目的:探讨与多发性骨髓瘤（MM）患者长生存相关的骨髓免疫微环境特征。方法:在中山大学附属第一医院明确诊断为新诊断MM并接受新药诱导续贯自体造血干细胞移植以及免疫调节剂维持治疗的随访队列中，在2019年8月至2020年5月横断面研究期间，通过高通量NanoString技术比较16例无进展生存≥5年患者［长生存组，其中微小残留病（MRD）持续阴性亚组9例、MRD持续阳性亚组7例］与5例疾病进展患者（疾病进展组）骨髓中免疫细胞亚群及770个与免疫相关标志物的RNA表达。通过细胞特征性基因表达水平综合计算各免疫细胞功能分值，从而间接得出各免疫细胞亚群比例。统计学分析主要采用Mann-Whitney U检验、Kruskal Wallis秩和检验。 结果:（1）长生存组患者骨髓中中性粒细胞比例较疾病进展组显著增加［功能分值：13.61（13.33，14.25）比12.93（12.58，13.38）； Z=2.31， P=0.021］；与MRD持续阴性长生存亚组相比，MRD持续阳性长生存亚组患者骨髓肥大细胞显著增多［功能分值：7.09（6.49，8.57）比6.03（5.18，6.69）； H=2.18， P=0.029］。（2）相比疾病进展组，长生存组显著上调基因4个（CTSG、IFIT2、S100B、CHIT1），显著下调基因6个（C4B、TNFRSF17、CD70、IRF4、C2、GAGE1）；相比MRD持续阴性长生存亚组，MRD持续阳性长生存亚组显著上调基因CMA1，下调基因10个（ISG15、OAS3、MX1、IFIT2、DDX58、SIGLEC1、CXCL10、IL1RN、SERPING及TNFSF10），其中前5个基因均为干扰素反应通路相关基因。 结论:骨髓中性粒细胞增多、肥大细胞增多可能与移植后MM患者长生存相关。干扰素反应通路激活可能是MRD持续阴性长生存MM患者骨髓免疫微环境的特征之一。

目的:基于生物信息学方法分析多发伤继发脓毒症的关键基因及其机制。方法:从基因表达综合(GEO)数据库中下载GSE70311数据集，采用"limma"R包筛选多发伤继发脓毒症患者外周血中差异表达基因(DEGs)，进一步借助"clusterProfiler"R包对DEGs进行基因本体(GO)富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析。最后通过STRING在线数据库和Cytoscape构建蛋白质相互作用(PPI)网络，并基于Cytohubba确定多发伤继发脓毒症的关键基因。结果:在GSE70311数据集中，获得328个DEGs。GO富集分析结果显示，多发伤继发脓毒症的DEGs介导了T细胞分化、细胞因子生成过程的正调控、对细菌的防御反应、对病毒的反应以及对病毒的防御反应等。KEGG通路富集分析结果显示，多发伤继发脓毒症的DEGs在造血细胞谱系、金黄色葡萄球菌感染、哮喘、Th1和Th2细胞分化以及抗原加工/提呈等信号通路中显著富集。通过PPI分析进一步筛选出5个关键基因： STAT1、 IFIT3、 ISG15、 IFIT1以及 MX1。 结论:STAT1、 IFIT3、 ISG15、 IFIT1以及 MX1是多发伤继发脓毒症潜在的关键基因，这些基因主要参与了T细胞分化、细胞因子生成过程的正调控以及对病原微生物的防御反应，并富集于Th1和Th2细胞分化以及抗原加工/提呈等信号通路。

目的 N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)修饰通过调节mRNA表达及功能参与免疫炎症过程逐渐被报道,但在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)中研究有限.故本研究将初步探索m6A修饰相关mRNA表达与SLE的关联及影响.方法 利用实时定量聚合酶链反应和蛋白质印迹实验验证m6A修饰相关干扰素诱导蛋白5(interferon induced protein with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)在SLE患者T淋巴细胞(T细胞)中表达情况;进一步分析IFIT5差异表达与患者临床表现和临床用药之间的关系.构建干扰和过表达IFIT5的Jurkat细胞系,流式细胞术分析T细胞表型及相关细胞因子表达情况.结果 与正常对照相比,SLE中高表达的IFTT5上m6A修饰显著增强;患者T细胞中IFIT5基因表达和蛋白水平均上调(均P＜0.05),且与SLE患者疾病活动程度有关(rs=0.388,P=0.028).Jurkat细胞实验发现,敲低IFIT5显著抑制细胞增殖和加速细胞凋亡,并触发肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)分泌且降低白介素-2(interleukin-2,IL-2)和白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达.结论 SLE 疾病中 IFIT5高表达与m6A修饰相关;m6A修饰相关的IFIT5在SLE患者T细胞中高表达,且参与T细胞增殖和凋亡及炎症因子表达.故m6A修饰相关IFIT5可能参与SLE患者T细胞免疫炎症反应,但确切机制值得进一步研究.

目的 明确N7-甲基鸟苷(7-methylguanosine,m7G)相关基因对腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)的作用.方法 从Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中获取人类AAA和正常组织中m7G相关基因的表达数据,并进行差异分析.通过LASSO回归筛选与发病相关的基因并进行免疫浸润分析,根据其表达模式对AAA患者进行共识聚类分型,对两种亚型的差异基因进行基因本体论(gene ontology,GO)、京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析.最后通过数据库预测筛选出的m7G相关基因的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)、微小RNA(microRNA,miRNA).结果 筛选出6个具有显著差异的m7G相关基因,其中IFIT5、NUDT10和NUDT4与AAA发病密切相关.这三者其可能影响CD4幼稚T细胞,自然杀伤(natural killer,NK)细胞,Tregs细胞的免疫浸润程度,根据其表达模式聚类的亚型与AAA的异质性密切相关,并构建了相关竞争性內源RNA(competing endogenouse RNA,ceRNA)网络.结论 m7G相关基因IFIT5、NUDT10和NUDT4可能是治疗人类AAA的潜在靶点.

目的:检测类风湿关节炎(RA)患者和正常对照组Ⅰ类干扰素(IFN)效应基因mRNA的表达,探讨IFN在RA发病过程中的意义.方法:收集32例RA患者和健康体检人群,分为治疗前RA组、治疗后RA组和正常对照组,患者均为首次就诊或未使用改变病情抗风湿药,留取全血,采用qPCR方法检测MXA、MXB、IFIT1、IFIT2、ISG15、HERC5、Ly6E、RSAD2、EPSTRI1、IFI44L、IFI35和IFI6基因mRNA的表达,检测血清抗CCP抗体和RF,比较mRNA组间基因表达差异及与自身抗体水平相关性.结果:IFIT1、ISG15、HERC5、MXA、MXB、Ly6E和RSAD2在治疗前RA患者组中的mRNA表达水平高于治疗后RA组(P<0.05),IFIT2、ISG15、HERC5、MXA、MXB、Ly6E、RSAD2、EPSTRLI1和IFI35在治疗前RA组中mRNA的表达水平均高于正常对照组(P<0.05),ISG15、HERC5、RSAD2在治疗后RA组中mRNA的表达水平均高于正常对照组(P<0.05).IFI6、IFIT2、IFI35、ISG15、MXB、Ly6E、EPSTRI1和MXA的mRNA的表达水平与抗CCP抗体呈正相关性(r=0.354~0.667,P<0.05),IFI6、IFIT2、IFI35、MXB、Ly6E、和MXA的mRNA的表达水平与RF呈正相关(r=0.362~0.579,P<0.05).结论:RA患者炎症细胞IFN效应基因mRNA表达升高,表明IFN可能是RA自身免疫反应的诱发因素.

目的:研究诱导前帕瑞昔布钠干预对骨科手术后切口疼痛、炎症应激反应的影响.方法:选择绵阳市中心医院2015年3月～2017年6月期间进行腰麻联合硬膜外阻滞麻醉下骨科手术的患者,采用随机数表法将其分为两组,Par组接受诱导前帕瑞昔布钠干预联合常规术后静脉自控镇痛,对照组仅接受常规术后静脉自控镇痛.手术前后测定血清及外周血中的疼痛神经递质、炎症分子及应激分子的含量.结果:与组内手术前疼痛神经递质比较,两组患者手术后1天、手术后3天时血清中PGE2 、5-H T 、SP 、NPY的含量均显著降低,血清中COR 、GH的含量以及外周血中JAK2 、STAT3 、IL-1 、IL-6 、IFIT1 、Nrf2 、HO-1的mRNA表达量显著升高且 Par组患者手术后1 d 、手术后3 d时血清中 PGE2 、5-HT 、SP 、NPY 、COR 、GH的含量以及外周血中JAK2 、STAT3 、IL-1 、IL-6 、IFIT1 、Nrf2 、HO-1的mRNA 表达量低于对照组.结论:诱导前帕瑞昔布钠干预能够减轻骨科手术后的切口疼痛及炎症应激反应.

目的 研究地塞米松(DEX)对内毒素诱导性葡萄膜炎(EIU)的治疗效果及转录组测序探讨其潜在的机制.方法 将125ng脂多糖(LPS)注射入雌性BALB/c小鼠玻璃体内建立EIU模型,每隔4h用0.1％ DEX滴眼,共6次.注射LPS后24h用裂隙灯观察小鼠眼前房炎症情况并进行临床评分.苏木精-伊红染色法观察小鼠眼部形态学变化.RNA-seq对EIU模型组和DEX治疗组小鼠的视网膜进行转录组测序并进行GO和KEGG功能分析.Real-time PCR检测小鼠视网膜炎症细胞因子表达及验证选出的差异基因.结果 连续滴眼6次后,DEX可减轻EIU前房的炎症,并下调炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-I(MCP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达.RNA-seq共检测出52个差异基因,与DEX+LPS组相比,LPS组中上调的基因有37个,下调的基因有15个.差异基因的功能分析未发现显著富集的GO条目.KEGG富集分析显示有6个显著上调的KEGG通路和2个显著下调的KEGG通路.KEGG结果提示DEX治疗后可下调RIG-I类受体信号通路(Ddx58、Ifihl和Isgl5)及一些免疫炎症相关基因(Ifitl、H2-T24、Mx2和Eif2ak2).结论DEX对LPS引起的小鼠内毒素诱导性小鼠葡萄膜炎有保护作用,此保护作用可能与下调RIG-I类受体信号通路及一些免疫炎症相关基因有关.

Systemic lupus erythematosus (SLE) is a complex autoimmune syndrome characterized by various co-existing autoantibodies (autoAbs) in patients' blood.However,the full spectrum of autoAbs in SLE has not been comprehensively elucidated.In this study,a commercial platform bearing 9400 antigens (ProtoArray) was used to identify autoAbs that were significantly elevated in the sera of SLE patients.By comparing the autoAb profiles of SLE patients with those of healthy controls,we identified 437 IgG and 1213 IgM autoAbs that the expression levels were significantly increased in SLE (P ＜ 0.05).Use of the ProtoArray platform uncovered over 300 novel autoAbs targeting a broad range of nuclear,cytoplasmic,and membrane antigens.Molecular interaction network analysis revealed that the antigens targeted by the autoAbs were most significantly enriched in cell death,cell cycle,and DNA repair pathways.A group of autoAbs associated with cell apoptosis and DNA repair function,including those targeting APEX1,AURKA,POLB,AGO1,HMGB1,IFIT5,MAPKAPK3,PADI4,RGS3,SRP19,UBE2S,and VRK1,were further validated by ELISA and Western blot in a larger cohort.In addition,the levels of autoAbs against APEX1,HMGB1,VRK1,AURKA,PADI4,and SRP19 were positively correlated with the level of anti-dsDNA in SLE patients.Comprehensive autoAb screening has identified novel autoAbs,which may shed light on potential pathogenic pathways leading to lupus.

目的:发现激素性股骨头坏死(SONFH)不同中医证型分子标志.方法:60例SONFH组患者与20例接受激素治疗未发生股骨头坏死的对照组患者随机分为训练集与验证集.通过全基因组表达谱芯片检测与生物分子网络分析相整合的方法,筛选SONFH不同证型候选分子标志,进而构建辨证预测模型.采用大规模独立样本测试和十倍交叉验证评估上述辨证预测模型的准确性与稳定性.结果:本研究分别获得4个痰瘀阻络证(CD28、CD4、PLCG1、PRKCA)、4个经脉痹阻证(PTGS2、SOS2、STAT6、TLR4)和5个肝肾亏虚证(IFIT1、IRF7、ISG15、MAPK14、RHOU)的候选标志基因,显著参与抑制成骨细胞分化、破骨细胞发育、炎症免疫反应等与SONFH病理改变相关生物学反应.基于上述候选基因在患者外周血中的表达量所建立的辨证预测模型,经十倍交叉验证和独立样本集验证表明,其最优辨证准确性均在83％以上,受试者工作特征曲线下面积均大于0.800.结论:3种SONFH证型预测模型的性能良好且稳定,为揭示SONFH“三期四型”的生物学基础提供客观依据.

目的 利用基因表达谱筛选与原发性干燥综合征(pSS)相关基因和潜在小分子治疗药物.方法 在GEO数据库获取并分析3个pSS相关基因表达谱,获得差异表达基因,并对差异基因进行GO与KEGG富集分析,通过蛋白互作网络(PPI)筛选pSS的hub基因并验证.最后,利用Cmap数据库预测pSS的潜在治疗药物,并结合药物靶点和药物途径探讨潜在药物在pSS治疗中的作用.结果 共鉴定出90个pSS相关差异基因,其中79个上调基因,11个下调基因,它们主要参与NOD样受体信号通路、甲型流感和细胞因子-细胞因子受体相互作用通路.此外,通过筛选、验证,鉴定出19个hub基因(STAT1、MX1、ISG15、IFIH1、GBP1、IFIT1、XAF1、RSAD2、IFIT2、SAMD9L、TRIM22、IFIT3、IFI44L、HERC5、IFIT5、IFI44、IFI6、RTP4和ISG20),多个是干扰素诱导基因.干扰素可能在pSS发病中起重要作用.最后,通过CMAP数据库筛选出氟替卡松、氯唑西林等15种候选药物,并对其作用通路与靶点分析.结论 本研究通过对pSS hub基因和候选药物的筛选,可以进一步了解pSS的发病机制,为pSS的进一步研究提供线索.