目的 探讨磷酸二酷酶8(phosphodiesterase 8,PDE8)抑制剂PF-04957325对冈田酸(okadaic acid,OA)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠学习记忆、焦虑、抑郁的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 选取21只2月龄雄性C57BL/6J小鼠进行实验,随机分为对照组、AD模型组、PDE8抑制剂组(0.1 mg·kg-1).模型组和PDE8抑制剂组小鼠双侧海马定位注射OA(每侧50 ng)诱导AD模型,注射OA2 d后,PDE8抑制剂组给予0.1 mg·kg-1抑制剂,AD模型组和对照组给予等剂量溶剂,共给药21 d.给予抑制剂d 13,对小鼠学习记忆能力及焦虑抑郁行为进行相关行为学检测,HE染色观察小鼠海马DG、CA1、CA3区神经细胞形态,Western blot检测小鼠海马内不同位点磷酸化Tau蛋白水平以及PDE8/cAMP/CREB通路相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,AD模型组Y迷宫轮替比、新物体识别指数、被动回避逃避潜伏期明显缩短(P＜0.01),水迷宫穿越平台次数及在目标象限停留的时间减少(P＜0.05),表现出学习记忆能力的下降,而给予PF-04957325可明显改善AD小鼠学习记忆能力;AD模型组进入旷场中央区次数及在中央区停留时间明显减少(P＜0.05)、悬尾不动时间明显增加(P＜0.01),提示小鼠有焦虑抑郁情况,给予PF-04957325 后小鼠焦虑行为没有得到改善,对抑郁行为有一定改善;AD模型组小鼠海马DG、CA1、CA3区表现出核仁固缩、神经元排列不整齐,给予PF-04957325可缓解小鼠海马神经细胞的损伤.与对照组相比,AD模型组小鼠海马中Tau蛋白Ser199、Ser396和Ser202位点的磷酸化水平明显升高(P＜0.01)、PDE8A及PDE8B蛋白表达量明显增加(P＜0.01)、p-PKA/PKA和BDNF蛋白表达量降低(P＜0.05),给予PF-04957325后Tau蛋白Ser396和Ser202位点的磷酸化水平明显降低(P＜0.01)、PDE8A和PDE8B蛋白表达量明显降低(P＜0.01)、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 和 BDNF蛋白表达量明显升高(P＜0.01).结论 PDE8抑制剂PF-04957325 能够提高AD小鼠的学习记忆能力、降低认知功能障碍,恢复Tau蛋白功能,减轻AD小鼠海马内神经元细胞的损害,具有改善AD的作用.作用机制可能与激活PDE8/cAMP/CREB通路、抑制Tau蛋白磷酸化有关.

近年来，中医药治疗AD得到广泛关注。中药调控AD的信号通路研究主要集中在脑源性神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶B（TrkB）通路、PI3K/Akt通路、MAPK通路、蛋白激酶A（PKA）/cAMP应答元件结合蛋白（CREB）通路、NF-κB通路及Wnt通路这6条通路。

目的 探究诺卡酮(NKT)对轻度脑爆震伤(bTBI)大鼠抑郁样行为的缓解作用及其机制.方法 采用生物激波管分别模拟爆炸超压(BOP)为60 kPa、90 kPa和120 kPa的冲击波建立大鼠bTBI抑郁样模型.BOP暴露后14 d,采用悬尾实验及强迫游泳实验对大鼠抑郁样行为进行评估,选取抑郁样行为最为明显的BOP(120 kPa)进行后续实验.30只大鼠随机分为假手术组、bTBI组(120 kPa BOP暴露)、bTBI+NKT组[120 kPa BOP暴露后第1天开始,经口给药给予NKT 10 mg/(kg·d),共14 d],每组10只.BOP暴露后14 d,采用悬尾实验及强迫游泳实验对大鼠抑郁样行为进行评估;采用Western blotting检测海马组织中蛋白激酶A(PKA)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(pCREB)及脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平;免疫组化检测海马齿状回区(DG)增殖细胞核抗原(PCNA)标记的神经发生情况.结果 90 kPa的BOP暴露即可引起大鼠抑郁样行为,而120 kPa组大鼠BOP暴露后产生的抑郁样行为更明显(P<0.05),据此选取120 kPa的BOP暴露进行后续实验.BOP暴露后14 d,与假手术组比较,bTBI组大鼠悬尾实验不动时间延长(P<0.05),强迫游泳实验潜伏期缩短,不动时间延长(P<0.05),海马组织中PKA、pCREB和BDNF蛋白表达水平降低(P<0.05),海马DG区PCNA阳性神经元数量减少(P<0.05);与bTBI组比较,bTBI+NKT组大鼠悬尾实验不动时间缩短(P<0.05),强迫游泳实验潜伏期延长,不动时间缩短(P<0.05),海马组织中PKA、pCREB和BDNF蛋白表达水平升高(P<0.05),海马DG区PCNA阳性神经元数量增加(P<0.05).结论 早期给予NKT治疗可缓解轻度bTBI大鼠的抑郁样行为,其机制可能与NKT通过激活海马PKA/CREB/BDNF信号通路,使pCREB和BDNF表达水平上调,进而促进海马DG区神经发生有关.

目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶 A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能的改善机制.方法:采用改良线栓法缺血 2h,再灌注 24h建立大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组和丙泊酚低(1 mg/ml)、中(2.5 mg/ml)、高剂量(5 mg/ml)组,各 12 只,另设含有 12 只大鼠的假手术组.分组后即开始给药,1 次/d,共 4 周,末次给药 12h后,采用改良神经功能评分(mNSS)法进行神经缺损评分;采用TTC染色法检测脑梗死面积;HE、Nissl 染色进行神经元细胞及尼氏小体形态学观察;Tunel 法进行神经元细胞凋亡检测;Elisa法检测脑组织 cAMP、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)含量;免疫荧光法检测脑组织环磷酸腺苷(cAMP)、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数;Western blot法检测脑组织 PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量.结果:模型组大鼠比较假手术组大鼠的 mNSS评分、脑梗死面积百分比显著增加(均P<0.05),HE染色和 Nissl 染色可见明显的神经元细胞损伤和尼氏小体破坏,脑组织 cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著下降,模型组大鼠比较假手术组大鼠的 cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数和蛋白共表达阳性细胞数也明显下降(均P<0.05).与模型组比较,丙泊酚给药组大鼠 mNSS评分、脑梗死面积百分比显著降低(均P<0.05),HE染色和 Nissl 染色可见神经元细胞损伤和尼氏小体破坏有不同程度改善,脑组织 cAMP、BDNF、NGF 含量和 PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著升高(均P<0.05),cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数均显著升高(均P<0.05).结论:丙泊酚可能通过 cAMP/PKA/CREB通路改善CIRI大鼠神经功能.

脑卒中的发病机制是一个动态演变过程,表现为一系列神经毒性和神经保护相互作用的反应,参与反应的蛋白质作为信号通路通常在外界刺激下激活.目前已明确针刺能通过抑制脑卒中后脑组织神经细胞铁死亡从而促进神经功能修复,近年来针刺通过调控铁死亡治疗脑卒中的相关信号通路研究取得了显著进展,主要包括以下几方面:miR-23a-3p和核转录因子红系2 样2(NFE2L2)信号通路;p62/Kelch样ECH关联蛋白 1/核因子E2 相关因子 2(p62/Keap1/Nrf2)信号通路;α7nAChR介导的Janus激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路;环磷酸腺苷/cAMP依赖性蛋白激酶/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路;磷脂酰肌醇-3 激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路;p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路;过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子 1α/线粒体转录因子A(PGC-1 α/TFAM)信号通路;Notch信号通路和脑源性神经营养因子(BDNF)介导的Nrf2 信号通路.其中有已被证实的信号通路,亦有待研究的信号通路.

目的 从调节环腺苷酸/环腺苷酸依赖蛋白激酶/环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路水平的角度探讨肉苁蓉毛蕊花糖苷对D-半乳糖诱导PC12神经细胞损伤的保护作用.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率以及提供毛蕊花糖苷剂量选择依据,确定D-半乳糖诱导PC12神经细胞损伤模型的剂量和作用时间,毛蕊花糖苷干预以后,Western Blotting从蛋白水平检测CREB、p-CREB蛋白的表达水平.ELISA法检测cAMP、PKA和脑源性神经营养因子(BDNF)的含量.试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果 ①16 g·L-1D-半乳糖暴露PC12细胞40 h后,MTT检测细胞存活率达(46.67±6.59)％,与对照组比较差异具有显著性意义(P＜0.05),表明成功建立了细胞衰老模型.②与模型组比较,毛蕊花糖苷作用24 h后,p-CREB表达增加(P＜0.05),并且有剂量依赖性(r=0.989,P＜0.01),PKA、cAMP、BDNF和SOD水平提高(P＜0.05),MDA和LDH水平下降(P＜0.05)(rMDA=-0.875,P＜0.05);(rLDH=-0.834,P＜0.05).阻断剂H-89干预后1 h后,p-CREB表达减少,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平显著降低(P＜0.05),MDA和LDH水平升高(P＜0.05).结论 肉苁蓉中毛蕊花糖苷对D-半乳糖诱导的PC12神经细胞损伤有明显的保护作用,其机制与上调cAMP/PKA/CREB信号通路有关.

目的:分析白芍“养血柔肝”功效物质基础与作用机制及血虚肝郁证证候实质.方法:选取健康雄性SD大鼠48只,随机数字表法将大鼠分成对照组、模型组、芍药内酯苷组及芍药苷组,每组12只,制备血虚肝郁大鼠模型,造模第1天开始给药,芍药内酯苷组灌胃30 mg/(kg·d)芍药内酯苷,芍药苷组灌胃30 mg/(kg·d)芍药苷,对照组和模型组灌胃等剂量生理盐水,共灌胃3周;观察大鼠一般活动情况,高效液相色谱-电化学检测系统检测大鼠海马内单胺类神经递质5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid,5-HIAA)、去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)、肾生腺素(Epinephrine,E)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)及多巴胺(Dopaminem,DA)水平,蛋白免疫印迹法检测大鼠海马内脑源性神经营养因子(Brainderived neurotrophic factor,BDNF)、磷酸化元件结合蛋白(P-cAMP-response element binding protein,P-CREB)、环磷酸腺苷(Cydic adenosine monophosp hate,cAMP)及蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)蛋白表达状况.结果:与对照组比较,模型组大鼠5-HIAA、NE、E、5-HT、DA、PKA、BDNF、cAMP、PKA均显著降低,P-CREB显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,芍药内酯苷组和芍药苷组大鼠5-HIAA、NE、E、5-HT、DA、PKA、BDNF及其大脑皮层内cAMP、PKA水平均升高,P-CREB蛋白显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:芍药内酯苷和芍药苷可调节血虚肝郁大鼠神经递质含量,调控大鼠机体内cAMP/PKA信号路径内相关蛋白表达,起保护神经作用,它们都是白芍养血柔肝功效物质基础.

目的:从列当中苯乙醇苷类成分Crenatoside(OC4)对D-半乳糖所致急性损伤的保护作用中,探讨调节cAMP/PKA/CREB信号通路的机制.方法:(1)根据MTT法检测细胞存活率确定给药OC4的剂量,以及D-半乳糖诱导PC12神经细胞损伤模型的剂量和作用时间.OC4孵育24 h后,ELISA法检测cAMP、PKA和BDNF的含量;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Western Blotting免疫印迹分析检测CREB、p-CREB蛋白的表达水平.结果:给予PC12细胞16 g/L D-半乳糖40h后,MTT检测细胞存活率达(46.67±6.59)％,与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05),表明成功建立了细胞衰老模型.OC4作用24 h后,与D-半乳糖组相比,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平提高(P<0.05),MDA和LDH水平下降(P<0.05)(rMDA=-0.850,P<0.05);(rLDH=-0.927,P<0.05),p-CREB表达增加(P<0.05),并且有剂量依赖性(r=0.903,P<0.01).PKA特异性抑制剂H-89作用1 h后,p-CREB表达减少,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平显著降低(P<0.05),MDA和LDH水平升高(P<0.05).结论:列当中Crenatoside对D-半乳糖诱导的PC12神经细胞损伤有明显的保护作用,其机制与上调cAMP/PKA/CREB信号通路有关.

目的 探讨磷酸二酯酶4抑制剂Ro20-1724对反复氯胺酮麻醉后幼年大鼠学习记忆障碍的作用及对环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)-cAMP应答元件结合蛋白(CREB)-脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路的调控.方法 6周龄SD大鼠80只,随机选取20只为正常对照组,剩余60只随机分为模型组和观察组(均n=30),每日给予氯胺酮(50 mg· kg-1)麻醉30 min后,模型组腹腔注射生理盐水2 mL,观察组给予Ro20-1724腹腔注射0.5 mg·kg-1,均连续注射7d.Morris水迷宫观察各组大鼠的记忆能力.取大鼠海马组织,采用放射免疫法检测cAMP的含量,Western-blot法和荧光定量PCR来检测PKA、CREB、BDNF蛋白和mRNA的相对表达量.结果 与正常对照组比较,模型组的水迷宫逃避潜伏期和第一次穿环时间延长(P＜0.05),穿环次数减少(P＜0.05),cAMP含量降低(P＜0.05);与模型组相比,观察组的水迷宫逃避潜伏期缩短,第一次穿环时间减少且穿环次数增多(P＜0.05),与正常对照组差异不显著(P＞0.05).观察组的cAMP含量高于模型组(P＜0.05),但是低于正常对照组(P＜0.05).观察组PKA、CREB、BDNF蛋白和mRNA相对表达量均高于模型组(P＜0.05),与正常对照组差异不显著(P＞0.05).结论 Ro20-1724可能通过调控cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路而改善由于反复氯胺酮麻醉造成的幼年大鼠学习记忆障碍.

目的 旨在研究丁苯酞对链脲佐菌素(STZ)所诱导的糖尿病模型大鼠认知功能障碍的治疗作用并探讨其相关作用机制.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组及治疗组.对照组大鼠给予柠檬酸盐缓冲剂,模型组及治疗组大鼠腹腔注射STZ诱导糖尿病模型(注射72 h后血糖仪测尾静脉血糖>16. 7 mmol/L视为糖尿病模型制作成功),治疗组给予丁苯酞灌胃治疗,模型组及对照组给予等体积植物油灌胃.连续治疗6w后进行水迷宫测试检测大鼠学习和记忆功能,检测治疗前后各组血糖水平,Western印迹方法检测大鼠海马蛋白激酶( PK) A、环磷腺苷效应元件结合蛋白( CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白水平的表达.结果 模型组及治疗组与对照组相比逃避潜伏期显著延长,跨越平台次数显著减少( P<0. 05),并伴随着海马PKA、p-CREB 和BDNF水平的下降(P<0. 05);治疗组与模型组相比,逃避潜伏期显著缩短,跨越平台次数显著增加(P<0. 05),PKA、p-CREB 和BDNF表达显著升高(P<0. 05).结论 丁苯酞治疗可以改善STZ诱导的糖尿病模型大鼠的学习和记忆能力,其机制可能与海马PKA-CREB信号通路的激活密切相关.