目的:探索葛根素抑制膀胱癌(bladder cancer,BLCA)T24及5637细胞系的作用机制.方法:利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测法证实葛根素抑制BLCA T24及5637细胞的能力.通过串联质谱标签(Tandem Mass Tags,TMT)技术获得差异表达蛋白列表,并进行功能富集分析.通过生物信息分析筛选关键蛋白并对其进行表达分析、生存分析和上游转录因子预测.分子对接及Western blotting实验用于上游转录因子的验证.结果:CCK-8检测结果显示葛根素对T24和5637细胞系的IC50分别为218 μmol·L-1和198 μmol·L-1.功能富集分析显示差异表达蛋白主要富集在细胞周期和DNA复制通路.筛选出的关键蛋白为CDK1、CCNB1和PLK1.CHEA3网站预测关键蛋白上游转录因子为着丝粒蛋A(centromere protein A,CENPA.分子对接显示葛根素与 CENPA 的结合能为-6.3 kcal·mol-1(1 cal=4.184 0 J),Western blotting显示葛根素可显著降低CENPA的表达.结论:葛根素可能通过抑制CENPA的表达来影响蛋白CCNB1和PLK1,从而调控BLCA细胞的细胞周期或DNA复制以抑制其增殖.

目的:探讨microRNA-145(miR-145)靶向沉默PLK1基因对肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响及相关机制。方法:采用lipofectamine 2000试剂将miR-145转染肾小管上皮细胞，按不同转染结果分为对照组、阴性对照组及miR-145转染组，采用RT-PCR法检测肾小管上皮细胞中miR-145水平，采用CCK-8实验检测细胞增殖能力，采用流式细胞术检测细胞转染miR-145后细胞周期的分布，采用Western blot实验检测胃癌细胞Bax、Cyclin B1、PCNA及Bcl-2的表达水平，采用荧光素酶报告实验检测miR-145与PLK1基因的靶向关系。结果:RT-PCR实验显示miR-145转染组肾小管上皮细胞miR-362表达水平(4.1±0.6)显著高于对照组(1.2±0.2)和阴性对照组(1.3±0.3)( P<0.05)。CCK-8实验显示肾小管细胞转染miR-145后，肾小管细胞的增殖水平低于对照组及阴性对照组( P<0.05)。采用流式细胞术显示各组肾小管细胞G0/G1期比例比较，差异无统计学意义( P>0.05)。miR-145转染组肾小管细胞S期比例为(14.16±2.82)%，显著低于对照组[(21.22±3.81)%]及阴性对照组[(22.56±2.69)%]( P<0.05)；miR-145转染组肾小管细胞G2/M期比例为(26.37±4.51)%，显著高于对照组[(24.57±2.02)%]及阴性对照组[(22.46±2.74)%]( P<0.05)。miR-145组Bax相对水平为(0.36±0.04)，显著高于对照组(0.25±0.03)及阴性对照组(0.24±0.04)( P<0.05)。miR-145组Cyclin B1、PCNA、Bcl-2相对水平分别为(0.18±0.03)、(0.27±0.03)、(0.16±0.02)，显著低于对照组[(0.28±0.02)、(0.36±0.04)、(0.32±0.03)]及阴性对照组[(0.30±0.03)、(0.40±0.03)、(0.33±0.03)]( P<0.05)。通过生物信息学预测结果显示miR-145可与PLK1基因的3'-UTR结合，经荧光素酶报告基因实验进行验证，显示肾小管细胞在共转染miR-145及PLK1野生型载体后，荧光素酶相对活性显著下降( P<0.05)，其他各实验组的肾小管上皮细胞的荧光素酶相对活性无明显下降( P<0.05)。RT-PCR实验显示miR-145转染组肾小管上皮细胞PLK1基因表达水平(0.31±0.13)显著低于对照组(1.03±0.15)及阴性对照组(1.04±0.17)( P<0.05)。 结论:miR-145可靶向抑制肾小管上皮细胞中PLK1基因表达水平，抑制细胞的增殖能力，诱发细胞发生凋亡，为肾纤维化治疗提供实验依据。

目的:探讨Polo样激酶1(PLK1)和真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在正常脑组织和胶质瘤组织中的表达，分析两者与胶质瘤临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测2015年3月至2021年8月大庆市人民医院11例正常脑组织和66例胶质瘤组织中PLK1和EIF5A2的表达水平，结合临床资料行 χ2检验相关分析。 结果:PLK1阳性表达率在胶质瘤组织和正常脑组织分别为71.21%(47/66)和9.09%(1/11)，两者差异有统计学意义( χ2＝15.498， P<0.05)；EIF5A2阳性表达率在胶质瘤组织和正常脑组织分别为74.24%(49/66)和9.09%(1/11)，两者差异有统计学意义( χ2＝17.577， P<0.01)。PLK1和EIF5A2表达水平与胶质瘤组织学分级明显相关( χ2＝4.929、5.128， P<0.05)。 结论:PLK1和EIF5A2可能与胶质瘤的发生发展有关，PLK1和EIF5A2有助于评估胶质瘤生物学行为及预后。

目的:探究埃可病毒11型(echovirus 11, E11)感染人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma cells, RD)后细胞内宿主因子在转录水平上的变化，初步了解Polo样激酶1(polo-like kinase 1, PLK1)对E11复制的影响及可能的分子机制。方法:利用转录组测序(RNA-Seq技术)对E11感染RD细胞组和RD细胞对照组进行差异表达基因分析。使用基因本体论(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)富集分析显著差异表达基因，利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR, qPCR)对代表性差异基因的表达水平进行验证，并初步探究抑制PLK1对E11复制的影响。结果:E11感染RD细胞后，共鉴定出3 726个差异表达基因，感染组(感染后12 h、24 h和48 h)共同显著差异表达基因484个，这些显著差异表达基因主要富集在免疫反应、细胞内信号转导、转录因子活性、序列特异性DNA结合、蛋白激酶活性、核、膜的组成成分、PI3K-Akt信号通路等。使用qPCR对6个靶基因(CXCL14、IFITM1、OAS1、SAMD9、MX1和PLK1)的表达情况进行验证，均与RNA-Seq结果一致，其中CXCL14、IFITM1、OAS1、SAMD9、MX1表达上调倍数在1.2~104.97倍之间，PLK1表达下调倍数在0.99~5.79倍之间。抑制PLK1后，E11复制能力增加。结论:炎症反应、PI3K-Akt、MAPK等通路可能在E11感染抗病毒免疫过程中发挥重要作用，此外，宿主因子PLK1可能通过调节细胞周期在E11感染中起到关键作用。

目的:探讨结直肠癌组织中结肠癌转移相关基因1(MACC1)和Polo样激酶1(PLK1)表达的临床意义。方法:收集2016年4月至2021年3月大庆油田总医院资料完整的结104例结直肠癌组织标本及癌旁正常组织标本，采用免疫组织化学法检测各组织中MACC1蛋白和PLK1蛋白表达，采用 χ2检验分析评估MACC1和PLK1的表达水平与结直肠癌临床病理因素之间的关系。 结果:MACC1蛋白在结直肠癌组织中表达率为73.08%(76/104)，明显高于癌旁组织中表达率15.39%(16/104)，两者差异有统计学意义( χ2＝70.165， P<0.01)；PLK1蛋白在结直肠癌组织中表达率为57.70%(60/104)，明显高于癌旁组织中表达率24.04%(25/104)，两者差异有统计学意义( χ2＝24.371， P<0.01)。MACC1表达水平与结直肠癌淋巴结转移、浸润深度、TNM分期明显相关( χ2＝4.697、6.307、6.899， P<0.05)，PLK1表达水平与结直肠癌淋巴结转移、组织学分化程度、TNM分期明显相关( χ2＝5.446、5.5076、6.307， P<0.05)。 结论:MACC1蛋白和PLK1蛋白表达与结直肠癌侵袭和转移密切相关，检测上述两种指标，并与临床指标结合，将能更准确判断结直肠癌生物学行为及预后、并指导临床治疗。

目的:探讨Polo样激酶4(Plk4)在脑胶质瘤中的表达特征、生物学功能及其相关分子机制。方法:纳入癌症基因组图谱(TCGA)数据库(689例)、中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库(693例)中脑胶质瘤患者的胶质瘤样本的转录组和临床数据，纳入基因型和基因表达量关联(GTEx)数据库中正常脑组织标本的转录组数据(255例)。比较脑胶质瘤标本与正常脑组织中，以及不同病理学分级脑胶质瘤标本中Plk4 mRNA表达量的差异；采用log-rank检验法比较Plk4 mRNA低表达组与高表达组患者总生存期的差异。取人星形胶质细胞、U87、LN229、U251及A172细胞株行相关研究。采用小干扰RNA(siRNA)转染法敲低U87和LN229细胞中Plk4的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测Plk4 mRNA的表达；采用蛋白质免疫印迹法检测Plk4蛋白的表达；采用EdU实验和Transwell实验观察Plk4对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。取4周龄雌性BALB/c-nu裸鼠20只，将U87细胞注射于小鼠腹部制备胶质瘤异种荷瘤模型，观察Plk4敲低组(肿瘤内注射siRNA-Plk4， n＝10)与无义序列组(肿瘤内注射无序列Plk4， n＝10)治疗21 d(7次)后肿瘤体积和重量的差异。取敲低Plk4的U87细胞，采用蛋白组学和磷酸化组学的关联分析方法探讨Plk4在胶质瘤中的生物学功能及其分子机制。 结果:与星形胶质细胞相比，U87、LN229、U251及A172细胞株中Plk4 mRNA的表达水平均升高；TCGA联合GTEx数据库数据分析显示，低级别胶质瘤及胶质母细胞瘤标本中Plk4 mRNA的表达量均高于正常脑组织；对CGGA数据库中标本的分析显示，Plk4 mRNA的表达量随世界卫生组织(WHO)病理学分级的升高而升高；2个数据库中Plk4 mRNA高表达组患者的总生存期均短于低表达组患者。EdU实验显示，敲低Plk4表达的U87和LN229细胞的EdU阳性率均低于其无义序列细胞。Transwell实验显示，敲低Plk4表达的U87和LN229细胞的穿胶数和迁移数均低于其无义序列细胞。体内实验结果表明，Plk4敲低组的裸鼠皮下肿瘤的生长速度明显慢于无义序列组。上述数据比较差异均有统计学意义(均 P<0.01或0.05)。在蛋白组学分析中，共鉴定到428个差异表达蛋白。在磷酸化组学分析中，共鉴定到1 180个差异表达的磷酸化肽段，对应于728个磷酸化蛋白。将蛋白组学和磷酸化组学的结果进行关联分析后发现，蛋白组学和磷酸化组学关联上2 197个蛋白，其中66个只在蛋白水平有改变，590个只在磷酸化水平有改变，25个在蛋白和磷酸化水平均有改变。对只在磷酸化水平有改变的590个蛋白进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析发现，590个蛋白的功能主要为细胞进程和生物学调控等，主要富集的通路是志贺菌病和神经退行性变途径等。 结论:Plk4 mRNA在脑胶质瘤中呈高表达，可能与患者的预后有关；其机制可能通过细胞进程等信号通路促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭有关。Plk4可能是脑胶质瘤诊断和预后的分子标志物和药物治疗潜在的靶点。

目的:鉴定胃腺癌新的预后标志物和治疗靶点。方法:通过Gene Expression Omnibus(GEO)数据库下载GSE33335和GSE63089基因表达数据集，共含有70例胃腺癌组织和配对的胃正常组织基因芯片数据，使用R语言分析胃癌组织和胃正常组织间差异表达基因。通过String在线分析工具构建差异表达基因的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络。使用Cytoscape软件和分子复合物检测(MCODE)插件分离出关键基因集。使用在线数据库鉴定分离出与预后相关的关键基因，分别用数据库信息和南通大学附属医院2019年7—9月收治的32例胃腺癌组织和癌旁正常组织从mRNA和蛋白水平进行验证。结果:使用R语言分析显示，2个数据集中有128个共同差异表达基因，其中85个基因在胃腺癌组织中表达上调，43个基因在胃腺癌组织中表达下调。通过String在线工具和Cytoscape软件建立了PPI网络和MCODE模型，获得27个关键基因，其中有25个基因与胃腺癌患者的预后有关( P<0.05)。25个与预后相关的基因中，有14个基因在胃腺癌组织中表达显著，其中有3个基因[垂体瘤转化基因1(PTTG1)、细胞周期蛋白B1(CCNB1)和polo样激酶1(PLK1)]在细胞周期途径中显著富集。PTTG1在胃腺癌和胃正常组织中的阳性表达率分别为68.8%(22/32)和18.8%(6/32)，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:PTTG1在胃腺癌组织和胃正常组织中存在表达差异，是胃腺癌形成的关键基因。过表达PTTG1的胃腺癌患者预后更差。PTTG1可能通过调控细胞周期参与胃腺癌的发生发展。

目的:探讨Polo样激酶1(PLK1)以及鼠双微体基因2(MDM2)在胃癌组织的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法:选取长治医学院附属和济医院和长治市人民医院2017年4月至2021年3月病理确诊的99例胃癌组织和癌旁组织，应用免疫组织化学方法检测组织中PLK1蛋白以及MDM2蛋白表达水平，采用 χ2检验并结合临床资料分析PLK1蛋白和MDM2蛋白与胃癌临床病理特征之间的关系。 结果:胃癌组织PLK1蛋白表达率为79.80%(79/99)、对应癌旁组织PLK1蛋白表达率为12.12%(12/99)，两者差异有统计学意义( χ2＝91.283， P<0.01)，胃癌组织MDM2蛋白表达率为66.67%(66/99)、对应癌旁组织MDM2蛋白表达率为26.26%(26/99)，两者差异有统计学意义( χ2＝32.486， P<0.01)。PLK1表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移明显相关( χ2＝5.602、6.550， P<0.05)；MDM2表达水平与胃癌TNM分期、组织学分化程度、淋巴结转移明显相关( χ2＝5.263、9.949、4.583， P<0.05)。 结论:PLK1蛋白和MDM2蛋白过度表达可能促进胃癌恶性增殖及转移，联合检测上述两项指标有助于判断胃癌恶性程度、转移潜能和预后。

目的:筛选增生型糖尿病视网膜病变（DR）患者差异表达基因（DEG ），为增生型DR(PDR）治疗提供新的生物学治疗靶点。方法:基础研究。2020年10月于天津医科大学眼科医院检查确诊的PDR患者3例（PDR组）及非糖尿病患者3例（对照组）纳入研究。另外分别选取同期PDR、非糖尿病患者各40例并据此分为PDR验证组、对照验证组。PDR验证组、对照验证组行外周血验证试验；PDR组、对照组进行RNA测序。采用转录组学（RNAseq）测序技术筛选PDR组、对照组DEG。对筛选得到的DEG进行基因注释（GO）功能富集分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）的信号通路富集分析和蛋白-蛋白互作网络（PPI）分析。应用基因表达总集数据库查找与PDR相关高通量数据行多队列比对分析，通过Targetscan平台对差异表达的miRNA进行靶基因预测，明确筛选所得DEG与PDR的相关性。采用逆转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法对与PDR相关的DEG mRNA、蛋白表达进行验证。PDR验证组、对照验证组之间PDR相关的DEG mRNA、蛋白相对表达量比较行配对 t检验。 结果:RNAseq测序共筛选出1 337个DEG，上调基因419个，下调基因918个。具有低等电点的直接凋亡抑制蛋白结合蛋白（ DIABLO）、锌指和含BTB域10 （ ZBTB10 ）、polo样激酶3 （ PLK3 ）、调节亚单位1 （ PIK3R1）、B细胞易位基因3 （ BTG3）等基因在PDR组患者中差异表达。GO功能富集分析结果显示， DIABLO、 ZBTB10、 PLK3、 PIK3R1、 BTG3等基因参与了与PDR相关的病理过程。KEGG富集分析结果显示，细胞外基质受体作用、细胞因子调控通路、p53信号通路、半乳糖代谢等糖代谢途径可能参与了DEG涉及过程。PPI分析结果提示，DEG关联蛋白节点越大，关联的节点数量越多，其中 DIABLO、 ZBTB10、 PLK3、 PIK3R1、 BTG3等基因对该作用网络形成作用显著。Targetscan平台预测发现，DR患者房水、玻璃体、血浆中显著差异miRNA与本研究所发现的DEG具有调控关系。与对照验证组比较，PDR验证组患者外周血中 DIABLO、 ZBTB10、 PLK3、 PIK3R1 mRNA、蛋白相对表达量上调， BTG3 mRNA、蛋白相对表达量下调。 结论:PDR患者的DEG为 DIABLO、 ZBTB10、 PLK3、 PIK3R1、 BTG3，其通过调控细胞增生、纤维化及氧化应激等生物学过程参与疾病进程。

目的:高通量筛选三阴型乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）预后相关的重要分子标志物，探讨纺锤体检测点蛋白BUB1B表达与TNBC临床病理特征及预后相关性。方法:收集2009—2017年四川大学华西医院诊断TNBC的临床病理资料和预后信息。选取符合纳入标准的新鲜样本47例，肿瘤原发灶石蜡样本139例。对新鲜肿瘤样本进行转录组测序（RNA-seq）与基因表达综合数据库（gene expression omnibus，GEO）数据集GSE38959和GSE65194差异分析并取交集，进行富集分析和蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）分析。利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析目的基因的表达水平与TNBC预后的关系。采用免疫组织化学染色验证其在TNBC中的表达情况及与临床病理特征和预后的相关性。结果:利用edgeR对47例TNBC肿瘤组织与其中12例正常组织进行差异分析得到1 559个上调基因和1 376个下调基因，与GEO2R对GSE38959和GSE65194差异分析后的差异基因取交集后得到131个基因。富集分析主要富集在细胞周期、JAK-STAT信号通路、p53信号通路。利用Cytoscape分析得到Degree最高的10个基因：TOP2A、BUB1B、MKI67、PLK1、RRM2、PCNA、KPNA2、SMC4、PBK、IGF1。Kaplan-Meier Plotter数据库中分析发现BUB1B表达与TNBC预后显著相关［总生存期，HR=0.52，95% CI（0.35~0.77）， P=0.001；无远处转移生存期，HR=0.72，95% CI（0.52~0.98）， P=0.038］。139例肿瘤原发灶石蜡样本免疫组织化学的结果显示BUB1B低表达与TNBC预后不良具有显著相关性［HR=0.41，95% CI（0.18~0.95）， P=0.024］。 结论:BUB1B蛋白低表达与TNBC预后不良相关，其预后相关分子机制和潜在治疗靶点有待进一步研究。