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绿色荧光裸小鼠髓源巨噬细胞的极化培养及特征
编辑人员丨5天前
目的:探讨巨噬细胞为适应肿瘤微环境(tumor micro-environment,TME)需要而在其自身极化层面上发生谱系变化模型的特征,为进一步研究TME中巨噬细胞的可塑性提供参考。方法:取绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因并已建成近交系的Foxn1 nu.B6-CAG-EGFP/SU裸小鼠骨髓细胞,分别在巨噬细胞集落刺激因子1(colony-stimulating factor 1,CSF-1)、IFN-γ+LPS、IL-4诱导下,培养出M0、M1和M2亚型,倒置荧光显微镜观察GFP。免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞标志蛋白和极化蛋白,并进一步与人脑胶质瘤干细胞SU3共培养。 结果:倒置荧光显微镜下,原始骨髓细胞和条件培养基培养出的M0、M1和M2都发出强烈的绿色荧光。瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)染色后,普通显微镜下能观察到巨噬细胞固有的可塑性。免疫细胞化学染色检测CD11C和CD206标志蛋白表达都呈阳性,CD68只在M1巨噬细胞上为弱阳性,CSF-1和CSF-1R在各亚型细胞上都呈强阳性。在共培养的干细胞球体中观察到了绿色荧光细胞浸润,并发生了吞噬反应。结论:本研究建立了绿色荧光裸小鼠的髓源性巨噬细胞谱系模型,包含M0、M1和M2亚型,都有巨噬细胞固有的可塑性,表达共同的标志蛋白和极化相关蛋白,具有巨噬细胞固有的吞噬功能,可用于与肿瘤细胞之间相生相克表征的研究,特别是需要示踪研究时,可通过巨噬细胞发出的绿色荧光进行识别。
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编辑人员丨5天前
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FOXN2在前列腺癌组织的表达及对前列腺癌细胞生物学的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨双头框蛋白N2(FOXN2)在前列腺癌(PCa)组织中的表达以及对PCa细胞生物学的影响。方法:选取宜宾市第二人民医院50例接受手术治疗的PCa患者的标本及癌旁组织,通过RT-qPCR实验和Western blot实验分别检测PCa组织和癌旁组织中的FOXN2 mRNA及蛋白的表达水平,并分析PCa组织中FOXN2与患者临床病理特征的相关性。通过RT-qPCR实验检测正常前列腺细胞RWPE-1、PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中FOXN2 mRNA的表达水平。选取PC-3细胞为研究对象,分为FOXN2过表达组、空载体对照组以及对照组,分别通过MTT实验、流式细胞实验、Transwell实验以及Western blot实验检测各组细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况以及相关蛋白Bax、CyclinD1、MMP-2的表达量。结果:结果与癌旁组织相比,FOXN2的mRNA和蛋白表达水平显著降低( P<0.05),与TCGA数据库中结果一致。FOXN2低表达与PCa患者淋巴转移、TNM分期以及Gleason评分有关( P=0.003、0.005、0.002)。与人正常前列腺细胞RWPE-1相比,FOXN2在PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中均呈现低表达( P<0.05),其中PC-3细胞中表达量最低。与对照组和空载体对照组相比,FOXN2过表达组的PC-3细胞在作用24 、48 、72 h后增殖能力显著下降( F=290.400、57.735、113.014, P<0.05),CyclinD1蛋白表达水平显著下降( P<0.05);PC-3细胞的凋亡率显著升高( P<0.05),Bax蛋白表达水平显著升高( P<0.05);PC-3细胞的迁移和侵袭能力显著下降( P<0.05),MMP-2蛋白表达水平显著下降( P<0.05)。 结论:FOXN2在PCa组织及细胞中低表达,过表达FOXN2可抑制PCa细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。
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编辑人员丨5天前
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胸腺增龄性萎缩与胸腺TECs内基因信使RNA表达相关性研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨胸腺增龄性萎缩与胸腺上皮细胞(thymus epithelial cells,TECs)内参与胸腺发育KGF、Foxp3、Foxn1和IL-6等基因表达的相关性。方法:将18只无特定病原体( specific pathogen free,SPF)小鼠按月龄分组,每组6只。无菌取胸腺,应用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR,RT-PCR)检测TECs细胞中KGF、Foxp3、Foxn1和IL-6等基因的表达。结果:小鼠TECs细胞中KGF、Foxp3、Foxn1和IL-6基因表达在随着年龄增加而变化,3、10、16月龄的小鼠KGF表达量分别为(0.90±0.06), (0.58±0.07)和(0.18±0.07),差异具有统计学意义( P值分别为0.030,0.020,<0.001);Foxp3表达量分别为(0.93±0.10),(0.60±0.08)和(0.20±0.06),差异具有统计学意义( P值分别为0.020,0.020,<0.001);Foxn1表达量分别为(0.92±0.09), (0.63±0.09)和(0.16±0.08),差异具有统计学意义( P值分别为0.020,0.010,<0.001);IL-6表达量分别为(0.33±0.11), (0.46±0.06),(0.88±0.09),差异具有统计学意义( P值分别为0.052,0.001,<0.001)。同时,胸腺质量的增龄性减少与TECs细胞KGF、Foxp3、Foxn1和IL-6等表达相关性结果显示,小鼠TECs细胞KGF、Foxp3和Foxn1在mRNA水平表达与胸腺增龄性萎缩(胸腺质量)情况呈正相关(KGF: r=0.941, R2=0.886, P<0.001。Foxp3: r=0.939, R2=0.881, P<0.001。Foxn1: r=0.918, R2=0.842, P<0.001),而IL-6的mRNA表达与胸腺增龄性萎缩(胸腺质量)情况呈负相关( r=-0.866, R2=0.749, P<0.001)。 结论:胸腺基质微环境增龄性变化和胸腺发育关键基因表达增龄性改变是导致小鼠胸腺增龄性萎缩的主要原因,提示KGF、Foxp3和Foxn1等基因的时序性表达调节胸腺增龄性萎缩的进程。
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编辑人员丨5天前
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miR-623靶向DNM2调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨miR-623调控非小细胞肺癌细胞A549凋亡的潜在分子机制。方法:在非小细胞肺癌细胞A549中过表达或抑制miR-623,检测细胞的凋亡水平。通过miRDB在线分析和荧光素酶报告系统分析miR-623的底物。通过siRNA和质粒分别敲低和过表达底物,检测非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平。结果:过表达miR-623后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平下降( t=3.313, P<0.05);敲低miR-623后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平上升( t=7.764, P<0.05)。miRDB在线分析发现miR-623潜在靶向TRIM44、FOXN2、PTPRD、KLF3、DNM2、EPHB6、APEM2、BIRC2、PHF6和FBN2。过表达miR-623后,非小细胞肺癌细胞A549中DNM2的表达水平下降( t=5.418, P<0.05),而TRIM44、FOXN2、PTPRD、KLF3、EPHB6、APEM2、BIRC2、PHF6和FBN2的表达水平均无显著变化(P值均>0.05);抑制miR-623后,非小细胞肺癌细胞A549中DNM2的表达水平上升( t=2.898, P<0.05),而TRIM44、FOXN2、PTPRD、KLF3、EPHB6、APEM2、BIRC2、PHF6和FBN2的表达水平均无显著变化( P值均>0.05)。此外,miR-623靶向DNM2 mRNA的3′端非编码区。敲低DNM2后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡下降( t=7.381, P<0.05);过表达DNM2后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡上升( t=4.113, P<0.05)。同时过表达miR-623和DNM2,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平无明显变化( t=0.751, P>0.05);同时敲低miR-623和DNM2,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平无明显变化( t=0.626, P>0.05)。 结论:miR-623通过靶向DNM2 mRNA的3′端非编码区,抑制了DNM2的表达,最终抑制了非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。
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编辑人员丨5天前
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新疆地区人群非综合征型唇腭裂与外周血FOXN3-SIN3A复合物表达量相关性研究
编辑人员丨2024/7/6
目的 研究FOXN3-SIN3A复合物表达量与新疆地区人群非综合征型唇腭裂(NSOC)的相关性.方法 本研究选取就诊于新疆维吾尔自治区人民医院的NSOC患者60例为病例组,其中唇裂伴或不伴腭裂(NSCL/P)30例,单纯腭裂(CPO)30例,对照组为30例健康儿童.采用高通量二代测序技术及定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组外周血中FOXN3、SIN3A和NEAT1的表达量,分析受试者工作特征(ROC)曲线和曲线下面积(AUC),采用卡方检验对NSOC和对照组FOXN3、SIN3A和NEAT1的表达量进行比较.结果 NSCL/P组和CPO组患者FOXN3、SIN3A、NEAT1基因表达较对照组均上升,差异均有统计学意义(P<0.05).NSCL/P组FOXN3、SIN3A、NEAT1的基因序列AUC分别为0.933[95%CI=(0.864,1.000)]、0.822[95%CI=(0.713,0.932)]、1.000[95%CI=(1.000,1.000)];CPO组FOXN3、SIN3A、NEAT1的基因序列AUC分别为 0.891[95%CI=(0.806,0.976)]、0.688[95%CI=(0.552,0.824)]、1.000[95%CI=(1.000,1.000)].结论 外周血FOXN3、SIN3A、NEAT1基因表达上升与新疆地区NSOC的发生存在相关性,可以对将来进一步研究FOXN3-SIN3A复合物作为生物标记物,从而对NSOC的早期筛查、患病预测和早期预防提供理论依据.
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编辑人员丨2024/7/6
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miR-183-5p靶向FOXN2促进前列腺癌细胞PC3增殖及侵袭的机制研究
编辑人员丨2023/11/11
目的:探究miR-183-5p对PC3细胞生物学功能的影响和作用机制.方法:从GEO数据库中筛选在前列腺癌中显著高表达的miR-183-5p,在PC3细胞中过表达miR-183-5p作为miR-183-5p mimics组;将转染空白质粒的PC3细胞作为miR-NC组,通过细胞克隆、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)实验、噻唑蓝(MTT)、细胞划痕、Transwell小室迁移及侵袭实验检测miR-183-5p mimics组与miR-NC组前列腺癌细胞PC3生物学功能的影响.在PC3细胞中稳定过表达miR-183-5p进行皮下成瘤实验观察miR-183-5p在体内对细胞增殖能力的影响.通过预测软件筛选出叉头框蛋白(FOXN2)作为miR-183-5p的下游靶基因并检测miR-183-5p对其蛋白表达的影响.在PC3细胞中转染FOXN2过表达质粒,共转染miR-183-5p后进行回复实验验证miR-183-5p通过靶向FOXN2促进PC3细胞增殖及侵袭.结果:与miR-NC组比较,miR-183-5p mimics组细胞增殖、迁移及侵袭能力均更高(P<0.05),且其在体内亦可促进瘤体生长(P<0.05).miR-183-5p组与靶基因FOXN2表达量高于miR-NC组(P<0.05),转染FOXN2质粒后可逆转miR-183-5p mimics对细胞增殖及侵袭的促进作用.结论:miR-183-5p可通过靶向FOXN2促进前列腺癌细胞PC3的增殖和侵袭能力.
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编辑人员丨2023/11/11
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FOXN3蛋白在恶性肿瘤中的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
FOXN3(Fork head Box N3),又名CHES1(Checkpoint Suppressor 1),属于叉头框(forehead box, Fox)蛋白家族中的一种亚型.FOXN3作为一种转录抑制因子,参与细胞周期的调控及肿瘤的发生,其基因结构及表观遗传学的异常与人类多种疾病的发生发展密切相关.研究发现,FOXN3在大多数恶性肿瘤中充当抑癌基因的角色,但其相关发病机制尚未明确.因此,对于FOXN3蛋白功能的深入研究,有助于更好地揭示相关疾病的发病机制,为疾病的预防和治疗提供理论依据.本文就国内外FOXN3蛋白在不同肿瘤中的主要作用的研究进展进行综述.
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编辑人员丨2023/8/6
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基于全基因表达谱的骨关节炎软骨下骨转录因子预测及分析
编辑人员丨2023/8/6
目的:利用生物信息分析方法对骨关节炎软骨下骨全基因表达谱进行转录因子预测及分析.方法:下载基因芯片实验数据(GSE30322),使用软件包limma packagein R(版本:3.3.1)筛选差异表达基因,筛选差异基因的标准以基因表达上调或下调的倍数≥2为标准(P<0.05),进一步使用Cytoscape软件(版本:3.4.0)的iRegulon插件预测分析调控这些差异表达基因的转录因子,并分析预测的转录因子所调控的差异表达基因.结果:发现上调的差异表达基因可能相关15个转录因子及其相对应的靶基因:FOXN4,NANOS1,E2F6,RAD21,MECOM,ETS1,MEF2A,POU2F3, BRCA1,GATA3,ZNF706,ZBTB33,SUZ12,DBP,SETDB1等.发现下调的差异表达基因可能相关12个转录因子及其相对应的靶基因:ARID3A,YY1,RDBP,ATF1,CRX,TAF1,XBP1,SOX3,E2F4,PGR,TIMM8A,HOXA2等.结论:预测分析的转录因子可能在骨关节炎软骨下骨致病机制调控中起了重要作用,其有可能成为新的防治骨关节炎的靶点.
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编辑人员丨2023/8/6
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长链非编码RNA FOXN3-AS2在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:观察FOXN3-AS2基因在肝癌组织和细胞中的表达,探讨其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响.方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝癌组织和细胞株中FOXN3-AS2的表达水平.在表达水平最低的肝癌细胞株转染携带FOXN3-AS2的质粒以升高FOXN3-AS2的表达,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell侵袭实验检测FOXN3-AS2高表达对肝癌细胞增殖活性和侵袭能力的影响.生物信息学预测FOXN3-AS2互补结合的miRNA及相关基因,qRT-PCR检测miRNA和相关基因mRNA的表达水平,Western blot检测相关蛋白的表达水平.结果:FOXN3-AS2在肝癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01),在肝癌细胞株的表达水平显著低于人正常肝细胞(P<0.05),在HepG2细胞的表达水平最低(P<0.01).FOXN3-AS2高表达可显著抑制肝癌细胞的增殖活性(P<0.05)和侵袭能力(P<0.05).FOXN3-AS2可互补结合miR-34a-5p,miR-34a-5p可互补结合Kruppel样因子4(KLF4)基因.FOXN3-AS2高表达可降低miR-34 a-5 p的表达水平(P<0.01),KLF4 mRNA表达水平升高(P<0.01),KLF4、β-catenin和E-cadherin蛋白表达升高,CDK4和Cyclin D1蛋白表达降低.结论:FOXN3-AS2在肝癌组织和细胞中表达降低,FOXN3-AS2高表达可抑制肝癌HepG2细胞的增殖和侵袭,其机制可能是调控miR-34 a-5 p及KLF4基因的表达.
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编辑人员丨2023/8/6
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结肠癌病灶内Runt相关转录因子2与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子的相关性研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨结肠癌病灶内Runt相关转录因子2(RunX2)与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子的相关性.方法:90例原发性结肠癌患者作为结肠癌组、68例良性结肠息肉患者作为结肠息肉组,对比两组病灶组织中RunX2及增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的差异,进一步采用Pearson检验评估结肠癌组织中RunX2表达量与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的相关关系.结果:结肠癌组病灶中RunX2 mRNA的表达量高于结肠息肉组.结肠癌组病灶中增殖基因GTPBP4、HOXB7、ZNF331、ADAM17、HSP60 mRNA的表达量高于结肠息肉组;抑癌基因ATF3、FOXN3、OTUD1、NDRG2 mRNA的表达量低于结肠息肉组;血管新生分子Musashi 1、NF-κB、RegⅣ、STAT3mRNA的表达量高于结肠息肉组.结肠癌病灶中RunX2 mRNA表达量与上述增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量直接相关.结论:结肠癌病灶内RunX2异常高表达,且具体表达量与癌细胞的增殖活性、血管新生活性均呈正相关,是导致结肠癌发生发展的重要分子靶点.
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编辑人员丨2023/8/6
