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索拉非尼通过调控Runt相关转录因子3-血管内皮生长因子通路抑制肝癌血管生成
编辑人员丨5天前
目的:探讨索拉非尼抗肝癌的分子机制。方法:应用肝癌人源肿瘤异体移植(PDX)模型进行索拉非尼药效筛选和验证;采用小动物B型超声和活体激光共聚焦观察PDX 血管生成;采用免疫组化观察PDX组织增殖、血管生成相关蛋白的表达;采用实时定量PCR技术观察PDX组织Runt相关转录因子3(RUNX3)基因表达;采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析。结果:用4例PDX进行索拉非尼药效筛选,PDX1对索拉非尼有明显应答,抑制率为68.07%;与对照组相比,索拉非尼明显抑制PDX1相对肿瘤体积(5.76±2.14比11.71±2.87, P<0.05);细胞分裂指数(39.50±7.72比67.10±9.14, P<0.05)以及Ki67表达明显降低(288.60±43.40比531.70±55.60, P<0.05);小动物超声可以检测到PDX1肿瘤有明显血流信号;活体激光共聚焦结果显示索拉非尼能明显减低PDX1肿瘤的总血管长度(1 573.00±236.21比2 675.03±162.00, P<0.05)和面积(11 145.33±1 931.97比20 105.37±885.93, P<0.05);免疫组织化学结果显示索拉非尼显著下调CD34(27.55±3.76比45.47±5.57, P<0.05)和血管内皮生长因子(VEGF)(16.33±2.86比22.77±3.20, P<0.05)蛋白表达以及减少微血管密度(38.75±6.01比55.50±8.61, P<0.05);Real-time PCR结果显示索拉非尼明显上调RUNX3基因表达(2.14±0.71比1.00±0.36, P<0.05),索拉非尼组RUNX3基因表达量与VEGF阳性细胞比率呈负相关( R2=0.5097)。 结论:索拉非尼可能通过调控RUNX3-VEGF通路抑制肝癌PDX血管生成进而抑制肝癌生长。
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编辑人员丨5天前
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雷帕霉素激活M2巨噬细胞自噬影响大肠癌放射敏感性的研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨雷帕霉素(RAP)激活M2巨噬细胞(type-Ⅱ macrophage)自噬对大肠癌移植瘤放射敏感性的影响。方法:经佛波酯(PMA)单独及联合人重组白介素4(IL-4)诱导人单核白血病细胞THP-1分化为M0和M2型巨噬细胞。使用RAP激活M2自噬,设置巴弗洛霉素(bafilomycin A1)下调M2已被激活的自噬作为对照。将大肠癌LoVo细胞接种于BALB/c-nu/nu裸鼠,待形成直径10 mm瘤体后,利用随机数表法,将18只裸鼠分为M2自噬未激活组、激活组和激活后下调组,LoVo细胞单独成瘤为阴性对照组,每组6只。对荷瘤鼠行2次8 Gy X射线局部照射,分析各组间移植瘤放射敏感性的变化。结果:M2巨噬细胞标志物Arg-1、CCL-22的相对表达量显著高于M0巨噬细胞( t=78.77、60.02, P<0.05)。M2自噬未激活组瘤体质量、体积和微血管密度(MVD)[(1.93±0.05)g、(2.14±0.06)cm 3、36.37±1.04]较阴性对照组[(1.35±0.05)g、(1.77±0.02)cm 3、25.69±1.34]显著提高( t=20.07、14.56、10.92, P<0.05);激活M2自噬后,瘤体重量、体积和微血管密度均显著下降[(0.89±0.03)g、(1.24±0.01)cm 3、13.60±1.52]( t=44.37、40.32、21.43, P<0.05)。利用巴弗洛霉素下调M2自噬后,瘤体质量、体积和微血管密度有所回升[(1.02±0.07)g、(1.37±0.02)cm 3、21.06±1.41]( t=4.67、13.79、6.23, P<0.05)。与阴性对照组相比,自噬未激活的M2能够抑制Livin和Survivin在瘤体组织中的表达( t=2.64、7.90, P<0.05);RAP激活M2自噬后,可进一步下调上述蛋白的表达( t=5.43、9.39, P<0.05)。利用巴弗洛霉素下调M2自噬后,Livin、Survivin表达量均有所回升( t=2.80、3.17, P<0.05)。 结论:利用RAP激活M2自噬,可抑制M2促进肿瘤微血管形成的能力,从而抑制移植瘤生长;同时,通过下调大肠癌移植瘤中抗凋亡基因Livin与Survivin的表达,诱导大肠癌移植瘤放疗后凋亡的发生,提高大肠癌的放射敏感性。
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编辑人员丨5天前
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结直肠癌c-MET、CXCR4蛋白和微血管密度与肝转移的关系
编辑人员丨5天前
目的:探讨结直肠癌组织中c-MET、CXCR4蛋白和微血管密度(MVD)与结直肠癌肝转移的关系。方法:收集2015年3月至2020年12月于山西省中医院手术切除的结直肠癌组织标本40例、癌旁(距肿瘤边缘5 cm)正常结直肠组织标本10例。40例结直肠癌患者中肝转移15例。采用免疫组织化学法检测各组织中c-MET、CXCR4蛋白及CD34标记的MVD情况,分析三者与肝转移间及三者间的关系。结果:结直肠癌组织中c-MET蛋白阳性率[72.5%(29/40)比30.0%(3/10)]、CXCR4蛋白阳性率[47.5%(19/40)比10.0%(1/10)]及MVD(20.1±5.2比11.5±4.3)均高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。结直肠癌肝转移组中c-MET蛋白阳性率[86.7%(13/15)比64.0%(16/25)]和CXCR4蛋白阳性率[66.7%(10/15)比36.0%(9/25)]均高于无肝转移组,差异均有统计学意义(均 P<0.05);结直肠癌肝转移组中MVD高于无肝转移组(21.5±5.3比12.4±5.7),差异有统计学意义( P<0.05)。在结直肠癌组织中,c-MET与CXCR4蛋白表达正相关( r=0.568, P<0.05),c-MET阳性及CXCR4阳性者MVD值均较阴性者高(均 P<0.05)。 结论:c-MET蛋白、CXCR4蛋白及MVD在结直肠癌肝转移中可能起着重要作用,三个指标可为结直肠癌肝转移的早期诊断及预后预测提供一定的参考。
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编辑人员丨5天前
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肾癌血管新生与肿瘤干细胞的相关性探索
编辑人员丨5天前
目的:探索肿瘤血管新生与肾癌干细胞的相关性。方法:应用细胞原代培养方法提取分离在哈尔滨医科大学附属医院泌尿外科接受手术的肾透明细胞癌患者的肾癌干细胞(RCSCs),随后利用qRT-PCR和Western 印迹方法分别检测不同微血管密度(MVD)肾癌组织来源的肾癌干细胞标志物CD105、Sox2基因和蛋白表达水平。利用TCGA数据库数据,分析肿瘤血管新生标志物与肿瘤干细胞调控基因相关性。结果:高MVD肾癌组织来源的RCSCs中干细胞标志物CD105和Sox2基因分别升高(2.34±1.77)倍和(3.92±1.41)倍( PCD105<0.01, PSox2<0.05),蛋白水平升高(5.12±3.31)倍和(4.90±3.30)倍( PCD105<0.05, PSox2<0.01)。高达30%的干细胞促“干性”调控基因与血管新生基因CD31/PECAM1、KDR存在正相关关系,并且有64个基因同时与CD31/PECAM1和KDR基因存在强正相关关系( r>0.6, P<0.05)。 结论:肾癌高微血管密度与肾癌干细胞存在强相关性。
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编辑人员丨5天前
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紧密连接蛋白-6基因对结肠癌小鼠模型肿瘤生长影响及其表达水平
编辑人员丨5天前
目的:观察紧密连接蛋白(claudin)-6基因对结肠癌小鼠模型肿瘤生长的影响。方法:将40只雄性C57BL/6小鼠(购自西安交通大学实验动物中心)分采用随机对照组原则分为对照组(10只)和模型组(30只),模型组通过腹腔注射氧化偶氮甲烷(AOM)的方式诱导结肠癌模型,将建模成功的小鼠随机分为两组,即模型组(10只)和claudin-6组(10只)。其中claudin-6尾静脉注射claudin-6过表达质粒,每周1次,连续4周。模型组注射等量的阴性对照(NC)质粒,对照组腹腔注射等剂量的生理盐水。干预后将小鼠拉颈处死取出结肠癌组织和正常结肠癌组织,分别检测瘤体的体积和质量。采用苏木精-伊红(HE)染色检测建立模型,采用免疫组织化学染色检测组织中claudin-6蛋白的表达,采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测claudin-6 mRNA的水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测claudin-6蛋白表达水平,采用微血管密度(MVD)检测结肠癌组织为血管生成。采用单因素方差分析(ANOVA)以评估组间差异,两两分析采用 t检验。 结果:干预后claudin-6组的肿瘤体积和质量分别为(0.63±0.18) cm 3和(0.57±0.15) g,均显著降低并低于对照组的(1.61±0.29) cm 3和(1.46±0.34) g( t=6.754、8.695, P<0.05),差异有统计学意义。干预后模型组结肠癌组织中mRNA(1.98±0.21)和claudin-6蛋白(1.27±0.17)水平显著低于对照组(5.68±0.46和3.95±0.31, t=12.357、15.674, P<0.05),claudin-6组的mRNA(3.58±0.32)和claudin-6蛋白(2.46±0.27)水平显著高于模型组(1.98±0.21和1.27±0.17, t=5.647、6.358, P<0.05)。模型组的MVD水平(27.64±5.32)显著高于对照组(7.43±1.74, t=4.847, P<0.05),claudin-6组MVD水平(16.99±4.14)显著高于对照组(7.43±1.74, t=8.472, P<0.05),差异均有统计学意义。 结论:过表达claudin-6具有抑制结肠癌生长和血管生成的作用,提示claudin-6在结肠癌中的抑癌作用。
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编辑人员丨5天前
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术前服用非那雄胺对前列腺电切术后出血的影响研究
编辑人员丨5天前
目的:分析术前服用非那雄胺对于前列腺电切手术术后出血的影响。方法:选取2016年1月至2018年1月在本院收治的良性前列腺增生并行经尿道前列腺电切术(TVRP)治疗的患者110例,将其随机分为观察组和对照组,各55例,其中观察组在术前一周开始每日服用非那雄胺5 mg,对照组未服用非那雄胺。比较两组患者一般资料、术中出血量、术后失血量、术后镜下血尿转阴时间以及术后相关免疫组化治疗检测结果。结果:110例患者均手术成功,无电切综合征及死亡病例,两组患者切除前列腺重量比较,差异无统计学意义( P>0.05),与对照组相比,观察组患者的术中出血量、手术时间、术后冲洗时间、术后冲洗液量及术后失血量均明显减少,差异有统计学意义( P<0.05)。观察组患者术后4、5、6周的镜下血尿转阴率均明显高于对照组,差异有统计学意义( P<0.05)。观察组的微血管密度(MVD)水平明显低于对照组,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)阳性细胞面积均小于对照组( P<0.01)。 结论:术前短期常规服用非那雄胺,能够减少TVRP术中及术后出血并缩短手术时间,值得临床推广。
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编辑人员丨5天前
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MiR-195和DLL4蛋白表达与结直肠癌临床病理特征及预后的关系
编辑人员丨5天前
目的:分析MiR-195与DLL4蛋白在结直肠癌组织中的表达模式,探讨二者与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系。方法:采用实时荧光定量PCR检测miR-195在56例结直肠癌组织中microRNA相对表达量,用Western blot和免疫组化检测DLL4蛋白的表达和肿瘤微血管密度,分析二者表达模式与结直肠癌患者临床病理学指标及预后的关系。采用基因过表达miR-195处理结肠癌细胞系SW480,Western blot检测通路相关蛋白DLL4、Jagged1、Noth受体胞内段、CyclinD1、Hes1、Bcl-2及NF-kB的表达。结果:结直肠癌组织中DLL4蛋白表达水平高于正常结直肠组织,平均为正常结直肠组织中的(2.342±0.004)倍( t=5.323, P=0.018) ;而miR-195表达水平低于正常结直肠组织,平均为正常结直肠组织的(0.277±0.005)倍( t=2.371, P=0.008)。DLL4蛋白表达水平与miR-195表达呈负相关( r=-0.881, P=0.015)。二者表达与结直肠癌的分化程度、淋巴结转移、TNM分期密切相关。DLL4蛋白高表达患者的预后差于DLL4蛋白低表达的患者( P=0.013),miR-195低表达患者的预后差于miR-195高表达患者( P=0.009),差异均有统计学意义。miR-195可阻断Notch通路,其相关蛋白ICN 、Hes-1随作用时间延长而表达下降。 结论:miR-195与Notch拮抗性表达可能与结直肠癌发生发展密切相关,可作为结直肠癌判定预后的新的指标。
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编辑人员丨5天前
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外泌体微小RNA-let-7c靶向结合AGO1调控多发性骨髓瘤血管生成
编辑人员丨5天前
目的:探究多发性骨髓瘤外泌体中微小RNA(miR)-let-7c对血管内皮细胞生物学功能的影响及机制。方法:从多发性骨髓瘤初治患者的骨髓活检标本中原代培养出骨髓瘤内皮细胞,慢病毒感染后建立miR-let-7c过表达或抑制内皮细胞稳染株,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell迁移实验及小管形成实验检测感染后内皮细胞的生物学行为改变,并采用生物学信息技术预测miR-let-7c与argonaute1(AGO1)蛋白的靶向调控区,双荧光素酶报告基因实验论证两者之间的靶向调控作用。构建多发性骨髓瘤移植瘤小鼠模型,采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组移植瘤组织中miR-let-7c的表达水平,免疫组织化学标记内皮细胞表面CD31来计算各组肿瘤微血管密度(MVD);采用蛋白印迹法检测各组移植瘤组织中缺氧诱导因子1α (HIF-1α)、AGO1及血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达;采用qRT-PCR检测各组移植瘤组织中HIF-1α、AGO1及VEGF的mRNA表达。两组均数间用独立样本t检验,两组以上均数的比较用方差分析。结果:用CCK-8试剂盒检测发现,接种后2 d LV3-miR-let-7c mimics组细胞增殖能力较NC组出现明显增强( t=25.185, P<0.05),而LV3-miR-let-7c inhibitor组细胞增殖能力较NC组明显减慢( t=8.708, P<0.05)。通过Transwell迁移实验证实,Mimics组细胞迁移能力较NC组明显增强( t=30.261, P<0.001),Inhibitor组则较对照组明显下降( t=9.459, P<0.01),小管形成实验结果显示,Mimics组细胞体外成管长度较NC组明显增强[(17.861±0.550) mm比(13.632±0.500) mm, t=5.685, P<0.01],而Inhibitor组体外成管长度则较NC组明显下降[(7.180±0.144) mm比(13.632±0.500) mm, t=12.514, P<0.001]。采用蛋白印迹法及qRT-PCR发现,Mimics组VEGF蛋白及mRNA相对水平较NC组明显增加(VEGF蛋白: t=12.720, P<0.001;mRNA: t=12.493, P<0.01),而AGO1蛋白及mRNA水平则较NC组降低(AGO1蛋白: t=6.544, P<0.001;mRNA: t=5.433, P<0.05),Inhibitor组中AGO1蛋白及mRNA水平明显升高(AGO1蛋白: t=7.251, P<0.01;mRNA: t=31.260, P<0.001),而VEGF蛋白及mRNA相对水平则明显降低(VEGF蛋白: t=6.286, P<0.05;mRNA: t=9.221, P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-let-7c mimics+ AGO1 WT组细胞中荧光素酶活性较LV3-NC+ AGO1 WT组明显降低(0.639±0.046比1.012±0.078, t=3.483, P<0.05)。体内实验中,外泌体组中MVD值较对照组明显增加[(11.6±2.51)个/每400倍视野比(5.4±1.67)个/每400倍视野, t=11.513, P<0.01]。外泌体组内HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白水平较对照组明显增加(HIF-1α: t=24.662、19.172, P<0.01;VEGF: t=19.830, P<0.01, t=7.762, P<0.01),而AGO1的mRNA及蛋白水平则相对降低( t=29.154、12.883, P<0.01)。 结论:骨髓间充质干细胞来源外泌体中miR-let-7c可靶向结合AGO1,促进多发性骨髓瘤血管生成。
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编辑人员丨5天前
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含有WW结构域的氧化还原酶的基因在骨肉瘤组织中表达的临床意义及其对骨肉瘤的调控作用
编辑人员丨5天前
目的:探讨含有WW结构域的氧化还原酶的基因(WWOX)在骨肉瘤组织中的表达与患者临床病理特征的相关性,研究WWOX在小鼠中对人骨肉瘤生长和转移的影响及其分子机制。方法:收集2011年1月至2018年12月来自郑州大学第一附属医院的骨肉瘤患者112例,采用免疫组织化学和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨肉瘤组织中WWOX的表达,并分析WWOX表达与骨肉瘤临床病理特征之间的关系,然后建立人骨肉瘤免疫缺陷鼠荷瘤模型,分别注射空白载体、慢病毒载体的WWOX和慢病毒载体的WWOX短发卡RNA(shRNA),比较3组免疫缺陷鼠肿瘤体积变化,荷瘤标本用qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)评估WWOX在小鼠原位瘤和肺转移瘤中的表达情况,CT分析肺转移情况。Western blot检测WWOX敲低组与对照组比较相关蛋白的表达量变化。对计量资料符合正态分布的使用独立样本 t检验进行差异分析,不符合正态分布的使用非参数检验进行差异分析,等级资料使用非参数检验进行差异分析,计数资料使用检验进行差异分析。不同组之间的差异采用one-way ANOVA方法分析。 结果:WWOX的表达与患者年龄、性别和发病部位等临床病理特征无关,而WWOX高表达与较低的微血管密度(MVD)( P<0.05)和较小的肿瘤体积明显相关( P<0.05)。此外,WWOX高表达患者的总生存期(OS)和无病生存期(DFS)均好于WWOX低表达患者( P值均<0.05),差异有统计学意义。瘤内注射WWOX的小鼠原位肿瘤WWOX表达与对照组和GDPAH的比值分别为1.43±0.17和2.31±0.26,表达明显高于对照组,MVD分别为19.34±3.71与11.71±1.72,表达明显低于对照组,肿瘤生长缓慢,肺转移瘤肿瘤个数、WWOX表达和MVD与对照组差异无统计学意义,瘤内注射WWOX shRNA的小鼠原位肿瘤WWOX表达和GDPAH的比值为0.76±0.19,表达明显低于对照组,MVD为28.50±3.44,表达明显高于对照组,肿瘤生长加快,肺转移瘤数量为13.00±4.19,表达明显高于对照组,WWOX表达降低,MVD增加。进一步发现WWOX可通过细胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化调节细胞核增殖抗原(Ki-67)及基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达,并进一步调控骨肉瘤的增殖与侵袭。 结论:WWOX在骨肉瘤中高表达与较好的预后相关,WWOX可以通过ERK信号通路抑制骨肉瘤免疫缺陷鼠荷瘤的生长,抑制骨肉瘤免疫缺陷鼠荷瘤的血管生成和肺转移。
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编辑人员丨5天前
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维A酸衍生物ECPIRM对皮肤T细胞淋巴瘤HH细胞增殖、凋亡的影响及其机制初探
编辑人员丨5天前
目的:探讨维A酸衍生物ECPIRM对人皮肤T细胞淋巴瘤HH细胞的增殖抑制作用及潜在机制。方法:以0(对照组)、5、10、20 μmol/L ECPIRM处理HH细胞72 h,采用CCK8法检测ECPIRM对HH细胞增殖活力的影响,采用流式细胞仪检测ECPIRM对HH细胞凋亡的影响。以10 μmol/L ECPIRM处理HH细胞72 h,采用转录组学测序分析ECPIRM对HH细胞基因表达的调控作用,结合KEGG通路分析和GO功能富集分析比较ECPIRM诱导的差异表达的相关基因。采用反转录qPCR验证相关通路中关键基因的表达变化。组间差异采用单因素方差分析,采用LSD- t检验进行两两比较。 结果:CCK8结果显示,ECPIRM对HH细胞IC50为(4.91 ± 2.48)μmol/L,对照组与5、10、20 μmol/L ECPIRM组HH细胞活力分别为100.00% ± 2.87%、49.58% ± 4.53%、48.36% ± 2.88%、31.44% ± 2.46%,4组细胞活力差异有统计学意义( F=162.86, P < 0.001),5、10、20 μmol/L组细胞活力均低于对照组( t值分别为15.36、15.73和20.89,均 P < 0.001)。流式细胞仪检测结果显示,4组细胞凋亡率差异有统计学意义(11.51% ± 1.84%、23.83% ± 5.72%、36.19% ± 8.33%、49.75% ± 4.10%, F=17.62, P < 0.001),10、20 μmol/L组细胞凋亡率均高于对照组( t值分别为4.46、6.92,均 P < 0.01)。转录组学分析发现,ECPIRM诱导的增殖抑制作用可能与类固醇的代谢调控有关。反转录qPCR验证发现,10 μmol/L ECPIRM组L-氨基酸氧化酶(IL4I1)、乙酰辅酶A乙酰转移酶2(ACAT2)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶1(HMGCS1)、甲羟戊酸二磷酸脱羧酶(MVD)、3-β-羟基类固醇-8,7-异构酶(EBP)、极低密度脂蛋白受体(VLDLR)、3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)mRNA相对表达与对照组比较明显受到抑制(均 P < 0.05)。 结论:维A酸衍生物ECPIRM对HH细胞可发挥显著的抗增殖及凋亡诱导作用,其机制可能与类固醇代谢关键基因的表达抑制有关。
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编辑人员丨5天前
