目的:观察胡桃醌(Juglone)对野百合碱(MCT)诱导肺动脉高压(PAH)大鼠内皮间充质转化(EndoMT)的影响。方法:采用随机数字表法将30只Sprague Dawley (SD)大鼠分为3组：正常对照组(Con)，PAH组，Juglone组，每组10只。通过MCT建立PAH模型。Juglone组于MCT干预2周后每天给予Juglone腹腔内注射；4周后，检测右心室收缩压(RVSP)及右心肥厚指数(RVHI)，并用苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肺血管形态的改变；免疫荧光法测定大鼠肺小动脉壁中α-肌动蛋白(α-SMA)和血管性血友病因子(vWF)的表达；蛋白印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织EndoMT相关蛋白的表达水平。多组间均数比较采用单因素方差分析。结果:PAH组大鼠体重低于Con组[(273.00±39.12) g比(408.90±17.63) g， q＝15.774， P<0.05]，而RVSP及RVHI则高于Con组[(39.66±5.26) mmHg、(44.02±5.47)%比(18.71±1.72) mmHg、(22.96±3.50)%， q＝17.255、16.126， P<0.05]；Juglone组大鼠体重高于PAH组[(346.30±16.12) g比(273.00±39.12) g， q＝8.320， P<0.05]，RVSP及RVHI则低于PAH组[(23.16±3.29) mmHg、(34.03±2.04)%比(39.66±5.26) mmHg、(44.02±5.47)%， q＝13.289、7.480， P<0.05]。HE染色示，PAH组肺小动脉管壁增厚；内皮细胞大部分脱落，部分空泡变性。Juglone干预后管壁明显变薄；内皮细胞分布均匀。免疫荧光染色示Con组内皮层vWF表达为强阳性，未见α-SMA表达；PAH组内皮层vWF表达减弱，α-SMA为表达加强，出现vWF和α-SMA的双阳性染色，Juglone组内皮层vWF表达增强，α-SMA表达减弱，双阳性染色细胞明显减少。Western blot示，PAH组中vWF，血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)相对表达量低于Con组(0.54±0.17比0.83±0.01、0.61±0.16比1.06±0.03， q＝4.517，8.231， P<0.05)；Juglone组vWF，VE-cadherin蛋白相对表达量高于PAH组(0.78±0.09比0.54±0.17、0.84±0.02比0.61±0.16， q＝3.738、4.207， P<0.05)；PAH组中波形蛋白(Vimentin)、α-SMA、脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)相对表达量高于Con组(1.10±0.05比0.70±0.09、0.94±0.07比0.53±0.06、1.01±0.07比0.48±0.01， q＝7.965、9.547、11.416， P<0.05)；Juglone组Vimentin、α-SMA、Pin1相对表达量低于于PAH组(0.86±0.11比1.10±0.05，0.63±0.09比0.94±0.07、0.73±0.12比1.01±0.07， q＝4.779、7.218、6.031， P<0.05)。 结论:胡桃醌能够减轻MCT诱导的PAH，其机制可能与其通过抑制Pin1进而抑制肺动脉EndoMT有关。

目的:探讨脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)及其抑制剂胡桃醌(Juglone)对肺动脉高压(PAH)的影响及作用机制。方法:将8周龄雄性SD大鼠按随机数目表法分配原则分为3组：正常对照组(Con)、PAH组、Juglone组，每组8只。野百合碱建立大鼠PAH模型。Juglone组在造模14 d后开始给予Juglone干预，4周后测定右心室收缩压(RVSP)，处死动物并取材，计算右心肥厚指数(RVHI)。苏木精-伊红(HE)染色观察肺血管病理学改变；免疫荧光染色检测Pin1在PAH中的表达；蛋白印迹法(Western blot)检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及S期激酶相关蛋白(Skp2)/p27通路蛋白的表达。多组间均数比较采用单因素方差分析。结果:PAH组大鼠体重低于Con组[(303.11±20.41) g比(418.83±26.77) g， q＝12.912， P<0.01]，而RVSP及RVHI则高于Con组[(39.83±2.31) mmHg、(40.49±3.12)%比(17.03±2.12) mmHg、(23.52±1.61)%， q＝28.291、16.105， P<0.01]；Juglone组大鼠体重高于PAH组[(349.73±21.96) g比(303.11±20.41) g， q＝5.204， P<0.01]，RVSP及RVHI则低于PAH组[(26.89±1.92) mmHg、(31.40±3.76)%比(39.83±2.31) mmHg、(40.49±3.12)%， q＝16.063、8.637， P<0.01]。免疫荧光染色结果显示PAH组Pin1表达高于Con组[(8.39±0.19)%比(3.32±0.26)%， t＝13.000， P<0.01]。HE染色结果显示，PAH组肺小动脉管壁增厚，Juglone干预后肺小动脉壁厚度减轻。Western blot结果显示，Con组α-SMA和Pin1的表达低于PAH组(1.02±0.04、1.00±0.07比2.21±0.07、3.37±0.04， t＝14.976、27.427， P<0.01)。PAH组p-AMPK表达低于Con组(0.52±0.02比1.00±0.04， F＝25.771， P<0.01)，Juglone组p-AMPK表达高于PAH组(0.65±0.04比0.52±0.02， F＝6.972， P<0.01)；PAH组Skp2表达高于Con组(4.05±0.12比1.00±0.07， F＝51.213， P<0.01)，Juglone组Skp2表达低于PAH组(2.91±0.08比4.05±0.12， F＝19.093， P<0.01)；PAH组p27表达低于Con组(0.55±0.03比1.00±0.02， F＝28.937， P<0.01)，Juglone组p27表达高于PAH组(0.75±0.03比0.55±0.03， F＝13.051， P<0.01)。 结论:Pin1在PAH肺组织中过表达，并参与肺血管重构过程。Pin1抑制剂胡桃醌通过激活AMPK从而调控Skp2/p27信号通路抑制肺血管重构。

目的 制备负载胡桃醌的白及多糖-维生素E琥珀酸酯聚合物胶束(Jug/BSP-VES),并进行表征和评价.方法 通过酯化反应合成白及多糖-维生素E琥珀酸酯聚合物(BSP-VES)载体,采用溶剂挥发法制备胶束,以包封率、载药量为指标,采用单因素实验筛选胶束处方和工艺,并用星点设计-效应面法确定其最优处方;使用透射电子显微镜和Zetasizer Nano ZSE纳米粒度电位仪观察测定Jug/BSP-VES形态、粒径、多分散指数(polydispersity index,PDI)及ζ电位;通过体外释药对Jug/BSP-VES进行评价,并考察其稳定性.结果 成功合成BSP-VES聚合物,其临界聚集浓度(critical aggregation concentration,CAC)值为5.95 μg/mL;以最优处方制备的Jug/BSP-VES胶束呈类球形,外观澄清透明,丁达尔效应明显;粒径、PDI、ζ电位结果分别为(120.30±2.80)nm、0.169±0.014、(-27.00±1.25)mV,包封率(89.140±1.163)％,载药量(6.493±0.087)％,在含有0.5％聚山梨酯-80的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)中48 h累积释放率达到(82.13±2.51)％.在4 ℃下储存稳定性良好.结论 通过溶剂挥发法制备的Jug/BSP-VES胶束粒径均一,包封率高,稳定性较好,具有一定缓释作用,该研究为胡桃醌的递药系统设计提供了参考.

目的 优化胡桃醌普郎尼克F127(F127)/聚乙二醇琥珀酸酯(D-alpha tocopheryl polythylene glycol succinate,TPGS)混合胶束的制备工艺,并对该混合胶束进行表征和体内药效学研究.方法 用薄膜分散法制备胡桃醌F127/TPGS混合胶束,以包封率为指标,用单因素和3因素3水平响应面实验优化胡桃醌混合胶束的制备工艺.用透射电镜和马尔文粒度仪对混合胶束进行表征.用透析袋研究其体外释放度.通过疾病活动指数(DAI)和结肠HE切片研究胡桃醌F127/TPGS混合胶束体内抗溃疡性结肠炎作用.结果 胡桃醌F127/TPGS混合胶束的最佳制备工艺:药物∶载体=1∶50、F127∶FPGS=4∶5、水化体积为10 mL、水化时间为1 h、乙醇体积为1 mL.对最优处方进行验证,得到胡桃醌的平均包封率为90.53%,与预测值(85.32%)偏差较小.透射电镜下混合胶束呈球形,形态完整且分布均匀.平均电位为(-3.86±3.05)mV,平均粒径为(13.91±0.15)nm,PDI为(0.092±0.009).体外释放度实验结果显示,胡桃醌F127/TPGS混合胶束的累积释放度大于胡桃醌混悬液.胡桃醌F127/TPGS混合胶束干预后,小鼠DAI值下降,结肠组织病理损伤得到缓解.结论 经响应面优化的胡桃醌F127/TPGS混合胶束制备工艺条件稳定,且可增加胡桃醌溶解度,增强胡桃醌抗溃疡性结肠炎的作用.

目的:研究胡桃醌通过Akt/mTOR/p70S6K通路调控肺癌细胞A549 自噬,发挥其抗肺癌作用的机制.方法:MTT法检测胡桃醌对A549 细胞存活率的影响.透射电镜和细胞自噬染色检测试剂盒(MDC)观察胡桃醌诱导A549 细胞自噬.蛋白免疫印迹法检测自噬标志蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ和LC3I蛋白和自噬经典通路Akt/mTOR/p70S6K相关蛋白的表达水平.RT-PCR法检测A549 细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ mRNA表达水平.结果:MTT结果表明胡桃醌抑制A549 细胞增殖,IC50 =10 μmol/L;透射电镜和MDC实验发现胡桃醌可以诱导A549 细胞产生自噬;与对照组相比,胡桃醌可以显著增加Beclin-1蛋白表达水平、LC3Ⅱ/LC3I比值和Beclin-1、LC3Ⅱ mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01);胡桃醌干预后,与对照组相比,Akt、mTOR和p70S6K蛋白的表达水平基本不变,但Akt、mTOR和p70S6K磷酸化蛋白的表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01).结论:胡桃醌可能通过Akt/mTOR/p70S6K通路调控肺癌细胞A549 自噬.

目的 构建经iRGD修饰的胡桃醌(juglone,Jug)-紫杉醇(paclitaxel,PTX)靶向纳米粒子(nanoparticles,NPs),并评价其对人骨肉瘤细胞Saos-2 的抑制作用.方法 通过乳化法制备iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs,并评价其材料特性、载药能力和体外释放结果.利用荧光显微镜观察iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs体外细胞摄取情况,再通过MTT法比较各组对Saos-2细胞的增殖抑制作用.结果 ①在Jug:PTX=0.1 mg:0.1 mg,iRGD-PLGA=1 mg条件下,成功制备iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs.②透射电镜下可见,纳米粒子为大小均一的类球形,粒径为233.3 nm,Jug载药率为8.68%,包封率为31.87%,PTX载药率为8.98%,包封率为 30.18%;③体外药物释放显示,前 24h 中为突释,随后为缓释,96 h 后 Jug 累积释放为(72.108±1.243)%,PTX为(69.980±3.626)%;④细胞摄取实验显示,iRGD修饰的纳米粒子较无修饰粒子进入细胞更多;⑤MTT结果显示,Jug和PTX均可抑制Saos-2 细胞增殖,且呈现出剂量依赖性.药物处理 24h后,裸药组抑制率明显高于其他组,而在 48h后,iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs抑制率高于裸药组.结论 iRGD-PLGA-(Jug,PTX)-NPs稳定性较好,包载药物表现出先突释后缓释的现象,iRGD修饰可增强肿瘤靶向穿透性,提升疗效.

目的 探讨梓醇延长秀丽隐杆线虫寿命的作用及其机制.方法 以野生型秀丽隐杆线虫(N2)、突变体线虫Daf-2(CF1041)、Daf-16(CF1038)为衰老模型,设置空白组、梓醇低、中、高剂量组(0.025、0.050、0.100 mg/ml梓醇),观察梓醇对线虫寿命的调控作用.通过检测梓醇对N2 线虫生殖能力、运动能力、抗急性应激及荧光定量RT-聚合酶链反应(PCR)检测Daf-2、Daf-16、Sod-3 及Ctl-1 基因表达量,探究梓醇抗衰老作用及机制.结果 与空白组比较,梓醇高、中剂量组N2 线虫寿命显著延长(P<0.01,P<0.05),突变体Daf-2、Daf-16 寿命差异无统计学意义(P>0.05),N2 线虫紫外辐射应激、高温热应激、胡桃醌氧化应激及过氧化氢应激条件下生存时长显著延长(P<0.05,P<0.01).与空白组比较,梓醇高剂量组N2 线虫Daf-2 mRNA表达显著下调,Daf-16、Sod-3 及Ctl-1 mRNA表达显著上调(P<0.01,P<0.05).结论 梓醇延长了N2 线虫正常状态和氧化应激状态下的寿命,没有延长突变体Daf-2 和Daf-16 线虫寿命,其作用机制可能是通过胰岛素/胰岛素样生长因子(IGF)-1 信号通路,促进Daf-16 下游相关抗氧化基因表达,提高线虫抗氧化应激能力,从而延长线虫寿命.

目的 探讨胡桃醌对人前列腺癌LNCaP细胞雄激素受体(AR)及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路蛋白表达的影响.方法 培养人前列腺癌LNCaP细胞,分为空白对照组、胡桃醌低剂量组、胡桃醌中剂量组及胡桃醌高剂量组.分别加入终浓度为12.5、25和50μmol/L胡桃醌作用24 h,空白对照组不加入胡桃醌.采用Western blotting法检测磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、AR、β-catenin蛋白表达.为观察LY294002与胡桃醌对PI3K/AKT信号通路是否具有交互作用,将LNCaP细胞分为空白对照组、胡桃醌组、LY294002组、胡桃醌+LY294002组,胡桃醌组加入胡桃醌50μmol/L,LY294002组加入LY29400220μmol/L,胡桃醌+LY294002组加入LY29400220μmol/L及胡桃醌50μmol/L,空白对照组不加入LY294002及胡桃醌,各组干预24 h后,采用Western blotting法检测p-AKT、β-catenin、AR及AR下游分子前列腺特异性抗原(PSA)的表达变化.结果 与空白对照组比较,胡桃醌低、中、高剂量组p-AKT、β-catenin及AR蛋白表达均降低(P均<0.05).与胡桃醌组、LY294002组比较,胡桃醌+LY294002组p-AKT、β-catenin、AR及PSA蛋白表达均降低(P均<0.05).结论 胡桃醌能够抑制前列腺癌细胞AR的表达,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路导致AR共刺激分子β-catenin表达下降有关.

目的:观察维生素D对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的作用,对脯氨酰异构酶1(Pin1)蛋白表达和活性、p66Shc线粒体转位及活性氧簇(ROS)生成的影响,以及维生素D受体(VDR)在这一过程的作用.方法:以33mmol/L葡萄糖干预建立高糖内皮细胞损伤模型,分别接受维生素D(10-8～10-6mol/L)和Pin1抑制剂胡桃醌(10-7mol/L)共孵育;流式细胞术和TUNEL染色法检测HUVECs的凋亡率;流式细胞术和荧光显微术检测细胞内的ROS水平;Western blot法检测HUVECs中Pin1、p66Shc、p-p66Shc、p66Shc胞浆/线粒体比值及caspase-3的蛋白水平;多肽酶解法测定HUVECs裂解液中Pin1的活性;通过转染siRNA沉默VDR的表达,观察VDR是否介导Pin1蛋白及活性改变.结果:维生素D(10-8～10-6mol/L)抑制高糖诱导的HUVECs凋亡,并抑制高糖诱导的HUVECs中Pin1蛋白表达和活性增加.维生素D抑制高糖诱导的HUVECs中p66Shc磷酸化、p66Shc线粒体转位、ROS生成及caspase-3蛋白表达(P<0.05).通过转染siRNA沉默VDR表达,可削弱维生素D对高糖诱导的HUVECs中Pin1蛋白表达和活性增加的抑制作用.结论:维生素D通过激动VDR,抑制高糖环境下Pin1蛋白表达和活性增加,抑制p66Shc的线粒体转位,减少ROS生成,从而减轻血管内皮细胞凋亡.

本文探究了天然染料胡桃醌与头发相互作用的吸附动力学及热力学,探究其染色机理.结果表明,染发过程中,头发对胡桃醌的吸附符合拟二级动力学模型,且染色速率和染色平衡吸附量均随着温度的升高而增大,在333 K下头发对胡桃醌的平衡吸附量最大,为18.957 mg/g.通过实验和理论的结合发现,Freundlich和Langmuir吸附理论均能较好的拟合吸附数据.但相比而言,Freundlich吸附理论可以更好地表述头发对胡桃醌分子的吸附作用.此外,吸附热力学数据表明吸附过程是自发吸热的物理吸附.ΔG ＜0,说明头发对胡桃醌的吸附是自发进行的,AH ＞0说明吸附为吸热反应,温度升高有利于吸附的进行.由Arrhenius方程求得活化能Ea为30.09 KJ/mol,表示吸附属于物理吸附.