目的:评价G蛋白偶联受体30(GPR30)在17β雌二醇减轻氯胺酮致发育期大鼠远期认知功能障碍中的作用。方法:7日龄健康雄性SD大鼠30只，体重11~18 g，采用随机数字表法分为5组( n＝6)：对照组(C组)、氯胺酮组(K组)、17β雌二醇+氯胺酮组(EK组)、GPR30激动剂G1+氯胺酮组(G1K组)和GPR30抑制剂G15+17β雌二醇+氯胺酮组(G15EK组)。K组腹腔注射氯胺酮75 mg/kg，EK组皮下注射17β雌二醇600 μg/kg，腹腔注射氯胺酮75 mg/kg，G1K组皮下注射G1 200 μg/kg和腹腔注射氯胺酮75 mg/kg，G15EK组皮下注射G15 300 μg/kg和17β雌二醇600 μg/kg以及腹腔注射氯胺酮75 mg/kg，C组腹腔注射等容量生理盐水。每隔24 h注射1次，连续注射3 d。所有大鼠饲养至60日龄，采用Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能。于水迷宫实验结束后处死大鼠取海马，采用ELISA法检测海马乙酰胆碱酯酶(AChE)和乙酰胆碱(ACh)的含量。 结果:与C组比较，K组大鼠第3~5天逃避潜伏期延长，穿越平台次数及靶象限停留时间百分比减少，海马AChE含量增加，ACh含量减少( P<0.05)；与K组比较，EK组和G1K组大鼠第3~5天逃避潜伏期缩短，穿越平台次数及靶象限停留时间百分比增加，海马AChE含量减少，ACh含量增加( P<0.05)；与EK组和G1K组比较，G15EK组大鼠第3~5天逃避潜伏期延长，穿越平台次数及靶象限停留时间百分比减少，海马AChE含量增加，ACh含量减少( P<0.05)。 结论:GPR30参与了17β雌二醇减轻氯胺酮致发育期大鼠远期认知功能障碍的过程，与调节海马AChE和ACh含量有关。

特异性促炎症消退介质(specialized proresolving mediators，SPMs)是一类由必需脂肪酸衍生而来的脂质介质，具有抗炎/促消退作用。SPMs主要包括脂氧素(lipoxin)、消退素(resolvin)、保护素(protectin)和胞壁质(maresin)。不同种类的SPMs可结合不同受体，如甲酰肽受体2(ALX/FPR2)、G蛋白耦联受体32(DRV1/GPR32)、G蛋白耦联受体18(DRV2/GPR18)或趋化因子样受体1(ERV1/CMKLR1)，经核因子-κB、信号传导和转录激活因子、丝裂原活化蛋白激酶信号通路，通过限制中性粒细胞迁移浸润，调节炎性细胞因子表达，增强巨噬细胞吞噬作用发挥促炎症消退作用。SPMs分子在危重疾病严重程度、预后预测和临床干预效能方面具有潜在临床价值。本文就SPMs在重症感染免疫炎症反应中的作用及潜在临床价值作一综述。

目的:探讨 Gpr174对脓毒症小鼠肠道损伤、肠道菌群与代谢物组成的影响。 方法:将12只8周龄雄性C57BL/6和 Gpr174 -/-小鼠随机（随机数字法）分为4组，分别为野生（WT）组，敲除（KO）组，野生鼠盲肠结扎穿孔（WT+CLP）组和敲除鼠盲肠结扎穿孔（KO+CLP）组，采用盲肠结扎穿刺法建立脓毒症模型；分别在生理情况下与脓毒症造模后72 h收集小鼠粪便，提取菌群DNA并进行扩增，在对PCR产物荧光定量后，对原始数据进行过滤与质控并筛选差异菌群。利用液相色谱-质谱联用技术，使用QuanMET软件对原始数据进行分析并比对鉴定内源性代谢物。通过R语言进行多元回归分析，筛选相关差异代谢物，并进一步分析相关代谢通路。 结果:研究发现，KO-CLP组小鼠的肠道损伤和炎症反应较WT-CLP组减轻，肠道屏障结构和功能破坏较弱。同时，WT组与KO组小鼠在生理和脓毒症情况下肠道差异菌群组内差异小，组间差异有统计学意义。生理情况下共筛选出18种差异细菌，差异最显著的包括双歧杆菌、乳酸菌、理研菌、拟杆菌、巴恩斯氏菌、普雷沃特菌、龈乳杆菌、艾克曼菌等，但脓毒症时则仅存在2种差异菌，分别为瘤胃球菌与普雷沃氏菌。肠道代谢物PCA分析表明生理情况下野生组与敲除组小鼠存在组间差异；而在脓毒症造模后，KO与WT小鼠组间差异不明显。在生理情况下，WT组与KO组小鼠鉴定出24种差异代谢产物，其中差异最显著的为丙氨酸与丙酮二羟酸，这些差异代谢产物涉及丙氨酸循环、丙氨酸代谢等信号通路。结论:Gpr174敲除后能缓解脓毒症小鼠的肠道损伤。生理情况下 Gpr174影响肠道菌群与代谢产物。研究结果提示 Gpr174参与肠道菌群与代谢物的调控。

目的:明确消退素D2(resolvin D2，RvD2)在病毒性心肌炎小鼠体内发挥的抗炎和抗内质网应激作用并初步探究其作用机制。方法:采购50只雄性BALB/c小鼠并给予相应编号，通过随机数表法抽取40只雄性BALB/c小鼠，每组各10只。分别设为正常对照组、RvD2对照组、病毒性心肌炎组和RvD2治疗组。RvD2对照组小鼠给予连续腹腔注射RvD2治疗7 d；病毒性心肌炎组小鼠给予腹腔注射柯萨奇B3病毒(Coxsackievirus B3，CVB3)构建病毒性心肌炎动物模型；RvD2治疗组小鼠在构建病毒性心肌炎动物模型后给予连续腹腔注射RvD2治疗7 d。7 d后处死各组小鼠并留取心脏组织及血清样本。ELISA检测各组小鼠血清中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)表达水平；HE染色检测各组小鼠心肌组织内炎症细胞浸润情况；Western blot检测各组小鼠心肌组织内炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α以及内质网应激相关蛋白质葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kD，GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein，Chop)的表达水平。剩余10只BALB/c小鼠在构建病毒性心肌炎动物模型后给予腹腔注射RvD2和G蛋白偶联受体18(G protein-coupled receptor 18，GPR18)蛋白抑制剂处理，Western blot检测各组小鼠心肌组织内GPR18蛋白、炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α以及内质网应激相关蛋白GRP78、Chop的表达水平。结果:与正常对照组相比，病毒性心肌炎组小鼠血清中炎症因子IL-1β、TNF-α表达水平显著上调；心肌组织内炎症细胞浸润程度显著增加；心肌组织内炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α以及内质网应激相关蛋白GRP78、Chop表达水平显著增加。与病毒性心肌炎组相比，RvD2治疗组小鼠血清炎症因子IL-1β、TNF-α表达水平显著降低；心肌组织内炎症细胞浸润程度显著降低；心肌组织内炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α以及内质网应激相关蛋白GRP78、Chop表达水平显著降低。与RvD2治疗组相比，给予病毒性心肌炎小鼠腹腔注射RvD2和GPR18抑制剂处理后小鼠心肌组织内炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α以及内质网应激相关蛋白GRP78、Chop表达水平显著增加，而GPR18蛋白表达水平显著降低。结论:RvD2可通过结合膜蛋白受体GPR18抑制病毒性心肌炎小鼠炎症反应并改善心肌组织所受的内质网应激损伤，从而在病毒性心肌炎小鼠体内发挥心脏保护作用。

目的:通过生信分析筛选脓毒症相关性脑病(sepsis associated encephalopathy,SAE)中小胶质细胞介导神经炎症的核心基因,并通过体外细胞学实验验证.方法:从基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)中获取脓毒症患者外周血全转录组测序数据集GSE65682以及体外脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小胶质细胞活化模型基因芯片数据集GSE103156.采用加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)筛选GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断显著相关的模块,与GSE103156数据集中LPS处理前后小胶质细胞的差异表达基因(differentially expressed gene,DEG)相交,利用基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)对DEG进行功能富集分析.采用STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用网络、Cytoscape以及Lasso回归分析筛选核心基因.构建LPS诱导BV2小胶质细胞活化体外细胞模型,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测基因表达;采用慢病毒载体法过表达组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9),Western blot检测炎症相关分子表达.结果:WGCNA分析得到GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断相关的9个模块、共332个基因,通过Limma分析得到GSE103156数据集中LPS刺激前后小胶质细胞的1 272个DEGs,二者取交集后得到18个交集基因,进一步采用Lasso回归分析筛选得到4个枢纽基因分别为七跨膜G蛋白偶联受体183(G protein-coupled receptor 183,GPR183)、HDAC9、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(nicotinamide adenine dinucleotide kinase,NADK)、富含亮氨酸重复蛋白 25(leucine rich repeat containing 25,LRRC25).RT-qPCR结果证实在LPS刺激的小胶质细胞炎性活化模型中,Gpr183和Hdac9基因的mRNA表达下调、Lrrc25表达上调,而Nafk表达无明显变化;Western blot显示过表达HDAC9可促进LPS诱导小胶质细胞促炎因子白介素(interleukin,IL)-1β、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达、促进JAK1-STAT3磷酸化.结论:本研究利用生物信息学筛选得到SAE中小胶质细胞介导神经炎症的4个关键基因,并初步证实HDAC9对于小胶质细胞具有促炎活性,为SAE的机制研究提供了新的思路和数据.

目的 应用新的半导体测序技术对山东地区耳聋患者进行耳聋基因检测,以明确耳聋的遗传学病因.方法 汇总2020年1月～12月山东省1000例耳聋患者血样标本,应用半导体基因测序技术对18个耳聋基因100个突变位点进行检测,统计分析耳聋基因变异类型和变异位点发生情况.结果 1000例耳聋患者中,有583例携带耳聋基因突变,检出率为58.3%;其中GJB2基因突变267例(26.7%);SLA26A4基因突变215例(21.5%);GJB3基因突变11例(1.1%);mtDNA基因突变21例(2.1%);双基因杂合突变和三基因突变共69例(6.9%);而MT-TH、DSPP、GPR98、DFNA5、COCH、TECTA、DIABLO、TMC1、MYO7A、MYO15A、PRPS1 11个基因均未检测到突变.结论 山东省耳聋人群中常见的致聋基为GJB2和SLA26A4.虽然半导体测序技术可明显提高耳聋基因的检出率和诊断率,但仍无法满足所有听障患者检测需求;必要时对筛查阴性患者进行高通量测序检测,以明确诊断.

目的 基于生物信息学和机器学习方法探究分析胞葬在缺血性脑卒中(IS)中的核心基因与免疫细胞的关系并分析预测相关作用中药.方法 从GEO数据库获取GSE16561基因芯片,利用R软件筛选差异表达基因,并在Genecards数据库检索获得胞葬相关基因(MRG),并对获得基因进行通路分析.同时基于STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络.利用LASSO回归、随机森林和支持向量机三种机器学习方法,进一步识别核心基因.通过ssGSEA算法分析IS免疫浸润情况,进一步分析关键基因和免疫细胞的相关性.最后基于Coremine Medical和TCMSP网站构建"药物-活性成分-作用靶点"网络,筛选作用与IS的相关中药靶点.结果 筛选出555个差异表达基因,包括427个上调基因和128个下调基因,共获得14个胞葬相关缺血性卒中疾病基因.GO和KEGG富集的通路主要涉及吞噬作用、内吞作用调节巨噬细胞趋化作用和巨噬细胞迁移等胞葬相关通路.通过LASSO回归、随机森林和支持向量机三种机器学习算法筛选出 5 个Hub基因,分别是ABCA1、FGL2、GPR18、MFGE8、PROS1.5个Hub基因与M2巨噬细胞、M0巨噬细胞、CD8+T细胞呈显著负相关,与CD4+T细胞和肥大细胞呈显著正相关.潜在治疗中药有:大黄、姜黄、郁金、三七、丹参、吴茱萸等.潜在化合物:甲基丙烯酸、1-(3-环戊基丙酸)、1,2-二氢姜黄素等.结论 综上,吞噬作用、内吞作用调节、巨噬细胞趋化作用和巨噬细胞迁移等胞葬相关通路与IS的发病机制密切相关,大黄、姜黄、郁金、三七、丹参和吴茱萸可能是IS治疗的潜在分子药物来源.

雌激素对GnRH神经元活性及其合成分泌具有重要的调控作用.为了体外模拟雌激素对GnRH合成分泌的抑制作用,使用1μmol/L的雌激素处理GT1-7细胞0、6、12、18、24和30 h,分别检测GnRH的分泌及相关基因GnRH、ERα、KISS-1和GPR54的表达.结果显示:雌激素处理GT1-7细胞GnRH分泌量相对于对照组先升高(6和12 h,P>0.05)后极显著降低(18和30 h,P<0.01).雌激素处理组GnRH mRNA表达在整个培养期间相对于对照组极显著降低(P<0.01),ERα(12和18 h,P<0.01)、KISS-1(12 h,P<0.01)和GPR54表达也极显著降低(6、12和24 h,P<0.01).结果表明:1μmol/L雌激素能够抑制GT1-7细胞GnRH的分泌,可能是通过降低ERα、GnRH、KISS-1及GPR54等基因的表达来实现的.

目的:探讨G蛋白偶联受体120(GPR120)在巨噬细胞胆固醇流出中的作用及机制.方法:培养Raw264.7巨噬细胞,以50-200 μmol/L的GPR 120激动剂GW9508处理Raw264.7细胞18h.NBD-胆固醇负载法检测细胞胆固醇的流出率;MTS方法检测细胞的存活率;定量PCR和Western blot方法检测胆固醇流出相关转运体ABCA1、ABCG1和SR-B1的mRNA及蛋白表达水平;定量PCR检测核受体LXRα、LXRβ和PPARα、PPARγ的mRNA水平.结果:与对照组相比,100、150和200 μmol/L的GW9508均提高Raw264.7细胞NBD-胆固醇流出率,分别提高了8％、10％和18％;ABCA1的蛋白水平分别上调了1.4倍、1.8倍和4.8倍,ABCG1的蛋白水平分别上调了1.3倍、3.2倍和5.1倍,但是不影响SR-B1的蛋白水平;而且,100和200μmol/L的GW9508分别上调ABCA1的mRNA水平3.6倍和6.8倍,上调ABCG1的mRNA水平1.6倍和3.3倍;同时,LXRα的mRNA水平也分别上调了0.6倍和1.25倍,且差异有统计学意义;但是不影响SR-B1及LXRβ、PPARα和PPARγ的mRNA水平.另外,50-200μmol/L的GW9508均不影响Raw264.7细胞的存活率.结论:GPR120通过LXRα上调ABCA1和ABCG1的表达而促进Raw264.7巨噬细胞的胆固醇流出.

目的 研究子宫内膜组织、癌组织中G蛋白偶联受体30(GPR30)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化,分析其与子宫内膜癌患者临床病理参数间的关系,探讨其临床意义.方法 选取正常子宫内膜增生期组织(正常组)、子宫内膜增生不伴不典型增生(EH)组织(EH组)、不典型增生(AH)组织(AH组)各30例,子宫内膜癌组织(癌症组)69例.采用免疫组织化学方法分析159例组织中GPR30和GRP78蛋白的表达情况.采用x2检验比较各组间和癌症组不同临床病理参数患者间GPR30和GRP78阳性表达率的差异,采用Spearmen相关性分析子宫内膜癌组织中GPR30与GRP78表达的关系.结果 正常组、EH组、AH组、癌症组的GPR30和GRP78蛋白阳性表达率依次升高,GPR30蛋白的阳性表达率分别为13.33％ (4/30)、26.67％(8/30)、60.00％(18/30)、75.36％(52/69),组间两两比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05);GRP78蛋白的阳性表达率分别为6.67％(2/30)、20.00％(6/30)、43.33％(13/30)、62.32％(43/69),组间两两比较差异均有统计学意义(P值均＜0.05).癌症组中,子宫内膜癌国际妇产科协会(FIGO)分期高、组织分级高、肌层浸润深度≥1/2、雌激素受体(ER)表达阳性者的GPR30蛋白阳性表达率高(P值均＜0.05),不同年龄、淋巴结转移与否、绝经与否、孕激素受体(PR)表达与否的患者GPR30蛋白阳性表达率的差异无统计学意义(P值均＞0.05);子宫内膜癌FIGO分期高、组织分级高、淋巴结转移者GRP78蛋白阳性表达率高(P值均＜0.05),不同年龄、不同肌层浸润深度、绝经与否、ER和PR表达与否的患者GRP78蛋白阳性表达率的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).Spearman相关分析显示,子宫内膜癌组织中GPR30与GRP78的表达呈正相关(r=0.735,P＜0.05).结论 子宫内膜癌组织中GPR30、GRP78蛋白表达均高于正常增生期、EH和AH组织,其阳性表达程度与子宫内膜恶性程度有关.GPR30与GRP78的表达在子宫内膜癌组织中呈正相关.