目的:评价甲烷对脊髓缺血再灌注大鼠炎症反应时嘌呤能受体P2X配体门控离子通道7(P2X 7R)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的影响。 方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠54只，3月龄，体重350～380 g，采用随机数字表法分为3组( n＝18)：假手术组(S组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和甲烷组(M组)。S组经右髂总动脉逆行置入Fogarty球囊套管至胸主动脉但不阻断缺血；I/R组采用阻断胸主动脉联合体循环低血压的方法诱导脊髓缺血9 min，然后恢复灌注，建立脊髓缺血再灌注损伤模型；M组于再灌注即刻腹腔注射10 ml/kg甲烷饱和生理盐水。于再灌注12、24和48 h时测定后肢运动-感觉障碍指数(MSDI)；于再灌注48 h时处死大鼠取L 3-5脊髓组织，采用尼氏染色和免疫荧光染色确定脊髓前角和后角正常神经元数量、活化小胶质细胞数量及其表达P2X 7R、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、计caspase-1、IL-1β和IL-18的水平。 结果:与S组比较，I/R组再灌注12、24和48 h时后肢MSDI升高，再灌注48 h时脊髓前后角正常神经元计数减少，活化小胶质细胞计数增加，P2X 7R、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18表达上调( P<0.01)；与I/R组比较，M组再灌注各时点后肢MSDI降低，再灌注48 h时脊髓前后角正常神经元计数增加，活化小胶质细胞计数减少，P2X 7R、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18表达下调( P<0.05)。 结论:甲烷减轻脊髓缺血再灌注大鼠炎症反应的机制与抑制P2X 7R/NLRP3信号通路有关。

目的:评价甲泼尼龙减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)机制与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)通路的关系。方法:清洁级雄性SD大鼠60只，体重270~320 g，4~5月龄，采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照组(C组)、机械通气组(V组)和甲泼尼龙组(M组)。C组不行机械通气，自主呼吸空气4 h；V组机械通气(RR 40次/min，V T 40 ml/kg，I∶E 1∶1，PEEP 0，FiO 2 21%)4 h；M组机械通气前20 min静脉注射甲泼尼龙10 mg/kg。机械通气4 h时，收集肺泡支气管灌洗液(BALF)和肺组织，测定BALF IL-1β、IL-18、TNF-α浓度与肺湿重/干重(W/D)比值，观察肺组织病理学结果。Western blot法检测肺组织p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的表达水平。 结果:与C组比较，V组肺组织W/D比值、BALF IL-1β、IL-18和TNF-α浓度升高，p-p38MAPK、NLRP3、ASC和caspase-1表达上调( P<0.05)，M组差异无统计学意义( P>0.05)；与V组比较，M组肺组织W/D比值、BALF IL-1β、IL-18和TNF-α浓度降低，p-p38MAPK、NLRP3、ASC和caspase-1表达下调( P<0.05)。 结论:甲泼尼龙减轻大鼠VILI的机制可能与抑制p38MAPK/NLRP3通路活性，减轻肺组织炎症反应有关。

目的:观察卡格列净（canagliflozin，Cana）干预治疗高糖诱导人足细胞（human podocyte，HPC）损伤的疗效，并探讨其相关机制。方法:将HPC设为5组：正常组（normal glucose group，NG组）、甘露醇组（mannitol group，MA组）、高糖组（high glucose，HG组）、Cana低剂量（0.3 μmol/L）组、Cana高剂量（1.0 μmol/L）组。Western印迹法检测膜相关反向鸟苷酸激酶2（membrane-associated guanylate kinase inverted-2，MAGI2）、足细胞相关蛋白nephrin、钠-葡萄糖转运蛋白2（sodium-glucose transporter 2，SGLT2）及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）、裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（cleaved-caspase1）表达。鬼笔环肽（phalloidin）染色观察HPC骨架变化。2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（2'，7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFH-DA）检测细胞活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平。酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测细胞上清中炎性因子白细胞介素（interleukin，IL）-18、IL-1β含量。结果:（1）与NG组比较，HG组MAGI2、nephrin表达水平较低（均 P<0.01），SGLT2表达较高（ P<0.01）；足细胞形态变化及细胞骨架重构显著；细胞ROS水平较高（ P<0.01）；NLRP3、ASC、cleaved-caspase1表达较高（均 P<0.01）；细胞上清中IL-18、IL-1β浓度较高（均 P<0.05）。（2）与HG组比较，Cana组MAGI2、nephrin表达升高（均 P<0.01）；细胞形态变化及细胞骨架重构减轻；SGLT2表达下调（ P<0.05）；细胞ROS水平下调；NLRP3、ASC、cleaved-caspase1表达下调（ P<0.01）；上清中IL-18、IL-1β浓度下调（均 P<0.05）。 结论:卡格列净能有效减轻高糖诱导的HPC损伤及炎性反应，其机制可能与抑制ROS/NLRP3信号通路相关。

目的 探讨圣草酚对携带5个家族性基因突变的转基因AD模型小鼠(5×FAD)的治疗效果以及对小胶质细胞含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性体的调节作用.方法 将8月龄5 × FAD小鼠随机分为AD模型组和圣草酚治疗AD组.同龄野生型C57BL/6J小鼠随机分为野生型(WT)对照组和圣草酚治疗WT组.Morris水迷宫和Y迷宫实验评估各组小鼠认知功能,免疫荧光组织化学染色检测小鼠脑组织小胶质细胞NLRP3、胱天蛋白酶1(caspase-1)和白细胞介素18(IL-18)的表达,Western blot法检测小鼠脑组织NLRP3、含胱天蛋白酶活化和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1、IL-18、IL-1β以及离子钙结合衔接分子1(Iba-1)的蛋白水平.结果 与WT组和圣草酚治疗WT组相比,AD组小鼠的认知功能明显障碍,小鼠脑组织小胶质细胞内NLRP3、caspase-1、IL-18、ASC、IL-1β和Iba1的表达均增加.经过圣草酚治疗后,与AD组小鼠相比,圣草酚治疗AD组小鼠学习记忆与认知功能得到改善,NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18和Iba1的表达均下调.结论 圣草酚可能通过抑制小胶质细胞NLRP3信号通路的激活改善AD动物模型的认知功能.

目的 探究NOD样受体家族含CARD结构域5(NLRC5)在胃癌中的相互作用蛋白,并明确其对胃癌的诊断价值.方法 采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库探究NLRC5在胃癌组织和癌旁组织中的差异,结合STRING网站分析NLRC5的相互作用蛋白,通过基因表达综合(GEO)数据库验证TCGA数据库筛选出来的蛋白对胃癌的诊断价值.引用临床模型,验证筛选出来的蛋白在胃癌组织和癌旁组织中的表达情况,确定各蛋白间的相关性,通过受试者工作特征(ROC)曲线明确其对胃癌的诊断价值.结果 TCGA结果显示,胃癌组织中NL-RC5表达水平明显高于癌旁组织(P﹤0.01).蛋白-蛋白相互作用发现,核因子κB激酶复合物抑制剂组分(CHUK)、核因子κB激酶亚单位β的抑制剂(IKBKB)、三重基序蛋白25(TRIM25)与NLRC5均呈正相关.经过GEO数据库验证得到TRIM25、CHUK、IKBKB与NLRC5可以构建联合模型诊断胃癌.临床模型中NLRC5在胃癌组织中高表达,且与TRIM25、IKBKB、CHUK表达水平均呈正相关(P﹤0.01).NLRC5联合TRIM25、IKBKB、CHUK对胃癌有较高的诊断价值.结论 TRIM25、IKBKB、CHUK参与NLRC5在胃癌发展中的相关调控机制,在胃癌诊断中具有较高的效能.

目的:探讨胱天蛋白酶1(Caspase-1)信号通路介导的细胞焦亡在放射性肠炎中的作用.方法:X射线随机辐射处理5只小鼠建立放射性肠炎模型,另取5只未处理小鼠为对照组.将体外培养的正常人肠上皮细胞分为对照组、电离辐射(ionizing radiation,IR)组和Caspase-1 特异性抑制剂(Z-YVAD-FMK,YVAD) +IR组. YVAD+IR组用YVAD处理后辐射.采用HE染色观察肠组织病理学改变.实时荧光定量PCR检测细胞及肠组织中白细胞介素6 (interleukin-6,IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、IL-1β、IL-18 的mRNA表达. ELISA法检测小鼠血清及细胞培养基中IL-1β和IL-18的含量水平.免疫组化检测肠组织中含pyrin结构域NOD样受体家族3(NOP-like receptor family,Pyrin domain containing 3,NLRP3)、Caspase-1和含CARD结构域凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)的表达情况.蛋白质印迹分析法检测Caspase1-p20、gasdermin D的N末端(GSDMD-N)、IL-1β、IL-18蛋白表达. Caspase-1活性检测试剂盒检测Caspase-1活性.乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒检测培养基中LDH释放量.细胞活力测定检测细胞活性.结果:辐射后小鼠肠组织隐窝结构丧失,绒毛萎缩; IL-1β、 IL-18、 IL-6、 IL-8、 TNF-α 的 mRNA 表达增加( P <0. 01); NLRP3、Caspase-1、ASC、Caspase1-p20、 GSDMD-N、 IL-1β、 IL-18 蛋白表达增加;血清 IL-1β 和 IL-18 含量增加( P <0. 01 );Caspase-1活性增强(P<0. 01).细胞水平上,与IR组相比,YVAD+IR组中Caspase-1、Caspase1-p20、GSDMD-N、IL-1β、IL-18蛋白表达水平降低;Caspase-1活性降低(P<0. 01);IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β、IL-18的mRNA表达降低(P<0. 01);培养基中IL-1β和IL-18含量降低(P<0. 01);LDH的释放水平降低(P<0. 01);细胞活性增强( P<0. 01).结论:放射性肠炎主要表现为炎性损伤,其机制可能与肠组织中NLRP3炎性小体诱导的Caspase-1依赖性细胞焦亡的参与相关.

目的 探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(TUG1)对缺氧复氧心肌细胞焦亡、自噬的影响及调控机制.方法 建立缺氧复氧大鼠心肌细胞H9c2损伤模型;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测TUG1、miR-525-5p、NOD样受体家族CARD结构域包含分子5(NLRC5)在细胞中的表达;用脂质体分别转染pcDNA-TUG1、si-TUG1、miR-525-5p mimics、anti-miR-525-5p、pcDNA-NLRC5、si-NLRC5至H/R H9c2细胞;或共转染pcDNA-TUG1和miR-525-5p mimics、miR-525-5p mimics和pcDNA-NLRC5至H/RH9c2细胞;双荧光素酶报告基因检测细胞的荧光活性.流式细胞术检测细胞焦亡率;Western blot检测细胞自噬标志基因自噬相关基因(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3(LC3),焦亡相关基因核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase-1)的蛋白表达.结果 与H9c2细胞相比,H/R H9c2细胞中TUG1、NLRC5表达显著升高,miR-525-5p表达显著降低(P＜0.05).TUG1能够靶向miR-525-5p,miR-525-5p又可靶向NLRC5.过表达TUG1可明显增强H/R对H9c2细胞的焦亡诱导和自噬抑制作用,并上调NLRP3、caspase-1,下调Beclin1、LC3.回复miR-525-5p能够部分逆转TUG1对H/R H9c2细胞的调控,回复NLRC5也可部分逆转miR-525-5p对H/R H9c2细胞的调控作用.结论 LncRNA TUG1促进缺氧复氧心肌细胞焦亡,抑制自噬的机制与靶向miR-525-5p/NLRC5通路相关.

模式识别受体(PRR)初始识别微生物感染和组织损伤相关分子模式进而介导一系列免疫应答反应是固有免疫的基本过程.目前生化研究确定了四种类型的PRR家族:Toll样受体(TLRs)、维甲酸诱导基因样受体(RLRs)、核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体(NLRs)和C型凝集素受体(CLRs).自2010年NLRC5被发现以来,研究已证实NLR含5个CARD结构域(NLRC5)是核受体,主要在人和动物的脑、肺、前列腺等组织中表达,并可调节NF-κB、IFN-Ⅰ信号通路及MHC-Ⅰ基因表达.近年研究发现,NLRC5在过敏性气道炎症、肺癌、肺损伤及呼吸道病毒感染等呼吸系统疾病的发病机制中起重要作用,成为探索呼吸系统疾病发病机制和治疗疾病研究的新位点.

为探讨miR-302b-3p对卵清蛋白(ovalbumin,OVA)所致变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠炎症反应的调控作用,将12只4周龄 BALB/c小鼠随机分为4组:sham 组、AR组、anti-miR-302b-3p NC组、anti-miR-302b-3p 组.使用 OVA制备AR模型,在建模后期,采用anti-miR-302b-3pNC或anti-miR-302b-3p抑制载体进行鼻内滴注.评估小鼠鼻部症状;采用H-E染色法观察鼻黏膜病变情况;qRT-PCR检测miR-302b-3p及B细胞淋巴瘤6(B-cell lymphoma 6,BCL6)mRNA水平;ELISA检测IL-4、IL-5及IL-13的水平;Western blotting检测BCL6、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)、包含 CARD 的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、前体 Caspase-1(pro-Caspase-1)、活化的Caspase-1 p20 亚基[c1eaved-Caspase-1(p20)]及成熟IL-1β(mature-IL-1β)蛋白表达水平.结果显示,与sham组比较,AR组小鼠的鼻部过敏症状明显,鼻黏膜组织炎症反应较重,IL-4、IL-5及IL-13的分泌显著增加,NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1(p20)及mature-IL-1β的蛋白表达水平较高,miR-302b-3p表达增加,BCL6 mRNA及蛋白水平显著减少(均P＜0.01);与anti-miR-302b-3p NC组比较,anti-miR-302b-3p组小鼠鼻部过敏症状减轻,鼻黏膜炎症反应减轻,上皮结构趋于完整,IL-4、IL-5及IL-13的分泌显著减少,NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1(p20)及 mature-IL-13的蛋白表达水平下降,miR-302b-3p 表达减少,BCL6 mRNA 及蛋白水平显著增加(均P＜0.01).该研究提示,miR-302b-3p可能通过靶向抑制BCL6调节NLRP3/ASC及下游炎症信号通路,进而促进AR进展.