目的 研究核因子E2 相关因子2(nuclear E2-related factor 2,Nrf2)靶点及线粒体质量控制系统调控姜三七挥发油(essential oil from Stahlianthus involucratus rhizomes,EOSIR)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用机制.方法 用氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导HUVECs建立细胞损伤模型,siRNA转染沉默Nrf2 因子的表达,将培养好的细胞分为对照组、模型组、EOSIR组、转染组、转染阴性对照组,利用蛋白质印迹法(Western-blot)及定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测Nrf2 及其下游因子的蛋白及mRNA的表达;Griess法检测一氧化氮含量;酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析人内皮素(endothelin 1,ET-1)、人前列环素(prostacyclin,PGI2)的含量;线粒体质量检测实验中将细胞分为空白组、ox-LDL诱导组、低剂量EOSIR组、中剂量EOSIR组、高剂量EOSIR组、阿司匹林阳性对照组,透射电镜观察HUVECs线粒体形态;Western-blot检测线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 1,Mfn2)、线粒体动力相关蛋白(dynamin-related protein 1,Drp1)、线粒体内膜融合蛋白(optic atro-phy 1,Opa1)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferatoractivated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)及轻链3A/B蛋白(LC3A/B)、泛素结合蛋白(p62)表达.结果 EOSIR组的Nrf2 及其下游因子的表达水平、NO、PGI2 的含量较模型组均显著升高,ET-1 水平较模型组相比显著降低,转染沉默Nrf2 后,EOSIR对上述指标的改善作用被抑制;透射电镜观察线粒体形态,EOSIR干预组自噬小体数量较模型组明显减少,线粒体形态恢复正常,同时,EOSIR组显著改善了ox-LDL引起的线粒体相关蛋白表达的变化(P<0.05).结论 EOSIR可能通过激活Nrf2 靶点及调控线粒体质量控制系统发挥对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的保护作用,延缓动脉粥样硬化的进程.

目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)在结直肠癌组织中的表达情况及其与临床病理特征之间的关系，为结直肠癌患者的诊治及预后评估提供理论依据。方法:收集湖南省人民医院2020年1月1日至2020年9月1日住院的结直肠癌患者手术切除标本(术前未行放化疗及免疫治疗等辅助治疗措施)和相应的癌旁正常组织45例，采用免疫组化检测LRP8在结直肠癌及癌旁正常组织中的表达，并通过单因素logistic回归分析、Spearman相关性分析明确LRP8与结直肠癌患者临床特征的关系。结果:免疫组化结果显示45例结直肠癌组织中LRP8蛋白高表达37例(82.22%)，低表达8例(17.78%)；45例癌旁正常组织中LRP8蛋白高表达17例(37.78%)，低表达28例(62.22%)；LRP8蛋白在结直肠癌组织和其癌旁正常组织中的表达差异具有统计学意义( P<0.05)。χ 2检验发现LRP8蛋白的表达与结直肠癌的分期、神经侵犯、血管侵犯、癌胚抗原(CEA)、低密度脂蛋白有关(均 P<0.05)；与性别、年龄、肿瘤分化程度、Ki67、糖类抗原199(CA199)、淋巴结转移、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白无关(均 P>0.05)；经logistic回归分析发现，TNM分期、血管侵犯、神经侵犯及血清CEA、低密度脂蛋白水平均为结直肠癌患者LRP8高表达的影响因素(均 P<0.05)。ApoB与肿瘤分期( rs＝-0.382)、淋巴结转移( rs＝-0.316)、血管侵犯( rs＝-0.311)存在弱的负相关(均 P<0.05)。 结论:LRP8蛋白在结直肠癌组织中表达增加，其表达增加与结直肠癌的分期、神经血管侵犯、低密度脂蛋白水平存在相关性；LRP8高表达的患者，其肿瘤分期更差、更易并发神经及血管侵犯。

目的:探究血清抗低密度脂蛋白受体相关蛋白4抗体（LRP4-ab）阳性在成人重症肌无力（MG）患者中的发生情况，并总结LRP4-ab阳性MG患者临床特点及对治疗的反应和预后。方法:纳入首都医科大学宣武医院MG数据库中于2017年2月至2018年12月入库的成人MG（起病年龄≥18岁）患者共355例，采用商用放射免疫测定法检测其血清中乙酰胆碱受体抗体（AChR-ab）和骨骼肌特异性酪氨酸激酶抗体，采用基于细胞底物的实验方法检测LRP4-ab。回顾性分析其中LRP4-ab阳性MG患者的临床特点、对治疗的反应和预后，并与同期入库的LRP4-ab阴性MG患者进行比较。结果:355例成人MG患者中，有13例（3.7%）患者血清LRP4-ab阳性，且均同时AChR-ab阳性；男女性别比为2.3∶1，平均起病年龄54岁。其中5例行胸腺手术，病理证实3例为胸腺瘤，2例为胸腺增生。LRP4-ab阳性和阴性MG患者在起病症状、AChR-ab滴度、球肌无力、呼吸肌无力、胸腺瘤和病情最重时的美国重症肌无力基金会（MGFA）临床分型方面差异均无统计学意义，但LRP4-ab阳性MG患者中MGFA分型为Ⅲ型者（病情最重时）的比例明显高于阴性患者［分别为8/13和26.9%（7/26）， P=0.08］。13例LRP4-ab阳性患者经治疗后，10例病情缓解，3例临床明显改善，与LRP4-ab阴性患者无明显差异。 结论:本组MG患者的LRP4抗体阳性率为3.7%，LRP4抗体阳性MG的临床特点与阴性者无明显差别。

神经毒素β-淀粉样蛋白（Aβ）是阿尔茨海默病（AD）的主要标志。最近的证据表明，在常见的散发性或晚发性AD形式中，脑Aβ水平升高是由清除受损而不是生产过度引起的。细胞表面受体的低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（LRP1）已经被报道不仅在Aβ内吞起作用，还存在于血脑屏障系统及外周血、肝、肾等组织器官，并且通过血脑屏障或血脑脊液屏障有效地将Aβ转运至脑脊液或血液系统中，最后经外周组织器官清除至体外。在这篇综述中，描述了LRP1在Aβ外周转运及清除中的作用，其可能是降低脑内Aβ、改善认知功能障碍的安全有效的途径。

目的:采用串联质谱标签（TMT）联合液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）筛选免疫介导性脱髓鞘疾病诊断与鉴别诊断的潜在生物标志物。方法:选择首都医科大学附属北京天坛医院2020年1月至2021年1月收治的20例脱髓鞘疾病患者（脱髓鞘组），包括10例吉兰-巴雷综合征（GBS）患者（GBS亚组）与10例多发性硬化（MS）患者（MS亚组）。以及10例神经系统非炎性疾病（NND）患者（NND组），通过TMT蛋白质组学技术筛选出脱髓鞘组与NND组、GBS亚组与MS亚组间具有表达差异的蛋白质（差异倍数>2或<0.5且差异有统计学意义），借助String数据库对组间差异蛋白质所参与的通路进行基因本体（GO）富集分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）富集分析。另选择同期就诊的80例脱髓鞘疾病患者（脱髓鞘病验证组）以及40名健康体检者（健康对照组）用于血脂一般指标的回顾性分析，脱髓鞘病验证组包括40例GBS患者（GBS验证组）及40例MS患者（MS验证组）。绘制受试者工作特征（ROC）曲线评价血脂一般指标对脱髓鞘病诊断及GBS与MS间鉴别诊断的价值。结果:经TMT蛋白质组学技术检测出362种蛋白质，脱髓鞘组与NND组比较共有101个差异蛋白，GBS亚组与MS亚组比较共有45个差异蛋白。GO富集分析结果显示，脱髓鞘组与NND组相比，富集度前5条通路为巨噬细胞集落刺激因子及受体复合物、胆固醇输入负调控、极低密度脂蛋白颗粒清除负调控、含甘油三酯丰富的脂蛋白颗粒重构、胆固醇逆向转运。GBS亚组与MS组相比，富集度前5条通路为高密度脂蛋白颗粒受体结合、极低密度脂蛋白颗粒重塑负调控、胆固醇输入负调控、极低密度脂蛋白颗粒清除负调控、中等密度脂蛋白颗粒。KEGG富集分析显示，脱髓鞘组与NND组的差异蛋白富集到8条通路，为磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路、补体和凝固级联反应、细胞外基质及其受体交互、金黄色葡萄球菌感染、胆固醇代谢、Ras信号通路、吞噬体、丝裂原活化蛋白激酶信号通路。GBS亚组与MS亚组的差异蛋白富集到9条通路，为胆固醇代谢、补体和凝固级联反应、血小板激活、过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路、维生素消化吸收、新型冠状病毒感染、脂肪消化吸收、轴突引导、中性粒细胞胞外陷阱形成通路。脱髓鞘病验证组与健康对照组比较，甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及载脂蛋白（apo）B水平较高（ P均<0.01），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）及apoA1水平较低（ P均<0.01）。GBS验证组与MS验证组比较，LDL-C及apoB水平较高，HDL-C及apoA1水平较低（ P均<0.05）。TG、TC、HDL-C、LDL-C、apoA1与apoB单独及联合检测对免疫介导性脱髓鞘病诊断的ROC曲线下面积分别为0.746、0.643、0.798、0.703、0.806、0.708和0.868。HDL-C、apoA1、LDL-C及apoB单独及联合检测对与GBS与MS鉴别诊断的ROC曲线下面积分别为0.692、0.653、0.632、0.695和0.718。 结论:免疫介导性脱髓鞘疾病患者与NND、GBS与MS患者脑脊液蛋白质组学存在差异，且差异蛋白主要存在于血脂代谢相关通路，血脂相关指标或可作为今后免疫介导性脱髓鞘疾病诊断及鉴别诊断的生物标志物。

目的 探讨化瘀祛痰方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)的影响及机制.方法 将30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组[20 g/(kg·d)]和瑞舒伐他汀组[1.55 mg/(kg·d)],每组10只,另取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组.ApoE-/-小鼠喂饲高脂饲料12周复制AS模型.造模成功后,各组小鼠灌胃相应药物或生理盐水,每日1次,连续4周.末次给药后,检测各组小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、5,6-环氧二十碳三烯酸(5,6-EET)、8,9-EET、11,12-EET、14,15-EET、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18水平,主动脉组织中核因子κB抑制蛋白(IκB)、核因子κB(NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平和IκB、NF-κB、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白质(ASC)、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β、IL-18蛋白表达水平,并观察主动脉组织形态学变化.结果 与模型组比较,化瘀祛痰方组及瑞舒伐他汀组小鼠血清中TC、TG、LDL-C、IL-1β、IL-18水平,主动脉组织中IκB、NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平以及IκB、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05),血清中5,6-EET、8,9-EET、11,12-EET、14,15-EET水平均显著升高(P＜0.05);主动脉粥样斑块明显减少.结论 化瘀祛痰方可能通过EETs介导细胞焦亡发挥抗AS作用.

目的 研究基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路探讨黄连解毒汤对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)小鼠心肌保护作用.方法 50只6周的雄性SD小鼠中取10只作正常对照组,其余小鼠给予高脂饮食建立CHD模型.采用随机数字表法将40只模型小鼠分为模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组,每组各10只.黄连解毒汤低、中、高剂量组每日分别以10、20、40 g/kg剂量进行灌胃,每日1次,持续6周;正常组、模型组每日给予等量蒸馏水灌胃.干预后采用生化法检测各组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平,酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、内皮素水平;采用苏木精-伊红染色法观察小鼠心肌细胞病理形态,蛋白质印迹法检测心肌组织中TLR4、NF-κB、NLRP3的表达.比较各组小鼠血脂、心肌组织中抗氧化相关指标和TLR4、NF-κB、NLRP3的表达.结果 模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组血脂水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);黄连解毒汤低剂量组与模型组血脂水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);黄连解毒汤中、高剂量组总胆固醇、甘油三酯、LDL水平均低于模型组,HDL水平高于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组心肌组织中SOD水平均低于对照组,丙二醛、内皮素水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组SOD水平均高于模型组,丙二醛、内皮素水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).对照组心肌纤维排列整齐,横纹清晰且细胞完整,无细胞肿胀、炎症浸润等;模型组心肌纤维排列紊乱,结构发生异常,有严重细胞肿胀、炎症浸润;黄连解毒汤低、中、高剂量组未见心肌纤维断裂,黄连解毒汤中、高剂量组细胞肿胀和炎症浸润情况优于黄连解毒汤低剂量组,黄连解毒汤高剂量组优于黄连解毒汤中剂量组.模型组、黄连解毒汤中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).且黄连解毒汤各剂量组中以上指标变化呈剂量依赖性.结论 黄连解毒汤能降低CHD小鼠血脂水平,保护心肌细胞,其能够通过下调组织TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达以调节血脂水平并改善心肌功能,且黄连解毒汤的效果随着剂量的增加而增强.

目的 基于网络药理学和实验验证探讨瓜蒌皮注射液治疗动脉粥样硬化的作用机制.方法 检索瓜蒌皮注射液的化学成分报道,通过Swiss ADME和Swiss Target Prediction预测活性成分和靶点.通过OMIM、TTD、GeneCards数据库获得动脉粥样硬化的靶点,使用Venny 2.1 软件获得瓜蒌皮注射液治疗动脉粥样硬化的共有靶点.采用Cytoscape 3.6.1 软件构建"药物-成分-靶点"网络,String、DAVID数据库进行蛋白质相互作用(PPI)网络构建,基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析.通过高脂饮食建立动脉粥样硬化小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、模型组、瓜蒌皮注射液(0.6、1.2 mL/kg)组,每组 6 只.瓜蒌皮注射液组分别im 0.6、1.2 mL/kg瓜蒌皮注射液,连续给药 3 周.全自动生化分析仪检测小鼠血脂相关指标,苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉病理变化,蛋白质免疫印迹(Western blotting)法检测核心蛋白的表达.结果 筛选出芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、香草酸等 21 个瓜蒌皮注射液活性成分,共有靶点89 个,核心靶点包括蛋白激酶B1(Akt1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、非受体酪氨酸激酶(SRC)等.GO功能分析获得 702 个条目,KEGG富集获得 42 条信号通路.动物实验显示,瓜蒌皮注射液可显著降低血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(P＜0.05、0.01);HE染色显示,瓜蒌皮注射液可减少斑块在主动脉管壁上附着;Western blotting显示,瓜蒌皮注射液可显著升高Caspase-3 蛋白表达,降低p-SRC、p-Akt1 蛋白表达(P＜0.05、0.01).结论 瓜蒌皮注射液通过多个成分调控Caspase-3、p-SRC、p-Akt1 等核心靶点,降低斑块在主动脉附着,进而发挥治疗动脉粥样硬化.

目的 本研究旨在探讨孕前超重/肥胖是否会影响人胎盘和小鼠相关组织中维生素 D 代谢酶的表达.方法 ①99 名正常体重女性(18.5 kg/m2≤BMI＜23.9 kg/m2)和 48 名孕前超重/肥胖妇女(BMI≥24.0 kg/m2)参与本横断面研究,产妇和新生儿信息通过问卷获得.孕妇自然分娩,分娩后采集胎盘样本.②将 4w龄雌性C57BL/6J小鼠采用对照饮食(Ctrl)或高脂饮食(HFD)喂养 10w.根据其体重比Ctrl组平均值大的百分比,将HFD喂养的小鼠分为肥胖抵抗(DIR,<10%)、超重(DIW,10%～20%)和肥胖(DIO,>20%)组,于 PND21 处死.检测人鼠血浆总25 羟基维生素D[25(OH)D],人胎盘和小鼠胎盘和肝脏维生素D代谢酶基因和蛋白质表达水平.结果 与正常体重相比,孕前超重/肥胖的孕妇血浆中总 25(OH)D 和 1,25(OH)2D3 的浓度显著降低.此外,孕前超重/肥胖与脐带血浆中1,25(OH)2D3 浓度有相关性.孕前超重/肥胖胎盘中 1a 羟化酶(CYP27B1)、转运受体(LRP2-CUBN)和维生素 D 受体(VDR)的表达降低,而 24 羟化酶蛋白(CYP24A1)的表达呈相反趋势.在小鼠中,DIR、DIW、DIO的母体血浆中总 25(OH)D和 1,25(OH)2D3 的浓度明显低于Ctrl;DIO组胎鼠血浆总 25(OH)D浓度明显低于Ctrl组;HFD母体肝脏25 羟化酶(CYP2R1)、VDR以及肾脏和胎盘中的CYP27B1、LRP2、CUBN、VDR的表达显著降低,CYP24A1 的表达显著增加.胎鼠的结果与母鼠的结果相似.结论 孕前超重/肥胖对人体胎盘和小鼠相关组织的维生素 D 代谢酶(CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、LRP2-CUBN、VDR)表达有影响,这可能是超重/肥胖孕妇和胎儿维生素D水平较低的原因.[营养学报,2023,45(6):565-573]

目的 探讨妊娠期糖尿病(GDM)与细胞焦亡相关的NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-1β/IL-18-TGF-β信号通路的临床相关性.方法 选取产检的GDM患者80例为研究对象,分为孕期未予胰岛素治疗GDM 60例(未予胰岛素治疗GDM组)和胰岛素治疗20例(胰岛素治疗GDM组).同期纳入健康孕妇30例作为对照组.比较各组年龄、孕周、体质量指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等指标.采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法分别检测各组孕妇外周单个核细胞(PBMCs)中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(4SC)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(Caspase-1)mRNA的表达水平及其蛋白表达水平.采用酶联免疫吸附试验测定各组患者血清中白细胞介素-1β(IL-1 β)、白细胞介素-18(IL-18)、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平.采用Spearman法分析GDM发生的相关影响因素.结果 GDM患者(未予胰岛素治疗GDM组、胰岛素治疗GDM组)PBMCs中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);胰岛素治疗GDM组PBMCs中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平与未予胰岛素治疗GDM组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).NLRP3 mRNA在胰岛素治疗GDM组与FPG呈正相关(P＜0.05);ASC mRNA在未予胰岛素治疗GDM组与HbA1c呈正相关,在胰岛素治疗GDM组与HbA1c、TG呈正相关(P＜0.05);Caspase-1 mRNA在对照组与FPG呈正相关,在未予胰岛素治疗GDM组与BMI呈正相关,在胰岛素治疗GDM组与BMI、TC呈正相关(P＜0.05).3组PBMCs中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达水平及血清中IL-1β、IL-18、TGF-β水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05).ASC在未予胰岛素治疗GDM组与FPG、HbA1c呈正相关,在胰岛素治疗GDM组与FPG、TC、IL-1β、IL-18呈正相关(P＜0.05).Caspase-1在对照组与FPG呈正相关,在未予胰岛素治疗GDM组与FPG、HbA1c、LDL-C、IL-1β呈正相关(P＜0.05).Caspase-1在胰岛素治疗GDM组与FPG、HbA1c、LDL-C、IL-1β呈正相关(P＜0.05).结论 以NLRP3炎性小体为中心的细胞焦亡相关NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-1β/IL-18-TGF-β信号通路可能在GDM的发生发展中发挥重要作用.