目的 通过生物信息学分析,寻找与银屑病发病密切相关的特征基因,并探寻中药复方对其作用机理.方法 利用中药系统药理学数据库(TCMSP)对健脾解毒汤的药物作用靶点进行研究.通过OMIM数据库、GeneCard数据库以及GEO数据库筛选银屑病的病理靶点;使用R包对基因进行功能注释;从NCBI GEO公共数据库下载银屑病数据集GSE13355的基因表达数据;通过Cytoscape建立"活性成分-靶点"网络;采用WGCNA方法,寻找协同表达的基因模块;利用WGCNA-R包构建数据集中基因的共表达网络;采用CIBER-SORT算法推断22种免疫浸润细胞的相对比例,并进行Pearson相关性分析;通过miRcode数据库获得关键基因相关的miRNA.统计分析采用R语言(version4.2.1)进行.结果 最终得到对应药物靶点共132个,将药物靶点与疾病靶点取交集,得43个交集靶点.GO和KEGG富集分析主要涉及cellular response to chemical stress、response to oxidative stress、gland development、HIF-1、Th17 cell differentiation、PI3K-Akt等信号通路.WGC-NA分析共检测到8个基因模块,其中black模块相关性绝对值最高,将black模块中筛选后得到的912个基因与43个交集靶点取交集,结果显示,ABCC1、BIRC5、PCNA这3个基因均有交集,关键基因与多种免疫细胞显著相关.对关键基因和铁死亡相关基因进行相关性分析,关键靶点的表达水平和铁死亡相关基因的表达水平显著相关.结论 ABCC1、BIRC5、PCNA、AIFM2、BECN1和GPX4在银屑病中具有重要的生物学功能,为今后的新药研发奠定基础.

目的 探究青藤碱对大鼠颅脑外伤引起的神经元铁死亡的影响及其作用机制.方法 将大鼠按随机数字表法分为假手术(Sham)组、颅脑外伤(TBI)组、TBI+青藤碱(SIN)组、TBI+SIN+Erastin组;建立模型后,实验组每天腹腔注射SIN;SIN+Erastin组每天注射SIN和Erastin;Sham和TBI组腹腔内注射等体积的生理盐水.TBI后3 d,通过大鼠神经功能损伤(NSS)评分量表评价神经功能,通过免疫荧光检测NeuN和谷胱甘肽过氧化物酶-4(GPX4)的表达,通过生物化学法检测谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,通过蛋白质印迹法(Western blot)技术检测相关蛋白表达.计量资料比较采用t检验.结果 NSS评分显示,TBI+SIN组评分[(1.80±0.84)分]低于TBI组和TBI+SIN+Erastin 组[(3.40±0.89)、(3.40±0.55)分],差异有统计学意义(t=2.92、3.56,P＜0.05).GSH 和MDA检测结果显示,TBI后脑组织GSH含量降低(0.43±0.11,t=4.62,P＜0.05),MDA含量升高(2.88±0.32,t=5.43,P＜0.05);SIN 治疗后 GSH含量升高(0.73±0.12,t=3.12,P＜0.05),MDA含量降低(1.88±0.33,t=2.88,P＜0.05);与TBI+SIN组比较,Erastin处理后GSH含量降低(0.44±0.15,t=7.15,P＜0.05),MDA 含量升高(2.50±0.26,t=5.12,P＜0.05);Western blot 分析结果显示,TBI后脑组织 SLC7A11(0.57±0.18,t=3.72,P＜0.05)和 GPX4(0.49±0.23,t=5.34,P＜0.05)表达降低,SIN 治疗使 SLC7A11(1.13±0.26,t=5.25,P＜0.05)和 GPX4(1.63±0.31,t=4.93,P＜0.05)表达升高;Erastin处理后 SLC7A11(0.52±0.14,t=3.89,P＜0.05)和 GPX4(0.64±0.38,t=5.18,P＜0.05)表达降低;免疫荧光染色显示,TBI后大鼠皮层NeuN(75.40±4.26,t=10.20,P＜0.01)和 GPX4(80.20±7.55,t=9.54,P＜0.05)阳性细胞显著减少,SIN 治疗后 NeuN(112.40±8.35,t=7.59,P＜0.05)和 GPX4(120.40±8.14,t=9.47,P＜0.01)阳性细胞增加;TBI+SIN+Erastin 组 NeuN(80.41±7.14,t=10.33,P＜0.05)和 GPX4(82.15±4.59,t=11.67,P＜0.01)阳性细胞少于TBI+SIN组.结论 青藤碱通过SLC7A11/GPX4通路改善颅脑外伤引起的铁死亡.

目的 探讨人参皂苷Rf对子宫内膜异位症(EMS)的改善作用,及其作用机制.方法 将Wistar雌性大鼠随机分为假手术组(只开腹不做其他处理)、模型组(构建EMS模型)、低剂量组(1.0 mg·kg-1人参皂苷Rf)、中剂量组(2.0 mg·kg-1人参皂苷Rf)、高剂量组(3.0 mg·kg-1人参皂苷Rf)和阳性组(0.25 mg·kg-1孕三烯酮胶囊).检测异位病灶体积和疼痛扭体次数,用原位末端转移酶标记法(Tunel)实验检测组织中细胞凋亡率,用蛋白质印迹法检测各组相关蛋白的表达水平.将分离的原代大鼠子宫内膜细胞随机分为对照组(正常组织分离)、EMS组(EMS细胞)、Rf组(20 μmol·L-1人参皂苷Rf处理EMS细胞)、联合组(20 μmol·L-1人参皂苷Rf和50 μmol·L-1自噬抑制药3-MA处理EMS细胞).用蛋白质印迹法检测各组相关蛋白的表达水平,用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.结果 假手术组、模型组、高剂量组和阳性组大鼠的扭体次数分别为 0、(37.10±4.64)、(14.70±1.90)和(20.20±1.78)次,异位病灶体积分别为 0、(118.91±19.51)、(50.11±9.69)和(37.64±3.56)mm3,细胞凋亡率分别为(3.43±0.33)％、(3.22±0.27)％、(20.42±1.82)％和(22.92±2.67)％,Beclin 1 蛋白相对表达水平分别为 0.32±0.03、0.36±0.04、0.79±0.12和0.35±0.07,谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)蛋白相对表达水平分别为 1.10±0.07、0.94±0.11、0.53±0.03 和 0.96±0.16;模型组的上述指标与假手术组比较,高剂量的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).对照组、EMS组、Rf组和联合组的Beclin 1蛋白相对表达水平分别为 0.22±0.05、0.31±0.03、0.52±0.07 和 0.19±0.03,GPX4 蛋白相对表达水平分别为 0.97±0.07、0.81±0.09、0.63±0.05 和 1.05±0.09,细胞凋亡率分别为(3.48±0.04)％、(3.42±0.23)％、(21.66±2.95)％和(12.51±1.15)％;Rf组的上述指标与EMS组、联合组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 人参皂苷Rf可以改善EMS大鼠子宫内膜病变、疼痛敏感性及细胞凋亡,这可能与调节自噬依赖性铁死亡相关.

目的:评价富含鸟嘌呤序列的结合因子1(GRSF1)在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其与铁死亡的关系。方法:清洁级雄性C57BL/6小鼠24只，8~10周龄，体质量20~25 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注组(IR组)、脑缺血再灌注+GRSF1过表达组(IR+LV-GRSF1组)、脑缺血再灌注+GRSF1过表达+谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)抑制剂组(IR+LV-GRSF1+RSL3组)。采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型。IR+LV-GRSF1组于造模前7 d时侧脑室注射GRSF1过表达慢病毒2 μl；IR+LV-GRSF1+ RSL3组造模前连续2 d腹腔注射GPX4抑制剂RSL3 5 mg/kg。再灌注24 h后TTC法确定脑梗死体积百分比，Nissl染色计数缺血区存活神经元，取缺血区脑组织，RT-qPCR法检测衰老标志物p16、p21及衰老相关分泌表型TNF-α的mRNA表达，ELISA法检测MDA、SOD和谷胱甘肽(GSH)含量，Western blot法检测GRSF1、GPX4、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和铁蛋白的表达水平。 结果:与Sham组相比，IR组脑梗死体积百分比升高，存活神经元计数降低，缺血区脑组织p16 mRNA、p21 mRNA及TNF-α mRNA表达上调，SOD和GSH含量降低，MDA含量升高，GRSF1和GPX4表达下调，ACSL4和铁蛋白表达上调( P<0.05)；与IR组相比，IR+LV-GRSF1组脑梗死体积百分比降低，存活神经元计数升高，缺血区脑组织p16 mRNA、p21 mRNA及TNF-α mRNA表达下调，SOD和GSH含量升高，MDA含量降低，GRSF1和GPX4表达上调，ACSL4和铁蛋白表达下调( P<0.05)；与IR+LV-GRSF1组相比，IR+LV-GRSF1+RSL3组脑梗死体积百分比升高，存活神经元计数降低，缺血区脑组织p16 mRNA、p21 mRNA及TNF-α mRNA表达上调，SOD和GSH含量降低，MDA含量升高，GPX4表达下调，ACSL4和铁蛋白表达上调( P<0.05)。 结论:GRSF1可通过上调GPX4表达，减轻氧化应激，进而抑制铁死亡，参与小鼠脑缺血再灌注损伤的内源性保护机制。

目的:探讨铁死亡在重症急性胰腺炎(SAP)诱发急性肾损伤(AKI)的作用及其机制。方法:胰腺炎建模后24 h，将36只SD大鼠(购自青岛大学医学部实验室动物中心)采用完全随机分组法分为3组( n＝12)：假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、铁死亡抑制剂Ferrostatin-1干预组(SAP＋Fer组)。建立SAP模型24 h后，检测血清淀粉酶(AMY)、肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN)水平；检测肾组织中铁含量、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)变化及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)活性；苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺和肾脏组织学改变；透射电镜(TEM)观察铁死亡的形态学特征；蛋白质印迹法(Western blot)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色等方法分析长链脂酰CoA合成酶4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)等铁死亡相关蛋白和基因的表达。组间比较采用方差分析，进一步两两比较采用LSD- t检验。 结果:SAP组大鼠血清AMY[(6 276.5±562.2)比(1 086.6±192.3) U/L]、Cr[(98.0±16.2)比(19.5±5.2) μmol/L]、BUN[(17.1±2.8)比(7.2±1.7) mmol/L]水平明显高于SO组( t＝30.314、15.927、10.375， P值均<0.01)，差异均有统计学意义；肾组织铁[(0.65±0.13)比(0.44±0.12) mg/g]、MDA[(7.25±0.81)比(1.84±0.24) μmol/g]、ROS[(68.54±7.04)比(15.67±5.21)×10 4/mg]高于SO组( t＝3.855、22.167、11.496， P值均<0.01)，GSH[(358.38±41.59)比(518.64±55.72) nmol/g]和GPX4[(7.75±1.09)比(14.72±2.56) U/mg]明显低于SO组( t＝7.984、8.674， P值均<0.01)，差异有统计学意义；胰腺和肾组织病理损伤程度增加；线粒体出现明显萎缩；肾脏ACSL4蛋白(0.84±0.03比0.34±0.02)表达高于SO组( t＝7.876, P<0.01)，GPX4、FTH1蛋白(0.69±0.03比1.04±0.06、0.26±0.02比0.83±0.04)表达低于SO组( t＝5.651、8.134， P值均<0.01)，差异有统计学意义；ACSL4、铁响应元件结合蛋白2(IREB2) mRNA(0.87±0.06比0.24±0.03、1.23±0.05比0.32±0.02)表达高于SO组( t＝12.864、15.163， P均<0.01)，差异有统计学意义。SAP＋Fer组大鼠血清AMY[(5 124.3±483.5)比(6 276.5±562.2) U/L]、Cr[(55.2±13.7)比(98.0±16.2) μmol/L]、BUN[(9.8±2.1)比(17.1±2.8) mmol/L]水平显著低于SAP组( t＝5.287、6.989、7.359， P值均<0.01)，差异有统计学意义；肾组织铁[(0.54±0.07)比(0.65±0.13) mg/g]、MDA[(4.67±0.73)比(7.25±0.81) μmol/g]、ROS[(28.39±6.36)比(68.54±7.04)×10 4/mg]低于SAP组( t＝2.639、7.176、8.247， P值均<0.05)，GSH[(448.21±45.51)比(358.38±41.59) nmol/g]和GPX4[(11.31±1.89)比(7.75±1.09) U/mg]高于SAP组( t＝5.048、5.639， P值均<0.01)，差异有统计学意义；胰腺和肾组织病理损伤程度减轻；线粒体轻度萎缩；肾脏ACSL4蛋白(0.49±0.02比0.84±0.03)表达低于SAP组( t＝2.781， P<0.05)，GPX4、FTH1蛋白(0.69±0.03比1.04±0.06、0.26±0.02比0.83±0.04)表达高于SAP组( t＝2.427、2.876， P值均<0.05)，差异有统计学意义；ACSL4、IREB2 mRNA(0.52±0.04比0.87±0.06、0.74±0.04比1.23±0.05)表达低于SAP组( t＝5.843、6.781， P值均<0.01)，差异均有统计学意义。 结论:铁死亡参与SAP引起的AKI，抑制铁死亡能改善肾功能，减轻肾组织脂质过氧化和病理损伤。

目的:运用生物信息学方法探究幽门螺杆菌(Hp)感染与玫瑰痤疮的共同信号通路以及筛选Hub基因。方法:通过GEO数据库获取Hp感染(GSE70394)和玫瑰痤疮(GSE65914)相关的基因表达数据集，使用R语言limma包以及Venn图筛选出两者共表达差异基因，运用Metascape数据库对差异基因进行基因本体论(GO)富集分析，并使用R语言clusterProfiler包分别对上调和下调基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。随后使用STRING以及Cytoscape软件构建蛋白互作(PPI)网络，应用其内部插件MCODE和Cytohubba筛选关键功能模块和Hub基因，将Hub基因导入GeneMANIA在线分析工具，构建Hub基因共表达网络，并再次对Hub基因进行GO以及KEGG富集分析。结果:GSE70394数据集包含3个未感染Hp的人胃腺癌细胞(AGS)组织和3个感染Hp 24 h后的AGS细胞组织的基因芯片数据；GSE65914数据集包含了19例玫瑰痤疮患者皮肤组织和10名健康志愿者皮肤组织的基因芯片数据。经过比较分析最终获得139个共表达差异基因，包含93个上调基因和46个下调基因。GO富集分析显示共表达差异基因主要集中于平滑肌细胞调节、血管发育以及脂质代谢过程。KEGG富集分析显示共表达差异基因主要涉及脂质和动脉粥样硬化、炎症反应和免疫相关通路，如PPAR信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、Th17细胞分化、IL-17信号通路和NF-κB信号通路。使用Cytohubba插件共识别出16个Hub基因，包括SPRR1B、GCLM、KRT16、GPX2、S100A2、SOD2、MMP1、MSMO1、HMOX1、GLRX、IL-1β、CXCL1、PPARγ、HMGCS1、SRXN1、SPRR3。结论:Hp感染与玫瑰痤疮存在一定的相关性，Hp可能通过介导炎症免疫反应以及调节脂质代谢过程来参与玫瑰痤疮疾病的发生发展，筛选出的Hub基因与相关信号通路可为后续的关联性分析提供一定的理论参考。

目的:评价白藜芦醇对糖尿病心肌病小鼠心肌细胞铁死亡的影响。方法:清洁级健康成年雄性C57BL/6小鼠30只，8周龄，体质量22~26 g。采用随机数字表法将其分为3组( n＝10)：对照组(C组)、糖尿病心肌病组(DCM组)和白藜芦醇组(RSV组)。采用连续5 d腹腔注射新鲜制备的链脲佐菌素40 mg·kg -1·d -1的方法制备小鼠糖尿病心肌病模型。模型制备成功后，RSV组小鼠连续12周经灌胃给予白藜芦醇25 mg·kg -1·d -1，C组和DCM组小鼠给予等体积二甲基亚砜。于第12周末行超声心动图检查心脏结构及心功能情况，随后处死小鼠收集心肌组织标本，采用HE染色观察小鼠心肌组织病理学结果，透射电镜下观察小鼠心肌组织线粒体结构，采用比色法测定铁、MDA和谷胱甘肽(GSH)含量，Western blot法检测谷胱甘肽还原酶4(GPX4)表达。 结果:与C组比较，DCM组小鼠左室舒张末期内径(LVDd)和左室收缩末期内径(LVDs)升高，左室短轴缩短率(LVFS)和左室射血分数(LVEF)降低，心肌组织铁和MDA含量升高，GSH含量降低，GPX4表达下调( P<0.05)；与DCM组比较，RSV组小鼠LVDd和LVDs降低，LVFS和LVEF升高，心肌组织铁和MDA含量降低，GSH含量升高，GPX4表达上调( P<0.05)。RSV组小鼠病理学损伤和线粒体结构损伤较DCM组明显减轻。 结论:白藜芦醇减轻糖尿病心肌病小鼠心肌损伤，进而改善心功能障碍的机制与抑制心肌细胞铁死亡有关。

目的:评价五味子乙素对胶质瘤大鼠新辅助化疗敏感性的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠72只，体重180～200 g，采用随机数字表法分为6组( n＝12)：假手术组(Sham组)、胶质瘤组(G组)、新辅助化疗组(T组)、五味子乙素10 mg/kg+新辅助化疗组(S 1+T组)、五味子乙素20 mg/kg+新辅助化疗组(S 2+T组)和五味子乙素40 mg/kg+新辅助化疗组(S 3+T组)。右侧尾状核区注射10 μl C6胶质瘤细胞悬液，制备胶质瘤模型。T组于造模后10 d时给予替莫唑胺25 mg/kg灌胃，连续6 d；S 1+T组、S 2+T组、S 3+T组于造模后10 d时分别给予五味子乙素10、20、40 mg/kg和替莫唑胺25 mg/kg灌胃，连续6 d。于造模后18 d时，每组取6只大鼠，剥离瘤体并称重；取瘤体核心区组织，采用Western blot法检测基质金属蛋白-2(MMP-2)、MMP-9和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)表达水平。其余6只大鼠记录生存时间。 结果:与Sham组比较，其余5组生存时间缩短，瘤体组织MMP-2、MMP-9和GPX4的表达上调( P<0.05)；与G组比较，T组、S 1+T组、S 2+T组、S 3+T组瘤体重量下降，生存时间延长，瘤体组织MMP-2、MMP-9和GPX4的表达下调( P<0.05)；与T组比较，S 1+T、S 2+T组和S 3+T组瘤体重量下降，生存时间延长，瘤体组织MMP2、MMP9和GPX4表达下调( P<0.05)；与S 2+T组比较，S 1+T组和S 3+T组瘤体重量升高，生存时间缩短，瘤体组织MMP2、MMP9和GPX4的表达上调( P<0.05)；S 1+T组和S 3+T组上述各指标比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:五味子乙素可增强胶质瘤大鼠新辅助化疗的敏感性，可能与抑制肿瘤侵袭转移和促进铁死亡有关，其中20 mg·kg -1·d -1效果最佳。

目的:分析大骨节病（KBD）患者沉默信息调节因子2相关酶类1（SIRT1）的表达及其与软骨细胞凋亡的关系。方法:从青海省KBD病区贵德县选取20例KBD患者作为KBD组，同时在病区选取年龄和性别匹配的40例健康受试者作为对照组。采集研究对象的空腹肘静脉血，采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测外周血SIRT1及硒蛋白基因[谷胱甘肽过氧化酶（GPX）2、GPX3、硫氧还蛋白还原酶（TXNRD）1、TXNRD3、碘甲腺原氨酸脱碘酶Ⅰ（DIO1）、硒磷酸合成酶2（SPS2）]mRNA水平；并采用曲线拟合法进行KBD患者外周血SIRT1与硒蛋白基因表达关联分析。同时，体外培养人正常软骨细胞，分为对照组（未经任何处理）、单纯白藜芦醇（RES）组（验证RES对SIRT1的激活作用）、叔丁基过氧化氢（tBHP）损伤组（软骨细胞氧化损伤模型）和RES保护组（RES预保护后进行tBHP损伤），采用real-time PCR检测各组细胞SIRT1，硒蛋白基因及凋亡相关基因[B淋巴细胞瘤-2基因（BCL2）、BCL2相关X蛋白（BAX）、核转录因子κB（NF-κB）p65、肿瘤抑制基因P53]mRNA水平。结果:人群研究中，KBD组外周血SIRT1 mRNA水平（1.12 ± 0.38）低于对照组（1.87 ± 0.97），差异有统计学意义（ t = 3.31， P = 0.002）。经曲线拟合分析，KBD组外周血GPX3、TXNRD1和TXNRD3 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均有所升高（ R2 = 0.48、0.66、0.95，均 P < 0.001）；DIO1 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高呈现先下降后上升的趋势（ R2 = 0.51， P = 0.024）；GPX2、SPS2 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均未见显著变化趋势（ R2 = 0.16、0.12， P = 0.064、0.114）。细胞实验中，与对照组（1.00 ± 0.10）比较，单纯RES组SIRT1 mRNA水平（1.79 ± 0.07）较高（ P < 0.05）。与tBHP损伤组比较，RES保护组硒蛋白基因GPX3、TXNRD1、TXNRD3、DIO1 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）；凋亡相关基因BAX、P53 mRNA水平及BAX/BCL2比值均较低，BCL2、NF-κB p65 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）。 结论:KBD患者SIRT1低表达；RES激活SIRT1后可能通过上调硒蛋白基因表达来增强软骨细胞抗氧化能力，从而抑制软骨细胞凋亡。

目的:探究低剂量柳氮磺吡啶（SAS）对结直肠癌细胞的放疗增敏作用。方法:CCK-8检测不同浓度SAS对结直肠癌细胞的增殖抑制作用，采用凋亡、自噬等抑制剂联合SAS处理结直肠癌细胞，CCK-8法比较细胞活力。采用锥虫蓝染色、平板克隆形成、细胞生长曲线等实验评价低浓度SAS联合放疗对结直肠癌细胞的体外放疗增敏作用。通过检测细胞内脂质过氧化物、铁死亡蛋白标志物（GPX4、PTGS2）等，探究低浓度SAS联合放疗对细胞铁死亡的促进作用。利用小鼠皮下移植瘤模型，明确SAS的体内放疗增敏效应。结果:高浓度SAS可诱导结直肠癌细胞凋亡与铁死亡。低浓度SAS增强结直肠癌细胞放疗敏感性，该效应可被铁死亡抑制剂（Fer-1）阻断。低浓度SAS联合放疗显著增加细胞内脂质过氧化物含量与PTGS2表达，降低GPX4表达。皮下移植瘤模型中SAS亦显示显著的放疗增敏效应。结论:低浓度SAS通过铁死亡途径增强结直肠癌细胞放疗敏感性。