目的:研究乳铁蛋白对放射性肺损伤的防护作用。方法:将15只C57BL/6 J小鼠按随机数表法分为健康对照组、15 Gy照射组(单纯照射组)和乳铁蛋白联合15 Gy照射组(联合组)，每组5只。联合组全程饮用10 mg/ml乳铁蛋白水溶液，3 d后单纯照射组和联合组给予单次15 Gy X射线全胸照射。于照后14 d处死，苏木素-伊红(HE)染色观察肺病理组织学改变、酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎症因子高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及IL-6的水平，免疫组织化学染色和Western blot法检测肺组织中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、MyD88及核转录因子κB(NF-κB)炎症因子蛋白表达。结果:与健康对照组比较，单纯照射组小鼠肺重明显增加( t＝3.20， P<0.05)、肺充血水肿并伴有炎性细胞浸润，血清促炎因子TNF-α健康对照组为(291.80±5.49)pg/ml，单纯照射组为(332.25±22.18)pg/ml，两组比较差异有统计学意义( t＝3.07， P<0.05)；免疫组织化学染色显示HMGB1和NF-κB阳性明显增多。肺组织中HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义( t＝4.04、4.78、3.77、6.14， P<0.05)；与单纯照射组相比，乳铁蛋白干预能显著降低受照小鼠肺重( t＝2.18， P<0.05)、HMGB1、TNF-α和IL-1β水平( t＝4.67、2.97、3.49， P<0.05)。联合组肺组织中HMGB1和NF-κB表达阳性细胞数减少，并下调HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平，差异有统计学意义( t＝8.06、9.80、3.07、5.56， P<0.05)。 结论:乳铁蛋白能够减轻放射性肺损伤，其机制可能与下调炎症相关的HMGB1/TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

目的 探究蓝萼甲素(GLA)对阿尔茨海默病(AD)大鼠神经炎症及高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终末产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路的影响.方法 通过在脑室注射Aβ1-42溶液建立AD大鼠模型,并将大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐组、GLA低剂量组、GLA高剂量组、GLA高+HMGB1组,每组15只.Morris水迷宫实验检测大鼠学习和记忆能力;HE染色检测海马组织病理形态学变化;ELISA检测海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量;免疫荧光检测小胶质细胞标记蛋白Iba-1和星形胶质细胞标记蛋白GFAP的表达;Western blotting检测海马组织中HMGB1-RAGE通路相关蛋白的表达.结果 与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量、Iba-1和GFAP蛋白阳性表达面积及HMGB1、RAGE、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达均升高(P<0.05),停留目标象限时间、穿越平台次数减少(P<0.05);与模型组相比,GLA低、高剂量组大鼠逃避潜伏期、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量、Iba-1和GFAP蛋白阳性表达面积及HMGB1、RAGE、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达均降低(P<0.05),停留目标象限时间、穿越平台次数增多(P<0.05),且GLA高剂量组和多奈哌齐组差异无统计学意义(P?0.05);进一步使用HMGB1重组蛋白进行回补实验,发现GLA对神经炎症的抑制作用被逆转,且RAGE水平升高(P<0.05).结论 GLA可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路减轻AD大鼠的神经炎症.

目的 探讨三十六荡坎蛤散对哮喘缓解期小鼠气道炎症的作用.方法 将 78 只BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)和三十六荡坎蛤散低、中、高剂量组(9.3、18.6、37.2 g/kg).除空白组外,其余各组均采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝混合液致敏,并激发建立小鼠哮喘缓解期模型,造模第 77 天给药干预,连续 28 d.采用HE染色观察小鼠肺组织病理改变,ELISA法检测血清和肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、NF-κB 水平,Western blot 法检测肺组织 TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65 蛋白表达.结果 与模型组比较,各给药组哮喘缓解期小鼠肺组织病理性损伤和炎症反应明显减轻,血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、NF-κB水平均降低(P＜0.01),肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65 蛋白表达均降低(P＜0.01),其中三十六荡坎蛤散中剂量组效果较佳,仅次于地塞米松组.结论 三十六荡坎蛤散对哮喘缓解期小鼠气道炎症具有良好的抑制作用,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/MyD88 信号通路活化有关.

目的 研究血必净注射液调控高迁移率族蛋白1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对脓毒症小鼠肺损伤的保护作用.方法 雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组,模型组和低、中、高剂量血必净组,阴性对照(NC)组,NC+模型组,NC+高剂量血必净组,HMGB1+高剂量血必净组.采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症肺损伤模型,造模前给予NC慢病毒或HMGB1慢病毒尾静脉注射,造模当天给予血必净注射液(剂量5、10、15 mL/kg)腹腔注射,2次/d,连续3 d,末次给药后24 h进行取材和检测.比较各组间肺组织病理改变,湿重(W)/干重(D)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,裂解型Caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB表达水平的差异.结果 模型组小鼠肺组织出现肺损伤的病理改变,W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA的含量及裂解型Caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB的表达水平均高于对照组,SOD的含量低于对照组(P＜0.05).不同剂量血必净组小鼠肺损伤的病理改变减轻,W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 的含量及裂解型 Caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB 的表达水平低于模型组,SOD的含量高于模型组(P＜0.05).HMGB1+高剂量血必净组小鼠肺损伤的病理改变加重,W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA的含量及裂解型Caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB的表达水平均高于NC+高剂量血必净组,SOD的含量低于NC+高剂量血必净组(P＜0.05).结论 血必净注射液对脓毒症小鼠肺损伤具有保护作用,并减轻炎症反应、氧化应激、细胞凋亡,其相关的分子机制为抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路.

目的 探究Toll样受体 4(toll-like receptor 4,TLR4)是否通过调控程序性坏死及铁死亡进一步影响对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)肝损伤过程及其发生机制.方法 体外培养人正常肝细胞L-02,采用CCK-8 法检测细胞活力,筛选出最佳APAP和TAK-242 浓度.将实验分为对照组、APAP组(1、4、12 h)和APAP+TAK-242 组(1、4、12 h),比较各组细胞 TLR4 mRNA表达;检测各组细胞匀浆液的丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotrans-ferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;检测各组细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;检测各组细胞高迁移率族蛋白 1(high mobility group box 1,HMGB1)、受体相互作用蛋白激酶 1(receptor interacting protein kinase 1,RIP1)、受体相互作用蛋白激酶 3(receptor interacting protein kinase 3,RIP3);检测各组细胞内Fe2+含量以及NF-κB、P53、重组溶质载体家族7 成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(glutathione peroxidase 4,GPX4)水平.结果 通过CCK-8 法,确定 5 mmol/L APAP和 100 nmol/L TAK-242 作为后续实验浓度.与对照组比较,各时间点APAP组TLR4 mRNA水平上调(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242 组TLR4 mRNA水平下调(P<0.05/3=0.016 7).与对照组比较,各时间点APAP组ALT、AST水平升高(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242 组ALT、AST水平下降(P<0.05/3=0.0167).与对照组比较,各时间点APAP组NF-κB、IL-6、TNF-α mRNA表达均上调(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242 组NF-κB、IL-6、TNF-α mRNA表达均下调(P<0.05/3=0.0167).与对照组比较,各时间点APAP组HMGB1、RIP1、RIP3 蛋白水平均升高(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242组HMGB1、RIP1、RIP3 蛋白水平均降低(P<0.05/3=0.0167).与对照组比较,各时间点APAP组Fe2+含量、NF-κB和P53 蛋白水平均上升(P<0.05),而SLC7A11 和GPX4 蛋白水平和mRNA表达均降低(P<0.05);与APAP组比较,同一时间点APAP+TAK-242 组Fe2+含量、NF-κB和P53 蛋白水平均降低(P<0.05/3=0.0167),而SLC7A11 和GPX4 蛋白水平和mRNA表达均升高(P<0.05/3=0.0167).结论 抑制TLR4 可通过调节TLR4/HMGB1 信号通路下调程序性坏死,以及可能通过调节TLR4/NF-κB信号通路下调炎症反应和铁死亡来减轻APAP肝损伤.

目的:研究调控miR-155对凝血功能障碍模型幼鼠的干预效果及作用机制.方法:选取健康、清洁级SD雄性幼鼠26只,建立凝血功能障碍模型,成功24只随机分为模型、上调miR-155和下调miR-155共3组,每组各8只.实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组幼鼠miR-155表达,观察各组幼鼠凝血因子水平、凝血指标变化,HE染色观察肝脏病理组织,Western blot法检测HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路相关蛋白表达.结果:与模型组比,上调miR-155组HMGB1、RAGE、TLR2、TLR4、NF-κB均明显增高(均P＜0.05),而下调miR-155组表达均明显降低(均P＜0.05).与模型组比,上调miR-155组凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、X表达均明显降低(均P＜0.05),而下调miR-155组均表达升高(均P＜0.05).三组凝血因子Ⅺ表达差异比较无统计学意义(P＞0.05).与模型组比,上调miR-155组凝血酶原时间、活化部分凝血活酶水平较低,纤维蛋白原水平较高(均P＜0.05),而下调miR-155组正好相反.结论:下调miR-155能有效改善凝血功能障碍幼鼠凝血因子水平及凝血指标,抑制炎症反应,其作用机制可能与 HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κ B 信号通路有关.

软骨细胞是关节软骨中的独特驻留细胞类型,当其发生一系列病理改变时能够导致骨关节炎(osteoarthritis,OA)的发生.藁本内酯衍生物(ligusticum cycloprolactam,LIGc)是中药当归药效标志物藁本内酯(Z-ligustilide,LIG)的衍生物,具有抗炎、抑制细胞凋亡等多种生物学功能.然而,其对OA软骨细胞的保护作用以及潜在的作用机制尚不清楚.该研究拟进行体外实验探索LIGc抗OA保护软骨细胞作用的分子机制.采用白细胞介素-1β(IL-1β)诱导建立大鼠OA软骨细胞炎症模型,并单独使用LIGc和联合高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子-κB(HMGB1/TLR4/NF-κB)信号通路阻断剂甘草酸(glycyrrhi-zic acid,GA)进行干预,以系统评估其治疗效果.通过cell counting kit-8(CCK-8)试剂盒检测不同浓度下LIGc对软骨细胞活力的影响,并筛选出最佳作用浓度;Annexin V-FITC/PI凋亡染色检测各组软骨细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组软骨细胞上清中环氧合酶-2(COX-2)、前列腺素-2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组软骨细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、HMGB1、TLR4、NF-κB p65的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组软骨细胞HMGB1、TLR4、NF-κB p65、髓样分化因子88(MyD88)的基因表达变化.通过CCK-8确定了LIGc对软骨细胞的大致安全浓度范围,并进一步明确了LIGc作用的最佳浓度.在IL-1β的干预下,成功构建大鼠OA软骨细胞模型,且在该细胞模型中,软骨细胞凋亡率明显增加.与此同时,ELISA检测该组软骨细胞上清中COX-2、PGE2、TNF-α的表达均显著上升;Western blot检测发现模型组软骨细胞Bax、caspase-3、HMGB1、TLR4、NF-κB p65的蛋白表达显著上调,Bcl-2的蛋白表达受到明显抑制;RT-qPCR测定显示软骨细胞内HMGB1、TLR4、NF-κB p65、MyD88的基因表达经IL-1β干预后均有所提高.然而,随着LIGc的加入逆转了IL-1β诱导下上述一系列因子的表达变化.此外,LIGc联合GA共同作用下较单独添加LIGc对实验结果的逆转趋势更为明显.这些研究结果表明,从中药当归中提取并衍生的LIGc能够起到抑制软骨细胞炎症反应及减少软骨细胞凋亡的作用,且该作用的发挥可能与HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路具有较强的相关性.LIGc保护软骨细胞的药理作用,对于延缓OA病情及改善患者临床症状具有潜在价值,值得进一步深入研究.

目的 分析南蛇藤素调节 HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对急性肝功能衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠炎性损伤的影响.方法 将大鼠分为正常组、模型组、南蛇藤素 12.5 mg/kg组、南蛇藤素 50 mg/kg组、促肝细胞生长素组(2 mg/kg)、南蛇藤素+甘草酸组(50 mg/kg+20 mg/kg),给药干预持续 3 d,观察大鼠一般情况,全自动生化分析仪分析大鼠血清肝功能、炎症指标水平,HE染色观测大鼠肝组织病理,TUNEL染色观测大鼠肝细胞凋亡情况,Western blotting法观测大鼠肝组织 HMGB1/TLR4/NF-κB 通路蛋白表达情况.结果 与正常组相比,模型组大鼠死亡率、血清 ALT、AST、TBil 水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织 HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达升高(P<0.05);与模型组相比,南蛇藤素 12.5 mg/kg组、南蛇藤素 50 mg/kg组、促肝细胞生长素组死亡率、血清 ALT、AST、TBil水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织 HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB表达降低(P<0.05);与南蛇藤素 50 mg/kg组相比,南蛇藤素+甘草酸组大鼠血清 ALT、AST、TBil 水平、肝组织细胞凋亡率、肝组织 HMGB1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB 表达降低(P<0.05).结论 南蛇藤素可能通过抑制 HMGB1/TLR4/NF-κB通路降低 ALF大鼠肝脏炎症与肝细胞凋亡,保护肝组织.

目的 探讨甘草酸苷联合艾司氯胺酮通过调节海马区高迁移率族蛋白B1(HMGB1)信号通路对小鼠围手术期神经认知障碍(PND)的影响及相关机制.方法 将小鼠分为空白组、PND组、甘草酸苷组、艾司氯胺酮组、甘草酸苷+艾司氯胺酮组,每组24只.本实验通过Morris水迷宫评估小鼠空间学习记忆能力,各组小鼠分别于术前1 d,术后1,3,7 d行定位航行实验记录逃避潜伏期,术后第7天行空间探索实验记录目标象限穿梭次数.ELISA法检测术前1 d,术后1,3,7 d各组小鼠海马区白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)表达含量.免疫荧光实验检测空白组、PND组、甘草酸苷+艾司氯胺酮组术后第1天小鼠海马区HMGB1表达情况.结果 各组术前1d各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).Morris水迷宫结果显示:与空白组相比,其他组术后同时点逃避潜伏期均延长(P＜0.05),术后第7天穿越平台次数均减少(P＜0.05);与PND组相比,甘草酸苷组、艾司氯胺酮组和甘草酸苷+艾司氯胺酮组术后同时点逃避潜伏期缩短(P＜0.05),术后第7天穿越平台次数增多(P＜0.05);与甘草酸苷组和艾司氯胺酮组相比,甘草酸苷+艾司氯胺酮组术后同时点逃避潜伏期缩短(P＜0.05),术后第7天穿越平台次数增多(P＜0.05).ELISA结果显示:与空白组相比,其余组术后同时点海马区IL-1β、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB表达含量均明显升高(P＜0.05);与PND组相比,甘草酸苷组、艾司氯胺酮组和甘草酸苷+艾司氯胺酮组术后同时点海马区IL-1β、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-KB表达含量明显降低(P＜0.05);与甘草酸苷组和艾司氯胺酮组相比,甘草酸苷+艾司氯胺酮组术后同时点海马区IL-1β、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB表达含量明显降低(P＜0.05).免疫荧光结果显示:与空白组相比,PND组小鼠术后第1天海马CA1区及DG区HMGB1表达明显增多,且在海马CA1区及DG区均检测到HMGB1在细胞质中表达;与PND组相比,甘草酸苷+艾司氯胺酮组术后第1天小鼠海马CA1区及DG区HMGB1表达明显减少.结论 甘草酸苷联合亚麻醉剂量艾司氯胺酮可改善小鼠围手术期神经认知功能及海马神经炎症,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路相关.

目的 探究吴茱萸碱对溃疡性结肠炎(UC)大鼠高迁移率族蛋白(HMG)B1/Toll样受体(TLR)-4/核因子(NF)-κB信号通路的影响.方法 制备UC模型采用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合法,将建模成功的 50 只SD大鼠随机分为 5 组(n=10),模型组、阳性对照组(0.6 g/kg柳氮磺吡啶片)和吴茱萸碱低、中、高(10、15、20 mg/kg吴茱萸碱)剂量组,另取健康SD大鼠 10 只为正常组.治疗 1 w后,观察各组大鼠的一般情况、结肠组织形态学损伤,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织的病理学损伤情况;酶联免疫吸附试验检测结肠组织匀浆液中白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;Western印迹检测结肠组织中IL-6、IL-10、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB p-p65、NF-κB p65 蛋白表达水平.结果 与正常组相比,模型组精神倦怠、嗜睡、大便黏腻、肛周污秽、体质量减轻,结肠黏膜明显出现充血、水肿、糜烂情况,肠黏膜损伤评分显著升高,杯状细胞数量减少,有大量炎症细胞浸润,肠长明显缩短、肠重显著增加(P<0.05),MDA、IL-6、TNF-α含量及IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB p-p65/NF-κB p65 蛋白表达水平显著升高,SOD含量及IL-10 蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组和吴茱萸碱各剂量组一般情况明显好转,肠黏膜组织充血、水肿、糜烂情况减轻,肠黏膜损伤评分显著降低,杯状细胞数量增多、炎症细胞减少,肠长明显增长、肠重显著减轻(P<0.05),MDA、IL-6、TNF-α 含量及 IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB p-p65/NF-κB p65 蛋白表达水平显著降低,SOD含量及IL-10 蛋白表达水平显著升高(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组与阳性对照组以上指标无显著性差异(P>0.05);吴茱萸碱各剂量组随着剂量的升高,以上各个指标变化呈剂量依赖性(P<0.05).结论 吴茱萸碱能够缓解UC大鼠肠黏膜损伤,减轻结肠组织炎症反应、氧化应激水平,抑制HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路激活可能为其作用机制.