目的:构建乳酸乳球菌（ Lactococcus lactis，LL）介导的多房棘球绦虫EmⅡ/3疫苗，并探讨其表达效率。 方法:以pCD-EmⅡ/3质粒为模板扩增EmⅡ/3基因，采用 XbaⅠ和 HindⅢ双酶切后插入pMG36e质粒，构建重组质粒pMG36e-EmⅡ/3，转化大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞，抽提质粒进行双酶切鉴定；电穿孔转化LL MG1363株，构建多房棘球绦虫重组（r）LL-EmⅡ/3疫苗。对rLL菌株进行罗红霉素抗性筛选后，抽提质粒进行PCR鉴定，并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹（Western blot）进行表达鉴定。 结果:pMG36e-EmⅡ/3重组质粒双酶切鉴定，出现大小约3 600 bp的载体条带和1 759 bp的EmⅡ/3基因条带。以具有罗红霉素抗性的rLL菌株中抽提的质粒为模板，PCR可扩增出大小为1 759 bp的EmⅡ/3基因；SDS-PAGE显示，rLL-EmⅡ/3疫苗可表达相对分子质量为66 × 10 3的EmⅡ/3蛋白，培养3 d的表达蛋白约占菌体总蛋白的20%；Western blot显示，表达蛋白可被泡型棘球蚴感染的鼠血清识别。 结论:成功构建多房棘球绦虫rLL-EmⅡ/3疫苗，其表达的EmⅡ/3蛋白具有特异的抗原性。

目的:构建粪肠球菌（Efs）为载体的多房棘球绦虫（Em）重组Efs-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗，并探讨其抗原性。方法:采用电穿孔法将重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3转化Efs ATCC47077株，构建重组Efs-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗，抽提质粒进行PCR扩增鉴定；经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹法对表达产物进行分析和鉴定，并使用薄层扫描技术分析表达蛋白在菌体总蛋白中所占比例。结果:以重组Efs菌抽提的质粒为模板，PCR可扩增出大小约2 554 bp的EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因片段。SDS-PAGE显示，表达产物为相对分子质量约119 × 10 3的重组蛋白；IPTG诱导培养5 h，目的蛋白的表达量较高，约占菌体总蛋白的9%。免疫印迹法检测结果显示，重组蛋白能被泡球蚴感染的鼠血清识别。 结论:成功构建了Em重组Efs-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗，表达的融合蛋白具有特异的抗原性。

目的:探讨注射用益气复脉(YQFM)通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬减轻叔丁基过氧化氢(TBHP)所致H9c2心肌细胞损伤的机制.方法:体外培养H9c2心肌细胞,分为正常对照组、TBHP组、TBHP+YQFM组.CCK-8法检测各组H9c2心肌细胞存活率;免疫荧光检测细胞自噬情况;免疫印迹法检测各组细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达.结果:用2、4、8、16 g/L的YQFM预处理后,可显著恢复TBHP诱导的H9c2细胞损伤;免疫荧光染色结果显示,与正常对照组相比,TBHP组细胞LC3荧光强度显著升高(P＜0.01);与TBHP组相比,TBHP+YQFM组LC3荧光强度降低,其中2 g/L YQFM组具有显著性(P＜0.05).West-em blot 检测结果显示:TBHP 组 p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达显著增加,p-mTOR/mTOR比率显著降低;YQFM预处理使自噬相关蛋白p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率明显降低,4 g/L YQFM组p-mTOR/mTOR比率明显升高.结论:注射用益气复脉能有效拮抗TBHP引起的H9c2细胞损伤,其机制与通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬途径有关.

目的 探讨慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1(SF-1)沉默对人子宫内膜基质细胞(hESCs)蜕膜化进程的影响及机制.方法 收集子宫内膜异位症(EM)患者与正常妊娠者的子宫内膜组织,通过Real-time PCR和免疫组织化学染色检测SF-1的差异表达情况.从正常妊娠者的子宫内膜组织中分离并鉴定hESCs,将hESCs分为对照组、雌二醇(E2)+孕酮(P4)组、短发夹RNA(shRNA,sh)-正常对照(NC)+E2+P4 组、sh-SF-1+E2+P4 组,进行对应处理后,倒置显微镜下观察hESCs形态变化,Real-time PCR和Western blotting分别检测细胞内人胰岛素样生长因子结合蛋白 1(IGFBP-1)、泌乳素(PRL)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,流式细胞术测定细胞周期分布,免疫荧光染色观察细胞内自噬标记物微管相关蛋白轻链 3(LC3)表达情况,Western blotting测定细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平.结果 EM患者子宫内膜组织中SF-1 mRNA相对表达量和SF-1蛋白阳性率均高于正常妊娠者子宫内膜组织(P<0.05).与sh-NC+E2+P4 组比较,sh-SF-1+E2+P4 组细胞多为长梭形,未见明显蜕膜化,IGFBP1、PRL的 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05),G0/G1 期细胞比例显著减少而S期细胞比例显著增加(P<0.05),细胞内LC3 荧光表达增强,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,Beclin-1 蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05).结论 EM 患者子宫内膜组织内SF-1 表达升高,通过慢病毒载体介导的SF-1 沉默能够抑制hESCs蜕膜化过程,该作用可能与调控细胞自噬水平相关.

目的 利用锥形束CT(cone-beam computed tomography,CBCT)探讨上颌尖牙阻生与蝶鞍形态变异的相关性,从三维方向上评价蝶鞍变异对上颌尖牙阻生的临床预判.方法 收集 125 例上颌阻生尖牙患者(研究组)和 125 例与之相匹配的尖牙正常萌出者(对照组).将所有样本CBCT数据导入Dolphin软件,进行重建头颅侧位片和三维图像,记录观察各组蝶鞍桥接(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型)的类型分布和发生情况.使用SPSS 25.0 软件对各组结果进行统计学分析.结果 研究组蝶鞍桥接的发生率显著高于对照组(P=0.004),PIC(腭侧尖牙阻生)组蝶鞍桥接的发生率显著高于对照组(P=0.007),Ⅱ型和Ⅲ型蝶鞍桥接分布和对照组存在统计学差异(P=0.012).而BIC(唇侧尖牙阻生)组和对照组蝶鞍桥接的发生情况无统计学差异.三维重建图像上各组间蝶鞍桥接发生率无统计学差异(P＞0.05).结论 上颌尖牙阻生与蝶鞍桥接的发生情况有相关性,但仅上颌尖牙腭侧阻生患者更易发生蝶鞍桥接,而上颌尖牙唇侧阻生患者蝶鞍桥接的发生情况无变化.

目的:通过下调 Gas6/MerTK 信号通路探究线粒体自噬在肺癌进展中的可能机制.方法:培养Calu-1 与A-427 细胞系,分为(1)对照组、Gas6 干预(下调Gas6)组,(2)对照组、雷帕霉素(自噬诱导剂,RAPA)组,Western blotting检侧Gas6、MerTK、LC3Ⅱ、Beclin1 蛋白表达水平,透射电镜观察细胞自噬小体,平板克隆检侧Calu-1 与A-427 细胞克隆能力,CCK-8 检测 Calu-1 与 A-427 细胞活力,细胞划痕实验检测Calu-1 与A-427 细胞的迁移能力,免疫荧光检测Calu-1 与A-427 细胞中LC3 表达水平.结果:与对照组相比,Gas6 干预组Calu-1 细胞与A-427 细胞的 Gas6、MerTK 蛋白水平显著降低(P<0.05),LC3Ⅱ、Beclin1 蛋白水平显著增加(P<0.05),且 Calu-1 细胞与 A-427 细胞中自噬小体形成,大量自噬空泡聚集,细胞克隆能力显著降低(P<0.05)、细胞活力显著降低(P<0.05)、细胞迁移距离显著减少(P<0.05).与对照组相比,RAPA 组 Calu-1 细胞与 A-427 细胞 LC3 蛋白表达增加(P<0.05),细胞克隆能力显著降低(P<0.05)、细胞活力显著降低(P<0.05)、细胞迁移距离显著减少(P<0.05).结论:下调Gas6/MerTK信号通路可诱导Calu-1 与A-427 细胞线粒体自噬,并抑制其增殖、活性和迁移能力.

目的 研究中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)、红细胞分布宽度(RDW)和癌胚抗原(CEA)对结直肠癌TNM分期的预判价值.方法 回顾性分析92例结直肠癌患者临床资料.应用Kruskal-Wallis秩和检验分析NLR、PLR、RDW和CEA值与结直肠癌TNM分期的关系,并行Pearson相关性分析.结果 结直肠癌TNM分期Ⅰ期7例,Ⅱ期33例,Ⅲ期34例,Ⅳ期18例.TNM分期Ⅰ~Ⅳ期NLR中位数值分别为2.53,2.37,2.69和4.57(P=0.010);PLR中位数值分别为114.91,157.41,153.44和183.22(P=0.106);RDW中位数值分别为41.80,43.30,42.40和45.85(P=0.064);CEA中位数值分别为3.60,3.20,7.75和15.15(P=0.007).Spearmann相关性分析结果显示相关系数NLR>CEA>PLR>RDW,NLR、CEA、PLR值与结直肠癌TNM分期明显正相关(P<0.05).结论 NLR、PLR和CEA值在预测结直肠癌患者TNM分期上具有一定的临床意义,可为临床提供参考.

目的:探讨MIF、COX-2与子宫内膜异位症(endometriosis,EM)的相关性研究.方法:采用免疫组织化学的方法测定EM患者49例异位内膜、40例在位的内膜及对照组正常内膜40例中MIF、COX-2的表达,并进行相关性分析.结果:(1)MIF、COX-2在EM在位内膜、异位内膜的表达率明显高于正常对照组,比较有统计学意义(P＜0.01).(2)异位和在位的内膜组中,MIF、COX-2表达在Ⅲ～Ⅳ期均高于Ⅰ～Ⅱ期,比较有统计学的意义(P＜0.05).(3)异位和在位的内膜组中,MIF表达与COX-2的表达呈正相关性(P＜0.05).结论:MIF可能通过增加COX-2表达而促进EM的发生、发展.

目的 拟行前瞻Ⅱ期临床研究,探讨CYP2D6基因多态性在中国人群中的分布及其与激素受体阳性早期乳腺癌他莫昔芬代谢的关系.方法 使用ABI 3500遗传分析仪通过Sanger测序行CYP2D6基因型测定.使用HPLC-MS/MS(API 2000)测定他莫昔芬和吲哚昔芬的血药浓度.CPIP数据库下载CYP2D6等位基因型数据进行统计学分析.结果 (1)中国乳腺癌患者最常见的等位基因型是CYP2D6*1,*2和*10;主要的双倍型是*1/*10(38.3%)和*10/*10(18.8%).(2)在不同的CYP2D6活性预测标准下,代谢表型的分布存在差异,吲哚昔芬血药浓度以及吲哚昔芬/他莫昔芬血药浓度比值在正常代谢表型(EM)与中间表型(IM)之间结果不一致.(3)通过聚类分析三组之间吲哚昔芬血药浓度以及吲哚昔芬/他莫昔芬血药浓度比值差异有统计学意义.结论 中国人CYP2D6基因型分布与西方人不同.以前被称为CYP2D6中间代谢型的患者间血清吲哚昔芬浓度有相当大的差异.在目前精准医学的时代,仅靠标准的CYP2D6基因型-表型分类系统不能对中国人群中不同吲哚昔芬浓度进行分层.

目的:探讨腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)腔内修复术后发生内漏的危险因素.方法:回顾性分析2014年1月至2015年10月272例AAA病人行腔内修复术的临床资料和术后3、6、12、24、36个月随访结果.分析腔内修复术后各型内漏发生率及其与临床特征、支架类型、动脉瘤颈结构的关系.结果:272例病人腔内修复术后内漏总发生率为15.8％(43/272),其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ型以及张力性内漏(V型)的发生率分别为7.4％(20/272)、6.3％(17/272)、1.5％(4/272)和0.7％(2/272).Ⅰ型内漏多在随访3个月时发现,而其他类型内漏在随访12个月或更晚发现.动脉瘤近端瘤颈短＜1.5 em)、重度扭曲(＞45°)、形状不规则或钙化程度高(＞25％)与Ⅰa型内漏发生显著相关(P＜0.05).持续通畅的肠系膜下动脉以及存在≥2根罪犯血管是Ⅱ型内漏发生的危险因素(P＜0.05).年龄、美国麻醉医师协会(American Society of Anesthesiologists,ASA)病情分级、吸烟以及合并高血压、糖尿病、冠心病、肺部疾病等对内漏发生率无影响.不同类型的人工血管支架对内漏发生有显著影响(P=-0.047).与其他类型支架相比,Endurant支架的内漏发生率最低(10.7％).结论:制定腔内修复手术方案时,应充分评估AAA的特征和内漏风险,以期达到较好的疗效.