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高碘通过内质网应激和P38MAPK信号通路诱导甲状腺上皮细胞损伤的研究
编辑人员丨5天前
目的 探讨内质网应激和p38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路在高碘诱导甲状腺上皮细胞损伤中的作用.方法 将甲状腺上皮细胞Nthy-ori 3-1随机分为对照组(正常培养)、模型组(40 mmol·L-1碘化钾)、4-苯基丁酸(4-PBA)组[40 mmol·L-1 碘化钾和 2 mmol·L-1 4-PBA]、SB203580 组(40 mmol·L-1碘化钾和10 μmol·L-1 SB203580).用蛋白质印迹法检测细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、p-P38/P38的表达水平;用MTT和克隆形成实验检测增殖水平;用流式细胞术检测细胞凋亡水平;用酶联免疫吸附试验法检测白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 对照组、模型组、4-PBA组和SB203580组 GRP78 蛋白表达水平分别为 0.15±0.03、0.61±0.07、0.27±0.03 和0.37±0.04;p-P38/P38 比值分别为 0.12±0.03、0.53±0.04、0.35±0.04 和0.25±0.03;细胞存活率分别为(100.00±0.00)%、(53.71±6.16)%、(80.24±8.17)%和(71.29±7.36)%;克隆形成数分别为(271.36±25.18)、(96.09±10.79)、(183.24±15.36)和(141.24±16.18)个;凋亡率分别为(1.04±0.21)%、(9.27±1.67)%、(3.18±1.52)%和(3.82±1.09)%;IL-6水平分别为(0.71±0.08)、(9.17±0.87)、(3.26±0.29)和(4.71±0.41)nmol·L-1.上述指标,模型组和对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05);4-PBA组、SB203580组和模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 高碘可抑制Nthy-ori 3-1细胞增殖,诱导细胞凋亡和炎症因子分泌,其机制可能与高碘激活内质网应激和P38MAPK信号通路有关.
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编辑人员丨5天前
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树突表达特异性7跨膜蛋白促进甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制
编辑人员丨5天前
目的:观察树突表达特异性7跨膜蛋白(DCSTAMP)对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:在基因表达谱交互式分析平台(GEPIA)中分析DCSTAMP在甲状腺乳头状癌组织中的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测甲状腺乳头状癌细胞系KTC-1、FTC-133及甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1中DCSTAMP表达的差异;在KTC-1和FTC-133细胞中分别转染过表达和敲低质粒及其对照,构建DCSTAMP过表达和敲低细胞模型;过表达组通过细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖检测试剂盒检测DCSTAMP基因过表达后对增殖的影响;蛋白印迹法验证过表达后对细胞核增殖抗原(Ki-67)蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响;敲低组通过细胞划痕、侵袭测定实验(Transwell)实验检测DCSTAMP基因敲低后对迁移、侵袭的影响;蛋白印迹法验证敲低后对神经钙黏着蛋白(NCAD)、磷酸化蛋白激酶B蛋白(p-Akt)、总蛋白激酶B蛋白(t-Akt)表达的影响;两样本均数比较采用成组配对 t检验分析。 结果:RT-qPCR和Western blot结果均显示DCSTAMP基因在甲状腺乳头状癌细胞KTC-1、FTC-133中的表达高于甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1(RT-qPCR:DCSTAMP基因在Nthy-ori 3-1、KTC-1、FTC-133细胞中mRNA相对表达量分别为1.020±0.202、17.350±3.326、8.684±0.030,Nthy-ori 3-1与KTC-1比较: t=4.901, P<0.05;Nthy-ori 3-1与FTC-133比较: t=37.460, P<0.01;Western blot:DCSTAMP基因在Nthy-ori 3-1、KTC-1、FTC-133细胞中蛋白相对表达量分别为1.000±0.009、3.227±0.444、3.367±0.073,Nthy-ori 3-1与KTC-1比较: t=9.628, P<0.01;Nthy-ori 3-1与FTC-133比较: t=55.580, P<0.01);KTC-1、FTC-133细胞中DCSTAMP过表达组细胞增殖速度高于对照组(KTC-1对照组与过表达组第3天相对增殖速度:0.215±0.010:0.397±0.029, t=6.198, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组第3天相对增殖速度:0.350±0.364:0.432±0.025, t=33.640, P<0.01),过表达组增殖能力高于对照组[KTC-1对照组比过表达组:(8.382±1.400)%比(91.253±1.699)%, t=65.220, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组:(14.385±2.441)%比(91.332±1.159)%, t=49.320, P<0.01],过表达组Ki-67表达高于对照组(KTC-1对照组与过表达组蛋白相对表达量:1.000±0.038比1.282±0.134, t=9.968, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组蛋白相对表达量:1.000±0.011比1.382±0.221, t=40.920, P<0.01),过表达组MAPK表达高于对照组(KTC-1对照组与过表达组:1.000±0.012比1.088±0.057, t=10.720, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组:1.000±0.039比1.220±0.123, t=9.404, P<0.01),过表达组MAPK通路亚家族细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达高于对照组:(1.000±0.005比7.047±0.088, t=68.650, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组:1.000±0.003比1.983±0.029, t=34.000, P<0.01);而在KTC-1、FTC-133中敲低DCSTAMP基因后,对照组细胞迁移速度高于敲低组(KTC-1对照组与敲低组:(72.545±0.704)%比(45.016±2.156)%, t=21.020, P<0.01;FTC-133对照组与敲低组:(82.422±0.196)%比(49.824±5.402)%, t=10.450, P<0.01),对照组侵袭能力高于敲低组(KTC-1对照组与敲低组:(320.667±13.013)%比(172.333±11.240)%, t=14.940, P<0.01;FTC-133对照组与敲低组侵袭细胞数:302.667±24.111比228.000±14.422, t=4.603, P<0.01),p-Akt表达对照组高于敲低组(KTC-1对照组与敲低组:1.000±0.029比0.376±0.355, t=21.980, P<0.01;FTC-133对照组与敲低组:1.000±0.010比0.809±0.110, t=35.900, P<0.01)。 结论:DCSTAMP基因通过激活MAPK通路亚家族ERK及Akt磷酸化在甲状腺乳头状癌细胞系中可以促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。
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编辑人员丨5天前
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小干扰RNA靶向干扰低密度脂蛋白受体相关蛋白4基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖的影响及其机制
编辑人员丨5天前
目的:探讨小干扰RNA(siRNA)靶向干扰低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP4)基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖的影响。方法:选择滨州市人民医院和清华大学第一附属医院于2018年9月至2020年9月收治的甲状腺乳头状癌患者43例,行手术切除中收集甲状腺乳头状癌组织标本和癌旁正常组织标本。运用实时荧光定量PCR法检测甲状腺癌肿瘤组织、对应癌旁组织、人甲状腺正常细胞(Nthy-ori 3-1)和人乳头瘤状甲状腺癌细胞(TPC-1)中LRP4基因表达变化。采用脂质体将si-LRP4和si-con分别转染至TPC-1细胞中作为si-LRP4组和si-con对照组,分析靶向干扰LRP4基因后对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞侵袭、迁移及癌细胞增殖情况。两组间比较采用 t检验,多组间比较采用单因素方差分析。 结果:43例甲状腺乳头状癌组织中LRP4基因相对表达量0.74±0.11,显著高于癌旁正常组织0.25±0.05,差异有统计学意义( t=12.242, P<0.05);TPC-1细胞中LRP4基因表达水平1.21±0.16,也显著高于Nthy-ori 3-1细胞0.57±0.09,差异有统计学意义( t=9.775, P<0.05)。siRNA靶向干扰TPC-1细胞后,LRP4基因表达水平显著降低( t=19.348, P<0.05),差异有统计学意义。si-LRP4组TPC-1细胞侵袭数与细胞迁移数显著下降( t=35.013、30.958, P<0.05),差异有统计学意义,而si-LRP4组TPC-1细胞在48、72 h的细胞增殖活性显著降低( t=12.731、11.777, P<0.05),差异有统计学意义。 结论:LRP4基因在甲状腺乳头状癌组织和细胞系中高表达,而靶向干扰LRP4基因可抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖、侵袭与迁移过程。
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编辑人员丨5天前
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LncRNA DLEU1靶向miR-624-3p介导甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的机制研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因1(deleted in lymphocytic leukemia1,DLEU1)对甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等过程的影响,以及其作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1与甲状腺癌细胞SW579、TPC-1、C64中DLEU1、微小RNA-624-3p(miR-624-3p)的表达水平。分别将si-con(si-con组)、si-DLEU1(si-DLEU1组)、miR-con(miR-con组)、miR-624-3p mimics(miR-624-3p组)、si-DLEU1与anti-miR-con(si-DLEU1+anti-miR-con组)、si-DLEU1与anti -miR-624-3p(si-DLEU1+anti -miR-624-3p组)转染至TPC-1细胞,将未经转染的细胞作为NC组;检测各组细胞活力、细胞凋亡率以及细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶验证DLEU1与miR-624-3p的靶向关系;Western blot检测Ki-67、基质金属蛋白酶2((matrix metalloproteinase-2,MMP2)、Cleaved caspase-3、Wnt、β-catenin表达量。结果:与Nthy-ori 3-1组DLEU1相比,甲状腺癌细胞SW579、C643、TPC-1中DLEU1表达水平明显升高,miR-624-3p表达水平明显降低,差异具有统计学意义( F值分别为207.87和68.45, P值均<0.05);与NC组、si-con组相比,si-DLEU1组细胞活力显著下降,迁移细胞数与侵袭细胞数显著下降,Ki-67、MMP-2、Wnt、β-catenin蛋白相对表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著升高,差异具有统计学意义( F值分别为52.93、354.43、193.75、101.74、86.80、141.66、122.14、307.83、78.49, P值均<0.05);与NC组、miR-con组相比,miR-624-3p组细胞活力显著下降,迁移细胞数与侵袭细胞数显著下降,Ki-67、MMP-2、Wnt、β-catenin蛋白相对表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著升高,差异具有统计学意义( F值分别为49.63、296.45、220.53、220.82、215.75、65.23、251.20、302.58、348.28, P值均<0.05);miR-624-3p过表达能显著降低DLEU1野生型质粒的荧光素酶活性( t=9.55, P<0.05);与si-DLEU1+anti-miR-con组相比,si-DLEU1+anti-miR-624-3p组细胞活力显著升高,迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多,Ki-67、MMP-2、Wnt、β-catenin蛋白相对表达量显著升高,细胞凋亡率显著降低,Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著降低,差异具有统计学意义( t值分别为9.93,15.29、20.18、6.79、4.23、8.02、9.57、11.34、8.67, P值均<0.05)。 结论:LncRNA DLEU1靶向miR-624-3p促进甲状腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡,其作用机制可能与信号通路Wnt/β-catenin的活化有关。
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编辑人员丨5天前
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环状RNA circGPX1通过调节miRNA-150表达影响甲状腺癌细胞增殖和侵袭
编辑人员丨5天前
目的:探讨环状RNA(circRNA)circGPX1在甲状腺癌组织中的表达及体外circGPX1对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响和分子机制。方法:基于GeneCards数据库分析circGPX1在甲状腺癌组织和癌旁组织中转录水平表达差异,比较不同临床分期患者circGPX1表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circGPX1在人正常甲状腺上皮细胞株Nthy-ori3-1和甲状腺癌细胞株SW579、TPC-1、B-CPAP、TT中的表达。将circGPX1表达水平最高的TPC-1细胞转染载有干扰circGPX1小干扰RNA(siRNA)序列的质粒和载有阴性对照siRNA序列的质粒,分别为si-circGPX1组和si-NC组。采用CCK-8法和Transwell实验分别检测两组TPC-1细胞增殖(以吸光度值为细胞增殖能力)和侵袭能力。采用CircAtlas软件预测circGPX1与miRNA-150(miR-150)互补,应用双荧光素酶报告基因实验验证二者的靶向关系。qRT-PCR法检测两组TPC-1细胞中miR-150表达。蛋白质印迹法检测两组TPC-1细胞中Wnt/β-连接素(catenin)信号通路β-catenin、c-myc、p-GSK3β、细胞周期蛋白D蛋白表达。结果:GeneCards数据库中,与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中circGPX1转录水平高表达,差异有统计学意义( P<0.01);甲状腺癌患者临床分期越高,circGPX1相对表达量越高,差异有统计学意义( P<0.01)。各甲状腺癌细胞株中circGPX1转录水平相对表达量均高于Nthy-ori3-1细胞,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。si-circGPX1组TPC-1细胞中circGPX1相对表达量较si-NC组低(1.2±0.4比6.1±0.5),差异有统计学意义( t=8.48, P=0.001)。铺板后36、48、60、72 h,si-circGPX1组TPC-1细胞的增殖能力均低于si-NC组,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。培养27 h,si-circGPX1组侵袭的TPC-1细胞数少于si-NC组[(40±6)个比(96±11)个],差异有统计学意义( t=4.30, P=0.005)。双荧光素酶报告基因实验显示,circGPX1-野生型与miR-150共转染的TPC-1细胞相对荧光素酶活性低于circGPX1-野生型与miR-150阴性对照共转染的TPC-1细胞,差异有统计学意义( t=5.32, P=0.002),提示circGPX1与miR-150之间存在互补序列。si-circGPX1组TPC-1细胞中miR-150相对表达量高于si-NC组,差异有统计学意义( t=5.55, P=0.001)。si-circGPX1组TPC-1细胞β-catenin、c-myc、p-GSK3β、cyclin D蛋白的相对表达量均低于si-NC组,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:circGPX1在甲状腺癌组织和细胞中高表达,体外敲减circGPX1可能通过调控miR-150/Wnt/β-catenin轴而抑制甲状腺癌TPC-1细胞的增殖和侵袭。
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编辑人员丨5天前
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BHLHE40靶向HMGA2激活氧化磷酸化通路降低甲状腺癌细胞对顺铂敏感性的研究
编辑人员丨5天前
目的:探究BHLHE40能否通过靶向高迁移率族蛋白A2(HMGA2)激活氧化磷酸化(OXPHOS)通路进而影响甲状腺癌细胞对顺铂的敏感性。方法:通过在线数据库TCGA-甲状腺癌和hTFtarget分析HMGA2及上游转录因子BHLHE40在甲状腺癌组织中的mRNA表达情况。采用脂质体转染法将si-HMGA2、oe-HMGA2、oe-BHLHE40以及阴性对照si-NC、oe-NC转染至甲状腺癌细胞K1和SW579中,通过实时荧光定量PCR检测BHLHE40和HMGA2在甲状腺癌细胞SW579、FTC-133、K1和正常甲状腺细胞Nthy ori3-1中的mRNA表达水平,采用MTT法检测细胞活力,CCK-8法计算顺铂半抑制浓度(IC 50)值,流式细胞术检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测OXPHOS复合体的表达,Seahorse XFe 96分析细胞的耗氧率。双荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀实验分析BHLHE40与HMGA2的结合关系。 结果:TCGA数据库结果表明,HMGA2和BHLHE40 mRNA在甲状腺癌组织中的表达(10.57±2.58、13.89±1.13)均较甲状腺正常组织高(4.82±1.69、12.28±1.01),差异均具有统计学意义( t=16.69, P<0.001; t=10.43, P<0.001)。实时荧光定量PCR结果发现,正常甲状腺细胞Nthy ori3-1、甲状腺癌细胞SW579、FTC-133和K1中HMGA2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.13、2.94±0.23、4.71±0.41和6.29±0.49,BHLHE40 mRNA相对表达量分别为1.00±0.12、2.60±0.23、3.39±0.35和6.18±0.51,差异均具有统计学意义( F=130.50, P<0.001; F=125.20, P<0.001)。进一步两两比较发现,与正常甲状腺细胞相比,甲状腺癌细胞中HMGA2和BHLHE40 mRNA的表达水平均显著升高(均 P<0.001)。MTT法检测显示,与si-NC组相比,si-HMGA2处理显著降低了K1细胞的细胞活力(均 P<0.05),oe-HMGA2处理相对于oe-NC组显著增加了SW579细胞的细胞活力(均 P<0.05);与oe-NC+DMSO组相比,oe-HMGA2+DMSO组SW579细胞的细胞活力增强,而OXPHOS通路抑制剂Gboxin能够逆转过表达HMGA2对细胞活力的影响(均 P<0.05)。流式细胞术和CCK-8实验结果显示,与si-NC组(凋亡水平:6.19%±0.28%;顺铂IC 50值:17.47 μmol/L)相比,敲低HMGA2能增加K1细胞的凋亡水平(11.96%±0.32%; t=19.17, P<0.001)和顺铂敏感性(IC 50值:1.49 μmol/L);与oe-NC组(凋亡水平:9.98%±0.32%;顺铂IC 50值:8.17 μmol/L)相比,过表达HMGA2显著降低了SW579细胞凋亡水平(4.32%±0.25%; t=19.65, P<0.001)和顺铂敏感性(IC 50值:34.95 μmol/L)。双荧光素酶报告实验结果发现,与si-NC组相比,在人肾上皮细胞293T细胞中敲低BHLHE40的表达显著降低野生型HMGA2的荧光素酶活性(0.31±0.02比1.00±0.11; t=10.69, P=0.004),但对于突变型HMGA2的荧光素酶活性没有显著性影响(1.06±0.11比1.00±0.07; t=0.80, P=0.470)。染色质免疫沉淀实验结果显示,与IgG组(1.00±0.10)相比,anti-BHLHE40组K1细胞的HMGA2 mRNA表达水平显著增加(6.57±0.62; t=15.36, P<0.001)。与oe-NC+DMSO组相比,oe-HMGA2+DMSO组SW579细胞凋亡水平( P<0.05)和顺铂敏感性均降低,OXPHOS复合体Ⅰ~Ⅴ表达显著增强,细胞耗氧率升高(均 P<0.05),oe-HMGA2+Gboxin处理可逆转过表达HMGA2的影响(均 P<0.05)。回复实验表明,与oe-NC+si-NC组相比,过表达BHLHE40后SW579细胞的细胞活力和OXPHOS复合体Ⅰ~Ⅴ的表达增强,细胞耗氧率和顺铂IC 50值显著增加,细胞凋亡水平下降(均 P<0.05);而同时敲低HMGA2可逆转过表达BHLHE40的影响(均 P<0.05)。 结论:BHLHE40可通过靶向调控HMGA2的表达激活氧化磷酸化通路,进而影响甲状腺癌细胞对顺铂的敏感性。
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编辑人员丨5天前
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甲状腺干扰物 p, p'-DDE抑制Nthy-ori-3-1细胞LHX4和DIS3L蛋白表达
编辑人员丨5天前
目的:观察甲状腺干扰物4,4-二氯二苯二氯乙烯( p, p’-DDE)处理甲状腺Nthy-ori-3-1细胞后,其LHX4和DIS3L mRNA水平及蛋白表达量的变化。 方法:取对数生长期Nthy-ori-3-1细胞,配制0、0.5、1.0、2.0和5.0 μg/ml p, p’-DDE溶液,按浓度梯度给药,处理Nthy-ori-3-1细胞。显微镜观察细胞生长状态、细胞形态。基因芯片检测基因表达谱变化,通过实时荧光定量PCR检测LHX4和DIS3L mRNA水平,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LHX4和DIS3L蛋白表达量。 结果:p, p’-DDE浓度为0、0.5、1.0和2.0 μg/ml时,Nthy-ori-3-1细胞均生长正常。2.0 μg/ml组细胞差异基因共33个,其中,13个基因表达下调,20个基因表达上调。与对照组比较,1.0、2.0 μg/ml组细胞LHX4、DIS3L蛋白表达水平明显降低,差异均有统计学意义( P<0.05),1.0 μg/ml组细胞LHX4和DIS3L蛋白mRNA相对表达量降低,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:p, p’-DDE处理Nthy-ori-3-1细胞会影响LHX4和DIS3L蛋白表达水平。
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编辑人员丨5天前
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KAT5/miR-210/TET2通路在甲状腺未分化癌细胞放射抵抗中作用
编辑人员丨5天前
目的:探究乙酰转移酶KAT5对甲状腺未分化癌(ATC)细胞放射敏感性的影响及机制。方法:检测人ATC细胞及正常人甲状腺细胞中内源性KAT5表达水平,使用克隆形成实验探讨KAT5特异性抑制剂NU9056对人ATC细胞及正常甲状腺细胞放射敏感性影响。借助蛋白质印迹、miRNA测序、qRT-PCR、双荧光素酶报告基因等手段,并检索JASPAR、TCGA等数据库,探讨KAT5调控ATC放射敏感性的机制。结果:人ATC细胞中内源性KAT5蛋白及基因水平均显著高于正常人甲状腺细胞,而NU9056能显著提高人ATC细胞8505C和CAL-62的放射敏感性,但对正常人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1却无增敏作用。下调KAT5和NU9056均可降低ATC细胞中miR-210水平,而NU9056可降低细胞中转录因子c-Myc表达。miR-210启动子核心区域存在转录因子c-Myc的结合位点,而c-Myc可提高miR-210启动子荧光素酶活性。miR-210高表达是甲状腺癌患者的不良预后因素。上调miR-210能降低ATC细胞中TET2基因表达,而下调miR-210则起相反作用。结论:过度激活的KAT5/miR-210/TET2通路可能造成ATC的放射抵抗,成为临床ATC放射增敏的潜在靶点。
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编辑人员丨5天前
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circ_BACH2通过调控miR-370-3p影响甲状腺乳头状癌的恶性生物学行为
编辑人员丨5天前
目的:探讨circ_BACH2对甲状腺乳头状癌恶性生物学行为的影响及分子机制。方法:收集天津市第四中心医院2017—2019年51例甲状腺乳头状癌患者的癌组织和癌旁正常组织。实时荧光定量PCR法检测癌组织、癌旁正常组织和细胞中circ_BACH2、miR-370-3p和GIT1 mRNA的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况和细胞周期变化,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数,细胞计数试剂盒8检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测circ_BACH2、miR-370-3p和GIT1之间的靶向关系,裸鼠成瘤实验检测抑制circ_BACH2的表达对小鼠体内肿瘤的影响。结果:甲状腺乳头状癌组织中circ_BACH2、GIT1 mRNA和蛋白表达水平高于癌旁正常组织,miR-370-3p表达水平低于癌旁正常组织,甲状腺癌细胞TPC-1、SW579中circ_BACH2、GIT1 mRNA和蛋白表达水高于人甲状腺正常细胞Nthy-ori3-1,miR-370-3p表达水平低于Nthy-ori3-1细胞(均 P<0.05)。GIT1 mRNA表达水平与miR-370-3p表达水平呈负相关( r=-0.634),circ_BACH2表达水平与GIT1 mRNA表达水平呈正相关( r=0.635),circ_BACH2表达水平与miR-370-3p表达水平呈负相关( r=-0.394,均 P<0.05)。circ_BACH2与miR-370-3p具有结合位点,GIT1的3'UTR与miR-370-3p具有结合位点。si-circ_BACH2组TPC-1、SW579细胞G 0/G 1期细胞比例高于si-NC组,S期细胞比例、细胞吸光度值低于si-NC组,细胞克隆形成数[分别为(43±5)个和(54±8)个]低于si-NC组[分别为(100±6)个和(100±9)个],细胞凋亡率[分别为(19.60±2.40)%和(18.10±2.10)%]高于si-NC组[分别为(4.30±0.20)%和(5.10±0.23)%],细胞迁移数[分别为(61±7)个和(58±6)个]、细胞侵袭数[分别为(45±6)个和(47±4)个]均低于si-NC组[分别为(134±15)个、(112±11)个、(113±11)个和(92±9)个,均 P<0.001]。si-circ_BACH2组细胞中Snail、Twist1表达水平低于si-NC组,E-cadherin表达水平高于si-NC组(均 P<0.001)。抑制miR-370-3p的表达逆转敲减circ_BACH2对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,过表达GIT1逆转过表达miR-370-3p对甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。注射稳定转染sh-circ_BACH2的TPC-1细胞的裸鼠在培养35 d 后肿瘤体积缩小[(535±91)mm 3和(857±114)mm 3],肿瘤重量减少[(0.62±0.13)mg和(1.06±0.15)mg,均 P<0.05]。裸鼠肿瘤组织中circ_BACH2、GIT1 mRNA表达水平降低,miR-370-3p mRNA表达水平升高(均 P<0.05)。 结论:抑制circ_BACH2可能通过靶向调控miR-370-3p/GIT1从而抑制体外甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,并抑制体内肿瘤的生长。
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编辑人员丨5天前
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外泌体LncRNA SPINT1-AS1在甲状腺乳头状癌中的诊断价值
编辑人员丨5天前
目的:本文旨在探讨外泌体源性LncRNA SPINT1-AS1在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)诊断和预后判断中的价值。方法:采用qRT-PCR检测SPINT1-AS1在PTC组织、细胞系(TPC-1、BCPAP、K1和IHH4)和患者血清外泌体及癌旁正常组织、人甲状腺正常细胞系Nthy-ori 3-1和健康志愿者血清外泌体中的表达。CCK-8和克隆形成实验分别检测SPINT1-AS1对PTC细胞增殖和集落形成的影响。双荧光素酶报告实验验证SPINT1-AS1和miR-128-3p、miR-128-3p和ITGA3间的互作用关系。结果:SPINT1-AS1在PTC组织和细胞系中的表达较癌旁正常组织和Nthy-ori 3-1细胞系显著升高。敲减SPINT1-AS1能抑制PTC细胞增殖和集落形成。生物信息学分析表明,PTC中存在一个SPINT1-AS1/miR-128-3p/IT-GA3互作用调节网络。双荧光素酶报告实验验证了SPINT1-AS1、miR-128-3p和ITGA3的直接相互作用。此外,还证实了SPINT1-AS1在PTC患者的血清外泌体中显著上调。结论:SPINT1-AS1调控miR-128-3p/ITGA3轴促进PTC细胞增殖和克隆形成。外泌体源性SPINT1-AS1可能是PTC诊断和治疗的一个有效分子靶点。
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编辑人员丨5天前
