目的:观察甲状腺干扰物4，4-二氯二苯二氯乙烯（ p， p’-DDE）处理甲状腺Nthy-ori-3-1细胞后，其LHX4和DIS3L mRNA水平及蛋白表达量的变化。 方法:取对数生长期Nthy-ori-3-1细胞，配制0、0.5、1.0、2.0和5.0 μg/ml p， p’-DDE溶液，按浓度梯度给药，处理Nthy-ori-3-1细胞。显微镜观察细胞生长状态、细胞形态。基因芯片检测基因表达谱变化，通过实时荧光定量PCR检测LHX4和DIS3L mRNA水平，通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测LHX4和DIS3L蛋白表达量。 结果:p， p’-DDE浓度为0、0.5、1.0和2.0 μg/ml时，Nthy-ori-3-1细胞均生长正常。2.0 μg/ml组细胞差异基因共33个，其中，13个基因表达下调，20个基因表达上调。与对照组比较，1.0、2.0 μg/ml组细胞LHX4、DIS3L蛋白表达水平明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05），1.0 μg/ml组细胞LHX4和DIS3L蛋白mRNA相对表达量降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:p， p’-DDE处理Nthy-ori-3-1细胞会影响LHX4和DIS3L蛋白表达水平。

目的:探究吸烟对非小细胞肺癌(NSCLC)患者LIM同源框基因3(LHX3)表达水平的影响，并分析其与患者预后的关系。方法:本研究为回顾性队列研究。采用非随机抽样的方法选取2018年1月至2019年6月在昆明医科大学附属延安医院住院治疗的80例NSCLC患者为研究对象。所有患者接受肺叶切除或者全肺切除+系统性肺门纵隔淋巴结清扫术。随访患者生存情况，随访时间截至2022年12月。根据吸烟判定标准将患者分为对照组(57例)和吸烟组(23例)。通过蛋白质印迹法比较LHX3在2组癌旁组织和肿瘤组织中的表达水平。统计2组患者术后无进展生存率、总生存率、3年后出现新发病灶和新淋巴结转移的情况。采用Cox回归模型分析影响NSCLC患者术后生存的独立因素。结果:2组患者肿瘤组织内LHX3表达水平均高于癌旁组织[吸烟组：(0.89±0.35)比(0.51±0.22)，对照组：(0.74±0.26)比(0.49±0.17)； t值分别为4.41、6.08，均 P<0.001]，吸烟组肿瘤组织LHX3表达水平高于对照组肿瘤组织( t＝2.11， P<0.05)，但2组患者癌旁组织LHX3表达水平比较差异无统计学意义( t＝0.44， P>0.05)。2组患者术后3个月的无进展生存率比较，差异无统计学意义(100.00%比95.65%， χ2＝2.51， P>0.05)，吸烟组患者术后6、18、24、36个月无进展生存率均较对照组缩短(均 P<0.05)。术后1年吸烟组与对照组总生存率比较差异无统计学意义(91.30%比96.49%， χ2＝0.93， P>0.05)，术后2年、3年吸烟组总生存率均较对照组降低(65.22%比89.47%，52.17%比75.44%； χ2值分别为6.68、4.13，均 P<0.05)。术后3年，吸烟组出现新病灶转移4例，新淋巴结转移5例；对照组出现新病灶转移2例，新淋巴结转移1例，吸烟组新病灶转移和新淋巴结转移发生率均较对照组升高(均 P<0.05)。多变量Cox回归分析显示，临床分期、LHX3表达、后续规范治疗和后续吸烟是影响NSCLC患者术后生存的独立因素(均 P<0.05)。 结论:在NSCLC患者中，吸烟与肿瘤组织中LHX3表达升高有关，影响患者预后。

背景:沉默信息调节因子1以去乙酰化的方式调控软骨细胞中相关蛋白的功能,参与软骨细胞增殖分化,促进软骨缺损修复.目的:利用高通量技术筛选软骨细胞中沉默信息调节因子1基因敲减后作用状态不明确的信号通路以及产生变化的疾病或功能.方法:取处于对数生长期的小鼠ATDC5软骨细胞,分2组转染:对照组转染沉默信息调节因子1基因敲减阴性对照慢病毒,实验组转染沉默信息调节因子1基因敲减慢病毒.转染72 h后,利用小鼠基因表达谱芯片GeneChip? Mouse Genome 430 2.0 Array检测mRNA的基因层面变化情况,应用生物信息学技术筛选激活或抑制不明确的信号通路以及这些信号通路相关因子,并分析疾病或功能模块的富集情况.结果与结论:①沉默信息调节因子1基因敲减后,小鼠ATDC5软骨细胞中激活或抑制状态不明确的信号通路有245条;②根据-log(P-value)排序选择排前20的激活或抑制状态不明确信号通路中的因子情况进行报道,包括IGFBP4、TGFBR1、CTGF、COL4A5、LHX2、IL1RL1、KLF6等;③根据-log(P-value)进行排序,细胞生长和增殖、生物体存活和细胞死亡与存活等14个疾病和功能密切相关模块明显变化;根据差异基因数量排序,生物体损伤和异常、癌症和细胞死亡与存活 3个疾病和功能密切相关模块明显变化;根据-log(P-value)与差异基因数量综合排序,固有免疫应答这一疾病和功能模块被显著激活.

目的:CRISPR/Cas9系统在斑马鱼的反向遗传学中的到了广泛应用,但突变基因的表型观察往往需要在突变鱼系的F1中进行,费时较长.LHX9作为LIM家族的一种转录因子,在胚胎早期的泌尿生殖嵴中有广泛分布;且LHX9基因敲除的小鼠存在性腺发育不良.本研究拟通过一种新的CRISPR/Cas9基因编辑技术,采用四条sgRNA对LHX9基因进行VASA转基因斑马鱼的基因敲除,以观察该基因缺陷对斑马鱼性腺发育的影响.方法:利用新的CRISPR/Cas9技术,设计四条针对斑马鱼LHX9基因3号外显子的20bp的sgRNA,通过非克隆体外转录得到靶位点的四条sgRNA.将以上靶位点的四条sgRNA与Cas9核酸酶蛋白同时注射入单细胞期的斑马鱼胚胎内,利用PCR鉴定突变型类型和突变比例.通过对LHX9基因突变体的VASA转基因斑马鱼进行荧光观察,发现LHX9基因缺陷的斑马鱼性腺发育的情况.结果:靶向Exon 3的四条sgRNA可成功编辑斑马鱼LHX9基因,敲除效率高达82％,Sanger测序发现产生10种不同的移码突变类型.通过该方法对VASA转基因斑马鱼的LHX9基因进行编辑,发现LHX9基因突变导致dph6的的斑马鱼原始生殖细胞增殖和迁移受到影响.结论:基于4条sgRNA注射的CRISPR/Cas9技术,可以快速地产生具有突变表型的G0斑马鱼,具有应用潜力.LHX9基因敲除导致原始生殖细胞的发育和迁移受到影响,提示该基因参与了斑马鱼早期性腺的发育.

目的:基于生物信息学分析肝细胞癌miRNA的差异表达及其功能预测,为肝细胞癌的早期诊断和干预治疗提供新的思路.方法:利用GEO数据库获取肝细胞癌非编码RNA表达数据集,使用R(v 3.6.0)通过limma包、pheatmap包筛选差异miRNA并进行可视化.对差异miRNA进行转录因子预测,同时进行信号通路分析和GO富集分析并进行可视化.结果:在肝细胞癌组织中共筛选出37个miRNA表达具有差异,得到比较有意义的转录因子分别为EGR1、POU2F1、SP1、NKX6-1、MEF2A、FOXA1、SP4、NFIC、RREB1、ARID3A、HOXA5、HNF4A、HOXD8、RORA、LHX3、POU3F2、FOXJ2、POU5F1、NKX2-1、SOX1;发现差异的miRNA主要位于细胞核、细胞质区域,具有丝/苏氨酸激酶活性、受体信号复合体支架活性、转录活性调节及转录因子活性调节等分子功能,参与核酸调控、信号转导等生物过程;可能通过表皮生长因子受体(EGFR)、IGF-1、γ-干扰素、膜雌激素受体等信号通路发挥作用,与血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血小板源生长因子(PDGF)、肝细胞生长因子受体(c-Met)、丝/苏氨酸蛋白激酶等介导的信号事件有关.结论:肝细胞癌中的差异miRNA与肿瘤的发生发展息息相关,部分差异miRNA可作为肝细胞癌早期诊断的潜在标志物,为肝细胞癌干预治疗提供新的思路.

背景:骨肉瘤是常见的原发性恶性肿瘤,其极易转移及预后较差;miRNA调控基因的表达参与骨肉瘤的发生与发展,但其潜在的miRNA-mRNA调控网络尚未全面建立.目的:通过生物学分析方法,构建骨肉瘤发病机制中潜在miRNA-mRNA调控网络,以便更全面地阐明骨肉瘤的发病机制.方法:从GEO数据库获取miRNA微阵列数据集(GSE65071),利用GEO2R对20个骨肉瘤血浆样本和15个健康者血浆样本的数据进行差异表达分析,筛选出在骨中有靶向基因的差异表达miRNA,并预测差异表达miRNA潜在转录因子.同时,从GEO数据库获得GSE16088数据集并在线分析获取差异表达基因,将靶基因与差异表达基因交集获得目标基因.最后,对目标基因进行GO注释和KEGG通路富集分析,构建PPI网络和筛选出关键基因,进一步评估关键基因的表达.结果与结论:共筛选出8个上调差异表达miRNA和14个下调差异表达miRNA,其主要转录因子有EGR1、POU2F1、SP1、SP4、NFIC、LHX3.22个差异表达miRNA靶基因与差异表达基因交集共获得110个目标基因.KEGG途径分析显示目标基因主要涉及细胞衰老、Apelin信号通路和癌症中的蛋白聚糖等途径.PPI网络分析显示CCNB1、AURKA、CD44较为重要.结果 显示,通过构建骨肉瘤发病相关潜在miRNA-mRNA调控网络,为深入研究骨肉瘤分子机制提供理论基础,也为开发新的治疗靶标提供科学依据.

目的:观察神经生长因子(NGF)纳米粒对神经干细胞(NSC)在APP/PS1转基因鼠脑内存活、迁移、分化的影响,以及NSC联合NGF纳米粒移植对基底前脑胆碱能神经元及海马、皮层3-淀粉样蛋白(Aβ)的影响.方法:36只12月龄雄性APP/PS1转基因小鼠采用随机数字表法分为AD对照组、NSC移植组、联合移植组,每组12只.另外选取12只12月龄野生型(WT)小鼠作为WT对照组.体外分离培养表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠胎脑来源的NSC.WT对照组和AD对照组于双侧海马分别注射5μL磷酸盐缓冲液(PBS),NSC移植组和联合移植组于双侧海马分别注射等量NSC悬液和NSC联合NGF纳米粒悬液.移植4周后,采用免疫荧光法检测移植NSC的存活、迁移、分化以及基底前脑胆碱能神经元(CHAT)的变化;采用实时荧光定量PCR法(Q-PCR)检测基底前脑ChAT和Lhx8 mRNA表达;采用Western blotting检测各组基底前脑ChAT蛋白表达情况;采用硫磺素T染色检测各组小鼠海马及皮层Aβ斑块的数量.结果:①移植4周后,EGFP阳性NSC在脑内存活,广泛迁移至胼胝体远端、皮层及海马深部,并能分化为神经元及星形胶质细胞,联合移植组细胞存活数量更多,并且NSC显示更多复杂的突起形态.②NSC移植组和联合移植组基底前脑ChAT神经元数量增加(P＜0.05),联合移植组ChAT及Lhx8基因表达明显高于NSC移植组(P＜0.05).③NSC移植组和联合移植组海马及皮层Aβ斑块的数量均未明显减少(P＞0.05).结论:NSC联合NGF纳米粒移植可以间接保护基底前脑胆碱能神经元和NSC的存活与成熟,并促进基底前脑ChAT和Lhx8的基因表达,但不能减少海马和皮层中Aβ斑块数量.

目的:探讨微小RNA-409-3p(microRNA-409-3p,miR-409-3p)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制.方法:qRT-PCR与Western blot平行检测前列腺癌细胞中miR-409-3p与LIM同源框基因2(LIM-homeobox gene 2,LHX2)的表达;CCK-8实验检测miR-409-3p过表达对前列腺癌细胞增殖能力的影响,以及LHX2过表达对前列腺癌细胞增殖能力的恢复作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测miR-409-3p与LHX2的靶向作用关系;Western blot检测细胞中LHX2、CyclinD1、CDK4、Cleaved-caspase-3及VEGF/VEGFR2信号通路相关蛋白表达.结果:miR-409-3p在前列腺癌细胞中的表达水平显著低于正常前列腺上皮细胞(P＜0.05),LHX2的表达水平高于正常前列腺上皮细胞(P＜0.05);miR-409-3p过表达可显著抑制前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡(P＜0.05),并可上调Cleaved-caspase-3的表达(P＜0.05),下调 CyclinD1、CDK4、VEGF、t-VEGFR2、p-VEGFR2的表达(P＜0.05);双荧光素酶实验证明miR-409-3p与LHX2存在靶向关系,miR-409-3p可负性调控LHX2的表达;LHX2过表达可部分逆转miR-409-3p对前列腺癌细胞增殖、凋亡及VEGF/VEGFR2信号通路的影响.结论:miR-409-3p可通过下调LHX2的表达而促进前列腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖,其作用机制可能与抑制VEGF/VEGFR2信号通路激活有关.

目的:利用生物信息学分析探讨类风湿关节炎(RA)与骨关节炎(OA)之间的关系.方法:通过GEO数据库获取RA和OA血清基因芯片表达谱,筛选两者之间的差异miRNA并取交集,利用FunRich软件对交集miRNA进行转录因子预测及功能富集分析.应用String及Cytoscape软件对交集miRNA作用的靶基因进行蛋白互作网络构建,并筛选出核心mRNA,最后利用DAVID数据库对mRNA进行GO功能分析及KEGG信号通路分析.结果:共获得hsa-miR-4281、hsa-miR-98-5p、hsa-miR-3613-3p及hsa-miR-6858-3p 4个差异miRNA,其生物过程主要涉及肽代谢、转录、翻译等,涉及10个核心转录因子:LHX3、SP4、NFIC、VSX2、HOXA7、TCF3、MYC、HOXB4、ETS1、SP1.蛋白互作分析提示CDC5L、HNRNPU、GATAD2A、CHD4、ACTB为互作网络中的核心靶点;GO富集分析结果显示交集miRNA所调控mRNA的生物学过程主要涵盖mRNA代谢过程的调控、细胞周期过程的负调控、有丝分裂细胞周期等,KEGG富集结果信号通路主要涉及调控干细胞多能性的信号通路、Hippo信号通路、FoxO信号通路、Apelin信号通路、p53信号通路等.结论:RA与OA两者之间交集miRNA和核心基因的发现有助于了解两种疾病发病机制的相关性,为治疗两种疾病的共同药物研发及治疗方式提供一定的参考.

背景:甲状腺功能减退常伴随着垂体合成分泌激素分泌不足,有研究表明淫羊藿苷对甲状腺功能减退引起的垂体激素分泌不足有确切疗效,但其作用机制还不清楚.目的:探究淫羊藿苷对大鼠甲状腺功能减退后垂体合成分泌激素的影响及机制.方法:①40只新生雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组及75,150,300 mg/kg淫羊藿苷组,每组8只,后4组给予丙基硫氧嘧啶1.5 mg/(kg·d)灌胃处理构建甲状腺功能减退大鼠模型,各淫羊藿苷剂量组给予75,150,300 mg/kg淫羊藿苷干预治疗,检测各组miR-17-5p、LIM同源框4(LIM homeobox 4,LHX4)、PROP成对同源1蛋白(prop paired end homology 1 protein,PROP1)和HESX1表达,以及垂体合成分泌激素含量.②采用锂盐处理共培养的大鼠甲状腺细胞和垂体前叶细胞,给予不同浓度淫羊藿苷(10,30,50,70,100μmol/L)干预,CCK-8试剂盒检测垂体前叶细胞活力;ELISA试剂盒检测促卵泡激素、生长激素和促甲状腺激素水平;实时荧光定量PCR检测miR-17-5p表达;Western印迹法检测PROP1和HESX1蛋白水平;采用双荧光素报告酶基因和RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测miR-17-5p和LHX4的结合关系.结果 与结论:①体内实验结果显示,150 mg/kg淫羊藿苷组较模型组促甲状腺激素含量降低(P<0.05),生长激素(P<0.01)和促卵泡激素(P<0.05)含量显著升高;此外,150 mg/kg淫羊藿苷组较模型组血清游离三碘甲状腺原氨酸、血清游离甲状腺素、血清三碘甲状腺原氨酸和血清甲状腺素激素分泌水平增加;②用50,70,100μmol/L淫羊藿苷干预能够增强大鼠垂体前叶细胞活力(P<0.01),其中70μmol/L淫羊藿苷干预效果最佳(P均<0.01);③淫羊藿苷处理抑制了锂盐处理的大鼠垂体前叶细胞中miR-17-5p表达增加,上调PROP1和HESX1表达(P均<0.05);④锂盐处理组细胞上清液中生长激素和促卵泡激素含量明显降低,促甲状腺激素含量增加,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.01);⑤用不同浓度淫羊藿苷干预细胞后,生长激素和促卵泡激素含量增加(P<0.01),促甲状腺激素水平明显降低(P<0.05),70μmol/L时干预效果最佳(P<0.01);⑥与对照组相比,转染miR-17-5p mimic抑制锂盐处理的大鼠垂体前叶细胞活力(P<0.05),下调细胞中PROP1和HESX1的蛋白表达,增加促甲状腺激素含量(P<0.05),减少生长激素和促卵泡激素含量(P均<0.01),而转染miR-17-5p inhibitor与转染miR-17-5p mimic的作用相反;⑦LHX4是miR-17-5p的靶基因,过表达LHX4增加细胞活力,促进PROP1和HESX1蛋白表达(P均<0.01),减少促甲状腺激素含量(P<0.05),增加生长激素和促卵泡激素含量(P<0.01);⑧提示淫羊藿苷可能通过miR-17-5p/LHX4轴恢复失调的垂体合成分泌激素水平.