目的:探讨多巴胺受体D2( DRD2)基因启动子区CpG岛DNA甲基化水平与持续性姿势-知觉性头晕(PPPD)发病的关系。 方法:对自2017年1月至6月在烟台市烟台山医院神经内科确诊的43例PPPD患者(试验组)于收治时采集血样，对同期收治的未予选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)类或5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)类药物治疗的、且随访3个月以上头晕症状未再发而排除PPPD诊断的45例急性前庭外周性眩晕患者(对照组)于随访时采集血样，应用重亚硫酸盐测序法进行 DRD2基因启动子区CpG岛甲基化水平的检测并比较2组间的差异。 结果:试验组 DRD2基因启动子区CpG岛的甲基化阳性率(58.1%)明显高于对照组(15.6%)，CpG岛位点甲基化率(0.15±0.18)明显高于对照组(0.04±0.10)，差异均有统计学意义( P< 0.05)。 结论:PPPD发病可能与患者 DRD2基因启动子区CpG岛DNA甲基化水平增高有关。

目的:探讨骨髓基质细胞抗原2（BST2）基因在胶质母细胞瘤（GBM）中的表达水平及其与DNA甲基化水平和患者预后的关系。方法:共纳入3组GBM样本[美国癌症基因组图谱（TCGA）数据库（35例）、基因表达综合（GEO）数据库中GSE22891队列（50例）、中国脑胶质瘤基因组图谱（CGGA）数据库（105例）]及非肿瘤对照脑组织（NTB）（TCGA数据库10例、GSE22891队列6例、CGGA数据库5例用于基因表达水平比较，GSE63347队列25例、GSE22891队列4例以及CGGA数据库8例用于甲基化数据比较）。利用公共数据库中GBM基因表达芯片和DNA甲基化芯片数据，通过GBM与NTB间BST2基因表达水平比较、生存分析、生物信息学分析等，获得BST2基因在GBM中的表达状态以及其与非CpG岛DNA甲基化、GBM分子亚型[CpG岛甲基化表型（G-CIMP），非G-CIMP的前神经元型、神经元型、经典型和间质型]、患者总生存（OS）时间以及功能基因表达谱之间的关系。结果:与NTB样本比较，BST2 mRNA在GBM中呈高表达状态（mRNA表达数据采用Z-score标准化）（TCGA数据库比GSE63347队列：-0.97±1.14比-2.32±0.21， t=3.74， P<0.05；GSE22891队列：9.03±1.28比7.18±0.22， t=3.42， P<0.05；CGGA数据库：-0.43±1.11比-0.62±0.35， t=2.09， P<0.05）。TCGA数据库中，BST2 mRNA在不同肿瘤分子亚型中均高表达（G-CIMP为-1.96±0.94，非G-CIMP的前神经元型为-1.74±0.88，神经元型为-0.83±0.98，经典型为-0.71±1.18，间质型为-0.55±1.01），与NTB样本（-2.32±0.21）比较，差异均有统计学意义（均 P<0.05）；BST2 mRNA在神经元型、经典型及间质型肿瘤之间表达差异均无统计学意义（均 P>0.05），但均高于G-CIMP和非G-CIMP的前神经元型（均 P<0.05）。BST2非CpG岛DNA甲基化水平与其mRNA表达负相关（TCGA数据库： r=-0.30， P<0.05；GSE22891队列： r=-0.54， P<0.05；CGGA数据库： r=-0.29， P>0.05）。生存分析表明，非G-CIMP且非前神经元型患者的BST2 mRNA表达水平与OS呈负相关（ HR=1.18，95% CI 1.00~1.39， P<0.05），而在G-CIMP及前神经元型的亚组中，BST2 mRNA表达与患者OS无相关性（ HR=1.08，95% CI 0.84~1.40， P>0.05）。生物信息学分析表明，在TCGA数据库非G-CIMP且非前神经元型的样本中，高表达BST2的GBM样本显著富集于与免疫反应负性调控和核因子κB（NF-κB）通路激活相关的功能基因簇。 结论:BST2基因在GBM中表达上调，可能与非CpG岛DNA低甲基化改变有关；该基因可能成为评估非G-CIMP且非前神经元型GBM亚型临床预后的潜在生物标志物。

目的:探究T细胞内抗原1（T-cell intracellular antigen 1，TIA1）在乳腺癌组织中的表达和TIA1启动子区甲基化状态，并分析乳腺癌多层螺旋CT征象与TIA1甲基化状态之间的关系。方法:选取2019年2月至2020年3月浙江省台州市第一人民医院收治的50例乳腺癌患者，荧光定量PCR法检测所有患者肿瘤组织和癌旁组织TIA1表达水平。通过生物信息学软件MethPrimer预测TIA1启动子区域发现存在cPG岛。采用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylmion Specific PCR，MSP）检测肿瘤组织和癌旁组织中TIA1甲基化状态，采用多层螺旋CT对患者进行检查，观察肿块大小、形态、钙化区域、淋巴结转移及边缘，分析TIA1甲基化状态与CT征象之间的相关性。结果:乳腺癌组织TIA1表达水平低于癌旁组织（0.50±0.12 vs 0.95±0.10， P=0.00），但TIA1基因启动子甲基化率高于癌旁组织（64% vs 42%， χ2=4.86， P<0.05）。乳腺癌患者TIA1基因启动子甲基化率在肿块形态和有无钙化方面差异无统计学意义（ P>0.05）。肿块直径≥2 cm患者TIA1基因启动子甲基化率显著高于肿块直径<2 cm患者（78.57% vs 45.45%， P<0.05），且淋巴结转移患者TIA1基因启动子甲基化率显著高于无淋巴结转移患者（79.17% vs 50.00%， P<0.05）。肿块边缘有毛刺的患者TIA1基因启动子甲基化率显著高于无毛刺的患者（80.77% vs 45.83%， P<0.05）。 结论:乳腺癌CT显像与TIA1基因启动子甲基化率之间存在相关性，这可为乳腺癌恶变程度和预后的判断提供依据。

甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)蛋白是一种5-甲基胞嘧啶(5-mC)羟化酶，属于人类α-酮戊二酸加氧酶TET蛋白家族。其功能是识别并结合到基因组5’-胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)-3’二核苷酸密度高的区域如CpG岛，启动DNA去甲基化程序，维持DNA甲基化和去甲基化平衡，以保持基因组甲基化稳态，实现表观遗传调控。TET1表达和/或功能异常与肿瘤的发生和进展密切相关，在不同来源的肿瘤中可以表现为原癌基因或者抑癌基因属性。本文综述近年来TET1在肿瘤中的作用及机制的研究进展。

目的:探讨6q24新生儿暂时性糖尿病（6q24-related transient neonatal diabetes mellitus, 6q24-TNDM）的临床特征和分子遗传学特点。方法:回顾性分析2017年上海市儿童医院新生儿科收治的2例6q24-TNDM患儿的临床资料。采用焦磷酸测序方法，对6q24区域内甲基化差异修饰区域（differentially methylated region, DMR）中16个胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸（cytidine-phosphate-guanosine, CpG）位点的甲基化水平进行定量分析。结果:2例患儿均为男性，例1为5日龄，例2为11日龄，均为剖宫产娩出。例1胎龄37周 +4，出生体重2 340 g；例2胎龄38周 +2，出生体重2 600 g。2例均为小于胎龄儿，生后均因高血糖入院，体格检查见皮肤弹性略差，皮下脂肪偏少，入院时血糖分别为12.95和8.00 mmol/L，血胰岛素低于正常值（分别为<1.39和3.94 pmol/L），C-肽低于正常值（分别为0.05和0.14 nmol/L），尿糖阳性，尿酮体阴性，血清抗谷氨酸脱羧酶抗体、抗胰岛素抗体、胰岛细胞抗体阴性，胰腺大小正常。皮下注射胰岛素2周余，2例患儿好转出院，分别在生后69和42 d停用胰岛素，糖尿病缓解。2例患儿产前诊断提示染色体核型正常，单核苷酸多态性芯片提示6号染色体单亲二体，入院后二代测序均未检测到明确的致病性点突变。使用焦磷酸测序发现患儿6q24区域DMR中16个CpG位点的甲基化水平均低于10%（健康对照儿童相应位点的甲基化水平约为40%），呈现明显的低甲基化。 结论:对于出生时小于胎龄儿、高血糖时血胰岛素和C-肽水平低的TNDM患儿，采用焦磷酸测序技术对甲基化差异修饰区域中CpG位点的甲基化水平进行定量分析，可以对6q24-TNDM进行快捷直接诊断，有助于指导治疗和评估预后。

结直肠癌是常见的的消化道恶性肿瘤之一，其癌变途径包括了经典的腺瘤-癌途径，炎-癌途径及de novo途径，在过去的十年里，已经有证据表明结直肠癌可能通过锯齿状途径发生。世界卫生组织指南建议将锯齿状病变分为增生性息肉（HPs）、传统锯齿状腺瘤（TSAs）和无蒂锯齿状病变（SSLs）3种亚型。锯齿状通路的特征性改变是BRAF基因的突变、CpG岛的广泛甲基化、丝裂原活化蛋白激酶级联（MAPK）信号通路激活和Wnt信号通路的失活。锯齿状结直肠癌可根据其不同的分子表型进行分型。本文将详细介绍锯齿状病变的分类、致癌机制和锯齿状结直肠癌的临床特点。

目的:研究DNA甲基化在结核分枝杆菌（MTB）裂解物诱导CD4 +T细胞白细胞介素6受体（IL-6R）表达下调中的作用及机制。 方法:本研究属于前瞻性研究。收集并分选2019—2020年深圳市第三人民医院10名健康人（对照组）和10例结核病患者（TB组）外周血单个核细胞（PBMC）中CD4 +T细胞，亚硫酸氢盐测序法分析 IL-6R启动子区和3′非翻译区（UTR）区CpG岛甲基化变化；RT-qPCR和Western blotting分别检测IL-6R和DNA甲基转移酶（DNMT）表达；进一步通过MTB裂解物刺激anti-CD3/CD28抗体活化的对照组PBMC和Jurkat E6-1细胞，检测 IL-6R不同区域CpG岛甲基化和IL-6R、DNMT表达的变化；双荧光素酶报告基因系统检测 IL-6R 3′UTR区甲基化状态对其转录活性的影响；两组间采用非配对 t检验，三组及以上多组运用one-way ANOVA分析。 结果:在对照组和TB 组外周血CD4 +T细胞中，TB组中IL-6R表达低于对照组，而DNMT1和DNMT3B则高于对照组；且与对照组比， IL-6R启动子CpG岛甲基化水平差异无统计学意义；3′ UTR区CpG岛甲基化率分别为54.3%±4.7%和69.5%±3.4%，差异有统计学意义（ P<0.001）；在体外，MTB裂解物刺激活化对照组PBMC后，IL-6R表达低于未刺激的，而DNMT1和DNMT 3B表达高于未刺激的；同时CD4 +T细胞中 IL-6R 3′ UTR区CpG岛甲基化率由58.9%±11.6%增加至79.4%±10.9%，差异有统计学意义（ P<0.001）；同样地，MTB刺激活化Jurkat E6-1细胞后的结果与对照组PBMC相一致。进一步发现DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（5-aza）与MTB裂解物共处理后IL-6R 的表达均高于MTB 裂解物单独刺激的；DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（5-aza）与MTB裂解物共处理后 IL-6R 3′ UTR区CpG岛甲基化水平低于MTB 裂解物单独刺激的，并且完全非甲基化修饰的 IL-6R 3′UTR报告基因的转录活性高于完全甲基化修饰的 IL-6R 3′ UTR区CpG岛。 结论:MTB裂解物刺激通过诱导CD4 +T细胞 IL-6R 3′UTR区CpG岛高甲基化抑制 IL-6R转录活性进而下调其表达；MTB诱导CD4 +T细胞 IL-6R 3′UTR区CpG岛高甲基化可能与DNMT1、DNMT3B表达增加有关。

目的:探讨轻甲硫氨酸限制(10%MR)对肝癌细胞增殖能力的影响及其机制。方法:采用对照短发夹RNA(shCtrl)及脂肪酸合酶(FASN)短发夹RNA (shFASN)慢病毒感染HuH7和HepG2，构建对照组和shFASN组细胞；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成分析细胞增殖能力；采用流式细胞仪分析细胞周期变化；采用蛋白质免疫印迹分析增殖细胞核抗原(PCNA)、FASN、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(pAkt)的蛋白水平；分别采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)、亚硫酸氢盐测序、油红染色和Bodipy染色分析10%MR对FASN的mRNA、FASN的CpG岛甲基化及脂质累积的影响。组间比较采用 t检验。 结果:10%MR处理组HuH7细胞活性高于对照组(0.666±0.013比0.510±0.007， t＝－26.50， P<0.001)；处在G 2期的细胞比例高于对照组[(19.8±1.3)%比(12.1±1.8)%， t＝－5.91， P<0.01]；PCNA水平高于对照组(1.280±0.051比0.447±0.067， t＝－17.07， P<0.001)；mTOR蛋白表达高于对照组(1.161±0.277比0.478±0.061， t＝－4.17， P<0.05)；pAkt水平高于对照组(0.938±0.194比0.357±0.169， t＝－3.90， P<0.05)；FASN的CpG岛甲基化水平低于对照组(0.233±0.252比0.833±0.153， t＝3.53， P<0.05)；FASN的mRNA高于对照组(1.360±0.137比1.003±0.081， t＝－4.49， P<0.01)；FASN的蛋白高于对照组(0.915±0.118比0.648±0.034， t＝－3.76， P<0.05)。ShFASN组HuH7细胞活性低于对照组(0.303±0.019比0.414±0.018， t＝10.25， P<0.001)；G 2期的细胞比例低于对照组[(3.5±1.4)%比(7.6±1.4)%， t＝3.69， P<0.05]；mTOR蛋白水平低于对照组(0.276±0.079比0.646±0.068， t＝6.17， P<0.01)；pAkt水平低于对照组(0.296±0.016比0.494±0.051， t＝6.37， P<0.01)。10%MR处理的shFASN组HuH7细胞活性低于10%MR处理的shCtrl组(0.369±0.003比0.495±0.007， t＝41.06， P<0.001)；G 2期的细胞比例低于10%MR处理的shCtrl组[(11.1±0.4)%比(19.4±2.8)%， t＝5.05， P<0.01]；mTOR蛋白水平低于10%MR处理的shCtrl组(0.419±0.187比0.939±0.072， t＝4.49， P<0.05)；pAkt水平低于10%MR处理的shCtrl组(0.421±0.060比0.623±0.060， t＝4.11， P<0.05)。 结论:轻甲硫氨酸限制通过上调FASN的表达，加速细胞周期，进而促进肝癌细胞增殖。

目的:本研究旨在探讨外周血中APC基因DNA甲基化与糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）发生、发展的关系，分析其对基因转录和蛋白表达水平的影响，探讨miRNA135b对APC基因甲基化水平的调控作用。方法:选择2018年3月至2020年3月在浙江大学附属杭州市第一人民医院肾内科的96例DN患者和同期100例健康体检者作为研究对象，分别检测两组APC基因CpG岛甲基化水平、mRNA水平和蛋白表达水平。用三联法构建Sprague-Dawely（SD）大鼠DN模型，分为DN组、miRNA-135b过表达慢病毒组和空载病毒组，将miRNA-135b过表达慢病毒和空载病毒通过尾静脉注射到大鼠体内，1个月后处死大鼠，测定其肾组织中的miRNA-135b的表达水平和APC基因甲基化水平。结果:DN患者的APC-1岛的甲基化水平为（3.05±0.65）%，显著高于健康对照组的甲基化水平（2.34±0.56）%（ t=5.231， P<0.001）；DN患者的APC-2岛的甲基化水平为（1.65±0.37）%，显著高于健康对照组的甲基化水平（1.17±0.29）%（ t=4.381， P<0.001）；Pearson相关分析结果显示，APC-1岛的甲基化水平与血清肌酐和尿酸比值呈显著正相关关系（ P均<0.05），APC-2岛的甲基化水平与尿酸呈显著正相关（ P<0.05）；DN患者APC-1岛的甲基化水平与mRNA相对表达量间呈显著负相关（ r=-0.426， P=0.019）；此外，DN患者的APC-1岛的甲基化水平与APC蛋白水平间呈显著负相关（ r=-0.569， P=0.004）。miRNA-135b在过表达慢病毒组大鼠中的表达均显著高于空载病毒组（ t=5.432， P<0.001）和DN组大鼠（ t=5.812， P<0.001）；miRNA-135b过表达慢病毒组大鼠的APC甲基化水平也均显著高于DN组（ t=6.217， P<0.001）和空载病毒组大鼠（ t=6.446， P<0.001）。 结论:miRNA-135b可能通过上调APC基因DNA甲基化，降低mRNA和蛋白表达水平，从而参与到DN的发生、发展中。