目的:探讨花黄色素(SY)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子 1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响.方法:将 60只 SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,生理盐水)、模型组(Model组,生理盐水)、SY组(100 mg/kg SY)、EX-527组(47 mg/kg EX-527)、SY+EX-527组(100 mg/kg SY+47 mg/kg EX-527),每组 12只,持续 4周给予相应药物.试剂盒检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和心肌白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色法进行心肌组织病理学观察;末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织 AMPK/SIRT1/NF-κB通路相关蛋白表达.结果:与 NC组相比,Model组大鼠心肌细胞数量少且排列杂乱,细胞核皱缩,TC、TG、LDL-C、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及磷酸化-AMPK(p-AMPK)/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05).与 Model组比较,SY组大鼠心肌细胞数量增多且排列整齐有序,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及 NF-κB 蛋白水平明显下降(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及 p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显上升(P<0.05);而 EX-527 组以上指标呈现相反趋势.与 SY组相比,SY+EX-527组大鼠心肌损伤加重,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及 NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及 p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05).结论:SY可能通过调控 AMPK/SIRT1/NF-κB通路降低氧化应激,减轻炎症反应,对冠心病大鼠心肌损伤起到一定改善作用.

目的:探究1个Waardenburg综合征4C型(WS4C)耳聋家系的遗传学病因，并为该家系的胎儿进行产前诊断。方法:选取2020年10月23日因双耳感音神经性聋就诊于郑州大学第一附属医院的1例女性耳聋先证者及其家系成员(2代3人)作为研究对象，收集先证者及其家系成员的临床资料。应用全外显子组测序对先证者进行基因检测，使用多重连接探针扩增(MLPA)方法对测序结果进行验证并对先证者父母和胎儿进行检测。结果:先证者为1岁8个月女性，双耳极重度感音神经性聋，长期慢性便秘，双眼虹膜异色。先证者母亲为双耳极重度耳聋患者，双眼虹膜异色。先证者父亲听力正常，虹膜颜色正常。基因测序结果提示先证者存在 SOX10基因第1~4外显子杂合缺失变异，先证者母亲及其胎儿检测到 SOX10基因杂合缺失，父亲 SOX10基因拷贝数正常。依据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南，变异评级为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PP1+PP4)。胎儿检测到该变异，将来发展为WS4C型耳聋患者的可能性大，先证者父母在遗传咨询后选择了引产。 结论:SOX10基因第1~4外显子杂合缺失变异考虑是该WS4C家系致病原因，可用于指导产前诊断。

目的:探讨黄芩素通过调控Sirtuin（Sirt）抑制成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes，FLS）衰老，缓解骨关节炎的机制。方法:提取非骨关节炎患者（3例）及骨关节炎患者（3例）滑膜中的FLS，通过Western blot、β-半乳糖苷酶染色和免疫荧光等方法评估骨关节炎患者FLS的衰老程度，并检测FLS中Sirt家族蛋白和mRNA的变化水平。通过转染Sirt1 siRNA敲低FLS中Sirt1的相对表达水平，分析FLS抗氧化能力及衰老程度。将软骨细胞与FLS共培养，通过Western blot检测软骨细胞功能变化。使用博莱霉素（Bleomycin，BLM）诱导FLS衰老后予以不同浓度黄芩素处理，检测Sirt1、p16、p21蛋白表达水平，并检测细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）表达水平。敲低FLS中Sirt1的表达水平并予以BLM和黄芩素处理，采用Western blot和ROS检测Sirt1和ROS相对表达量。BLM诱导FLS衰老后加入黄芩素和Compound C，通过Western blot、ROS检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated AMP protein-activated kinase，pAMPK）、核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，NRF2）、p16、p21和ROS相对表达量。结果:骨关节组FLS的p16和p21相对表达量为3.66±0.38和3.55±0.34，高于非骨关节炎组的1.00±0.07、1.00±0.09（ t=11.860， P<0.001； t=12.520， P<0.001）。骨关节炎组FLS中Sirt1和Sirt6的相对表达水平为0.30±0.04和0.16±0.01，小于正常组的1.00±0.03和1.00±0.04（ t=23.840， P<0.001； t=34.130， P<0.001）。黄芩素处理后，BLM组、BLM+Bai组和对照组的ROS相对表达量分别为2.58±0.28、1.65±0.14和1.00±0.24，组间差异有统计学意义（ F=35.700， P<0.001），其中BLM组和BLM+Bai组均大于对照组，BLM+Bai组低于BLM组（ P<0.05）。Compound C+黄芩素处理后，pAMPK及NRF2相对表达为0.28±0.02和0.38±0.09，低于BLM+Bai组的0.56±0.07和0.60±0.08（ P<0.05）。ROS相对表达量由1.75±0.16升高至3.45±0.12（ P<0.001）。BLM+Bai+Compound C组、BLM+Bai组和对照组β-半乳糖苷酶阳性比例分别为47.30%±4.29%、18.18%±3.89%和7.70%±3.53%（ F=109.700， P<0.001），其中BLM+Bai+Compound C组高于BLM+Bai组（ P<0.05）。 结论:骨关节炎患者Sirt1表达下调导致FLS衰老，加速骨关节炎进展。黄芩素可通过激活Sirt1/AMPK/NRF2通路抑制FLS衰老，可能延缓骨关节炎进展，进而改善软骨细胞功能。

目的:探讨Klotho通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和胞外信号调控激酶(ERK)途径对高糖条件下人肾小管上皮细胞自噬的影响。方法:将体外培养人肾小管上皮细胞分为对照组和高糖(HG组，加入30 mmol/L葡萄糖)；按照转染pcDNA3.1-Vector或pcDNA3.1-Klotho分为两组：Vector组和Klotho组；按照转染pcDNA3.1-Klotho后是否加入AMPK抑制剂compound C或ERK抑制剂curcumin和高糖刺激分为4组：HG+Vector组、HG+Klotho组、HG+Klotho+compound C组和HG+Klotho+curcumin组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞Klotho的表达；Western blot法检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ，p-AMPK/AMPK和p-ERK/ERK的相对表达；透射电镜观察人肾小管上皮细胞自噬体的变化。结果:HG组人肾小管上皮细胞中Klotho蛋白和mRNA相对表达量显著低于对照组(均 P<0.05)；Klotho组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著高于Vector组( P<0.05)；Klotho组的自噬体数量也较Vector组明显增加( P<0.05)；Klotho组p-AMPK/AMPK显著高于Vector组( P<0.05)，而p-ERK/ERK显著低于Vector组( P<0.05)。HG+Klotho+compound C组中p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量(0.44±0.04)显著低于HG+Klotho组(0.79±0.08)( P<0.01)，HG+Klotho+curcumin组中p-ERK/ERK蛋白相对表达量(1.05±0.12)显著高于HG+Klotho组(0.56±0.05)( P<0.01)。HG+Klotho+compound C组和HG+Klotho+curcumin组中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白相对表达量(0.79±0.12；0.68±0.09)显著低于HG+Klotho组(1.65±0.20)(均 P<0.01)。 结论:Klotho可通过激活AMPK和抑制ERK通路增强高糖条件下人肾小管上皮细胞的自噬。

目的:评价天麻素对神经病理性痛大鼠脊髓腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/瞬时受体电位通道A1(TRPA1)信号通路的影响。方法:SPF级健康雄性SD大鼠36只，6～8周龄，体质量200～230 g，采用随机数字表法分为3组( n＝12)：假手术＋生理盐水组(SHAM组)、神经病理性痛＋生理盐水组(NP组)和神经病理性痛＋天麻素组(GAS组)。2%异氟烷麻醉下，采用坐骨神经慢性结扎损伤法制备大鼠神经病理性痛模型，SHAM组未结扎。造模后连续14 d，GAS组腹腔注射天麻素100 mg/kg，SHAM组和NP组注射等量生理盐水。分别于造模前1 d(T 0)、造模后第1、3、5、7、10和14天(T 1-6)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。在T 4和T 6时测完痛阈后，2%异氟烷麻醉处死大鼠取L 4-6脊髓组织，采用qRT-PCR法检测TRPA1 mRNA表达，Western blot法检测脊髓TRPA1、AMPK和p-AMPK表达，免疫荧光染色法检测脊髓TRPA1表达；免疫组织化学染色法观察TNF-α、IL-1β和c-fos的表达。 结果:与SHAM组相比，NP组T 1-6时MWT和TWL降低，脊髓TRPA1 mRNA、TRPA1、TNF-α、IL-1β和c-fos表达上调，p-AMPK表达下调( P<0.05)，AMPK表达差异无统计学意义( P>0.05)；与NP组相比，GAS组T 3-6时MWT和T 2-6时TWL升高，脊髓TRPA1 mRNA、TRPA1、TNF-α、IL-1β和c-fos表达下调，p-AMPK表达上调( P<0.05)，AMPK表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:天麻素减轻大鼠神经病理性痛的机制可能与调控AMPK/TRPA1信号通路有关。

目的:探讨花旗松素（taxifolin，TAX）改善顺铂（cisplatin）致急性肾损伤的作用及机制。方法:（1）40只C57BL/6小鼠随机分为4组：对照组、TAX组、顺铂组、顺铂+TAX组。测量各组小鼠体重情况。检测各组小鼠血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平；通过HE染色观察小鼠肾组织病理学改变；通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定血清炎性因子白细胞介素（IL）-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α水平；通过试剂盒测定各组小鼠肾组织氧化应激指标[活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、还原型谷胱甘肽（GSH）]；实时荧光定量PCR法测定炎性因子 IL- 6、 TNF- α和 IL- 1β，抗氧化基因解耦联蛋白2（ UCP2）、 SOD2、 CAT以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（ PGC- 1α）mRNA表达情况；通过测定肾组织ATP水平和线粒体DNA（mtDNA）含量评价线粒体功能；通过Western印迹法测定腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和磷酸化（p）-AMPK蛋白表达情况。（2）通过建立Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型评价TAX对顺铂化疗效果的影响。 结果:与对照组比较，TAX组小鼠体重未明显降低，且未出现明显肾损伤（均 P>0.05），提示口服TAX具有良好的安全性。与顺铂组比较，TAX能够显著延缓顺铂引起的小鼠体重下降，降低小鼠血清Scr和BUN水平，并缓解肾组织病理学改变（均 P<0.05）。TAX能够显著下调顺铂诱导的小鼠血清炎性因子IL-6和TNF-α水平，以及肾脏炎性因子 IL- 6、 TNF- α、 IL- 1β mRNA表达（均 P<0.05）。TAX能够显著降低顺铂致急性肾损伤小鼠肾组织ROS和MDA水平，并提高SOD、CAT和GSH活性（均 P<0.01）。同时，TAX能够显著上调顺铂致急性肾损伤小鼠肾脏抗氧化基因 UCP2、 SOD2、 CAT mRNA以及 PGC- 1α mRNA表达，并提高肾组织ATP和mtDNA水平（均 P<0.01）。Western印迹结果显示，TAX显著促进顺铂致急性肾损伤小鼠肾脏AMPK磷酸化蛋白表达（ P<0.01）。此外，通过Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型证实，TAX对顺铂抗肿瘤疗效无显著影响。 结论:TAX能够改善顺铂引起的肾脏氧化损伤，其机制可能与激活AMPK/PGC-1α通路有关。

目的:评价细胞外信号调节激酶(ERK1/2)/环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路在右美托咪定抑制丙泊酚致胎鼠离体海马神经元凋亡中的作用。方法:将孕16 d SD大鼠处死，取胎鼠海马神经元，体外培养原代海马神经元至第7天，采用随机数字表法分为9组( n＝12)：对照组(C组)、脂肪乳剂组(I组)、二甲基亚砜组(DMSO组)、右美托咪定组(D组)、丙泊酚组(P组)、丙泊酚+右美托咪定组(PD组)、PD98059+丙泊酚+右美托咪定组(PDP组)、MH89 +丙泊酚+右美托咪定组(HDP组)和KG501+丙泊酚+右美托咪定组(KDP组)。C组不做任何处理；I组加入20%脂肪乳剂，孵育30 min；DMSO组加入0.25%DMSO，孵育30 min；D组加入右美托咪定，终浓度10 μmol/L，孵育30 min；P组加入丙泊酚，终浓度100 μmol/L，孵育3 h；PD组加入右美托咪定，终浓度10 μmol/L，孵育30 min，再加入丙泊酚，终浓度100 μmol/L，继续孵育3 h；PDP组、HDP组和KDP组分别加入25 μmol PD98059(p-ERK1/2抑制剂)、10 μmol H89(p-CREB抑制剂)、25 μmol KG501(CREB抑制剂)孵育30 min，再加入右美托咪定，终浓度10 μmol/L，孵育30 min，最后加入丙泊酚，终浓度100 μmol/L，继续孵育3 h。透射电镜下观察细胞超微结构，采用流式细胞术检测神经元凋亡情况，qRT-PCR法检测ERK1/2、CREB和BDNF mRNA的表达，Western blot法检测p-ERK1/2、CREB、p-CREB、BDNF及cleaved-caspase-3的表达。 结果:与C组比较，P组、PD组、PDP组、HDP组和KDP组神经元凋亡率升高，p-ERK 1/2和p-CREB表达下调，cleaved-caspase-3表达上调，P组、PDP组、HDP组和KDP组BDNF表达下调( P<0.05)；与P组比较，PD组神经元凋亡率降低，p-ERK1/2、p-CREB和BDNF表达上调，cleaved-caspase-3表达下调( P<0.05)；与PD组比较，PDP组、HDP组和KDP组神经元凋亡率升高，p-ERK1/2、p-CREB和BDNF表达下调，cleaved-caspase-3表达上调( P<0.05)。 结论:ERK1/2/CREB/BDNF信号通路参与了右美托咪定抑制丙泊酚致胎鼠离体海马神经元凋亡的过程。

目的:探讨二甲双胍对肝脏缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法:30只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注组＋二甲双胍组(I/R＋MET组)。I/R组和I/R＋MET组小鼠建立肝脏缺血再灌注损伤模型，Sham组小鼠不建模。I/R＋MET组小鼠术前每日二甲双胍200 mg/kg腹腔注射，术前24 h停止给药。Sham组和I/R组小鼠术前每日腹腔注射等体积生理盐水。3组小鼠在术后6 h，取静脉血，检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)浓度。原位缺口末端标记法(TUNEL)染色试剂盒分析3组肝脏组织细胞凋亡。放射免疫法检测3组小鼠氧化应激反应。酶联免疫吸附试验(ELISA)分析3组小鼠肝脏炎性因子水平变化。蛋白质免疫印迹分析3组小鼠肝脏组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、UNC-51样激酶(ULK1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、自噬底物p62蛋白表达水平。组间计量数据比较采用单因素方差分析。结果:I/R＋MET组小鼠血清ALT和AST水平[(62.37±8.07)、(121.51±20.45) U/L]明显低于I/R组[(140.53±13.07)、(187.19±18.73) U/L]，差异有统计学意义( t＝18.150、7.489， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠肝脏组织炎性因子[(55.70±6.36)、(39.62±6.66)、(64.12±5.33) pg/g]低于I/R组[(99.15±7.45)、(82.73±8.90) 、(102.40±13.17) pg/g]，差异有统计学意义( t＝18.580、14.030、9.630， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠血清MDA水平[(1.03±0.05) μmol/ml]明显低于I/R组[(1.73±0.14) μmol/ml]，差异有统计学意义( t＝14.970， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠血清SOD水平[(129.70±7.12) U/ml]明显高于I/R组[(99.50±10.66) U/ml]，差异有统计学意义( t＝14.970， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠肝脏组织TUNEL染色阳性率[(13.57±2.01)%]明显低于I/R组[(26.40±4.05)%]，差异有统计学意义( t＝8.967， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠肝脏组织AMPK磷酸化和ULK1磷酸化水平(1.25±0.06、1.37±0.09)明显高于I/R组(0.65±0.07、0.96±0.06)，差异有统计学意义( t＝19.480、11.670， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠肝脏组织自噬底物蛋白p62水平(0.67±0.08)明显低于I/R组(0.98±0.05)，差异有统计学意义( t＝10.050， P<0.05)。 结论:二甲双胍通过激活AMPK，促进细胞自噬，缓解肝脏缺氧缺血引起的氧化应激和炎性反应，对缺血再灌注损伤肝脏起保护作用。

目的:报道2例智力障碍伴小头畸形患儿，分析其临床表型与遗传学特征，明确其可能致病原因。方法:选取2例分别在2021年3月12日和2021年6月22日就诊于安徽省儿童医院的患儿为研究对象，收集患儿的临床资料，采集患儿及其父母外周静脉血样，对患儿进行染色体分析及全外显子组检测。对候选变异进行Sanger测序家系验证，并分析其致病性。本研究通过安徽省儿童医院医学伦理委员会的审查(EYLL-2018-008)。结果:2例患儿的染色体核型分析与拷贝数检测均未见异常。全外显子组测序发现患儿携带 CASK基因c.471delT(p.Pro157Profs*9)移码变异，患儿2携带 CASK基因c.1259_1269delCTGAGAATAAC(p.Pro420fs*27)移码变异。经Sanger测序验证，上述2个变异均为新发。根据美国医学遗传学与基因组学学会与分子病理学协会(ACMG-AMP)相关指南，上述2个变异均被评级为致病性(PVS1＋PS2＋PP3)。 结论:CASK基因新发变异可能是上述2例患儿的主要致病原因。

目的:通过脂多糖刺激小鼠以及人单核细胞THP-1诱导的急性炎症模型，探索罗汉果醇促进AMPK磷酸化后靶向调控炎症通路的作用以及相关机制，为罗汉果醇（MO）能否对急性肺损伤的临床治疗中得到应用提供研究证据。方法:动物实验：取用24只6~8周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠，采用随机（随机数字法）法将小鼠分为对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组，每组各分配6只。对照组小鼠腹腔注射生理盐水（30 mL/kg）,MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg),脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖（10 mg/kg），脂多糖+MO组小鼠腹腔注射MO(30 mg/kg)，30 min后另一侧腹腔注射脂多糖（10 mg/kg）。经过12 h后，处死小鼠取材，并进行病理学、分子生物学检测。细胞实验：取用状态良好的THP-1细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养24 h后，用100 ng/mL PMA诱导分化成巨噬细胞，设置对照组、罗汉果醇(MO)组、脂多糖组、脂多糖+MO组。药物刺激结束后收集各组细胞悬液，所得细胞及培养基上清液用于后续检测。结果:与对照组相比，脂多糖组的损伤程度明显，组织切片的H&E染色结果中可见肺泡腔结构破坏，炎症细胞浸润增多，且有出血以及肺泡腔间隔明显增厚；在加入MO干预下，小鼠肺组织的损伤程度大幅度改善，MPO、肺湿/干重比等也有了显著的降低。肺组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平也同样在MO的干预下显著下调[(2.96±0.10) vs. (5.53±0.14)，(8.62±0.17) vs. (12.31±0.09)，(3.01±0.09) vs.(4.85±0.36)]。在脂多糖组小鼠肺组织中炎性小体的主要成分蛋白NLRP3、caspase-1 p20、GSDMD-N、ASC表达量显著高于对照组,而脂多糖+MO组中AMPK磷酸化水平提高，焦亡相关蛋白的表达均得到有效地抑制[(0.58±0.09) vs.(0.89±0.15)、(0.19±0.08) vs. (0.93±0.16)、(0.65±0.09) vs. (0.86±0.14)、(0.30±0.12) vs. (0.47±0.10)，均 P<0.05]；同时通过ELISA法测得在组织中焦亡的主要标志物炎症因子IL-1β、IL-18的分泌同样可以被MO缓解。而细胞实验中MO同样促进了AMPK的磷酸化，抑制NLRP3炎症小体相关成分蛋白表达，同时明显提高了细胞活力。 结论:MO通过促进AMPK的磷酸化抑制NLRP3介导的细胞焦亡，进而缓解脂多糖诱导的急性肺损伤。