目的:探究山东省潍坊市农村居民耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌（CR-ECL）耐药基因特征及核心基因组特征。方法:收集2017年山东省潍坊市农村社区居民粪便标本，使用耐碳青霉烯类肠杆菌显色培养基筛选耐药菌株，通过激光解吸/电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOFMS）分析获得CR-ECL阳性菌株，针对CR-ECL分离株，采用微量肉汤稀释法进行抗生素敏感性试验获得CR-ECL耐药表型，开展全基因组测序（WGS）和分析、 blaNDM基因周围环境及菌株间系统进化分析。 结果:共获得并检测628份粪便标本，6份为CR-ECL阳性（检出率0.96%），均表现为多重耐药（MDR）表型。6株CR-ECL共有4个MLST分型（ST），均携带多种耐药基因（ blaNDM-1、 blaNDM-5等）和毒力基因（ acrA、 acrB、 entB、 fepC等），且 blaNDM基因周围遗传环境中均存在移动遗传元件 ISAba125、 TN3-IS3000、 TN3及 IS5。系统发育树显示，核心基因组多位点序列分型（core genome multilocus sequence typing，cgMLST）与单核苷酸多态性（SNPs）结果具有一致性，cgMLST结果显示菌株2BC0101B与2BC0251B，2BG0561B与2BI0221B之间等位基因差异分别为2和1，SNPs结果显示上述2对菌同样各自聚成一簇，并发现美国国立生物技术信息中心数据库（National Center for Biotechnology Information，NCBI）中鸡粪样本的菌株居于进化树中心，且本地序列均可追溯到美国人源序列。 结论:山东省潍坊市农村社区居民中已检出多重耐药碳青霉烯类阴沟肠杆菌。

目的 分析开放性手部及前臂外伤厌氧菌感染患者的临床病原学特征及药敏情况.方法 回顾性分析2015-2021年53例开放性手部及前臂外伤厌氧菌感染患者的临床特征、实验室指标、病原菌鉴定和药敏试验结果.病原菌鉴定使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)方法,并用16S rRNA测序验证.药敏试验采用E-test法进行.结果 53例患者感染类型中1种厌氧菌+1种非厌氧菌感染占52.8％,1种厌氧菌+1种及以上厌氧菌或非厌氧菌感染占88.7％.共分离出26种66株厌氧菌,从直接或间接咬伤病例中分离的厌氧菌占总株数的75.8％.23株非拟杆菌群的革兰阴性厌氧菌最低抑菌浓度(MIC)≤0.5 μg/mL的药物种类为:亚胺培南(22株,占96％)、美罗培南(22株,占96％)、甲硝唑(22株,占96％)、哌拉西林/他唑巴坦(21株,占91％)、阿莫西林/棒酸(20株,占87％).结论 开放性手部及前臂外伤的厌氧感染混合感染率高;直接或间接咬伤的患者病原菌复杂;革兰阴性厌氧杆菌引起的感染可选用亚胺培南、美罗培南、甲硝唑及哌拉西林/他唑巴坦等抗菌药物治疗.

目的 研究已报道的275个身高关联性SNPs位点与中国北方汉族男性身高的关联性.方法 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)方法,检测了266例中国北方汉族男性人群样本的SNPs分型.采用PLINK 1.09和SPSS 19.0软件,利用三种方案进行关联性分析,分别是:身高数值变量线性回归分析;高(≥177.5cm)和低(≤167.5cm)两组(以平均身高172.5±5cm为分组标准)进行logistic回归分析;高(≥180cm)和低(≤165cm)两组进行logistic回归分析.结果 16个SNPs位点与北方汉族男性身高有显著关联性(P<0.05).身高均值方差分析显示,已报道与亚洲人群身高关联的rs11170624和与欧洲人群身高关联的rs10037512、rs17346452、rs2629046、rs7689420、rs8052560、rs7909670等7个SNPs在北方汉族男性的身高均值中差异有意义(P<0.05).其中亚洲人群的rs11170624和欧洲人群的rs17346452、rs7689420、rs7909670对北方汉族男性身高的影响效应与之前研究一致,而另外3个欧洲人群的SNPs对北方汉族男性身高的影响效应基因及方向与欧洲人群不一致.结论 本研究揭示了身高关联SNPs位点具有较明显的人群差异性,构建适合中国汉族人群的身高预测模型还需要发掘更多、更准确的身高关联性SNPs遗传信息.

目的 利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MAIDI-TOF MS)技术构建霍乱弧菌谱库.方法 选取56株有代表性的霍乱弧菌,在相同环境下培养,通过生化、分子生物学及血清型鉴定,利用MAIDI-TOF MS对56株霍乱弧菌进行质谱数据采集,建立数据库.另选取10株野生霍乱弧菌及104株非霍乱弧菌用自建数据库进行MAIDI-TOFMS检测及评价.结果 自建数据库对10株野生霍乱弧菌鉴定,阳性率为100％,对104株非霍乱弧菌鉴定,均无误判,菌种鉴定结果可靠.56株霍乱菌株的聚类分析发现,MALDI-TOF-MS分型与血清型抗原分类之间无相关性,不同血清型间的质谱数据差异不明显,不能用于区分血清型别.结论 本研究建立的霍乱弧菌谱库对霍乱弧菌的鉴定准确性高,适用于实际检测.本研究结果填补了谱库中缺失的霍乱弧菌谱库,建立了霍乱弧菌的MAIDI-TOF MS检测鉴定平台,同时也为其他细菌建立或补充完善谱库提供了很好的方法借鉴.

目的 探讨凋亡相关基因Fas及其配体FasL单核苷酸多态性(SNPs)与肝细胞癌(HCC)易感性的关系.方法 收集本院2013年1月至2016年12月经病理确诊的126例HCC患者的外周血标本,在Sequenom MassARRAY系统上利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS)进行Fas多态性位点rs1571013、rs 1800682及rs 1468063和FasL多态性位点rs6700734、rs763110的基因分型,选取130例健康体检者的外周血作对比,采用Hardy-Weinberg平衡分析以上5个SNPs位点的遗传平衡情况,比较HCC患者与健康对照rs1571013、rs 1800682、rs1468063、rs6700734和rs763110基因型和等位基因的分布差异并计算比值比(0R)及其95％置信区间(95％CI)来评价以上SNPs与HCC易感性的关系.结果 126例HCC患者及130例健康体检者的Fas多态性位点rs1571013、rs 1800682及rs1468063和FasL多态性位点rs6700734及rs763110基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡.HCC组与对照组rs1468063、rs6700734和rs763110基因型分布的差异无统计学意义(P＞0.05),且与HCC易感性无关;rs1571013分布上,HCC组A/A基因型及等位基因A的比例均高于对照组(P＜0.05),其中以G/G基因型为参照,A/A基因型发生HCC的风险升高至2.492倍(P＜0.05),而A/G、A/G+A/A发生HCC的风险未改变(P＞0.05),以G等位基因为参照,A发HCC的风险升高至1.549倍(P＜0.05).rs 1800682分布上,HCC组G/G基因型及等位基因G的比例均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),以A/A基因型为参照,G/G基因型发生HCC的风险升高至2.880倍(P＜0.05),而A/G、A/G+G/G发生HCC的风险未改变(P＞0.05);以A等位基因为参照,G发生HCC的风险升高至1.651倍(P＜0.05).结论 Fas rs1571013、rs 1800682与HCC易感性有关,其中携带突变等位基因的HCC发生风险升高,在HCC易感人群筛查中有一定价值.

目的:利用全自动生物质谱检测系统即基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)快速鉴别耐万古霉素屎肠球菌(vancomycin resistant Enterococcus faecium,VRE)和万古霉素敏感屎肠球菌(vancomycin susceptible Enterococcus faecium,VSE).方法:收集临床分离的屎肠球菌,用仪器法和纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)进行万古霉素耐药性确认.用MALDI-TOFMS对菌株进行再鉴定,采集图谱.用ClinProTools 3.0软件对质谱峰图进行分析:随机选取25株VRE和50株VSE的质谱峰图用于模型的建立,用建立的模型验证剩余的15株VRE和35株VSE.结果:用ClinProTools 3.0软件建立了遗传算法(GA)、快速分类算法(QC)、监督式神经网络算法(SNN),3种模型的交叉验证和识别能力分别为95.65％、100％,87.62％、94.98％,62.54％、100％.质荷比为2 194.94、3 022.15、3 167.47和4 058.08的质谱峰是用于区分VRE和VSE的最为明显的特征性峰,即两类菌株间存在的差异蛋白质谱峰(分别是峰6、峰27、峰32、峰52).受试者工作特征曲线显示,这4个特征性峰的曲线下面积(AUC)均约为0.9.用3种模型分别进行的外部验证显示,GA算法、QC算法、SNN算法对VRE的敏感性和特异性分别为86.7％、82.8％,73.3％、85.7％,66.7％、80.0％.结论:在严格控制实验条件的情况下,MALDI-TOF MS可以在鉴定屎肠球菌的同时大致区分VRE和VSE,具有耗时短,敏感性、特异性相对较高的优势.

目的 检查44批通草中药饮片的微生物限度,分析其微生物污染现状,为通草饮片微生物的限度检查项和限值的制定提供参考.方法 按2015年版《中国药典》中方法,测定通草类中药饮片的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、耐热菌数、耐胆盐G-菌数并检查大肠埃希菌、沙门菌,采用飞行时间质谱微生物鉴定系统和全自动微生物鉴定及药敏分析系统对平板中分离得到的菌株进行鉴定.结果 44批通草类中药饮片的需氧菌总数的lg平均值为4.62,耐热菌数的lg平均值为2.13,有16批样品检出霉菌,耐胆盐G-菌N＞ 104(占18.18％),大肠埃希菌的检出率达9.09％,污染菌为30种.结论 需煎煮类饮片目前尚无微生物控制要求,通草中药饮片的卫生状况令人堪忧,应及时制定相关微生物的限度标准.

目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析白色念珠菌所致血流感染的血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型.方法 建立ICR小鼠白色念珠菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer软件分析白色念珠菌感染与正常对照组的血清多肽指纹图谱,同时分析大肠埃希菌感染组、金黄色葡萄球菌感染组和白色念珠菌感染组的血清多肽指纹图谱.结果 比较白色念珠菌感染组和正常对照组共得到135个多肽峰,其中表达上调的多肽有5个,表达下调的多肽有6个,表达呈先上调后下调的多肽有7个,组合m/z 1610.9、1742.3、2666.4、2778.0、3345.1、4528.8这6个峰建立诊断模型,该模型区分白色念珠菌感染的正确率为80.0％.综合比较大肠埃希菌感染组、金葡菌感染组和白色念珠菌感染组的血清多肽指纹图谱发现,有5个多肽峰在感染组中共同出现,分别为m/z 1513.8、2910.8、3538.1、3884.9和5007.3.结论 利用MALDI-TOFMS可有效区分白色念珠菌感染和正常血清的多肽峰,同时感染中共同出现的多肽峰有望成为辅助诊断血流感染的标志物,通过建立相应的诊断模型能早期辅助诊断真菌性血流感染,为临床合理用药及标志物寻找提供依据.

目的 探讨瘦素(LEP)水平及其单核苷酸多态性(SNPs)与非小细胞肺癌(NSCLC)易感性的关系.方法 收集2014年1月至2016年12月经病理确诊的142例NSCLC患者的外周血,在Sequenom MassARRAY系统上利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS)进行LEP多态性位点rs4731423、rs10487506、rs2167270、rs17151919、rs1800564和rs11761556的基因分型,同时收集176例健康体检者的外周血进行对比.采用Hardy-Weinberg平衡分析以上6个SNPs位点的遗传平衡情况,比较两组以上SNPs基因型和等位基因的分布差异并计算比值比(OR)及其95％置信区间(95％CI)来评价NSCLC易感性;采用放射免疫分析法检测142例NSCLC患者的血清LEP水平,并分析与NSCLC临床病理学特征(性别、年龄、病理类型、肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移)和LEP SNPs的关系.结果 142例NSCLC患者及176例健康体检者rs4731423、rs10487506、rs2167270和rs11761556基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡.NSCLC组与对照组rs10487506、rs11761556基因型及等位基因分布的差异无统计学意义(P＞0.05);rs4731423分布上,NSCLC组GG基因型频率为31.7％(45/142),G等位基因频率为51.4％(146/284),均高于对照组的18.8％(33/176)和37.2％(131/352),差异有统计学意义(P＜0.05);rs2167270分布上,NSCLC组AA基因型频率为15.5％ (22/142),高于对照组的7.4％(13/176),差异有统计学意义(P＜0.05),但两组等位基因分布频率的差异无统计学意义(P＞0.05).LEPrs10487506、rs2167270和rs11761556与NSCLC的发病风险均无关(P＞0.05);rs4731423分布上,以AA基因型为参照,GG基因型发生NSCLC的风险升高至2.594倍,AG+GG基因型则升高至1.961倍(P＜0.05),而AG基因型发生NSCLC的风险未改变(P＞0.05);以A等位基因为参照,G等位基因发生NSCLC的风险升高至1.785倍(P＜0.05).血清LEP水平与性别、年龄、病理类型、淋巴结转移、rs10487506、rs2167270及rs11761556均无关,但与肿瘤大小、TNM分期有关(P＜0.05);血清LEP水平与rs4731423有关,其中AG、GG和AG+GG基因型的血清LEP水平均高于AA型,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LEP rs4731423与NSCLC易感性及LEP水平有关,其中携带G等位基因的NSCLC发生风险升高且LEP水平升高,在NSCLC易感人群筛查中有一定价值.

目的 评估应用Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定血培养阳性标本中病原菌的符合率.方法 收集临床血培养阳性标本153例,应用Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法分别处理后,联合MALDI-TOF MS对菌种进行快速鉴定,快速鉴定结果与培养后结果进行比较.结果 经培养后确认,153例血培养阳性标本包括143例单数菌感染和10例复数菌感染标本.Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法均可在1 h内联合MALDI-TOF MS对血培养阳性标本进行快速鉴定.应用Sepsityper Kit试剂盒法联合MALDI-TOF MS 直接鉴定标本中病原体的种、属水平的符合率为76. 2% (109/153)和7. 8% (12/153).应用血清分离胶法联合MALDI-TOF MS直接鉴定标本中病原体的种、属水平的符合率为75.1%(101/153)和8.5%(13/153).单数菌感染中,Sepsityper Kit试剂盒法联合MALDI-TOF MS对革兰阴性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为95.2%(79/83)和0%(0/83),对革兰阳性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为57.5%(27/47)和23.4%(11/47),对念珠菌的种、属水平的鉴定符合率分别为33.3%(3/9)和11.1%(1/9).血清分离胶法联合MALDI-TOF MS在单数菌感染血培养瓶中对革兰阴性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为90.4%(75/83)和4.8%(4/83),对革兰阳性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为55.3%(26/47)和14.9%(7/47),对念珠菌的种、属水平的鉴定符合率分别为0%(0/9)和22.2%(2/9).对复数菌感染中,只有Sepsityper Kit试剂盒法有1例与培养鉴定结果一致,其他标本均都不能准确鉴定出多种细菌,但均都可以正确鉴定出其中一种细菌.结论Sepsityper Kit试剂盒或血清分离胶联合MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血标本中的病原菌,可以1 h内得到鉴定结果,且与培养结果比较具有较高的鉴定符合率.相对于传统的血培养阳性标本的分离培养鉴定流程,Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法联合MALDI-TOF MS方法具有快速、操作简便等优点,可以满足临床对快速诊断和及时有效合理抗菌治疗的需求,具有重要的临床应用价值.