目的:对肺炎克雷伯菌(KP)中标注的氨基肽酶(PepA)进行序列扩增与蛋白表达，鉴定其酶活特性。方法:根据(美国)国家生物技术信息中心(NCBI)公布的KP PepA基因序列(Reference Sequence：NZ_CP045783.1)设计扩增引物，以本科室前期分离到的一株KP基因组为模板，通过聚合酶链反应(PCR)扩增出PepA基因全长，使用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后连接至表达载体pET-30a。将重组质粒pET-30a-PepA转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达出KP PepA蛋白，使用N 2＋层析柱对重组His标签蛋白进行纯化。以亮氨酸-对硝基苯胺(Leu-pNA)为底物，测定KP PepA对其水解能力，并摸索不同的反应温度和pH值条件对水解反应的影响。在反应体系中加入不同二价金属离子，观察各离子对KP PepA氨基肽酶活性的作用。组间比较采用 t检验。 结果:扩增出长度为1 527 bp的KP PepA基因，并获得可溶性KP PepA蛋白，大小为56.1×10 3，与预测大小一致。KP PepA加入组反应产物pNA浓度显著高于KP PepA不加组[(205.00±5.00) μmol/L比(8.00±2.00) μmol/L， t＝63.36， P<0.01]，表明重组KP PepA可以水解Leu-pNA。KP PepA水解Leu-pNA的最适温度为37 ℃，最适pH值为pH 8.0。Co 2＋、Mn 2＋均可以提高KP PepA酶活性，其中Co 2＋激活作用最强，加入Co 2＋组的相对酶活性显著高于不加离子组(181.70±7.64比95.00±0.00， t＝16.44， P<0.01)；Zn 2＋、Fe 2＋均可以抑制KP PepA酶活性，其中Zn 2＋抑制作用最强，加入Zn 2＋组的相对酶活性显著低于不加离子组(44.67±8.97比95.00±0.00， t＝8.49， P<0.01)。 结论:肺炎克雷伯菌中标注的PepA具有体外氨基肽酶活性。

目的：:初步探索正常人瞳孔对光反射曲线的生物力学模型，了解各分量参数与年龄的关系。方法：:系列病例研究。使用Oculus Keratograph 4角膜地形图仪的Pupillometer程序收集2015年2月至2018年7月在温州医科大学附属眼视光医院视光诊疗中心就诊的143名眼部正常受试者一眼的瞳孔对光反射曲线数据，将曲线数据代入Matlab编制的生物力学模型方程，使用逐次逼近法进行拟合求解，获得瞳孔开大肌和瞳孔括约肌的弹性系数和黏滞系数；获得交感神经和副交感神经的静息、冲动神经量和神经冲动发生的延迟时间。各模型参数与年龄、瞳孔直径（PD）的关系使用相关分析和多元线性回归分析。结果：:143名受试者中男65名，女78名，年龄（45.3±22.6）岁，PD为（5.58±1.06）mm，瞳孔括约肌弹性系数 kc为（0.29±0.29）mN/（g·mm 2），瞳孔括约肌静息半径 L0c为（0.89±0.05）mm，瞳孔开大肌弹性系数 kd为（1.27±1.08）mN/（g·mm 2），瞳孔开大肌静息长度 L0d为（3.40±0.28）mm，虹膜肌肉黏滞系数D为（3.57±0.15）mN·s/（g·mm），副交感神经冲动分量 fp为（134.77±33.23）mN/g，交感神经冲动分量 fs为（1.26±1.84）mN/g，副交感神经静息分量 fp0为（0.19±0.26）mN/g，交感神经静息分量 fs0为（0.09±0.12）mN/g，副交感神经冲动延时 tp为（1.15±0.10）s，交感神经冲动延时 ts为（2.14±0.36）s。其中，随年龄增加而增加的瞳孔对光反射参数为 Kc，随年龄增加而减小的瞳孔对光反射参数有PD、 kd、 L0d、 fp、 tp，使用对光反射模型预测PD的多元线性回归方程为：PD=2.9585-0.0099×年龄+0.0059× fp+1.3259× fs0-1.4853× kc+0.3006× kd+1.0159× L0d（ F=79.906， P<0.001）。 结论：:本研究通过建立虹膜生物力学模型，获取正常人的虹膜黏滞系数、交感及副交感神经在瞳孔对光反射中的具体数值，有利于对虹膜或自主神经相关疾病的研究。

目的:分析影响紫外荧光法测量饮用水中铀准确性的因素、分析测量过程中不确定度，实现饮用水中铀的快速、准确测量。方法:通过研究饮用水中不同酸度、不同Fe 3+含量和Mn 2+含量条件下对测量结果的影响，分析该方法的最佳测量条件。通过低中高3种浓度的加标样品研究标准品配制、样品前处理、测量等过程引入的误差，分析不确定度来源，进行不确定度合成。 结果:当水溶液pH＝1~11时所绘制的标准曲线，其线性回归系数>0.995，符合仪器的线性测量范围。当pH为12左右时，其线性回归系数为0.761，不满足测量要求。当pH<3或pH>10时，荧光计数增加量低，或可导致测量误差增大。当Fe 3+含量≥15 mg/L时，测量值有很大偏差，严重影响测量结果。当Mn 2+含量≥1.6 mg/L时，样品产生白色沉淀，影响测量准确性。结果的合成相对标准不确定度分别为6.42×10 -2、4.48×10 -2、5.26×10 -2μg/L，扩展不确定度分别为0.03、0.06、0.12 μg/L( k＝2)。 结论:该分析方法测量饮用水中铀的最佳条件为待测样品pH值3~10，Fe 3+浓度应<15 mg/L，Mn 2+浓度≤1.6 mg/L。不确定度评价中重复测量误差和加入标准溶液体积是紫外荧光法测量水中铀不确定度的主要来源。

患者男性，43岁。以水肿起病，查24h尿蛋白定量4.66 g，抗M型磷脂酶A 2受体（PLA 2R）抗体水平25.3 EU/ml，肾脏穿刺病理确诊特发性膜性肾病（MN）。初期口服泼尼松40 mg每日1次，环孢素A 100 mg每日2次治疗，部分缓解后复发，联合环磷酰胺100 mg每日1次口服无效，监测24h尿蛋白定量升至10.8 g，抗PLA 2R抗体水平升至496 RU/ml，CD19 +B细胞计数71个/μl，遂分别予3次利妥昔单抗1 g静脉输液治疗，并先后停用环孢素A、环磷酰胺及泼尼松。末次随访CD19 +B细胞0个/μl，抗PLA 2R抗体阴性，血白蛋白34 g/L，24 h尿蛋白定量4.4 g。本例患者提示了利妥昔单抗在难治性膜性肾病中的治疗效果，以CD19 +B细胞计数或抗PLA 2R抗体水平作为再次使用利妥昔单抗治疗的指征，需进一步思考。

Background::Investigations of the pathogenic mechanisms in motor neurons (MNs) derived from amyotrophic lateral sclerosis (ALS) disease-specific induced pluripotent stem (iPS) cell lines could improve understanding of the issues affecting MNs. Therefore, in this study we explored mutant superoxide dismutase 1 (SOD1) protein expression in MNs derived from the iPS cell lines of ALS patients carrying different SOD1 mutations.Methods::We generated induced pluripotent stem cell (iPSC) lines from two familial ALS (FALS) patients with SOD1-V14M and SOD1-C111Y mutations, and then differentiated them into MNs. We investigated levels of the SOD1 protein in iPSCs and MNs, the intracellular Ca 2+ levels in MNs, and the lactate dehydrogenase (LDH) activity in the process of differentiation into the MNs derived from the controls and ALS patients’ iPSCs. Results::The iPSCs from the two FALS patients were capable of differentiation into MNs carrying different SOD1 mutations and differentially expressed MN markers. We detected high SOD1 protein expression and high intracellular calcium levels in both the MN and iPSCs that were derived from the two SOD1 mutant patients. However, at no time did we observe stronger LDH activity in the patient lines compared with the control lines. Conclusions::MNs derived from patient-specific iPSC lines can recapitulate key aspects of ALS pathogenesis, providing a cell-based disease model to further elucidate disease pathogenesis and explore gene repair coupled with cell-replacement therapy. Incremental mutant expressions of SOD1 in MNs may have disrupted MN function, either causing or contributing to the intracellular calcium disturbances, which could lead to the occurrence and development of the disease.

目的:探讨胚胎早期发育动态表型和动力学参数是否受培养液组分差异的影响。方法:回顾性队列研究分析广西壮族自治区人民医院生殖医学与遗传中心2016年10月至2018年12月期间收治的体外受精（ in vitro fertilization，IVF）周期患者的临床资料，根据使用的培养液品牌不同，将IVF周期分为Cook组和Vitrolife组，经1∶1倾向性评分匹配后，每组纳入59个，采用延时成像技术分析正常受精卵裂胚胎授精后68 h内的早期发育形态动力学。记录胚胎发育动态表型，比较两组胚胎7种发育动态表型构成的差异；计算正常表型胚胎的13个早期发育动力学参数，比较两组之间动力学参数的差异；基于两个已发表的time-lapse胚胎筛选模型，比较两组正常动态表型胚胎的等级分布差异。 结果:①Cook组胚胎发育动态表型构成如下：正常表型54.0%、胞质异常波动（abnormal first cytokinesis，A1 cyt）3.0%、不规则卵裂（abnormal cleavage，AC）17.4%、逆向卵裂（reverse cleavage，RC）5.2%、无序卵裂（chaotic cleavage，CC）3.2%、多核（multinucleation，Mn）3.5%以及混合表型13.7%；Vitrolife组胚胎发育动态表型构成如下：正常表型49.3%、A1 cyt 4.0%、AC 19.1%、RC 7.5%、CC 2.1%、Mn 6.4%以及混合表型11.6%，两组间表型构成差异没有统计学意义（ P>0.05）。②相较于Vitrolife组，Cook组正常动态表型胚胎13个发育动力学参数（tPNa、tPNf、t2、t3、t4、t5、t6、t7、t8、cc2、s2、t5_PNf和t8_PNf）均略长，授精后68 h胚胎平均卵裂球数略少，但差异均无统计学意义（均 P>0.05）。③基于模型A，Vitrolife组与Cook组胚胎等级分布差异没有统计学意义（ P>0.05）；基于模型B，两组胚胎等级分布差异存在统计学意义（ P=0.040），其中Vitrolife组A +级胚胎比例较Cook组高［59.8%（125/209）比43.3%（94/217）］，而C级胚胎比例较Cook组低［9.6%（20/209）比20.3%（44/217）］。 结论:胚胎早期发育动态表型及动力学参数不受Cook与Vitrolife序贯培养液差异的影响，但不同time-lapse胚胎筛选模型对不同培养液体系的适用性存在差异，选择或建立模型时应充分考虑所使用的胚胎培养液体系。

目的:考察多种微量元素对新生儿肠外营养液中脂肪乳稳定性的影响，评估过滤前后稳定性指标的变化。方法:以1.5 kg体重为标准，设计7组含不同浓度多种微量元素的新生儿肠外营养液，包括空白组（不含多种微量元素）、正常剂量组［1 ml/kg，每100 ml 肠外营养中加入0.75 ml］和5个试验组（每100 ml肠外营养中分别加入1.5、3、4.5、6和7.5 ml），在配制后0 h、24 h时进行外观考察，应用动态光散射法测定过滤前后脂肪乳平均粒径（mean droplet diameter，MDD），采用光阻法测定过滤前后脂肪乳粒径>5 μm的乳粒百分比（percentage of fat residing in globules larger than 5 μm，PFAT5）及粒径分布。结果:7组肠外营养液在配制后24 h内肉眼观察外观颜色无变化，无分层、挂壁等现象。在24 h内，所有肠外营养液过滤前MDD波动于（338.67±6.11）nm~（370.00±15.13）nm，PFAT5值波动于（32.00±1.00）×10 -3% ~（85.67±6.81）×10 -3%，过滤后MDD波动于（310.67±8.62）nm~（362.33±19.86）nm，PFAT5值波动于（4.67±1.15）×10 -3% ~（17.33±0.58）×10 -3%。多种微量元素的浓度与PFAT5值呈正相关（ P<0.05）。放置24 h后，PFAT5值和t=0 h时比较，差异有统计学意义（ P=0.004）。过滤前后的PFAT5值比较，差异有统计学意义（ P=0.000）。 结论:在室温下24 h内，新生儿肠外营养液中添加不同浓度的多种微量元素后，其外观无改变，脂肪乳的MDD均在安全范围内；但当一价阳离子（Na +、K +）浓度为38.9 mmol/L，二价阳离子（Ca 2+）浓度为5 mmol/L，微量元素（Zn 2+、Cu 2+、Mn 2+、Se 4+）浓度超过0.063 mmol/L时，PFAT5值大于0.05%，需经1.2 μm的过滤器过滤，可显著降低PFAT5值以及粒径分布，提高肠外营养液临床应用的安全性和规范性；建议添加多种微量元素注射液（I）的新生儿肠外营养液需进行终端过滤。

目的 基于Janus激酶2(JAK2)/转录激活子3(STAT3)通路探讨杜鹃素对高盐诱导的小鼠脑基底动脉炎症和肌张力异常的抑制作用及其分子机制.方法 用喂养高盐饲料的方法建立高盐模型.将50只C57BL/6J小鼠随机分成正常组(正常饲养)、模型组(高盐饲料)、低剂量实验组(高盐饲料+灌胃12.5 mg·kg-1·d-1杜鹃素)、中剂量实验组(高盐饲料+灌胃25 mg·kg-1d-1杜鹃素)、高剂量实验组(高盐饲料+灌胃50 mg·kg-1d-1杜鹃素),每组10只,干预12周.用微血管张力测定仪检测小鼠脑基底动脉对血管收缩剂的收缩反应;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎性细胞因子水平;用蛋白质印迹法检测基底动脉组织JAK2/STAT3通路的相关蛋白表达.结果 正常组、模型组和低、中、高剂量实验组脑基底动脉对60 mmol·L-1氯化钾(KCl)的收缩幅度分别为(2.19±0.13)、(2.66±0.11)、(2.52±0.09)、(2.41±0.08)和(2.25±0.10)mN;对10-5 mol·L-1血管加压素(AVP)的收缩幅度分别为(1.98±0.09)、(2.46±0.08)、(2.33±0.12)、(2.11±0.10)和(2.05±0.06)mN;对2.5 mmol·L-1 氯化钙(CaCl2)的收缩幅度分别为(1.77±0.08)、(2.09±0.09)、(2.03±0.08)、(1.94±0.05)和(1.86±0.06)mN;血清中白细胞介素(IL)-1β水平分别为(10.10±3.21)、(47.28±4.78)、(40.16±3.98)、(35.87±4.12)和(20.32±3.17)pg·mL-1;肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平分别为(60.26±5.43)、(134.32±4.15)、(110.65±3.56)、(90.79±5.25)和(81.54±6.23)pg·mL-1;趋化因子配体 3(CCL3)水平分别为(68.93±4.16)、(146.37±5.73)、(128.29±4.38)、(100.25±6.82)和(84.16±3.89)pg·mL-1;脑基底动脉组织JAK2表达水平分别为 0.52±0.05、1.28±0.07、1.11±0.06、0.88±0.09 和0.75±0.04;STAT3 表达水平分别为 0.58±0.07、1.93±0.10、1.62±0.04、1.34±0.06和 0.88±0.09.模型组上述指标与正常组比较,均显著增高,差异均有统计学意义(均P＜0.01).中、高剂量实验组上述指标与模型组比较,均显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 杜鹃素可能通过下调JAK2/STAT3通路改善高盐致小鼠脑基底动脉炎症和肌张力异常.

目的 研究多巴胺能神经元SIRT3表达对小胶质细胞活化所致其炎症损伤的抵抗作用及相关机制.方法 建立多巴胺能神经元MN9D细胞与小胶质细胞BV-2共培养体外炎症损伤模型.将MN9D细胞分为对照组、模型组、SIRT3组、SIRT3+PJ34(PARP-1抑制剂)组.实时定量聚合酶链式反应分析mRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1法检测线粒体膜电位变化,酯化钙黄绿素与氯化钴共孵育法分析线粒体通透性转运孔(mPTP)开放情况,Western blot检测蛋白表达情况.结果 与模型组比较,SIRT3过表达则使SIRT3组MN9D细胞的凋亡率明显降低,SIRT3和SOD2基因表达明显增多,PARP-1、TNF-α及IL-1 β蛋白表达明显减少,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值明显变小,线粒体膜电位上升,mPTP开放和ROS生成减少,组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05);SIRT3+PJ34 组 MN9D 细胞 PARP-1 活性抑制后,除SIRT3和IL-1β蛋白表达变化不明显外,其它考察指标的变化趋势在SIRT3组基础上进一步增大,两组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 SIRT3表达能够缓解小胶质细胞激活所致多巴胺能神经元的炎症损伤,机制可能与其改善线粒体功能,减少ROS生成抑制PARP-1活性及NF-κB信号通路有关.

目的 探讨奥妥珠单抗(Obinutuzumab,OBZ)对有中高危进展风险的磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)相关性膜性肾病(membranous nephropathy,MN)治疗的有效性及安全性.方法 选取 2022年 1月至 2022年 11月在武汉大学人民医院肾内科确诊为原发性膜性肾病(primary membranous nephropathy,PMN)且接受OBZ治疗、资料完整的 10例患者,收集患者的基本信息、病史资料、24 h尿蛋白定量(24 hours urinary total protein,24 hUTP)、血生化、细胞免疫、体液免疫等指标,使用Graphpad Prism 9.4.1软件进行统计学分析,符合正态分布的计量资料采用±进行统计描述,组间差异用配对样本的非参数检验法进行统计比较.结果 根据改善ˉxs全球肾脏病预后组织定义肾脏部分缓解(partial response,PR)和完全缓解(complete response,CR),其中随访至 1个月时 4例患者达到PR;随访至 6个月时 6例患者达到PR,1例患者达到CR;随访至14个月时,1例患者达到PR,7例患者达到CR,PR+CR缓解率达 80%.安全性:7例患者无输液反应,3例患者在第一次输注OBZ后出现输液反应,经处理后均顺利完成治疗.不良反应:3例患者在OBZ治疗后 1个月内并发感染,但感染均已治愈.结论 OBZ对PLA2R相关性MN具有较好的治疗效果,不良反应小,安全性较好.