多黏菌素是治疗多重耐药革兰阴性菌感染的一线药物.多黏菌素的肾毒性是限制其临床剂量的主要因素,其肾毒性是由多黏菌素于肾近端小管处广泛重吸收后在肾脏中蓄积引起,多黏菌素跨细胞膜进入肾小管细胞的这一过程可能由一到多个转运体介导产生.该文综述多黏菌素在肾小管上皮细胞处重吸收所涉及到的多个肾脏转运体及其作用机制,以期为降低多黏菌素肾毒性的相关研究提供参考.

目的 观察膜转运体Megalin、Cubilin在发生发育小鼠肾内的分布,从而揭示它们在肾发生发育中相应功能分化的时空规律.方法 C57BL/6小鼠按雌雄1:1合笼饲养,并于胚(胎)龄(Ed)E10、12、14、16、18 d,及生后日龄(Pd)P1、3、7、14、28、42 d,分离胎鼠、仔鼠或成鼠的肾脏.应用改良的块染技术对不同发育阶段的肾脏组织进行整体固定及染色,分别进行常规石蜡包埋,制成连续的石蜡切片(5μm).选取连续切片中目标切片,采用免疫组织化学技术和免疫荧光技术对不同发育阶段的小鼠肾脏膜转运体Megalin和Cubilin进行定位,观察其在不同发育阶段的表达情况.结果 Megalin和Cubilin在E10 d的中肾管上皮细胞开始有表达,E12 d时表达于肾脏输尿管芽上皮细胞的近腔面游离缘,二者主要以共表达模式存在.E14 d以后在发生发育小鼠肾脏的"逗号"小体、"S"型小体上皮细胞的游离缘呈弱表达,于肾脏近端小管的上皮细胞游离缘表达明显,偶尔可见在未发育成熟的血管球有弱表达.Megalin和Cubilin在细段、远端小管、集合管系统以及间质部分都未见表达.结论 膜转运体Megalin和Cubilin在中肾管、输尿管芽、"逗号"小体、"S"型小体,以及近端小管的依次表达规律提示小鼠肾脏在中肾形成时期就开始有蛋白或多肽的转运功能.此外,二者稳定地出现在较为成熟的近端小管,较弱地出现在未成熟近端小管,表明其重吸收蛋白质的功能与近端小管结构的成熟度有关.

糖尿病肾病是造成终末期肾脏病的主要原因之一并导致糖尿病患者的死亡率不断增加.早期诊断和治疗是改善预后的关键.目前多用微量白蛋白尿和肾小球滤过率综合评价,但微量白蛋白尿的敏感性和特异性不强,肾小球滤过率在正常偏高水平时检测较为困难.因此,近几年很多研究致力于寻找检测糖尿病肾病和预测肾功能下降的早期标志物,包括足细胞标记蛋白、WilmsTumor-1、胱抑素C、megalin和cubilin、肝脏脂肪酸结合蛋白、尿微小RNA、尿蛋白质组学、中性粒细胞趋化因子、维生素D结合蛋白、骨诱导因子和骨膜蛋白等.

目的:研究GLP-1对糖基化终末产物(AGEs)引起人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤的影响及机制.方法:将HK-2细胞分成4组:正常对照组,AGEs处理组,AGEs+GLP-1处理组和AGEs+Insulin处理组,分别培养24h.检测各组细胞对荧光标记白蛋白的吸收能力.结果:与正常组相比,AGEs处理组细胞吸收白蛋白的能力减弱,与重吸收相关的通道蛋白Megalin和Cubilin表达降低.AGEs+GLP-1处理组细胞吸收白蛋白的能力与正常对照组相似,给予胰岛素无明显保护作用,与AGEs处理组无差别.进一步研究发现,AGEs处理组较正常对照组的PKA表达降低,PKC表达升高;同时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)升高,超氧化物歧化酶(SOD)降低.给予GLP-1可减轻AGEs的作用.采用信号通路激活剂或阻断剂后发现,抑制PKA或激活PKC可以拮抗GLP-1对iNOS和SOD的调节作用.结论:GLP-1可能通过调节PKA和PKC水平降低AGEs引起的肾小管上皮细胞氧化应激,从而维持通道蛋白的表达,改善细胞对白蛋白的重吸收功能.

目的 动态观察OLETF大鼠在NGT、IGT、糖尿病及DKD期肾组织结构及功能变化,探讨IR参与其中的作用.方法 按OGTT血糖水平及24 h尿微量白蛋白(24 hUMA)结果将OLETF大鼠分为NGT、IGT、DM、DKD组,8只LETO大鼠为对照(Con)组.每2周测FIns、24 hUMA、N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、视黄醇结合蛋白(RBP)、胱抑素C(Cys-C).HE染色 、透射电镜观察大鼠肾脏病理学改变;免疫组织化学检测胰岛素受体底物1(IRS-1)、丝氨酸磷酸化IRS-1(pSer IRS-1)及肾小管重吸收蛋白受体megalin、cubilin的表达.结果 IGT组FIns、NAG、NGAL、RBP、Cys-C高于Con组及NGT组(P<0.05),病理出现明显肾小管及间质损伤;IGT组IRS-1、megalin、cubilin低于Con组及NGT组,pSer IRS-1高于Con组及NGT组.结论 OLETF大鼠在IGT期就出现明显肾脏损伤,以肾小管及间质损伤为主要表现,IR可能参与其发病.

目的 观察山莨菪碱对横纹肌溶解引发急性肾小管上皮细胞溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)和组织蛋白酶B(Cathepsin B)表达的影响并探讨其机制.方法 63只雄性SD大鼠随机均分为对照组、模型组和给药组.模型组和给药组采用甘油肌注法建立横纹肌溶解致急性肾损伤大鼠模型,给药组建模前腹腔注射山莨菪碱(1 mg/kg).甘油肌注后不同时点,HE染色观察肾组织病理学变化;检测肾功能指标[尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、肌酸激酶(CK)]、血清肌红蛋白(Mb)水平及肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量.甘油肌注诱导急性肾损伤24 h时,采用免疫组化法和Western blot法检测肾组织中LAMP2、Cathepsin B、Megalin蛋白的表达.结果 HE染色示模型组大鼠发生明显肾脏损伤,山莨菪碱给药后肾脏损伤情况明显改善.模型组在甘油肌注24 h和48 h的Scr、12 h和24 h的BUN、6 h的CK、24 h的Mb均高于对照组,而给药组上述各时点的指标水平均低于模型组(P<0.05).给药组甘油肌注6 h和12 h的MDA含量低于模型组,而SOD活性高于模型组(P<0.05).甘油肌注24 h时,免疫组化和Western blot结果显示,模型组LAMP2、Cathepsin B、Megalin蛋白表达水平高于对照组,而给药组LAMP2、Cathepsin B、Megalin蛋白表达水平均低于模型组(P<0.05).结论 山莨菪碱可能通过减少Mb的生成,下调肾组织内LAMP2和Cathepsin B的表达以及抑制氧化应激反应发挥其肾脏保护作用.

[目的]探讨益肾化湿颗粒对自发型2型糖尿病db/db小鼠早期肾小管损伤的作用.[方法]6～7周龄SPF级雄性自发型2型糖尿病db/db小鼠18只,随机分为模型组、缬沙坦组[13.33 mg/(kg·d)]、益肾化湿组[5 g/(kg·d)],每组6只,另设雄性非糖尿病db/m小鼠6只为正常组.正常组及模型组予去离子水10 mL/(kg·d)]灌胃,连续干预12周.代谢笼收集24 h尿液行24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)及中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测.12周后小鼠麻醉取血,全自动生化分析仪检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平.取肾组织行PAS染色后光镜观察病理改变;免疫组化(IHC)检测肾小管上皮细胞megalin、cubilin蛋白表达强度.[结果]与模型组比较,益肾化湿颗粒干预后db/db小鼠血液UA、LDL水平下降(P<0.05),24 h-UTP及尿液NGAL水平下降(P<0.05,P<0.01),PAS染色提示系膜基质增生及小管损伤减轻,肾小管上皮细胞megalin、cubilin蛋白表达增加,Image Pro Plus 6.0软件统计,益肾化湿组肾小球系膜基质指数下降(P<0.01),megalin、cubilin平均光密度值升高(P<0.05).[结论]益肾化湿颗粒可以上调db/db小鼠肾小管上megalin、cubilin蛋白的表达从而减少尿蛋白的形成,起到保护肾小管的作用.

分析陕西省分离的9株乙脑病毒基因组序列特征.使用乙脑病毒全基因组序列测定引物进行RT-PCR扩增,扩增产物进行测序,拼接后获得基因组序列.利用MEGA 4.1、MegAlin、MEGA7.0等软件进行毒株的系统进化分析,并与P3株、减毒活疫苗SA14-14-2株及覆盖5个基因型别的其他乙脑病毒进行E基因序列比对.9株分离株3株分离自猪舍、6株分离自羊舍,其中4株获得全基因组序列,5株测得E基因序列.基于E基因序列进行毒株核苷酸、氨基酸同源性比较,结果显示分离株均与基因Ⅰ型GI-b亚型毒株核苷酸和氨基酸同源性最高,核苷酸同源性范围为96.5％～99.7％、氨基酸同源性范围99.2％～100.0％;与SA14-14-2株核苷酸同源性范围为87.5％～88.9％、氨基酸同源性范围96.3％～97.2％;与P3株核苷酸同源性范围为87.6％～88.1％、氨基酸同源性范围96.7％～97.6％.分析09年(陕南地区)分离株与18年(关中地区)分离株的E基因核苷酸差异率为1.8％～2.9％、氨基酸差异率为0％～0.8％.陕西省自然界中循环的乙脑病毒以基因 Ⅰ 型为主,与P3株在抗原毒力关键位点无差异,病毒相对保守.病毒分子生物学特征及分离生境提示我省需注意多种类乙脑传播媒介和宿主的防控.

目的 探讨Numb对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)复合物1(mTORC1)信号通路活性的影响及潜在的分子机制.方法 建立Numb-siRNA转染和/或顺铂诱导的雄性BALB/c小鼠急性肾损伤模型,分为4组:NC-siRNA、Numb-siRNA、NC-siRNA+顺铂、Numb-siRNA+顺铂.免疫组化检测肾脏Numb、Megalin的表达与分布;Western blot检测各组动物肾脏中Numb、S6、p-S6、S6K1、p-S6K1、4EBP1、p-4EBP1的蛋白表达.分离培养Numb-siRNA转染的小鼠原代近端肾小管上皮细胞.体外建立Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激的大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞模型,分为NC-siRNA组、Numb-siRNA组、NC-siRNA+氨基酸刺激组和Numb-siRNA+氨基酸刺激组.Western blot检测各组细胞Numb、S6、p-S6的蛋白表达,检测沉默Numb表达前后的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及原代近端肾小管上皮细胞中AMPK、p-AMPK的蛋白表达.V1G1过表达及空白对照慢病毒感染、Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激NRK-52E细胞,分为NC-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组、Numb-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组及Numb-siRNA+V1G1过表达慢病毒+氨基酸刺激组;Western blot检测V1G1、S6、p-S6的蛋白表达.结果 与NC-siRNA组相比,Numb-siRNA组小鼠肾脏近端肾小管上皮细胞Numb及p-S6的蛋白表达均下调(P<0.05),但不影响近端小管标记蛋白Megalin的表达与分布;与对照组小鼠相比,顺铂处理组小鼠肾脏p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达均上调(P<0.05),而Numb-siRNA处理组小鼠抑制顺铂介导的p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达水平的上调(P<0.05).在NRK-52E细胞中,与氨基酸饥饿组相比,氨基酸刺激组细胞p-S6的蛋白表达上调(P<0.05),而转染Numb-siRNA的细胞中Numb及p-S6的蛋白表达较对照组均下调(P<0.05);在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及小鼠原代近端肾小管上皮细胞中,p-AMPK的蛋白表达均下调(P<0.05);在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞中,V1G1的蛋白表达下调(P<0.05),上调NRK-52E细胞中V1G1的蛋白表达,可以逆转Numb沉默介导的p-S6的降低(P<0.05).结论 Numb可通过上调V1G1的蛋白表达促进近端肾小管上皮细胞mTORC1信号通路的活化.

The growth and development of metabolous insects are mainly regulated by ecdysone and juvenile hormone.As a member of the low-density lipoprotein receptor(LDLR)family,megalin(mgl)is involved in the lipoprotein transport of cholesterol which is an essential precursor for the synthesis of ecdysone.Despite extensive studies in mam-mals,the function of mgl is still largely unknown in insects.In this study,we character-ize the function of mgl in the silkworm Bombyx mori,the model species of Lepidoptera.We find that mgl is broadly present in the genomes of lepidopteran species and evolved with divergence between lepidopterans and Drosophila.The expression pattern suggests a ubiquitous role of mgl in the growth and development in the silkworm.We further per-form clustered regularly interspaced palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated protein 9-based mutagenesis of Bmmgl and find that both the development and the silk production of the silkworm are seriously affected by the disruption of Bmmgl.Our results not only explore the function of mgl in Lepidoptera but also add to our understanding of how cholesterol metabolism is involved in the development of insects.