毒性对胰岛β细胞的影响，进一步利用qPCR、Western blot等方法考察PA对Gremlin-1表达及其下游信号通路BMP4/Smads的影响。随后利用重组小鼠Gremlin-1和BMP信号通路抑制剂LDN193189干预细胞，并与对照组进行比较。结果:PA刺激能够降低胰岛β细胞活力及胰岛素分泌能力( P<0.05)。同时，PA能够抑制细胞Gremlin-1的表达和分泌，增加BMP-4及其下游Smad-1、Smad-5的表达( P<0.05)。利用重组小鼠Gremlin-1蛋白干预细胞可使细胞的胰岛素分泌显著升高，同时BMP4/Smads信号通路中的关键分子表达降低( P<0.05)。而抑制BMP4/Smads信号通路可改善PA导致的胰岛β细胞功能障碍。 结论:Gremlin-1参与调控脂毒性介导的胰岛β细胞功能障碍，该作用可能与BMP4/Smads信号通路激活有关。

目的:探究沉默微小RNA-378(miR-378)靶向调节骨形态发生蛋白(BMP)2/母亲DPP同源物(Smad)4信号通路对大鼠胫骨骨折愈合的影响.方法:对38只大鼠建立胫骨骨折模型,另取18只正常大鼠作为假手术组.选取胫骨骨折模型造模成功大鼠中的8只作为造模组,假手术组中的8只作为对照组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测造模组胫骨骨折部位骨组织及对照组相同部位正常骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达.将30只胫骨骨折模型大鼠随机分为模型组、空载质粒组和miR-378沉默组,每组10只.空载质粒组、miR-378沉默组分别经尾静脉注射1 μg空载质粒或miR-378小干扰RNA(siRNA)质粒;模型组和剩余10只假手术组大鼠经尾静脉注射0.9％氯化钠溶液1μg;每2天注射1次,连续干预30 d.利用X线观察各组大鼠胫骨骨折愈合情况并进行骨折愈合评分(Lane-Sandhu评分).采用酶联免疫吸附法检测各组血清炎症因子和骨钙素(OC)、碱性磷酸酶(ALP)水平.采用HE染色观察各组骨组织形态学变化.采用RT-qPCR检测各组骨组织miR-378与BMP2、Smad4 mRNA表达.采用蛋白印迹检测各组骨组织BMP2、Smad4蛋白表达.结果:造模组骨组织miR-378表达水平高于对照组,BMP2、Smad4 mRNA表达水平低于对照组(均P＜0.05).假手术组大鼠骨组织结构清晰;模型组和空载质粒组骨折线清晰,无骨痂出现,骨组织结构严重破坏,仅有少量成骨细胞生成;miR-378沉默组骨折线模糊,出现骨痂,骨组织破坏程度得到缓解并有大量成骨细胞生成.与假手术组比较,模型组血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、OC、ALP及骨组织miR-378表达水平升高,BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平降低(均P＜0.05).与模型组和空载质粒组比较,miR-378沉默组Lane-Sandhu评分、OC、ALP水平,以及BMP2、Smad4 mRNA和蛋白表达水平升高,血清TNF-α、IL-1β及骨组织miR-378表达水平降低(均P＜0.05).结论:沉默miR-378可能通过靶向激活BMP2/Smad4信号通路减轻胫骨骨折大鼠炎症反应,促进成骨细胞生成,加快大鼠骨折部位的愈合.

目的:探讨昆仙胶囊治疗创伤性骨化性肌炎大鼠的可能作用机制.方法:选取78只SD大鼠,按随机数字表法分为空白组(6只)、假手术组(24只)、对照组(24只)及药物组(24只),空白组直接处死后取血,假手术组剪开踝关节表皮后予以缝合,对照组和药物组建立创伤性骨化性肌炎模型,对照组予安慰剂灌胃,假手术组和药物组均予昆仙胶囊汤剂灌胃,在术后14 d、28 d、42 d、56 d各断颈处死6只大鼠,测量造模前后踝关节的肿胀厚度并计算肿胀率,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)和骨成型蛋白-4(BMP4)、Smad5水平,取跟腱组织用免疫组化检测BMP4和Smad5的表达情况.结果:对照组和药物组术后14 d、28 d、42 d、56 d的踝关节肿胀率均高于假手术组(P＜0.01).药物组术后42 d、56 d的踝关节肿胀率均低于对照组(P＜0.01).对照组和药物组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清TNF-α水平均高于假手术组(P＜0.01);药物组术后28 d、42 d、56 d的血清TNF-α水平均低于对照组(P＜0.01).对照组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清IL-6水平均高于假手术组(P＜0.01);药物组术后14 d、28 d、42 d的血清IL-6水平均高于假手术组(P＜0.01).药物组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清IL-6水平均低于对照组(P＜0.01).对照组和药物组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清CRP水平均高于假手术组(P＜0.01);药物组术后42 d、56 d的血清CRP水平均低于对照组(P＜0.01).对照组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清BMP4水平均高于假手术组(P＜0.01),药物组术后14 d、28 d、42 d的血清BMP4水平均高于假手术组(P＜0.01);药物组术后28 d、42 d、56 d的血清BMP4水平均低于对照组(P＜0.01).对照组术后14 d、28 d、42 d、56 d的血清Smad5水平均高于假手术组(P＜0.01),药物组术后14 d、28 d、42 d的血清Smad5水平均高于假手术组(P＜0.01).药物组术后56 d的血清Smad5水平低于对照组(P＜0.01).对照组术后14 d、28 d、42 d、56 d的跟腱组织BMP4平均光密度均高于假手术组(P＜0.01),药物组术后14 d、28 d、42 d的跟腱组织BMP4平均光密度均高于假手术组(P＜0.01);药物组术后28 d、42 d、56 d的跟腱组织BMP4平均光密度均低于对照组(P＜0.01).对照组术后14 d、28 d、42 d、56 d的跟腱组织Smad5平均光密度均高于假手术组(P＜0.01),药物组术后14 d、28 d、42 d的跟腱组织Smad5平均光密度均高于假手术组(P＜0.01).药物组术后28 d、42 d、56 d的跟腱组织Smad5平均光密度均低于对照组(P＜0.01).结论:昆仙胶囊对创伤性骨化性肌炎的治疗效果可能和调控BMP4/Smad5信号通路及抑制下游炎性因子有关.

目的:探究异氟醚通过调节骨发生形态蛋白 4(BMP4)及其下游 Smad蛋白对自发性高血压大鼠(SHR)脑损伤的作用机制.方法:采用随机数字表法将 48只SHR分为模型组、异氟醚组、阳性药物组、异氟醚+LDN193189组,健康大鼠作为健康对照组,每组12只.各组大鼠分别放入氧气箱中,健康对照组、模型组、阳性药物组大鼠通入特殊气体(30%O2、70%N2)1 h,异氟醚组、异氟醚+ LDN193189组通入混杂 2%异氟醚的特殊气体 1h,通过麻醉气体检测仪检测异氟醚含量,确保异氟醚浓度始终保持在 2%.通气结束后,异氟醚+LDN193189组大鼠腹腔内注射BMP4/Smad通路抑制剂溶液 20μL(LDN193189,5 mg/kg),阳性药物组大鼠腹腔内注射缬沙坦溶液 20μL(10 mg/kg),健康对照组、模型组、异氟醚组大鼠腹腔内注射等量的生理盐水.氧气箱通气实验及注射每日 1次,持续 10 d.无创血压检测仪检测尾动脉收缩压变化;神经学行为评分评价行为功能;脑含水量检测脑水肿程度;原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色和尼氏染色观察海马组织病理学变化及神经元损伤情况;荧光定量聚合酶链式反应(PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测海马组织 BMP4、Smad2 mRNA 及蛋白表达水平.结果:与模型组比较,异氟醚组、阳性药物组、异氟醚+ LDN193189组大鼠海马神经细胞凋亡减少,尼氏小体增多,血压、神经学评分、脑组织含水量显著降低,BMP4、Smad2 mRNA及蛋白表达量显著升高(P<0.05);与异氟醚组比较,异氟醚+LDN193189组大鼠神经细胞凋亡增多,尼氏小体急剧减少,血压、神经学评分、脑组织含水量显著升高,BMP4、Smad2 mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.05);异氟醚组与阳性药物组各项数据差异均无统计学意义(P>0.05).结论:异氟醚可通过促进 BMP4/Smad信号通路减轻 SHR脑损伤.

目的 观察藤黄健骨丸对绝经后骨质疏松症模型大鼠的治疗作用.方法 将72只雌性大鼠随机分为6组,分别为假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、仙灵骨葆胶囊组(XLGB)、藤黄健骨丸低剂量组(THJGW-L)、藤黄健骨丸中剂量组(THJGW-M)及藤黄健骨丸高剂量组(THJGW-H).手术造模3d后给药,除假手术组、模型组灌胃蒸馏水外,其余4组均按照相应剂量灌胃药物.连续灌胃8周后,分别检测大鼠术后各阶段体质量、子宫和肾脏重量、骨强度值,观察股骨病理变化.Western-blot法检测大鼠股骨中Runx2、BMP-2和Smad1蛋白表达水平.结果 实验结果显示,藤黄健骨丸可以增加去卵巢大鼠的子宫和肾脏重量,能够提高去卵巢大鼠的股骨荷载力,改善骨微结构,增加钙离子沉积,增加骨细胞数量.Western-blot结果显示去势大鼠骨组织中Runx2、BMP-2和Smad1相对蛋白水平降低,经过藤黄健骨丸治疗后,Runx2、BMP-2和Smad1相对蛋白水平显著升高.结论 藤黄健骨丸可以提高去势大鼠骨强度,改善骨组织形态,其作用机制可能与调控BMP-2/Smad信号通路来促进骨形成,对绝经后骨质疏松症有一定的治疗作用.

目的 分析中医药调控骨代谢研究相关文献,了解该领域研究热点和发展趋势.方法 检索中国知识资源总库(CNKI)、中国学术期刊数据库(万方数据)、中文科技期刊数据库(VIP)收录的2000年1月1日-2022年5月31日中医药调控骨代谢研究相关文献.采用NoteExpress3.6.0软件进行去重及人工筛选,采用Excel2019绘制发文趋势折线图和来源期刊饼状图,采用VOSviewer1.6.18软件绘制核心作者密度视图和关键词共现网络,采用CiteSpace5.8.R3软件对关键词进行聚类、突现、时间线分析,并绘制相应图谱.结果 共纳入2 405篇文献,该领域发文量逐年增加,涉及5 551位作者,形成以郑洪新、沈霖、宋敏、王丽丽等为代表的研究团队.文献关键词形成了13个有意义的聚类,显示该领域研究热点主要集中于成骨细胞、骨密度、实验研究、信号通路、乳腺癌、中医证候等;备受关注的中医药干预手段有左归丸、仙灵骨葆胶囊、淫羊藿、葛根素、针灸、电针、穴位敷贴等,主要涉及OPG/RANKL/RANK、Wnt/β-catenin、BMP/Smad、Hedgehog等信号通路的研究.结论 中医药调控骨代谢研究近年热度较高,尚需研究团队间加强学术交流及合作.研究热点主要涉及4个方面:骨代谢生化指标的调控、相关信号通路、中医证候及中医药干预手段的更新与发展.

目的 探究基因DACT3促进神经胶质瘤细胞(U251、U118)铁死亡的分子机制.方法培养人U251、U118胶质瘤细胞,慢病毒转染构建稳定过表达DACT3的细胞后,qRT-PCR和Western blot检测转染效率.上述细胞分成3组:Ctrl组(对照组)、DACT3组(过表达DACT3细胞组)和DACT3+ferrostatin-1组(过表达DACT3+铁死亡抑制剂).采用CCK-8检测细胞生存率,铁离子、MDA、谷胱甘肽(glutatione,GSH)检测试剂盒测定细胞铁离子、MDA、GSH 含量,Western blot 检测 GPX4、SLC7A11、TFR1表达.进一步将上述细胞分为以下3组:Ctrl组(对照组)、DACT3组(过表达DACT3细胞组)和DACT3+siBMP4组(过表达DACT3+敲低BMP4组),再次利用CCK-8检测细胞生存率,铁离子、MDA、GSH检测试剂盒测定细胞铁离子、MDA、GSH 含量,Western blot 检测 GPX4、SLC7A11、TFR1、BMP4、p-Smad 表达.结果 DACT3组中DACT3 mRNA和蛋白表达均显著高于Ctrl组;与Ctrl组比较,DACT3组细胞生存率明显下降,铁离子、MDA含量显著升高,GSH含量明显下降,GPX4、SLC7A11表达显著下降,TFR1、p-Smad、BMP4表达明显升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05);DACT3+ferrostatin-1组、DACT3+siBMP4组均能一定程度抵消DACT3导致的上述指标的变化,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论DACT3可以促进U251、U118胶质瘤细胞铁死亡,其机制与BMP4/SMAD信号通路激活有关.