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蛋白酶体β5过表达对人晶状体上皮细胞抗氧化能力的影响
编辑人员丨2天前
目的::研究蛋白酶体β5(PSMB5)过表达对人晶状体上皮细胞抗氧化能力的影响。方法::实验研究。构建重组质粒pcDNA3.1-PSMB5,将其转染入人晶状体上皮细胞株SRA01/04中,形成稳定表达(作为实验组),设pcDNA3.1空载体作为对照组。将2组细胞置于40 μmol/L H 2O 2环境下,Hoechst 33342荧光染色观察2组细胞核形态的变化;流式细胞仪检测2组细胞凋亡率的变化。数据采用独立样本 t检验。 结果::40 μmol/L H 2O 2环境下,Hoechst 33342荧光染色可见,与实验组相比,对照组的细胞核明显皱缩、变形;流式细胞仪检测发现,实验组和对照组的细胞凋亡指数分别为(9.3±0.9)%和(15.7±1.9)%,均高于处理前的(5.9±0.8)%和(7.1±1.1)%,对照组凋亡指数比实验组的凋亡指数更高( t=3.742, P=0.008)。 结论::PSMB5基因过表达能有效提高人晶状体上皮细胞的抗氧化能力。
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编辑人员丨2天前
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社会隔离对小鼠认知功能及海马星形胶质细胞表型转换的影响
编辑人员丨2天前
目的:探讨社会隔离(social isolation,SI)对小鼠认知行为及海马星形胶质细胞表型转换的影响。方法:20只3~4周龄雄性C57BL/6小鼠根据随机数字表法分为正常群居组(group house,GH组)和社会隔离组(SI组),SI组小鼠单笼饲养8周建立社会隔离模型,GH组小鼠5只/笼正常饲养。采用新旧事物识别实验和新旧位置识别实验检测小鼠认知功能;采用免疫组织化法、RT-PCR和Western blot分别检测小鼠海马星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达变化;Sholl Analysis定量分析星形胶质细胞形态变化;RT-PCR和Western blot法检测海马A1和A2型星形胶质细胞标志物蛋白酶体亚单位β-8(proteasome subunit beta 8,PSMB8)以及钙结合蛋白S100家族的成员(a member of the S100 family of Ca 2+-binding proteins,S100A10)的表达。采用GraphPad Prism 6.0软件进行统计分析,两组间比较采用 t检验。 结果:认知功能结果显示,SI组小鼠新事物识别指数[(-5.54±3.30)%,(33.42±7.14)%; t=4.680, P=0.001]和新位置识别指数[(-7.96±4.81)%,(23.55±8.20)%; t=3.670, P=0.008]均低于GH组。免疫组化结果显示,SI组小鼠海马GFAP阳性细胞数明显低于GH组[(369.90±42.97)个,(544.90±57.64)个; t=2.480, P=0.023]。Sholl分析结果显示,SI组小鼠海马星形胶质细胞突起回缩,突起分支与同心圆交点数目减少,在距离星形胶质细胞胞体6、8、10、12、14、16 μm处,两组间比较均差异有统计学意义(均 P<0.05)。Western blot结果显示,SI组GFAP蛋白的表达低于GH组[(0.85±0.05),(1.03±0.06); t=2.527, P=0.028];PCR结果显示,SI组GFAP mRNA表达低于GH组[(0.83±0.05),(1.00±0.03); t=2.970, P=0.018];SI组小鼠海马区A1表型标志物PSMB8 mRNA表达[(1.58±0.17),(1.00±0.06); t=2.931, P=0.011]和A2表型标志物S100A10 mRNA表达[(1.52±0.14),(1.00±0.07); t=3.121, P=0.007]均高于GH组。SI组营养因子IGF-1 mRNA表达低于GH组[(0.73±0.07),(1.00±0.08); t=2.327, P<0.05],而SI组LCN2 mRNA、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA表达均高于GH组[(1.12±0.03),(1.00±0.03), t=2.575, P<0.05;(1.76±0.19),(1.00±0.07), t=3.460, P<0.01;(2.18±0.42),(1.00±0.07), t=2.427, P<0.05]。 结论:社会隔离诱导的小鼠认知障碍可能与海马星形胶质细胞表型转换有关。
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编辑人员丨2天前
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右美托咪定对烧伤大鼠肠道屏障损伤时蛋白质组学的影响
编辑人员丨2天前
目的:评价右美托咪定对烧伤大鼠肠道屏障损伤时蛋白质组学的影响。方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠64只,体质量250~300 g,8~12周龄,采用随机数字表法分为4组( n=16):假手术组(Sham组)、假手术+右美托咪定组(Sham-Dex组)、烧伤组(Burn组)和烧伤+右美托咪定组(Burn-Dex组)。Burn组和Burn-Dex组制备大鼠背部(约40%全身体表面积)Ⅲ度烧伤模型,Sham组和Sham-Dex组大鼠仅背部脱毛用烫头以皮温接触。Sham-Dex组和Burn-Dex组大鼠在造模后分别静脉输注右美托咪定5 μg·kg -1·h -1 3 h,Sham组和Burn组大鼠连续输注相同剂量0.9%生理盐水。于停药后6 h时采集大鼠腹主动脉血,随后处死大鼠取肠组织,采用HE染色法观察肠组织病理学结果并行Chiu评分,测定血浆荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖(FITC-Dextran)和二胺氧化酶(DAO)浓度。对肠组织蛋白质进行同位素相对和绝对定量标记、液质联用-串联质谱分析,筛选差异表达蛋白质,对差异表达蛋白进行STRING蛋白质互作网络分析、基因本体分析(GO)和KEGG通路分析。 结果:与Sham组比较,Burn组和Burn-Dex组烧伤后大鼠肠组织Chiu评分和停药后6 h时血浆FITC-Dextran和DAO浓度升高( P<0.05);与Burn组比较,Burn-Dex组烧伤后大鼠肠组织Chiu评分和停药后6 h时血浆FITC-Dextran和DAO浓度降低( P<0.05)。通过STRING蛋白质互作网络分析、GO分析和KEGG通路分析得出满足条件的蛋白质基因为Psmb10、Psmb7、RGD1310507和LOC100909441,其中Psmb10和Psmb7存在相互作用,且在蛋白酶体等多种途径中显著富集。 结论:右美托咪定可引起烧伤大鼠肠道屏障损伤时蛋白表达的变化,Psmb10和Psmb7可能是其作用靶点。
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编辑人员丨2天前
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原发性胆汁性胆管炎关键基因及分子机制的生物信息学分析
编辑人员丨2天前
目的:采用生物信息学方法挖掘原发性胆汁性胆管炎(PBC)的差异表达的关键基因,以期为进一步研究机制提供信息。方法:从GEO数据库中下载GSE119600数据集,获取差异表达基因;对差异基因进行基因本体论(GO)富集与京都基因和基因组百科全书(KEGG)路径分析;再构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,用Cytoscape软件进行可视化并筛选核心基因。受试者操作特征(ROC)曲线下面积(AUC)用于评估基因诊断的有效性,并由"pROC"软件包绘制。用x-Cell工具计算每个样本中34种免疫细胞的富集评分。最后,选取PSMA4、PSMA1、PSMB1和PSMA3 4个关键基因,用qPCR法对血液样本进行鉴定。结果:共鉴定出373个免疫相关差异表达基因。从178个节点596条边的PPI网络中筛选出8个基因(PSMC6、PSMB2、PSMB1、PSMA3、PSMA4、PSMA1、PSMD7和PSMB5)作为hub基因,与细胞氨基酸代谢相关过程、造血干细胞分化相关过程、细胞周期相关过程和免疫相关过程显著相关。然后按ROC曲线的AUC值>0.7,将PSMA4、PSMA1、PSMB1和PSMA3定义为PBC的免疫生物标志物。通过免疫浸润细胞分析,我们发现PBC患者的嗜酸性粒细胞比例明显高于对照组,CD4 +记忆T细胞、浆细胞、Th2细胞和cDC细胞比例明显低于对照组。所有4种免疫生物标志物都与浆细胞相关。纳入7例PBC患者及7名健康人外周血qPCR验证,PSMB1、PSMA3、PSMA1、PSMA4水平显著低于健康人,差异有统计学意义。 结论:通过生物信息学筛选出8个关键基因,其中4个为关键免疫标志物,可能为临床诊断提供和机制探讨依据。
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编辑人员丨2天前
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氧化环境下 PSMB5基因对人晶状体上皮细胞的保护作用
编辑人员丨2天前
目的::研究氧化环境下高表达蛋白酶体β5亚单位( PSMB5)对人晶状体上皮细胞的保护作用。 方法::实验研究。建立稳定过表达 PSMB5的人晶状体上皮细胞株(实验组),以空白载体转染细胞株为对照组。通过Western blot法分别检测2组细胞内PSMB5、蛋白酶体β2亚单位(PSMB7)和蛋白酶体β1亚单位(PSMB6)蛋白表达情况;人工合成的多肽Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(LLVY)、Boc-Bal-Gly-Arg-AMC(VGR)及Z-Leu-Leu-Glu-βNA(LLE)分别检测2组细胞内 PSMB5、 PSMB7和 PSMB6蛋白活性的变化;并将2组细胞置于40 μmol/L H 2O 2环境下,观察细胞增殖能力的变化及细胞内羰基化蛋白含量改变的情况。数据采用独立样本 t检验进行比较。 结果::转染 PSMB5的实验组人晶状体上皮细胞株内PSMB5蛋白的表达量较对照组高,同时PSMB6和PSMB7蛋白的表达量也相对高;而相应蛋白酶体亚单位的蛋白酶活性也显著增加。在40 μmol/L H 2O 2环境下处理4 h后,对照组和实验组细胞的增殖能力均受到抑制,2组细胞的增殖率分别为(6.99±3.43)%和(72.47±5.56)%,但对照组细胞的增殖能力受到抑制的程度明显高于实验组,2组之间的差异有统计学意义( t=22.41, P<0.001)。经过相同处理后,对照组和实验组细胞内羟基化蛋白含量分别为(2.65±0.44)nmol/mg和(1.63±0.36)nmol/mg,均高于处理前[分别为(0.41±0.10)nmol/mg和(0.45±0.12)nmol/mg],但是实验组细胞内氧化蛋白含量明显低于对照组细胞内氧化蛋白的含量,差异具有统计学意义( t=4.01, P=0.008)。 结论::氧化环境下,高表达 PSMB5基因提高了人晶状体上皮细胞内蛋白酶体的活性及抗氧化能力,具有保护作用。
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编辑人员丨2天前
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基于TMT蛋白组学探讨消肿止痛合剂治疗皮瓣缺血再灌注损伤的作用机制
编辑人员丨2024/1/13
目的 应用Tandem Mass Tag(TMT)体外定量蛋白组学技术研究消肿止痛合剂治疗大鼠皮瓣缺血再灌注损伤(Flap Ischemia-reperfusion Injury,FIRI)的作用机制.方法 30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、消肿止痛合剂组(消肿组),每组10只;正常组腹腔麻醉后切开背部约5 cm*6 cm皮肤及其皮下筋膜,未游离皮瓣,模型组与消肿组腹腔麻醉后完全游离背部大小约5 cm×6 cm带蒂皮瓣,模拟FIRI;消肿组给予消肿止痛合剂灌胃(1.8 mL·kg-1),每天1次,正常组和模型组给予生理盐水灌胃(1.8 mL·kg-1),每天1次,3组大鼠连续灌胃7天;7天后取大鼠背部皮瓣组织进行TMT蛋白组学分析,筛选出差异蛋白,对其进行基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析、通路富集(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析、共同差异蛋白分析,并建立差异蛋白相互作用(Protein-Protein Interaction,PPI)网络分析.结果 本次实验通过蛋白质定量共筛选出5005个蛋白质,其中鉴别到4996个蛋白质,筛选出消肿组/模型组之间141个上调和132个下调的差异表达蛋白.GO富集分析发现差异表达蛋白主要参与有机体细胞代谢、细胞组分的发生与结合、分解代谢、细胞器形成、线粒体形成、细胞内物质催化、分子结合、水解酶活化、核苷酸调节等分子机制.KEGG通路分析发现差异表达蛋白主要涉及有机体细胞代谢、核糖体转录翻译、蛋白酶体系统、细胞周期等信号通路.PPI分析发现共同表达差异蛋白Mrpl32、Psma2、Mrpl34、Psma4、Psmb1、Srp9位于相互作用网络的关键节点.结论 消肿止痛合剂治疗大鼠FIRI可能与线粒体核糖体相关信号通路、20S蛋白酶体系统信号通路等有关,其中差异蛋白Mrpl32、Psma2、Mrpl34、Psma4、Psmb1可能是药物发挥作用的关键靶点.
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编辑人员丨2024/1/13
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Circ-OGDH调节miR-127-3p/PSMB5轴对口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭的影响
编辑人员丨2023/10/21
目的:探讨环状RNA酮戊二酸脱氢酶(circular oxoglutarate dehydrogenase,Circ-OGDH)调节miR-127-3p/蛋白酶体β5 亚基(proteasome subunit beta type-5,PSMB5)轴对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)增殖、迁移和侵袭的影响.方法:qRT-PCR与Western Blotting测定人口腔上皮细胞及人OSCC细胞系CAL-27、HN6、Bca885 中Circ-OGDH、miR-127-3p及PSMB5 表达.体外培养CAL-27 细胞并分组转染后测定细胞Circ-OG-DH、miR-127-3p及PSMB5 表达;Ki67 免疫荧光及TUNEL染色检测细胞增殖、凋亡,细胞划痕及Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭;Western Blotting检测细胞凋亡(Bcl-2、Bax)及上皮间充质转化相关蛋白(Vimentin、E-cadherin)表达.于裸鼠皮下接种分组转染后的CAL-27 细胞构建其移植瘤模型,测定裸鼠肿瘤体积与质量,瘤组织中Ki67 阳性表达,TUNEL染色检测细胞凋亡情况.双荧光素酶报告基因实验验证CAL-27 细胞Circ-OGDH对miR-127-3p、miR-127-3p对PSMB5 的靶向调控作用.结果:与人口腔上皮细胞相比,CAL-27、HN6、Bca885 细胞 Circ-OGDH、PSMB5 mRNA及蛋白表达均升高,miR-127-3p表达均降低(P<0.05).与对照组相比,Circ-OGDH敲低组、miR-127-3p过表达组细胞和瘤组织中PSMB5 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、迁移率、侵袭数目、瘤体积及质量、Ki67 阳性表达、细胞和瘤组织中Bcl-2与Vimentin蛋白表达降低,miR-127-3p表达、凋亡率、Bax与E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与Circ-OGDH敲低组相比,Circ-OGDH敲低+miR-127-3p敲低组细胞和瘤组织中PSMB5 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、迁移率、侵袭数目、瘤体积及质量、Ki67 阳性表达、细胞和瘤组织中Bcl-2 与Vimentin蛋白表达升高,miR-127-3p表达、凋亡率、Bax与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05).Circ-OGDH可靶向下调CAL-27 细胞miR-127-3p表达,miR-127-3p可靶向下调其PSMB5 表达.结论:敲低Circ-OGDH可通过上调miR-127-3p而降低PSMB5 表达,进而减弱OSCC细胞增殖、迁移、侵袭能力,抑制其在裸鼠体内生长,并促使其凋亡.
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编辑人员丨2023/10/21
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MicroRNAs in Parkinson's disease and emerging therapeutic targets
编辑人员丨2023/8/6
Parkinson's disease (PD) is the second most common age-related neurodegenerative disorder, with the clin-ical main symptoms caused by a loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra, corpus striatum and brain cortex. Over 90% of patients with PD have sporadic PD and occur in people with no known family history of the disorder. Currently there is no cure for PD. Treatment with medications to increase dopamine relieves the symptoms but does not slow down or reverse the damage to neurons in the brain. Increasing evidence points to inflammation as a chief mediator of PD with inflammatory response mechanisms, in-volving microglia and leukocytes, activated following loss of dopaminergic neurons. Oxidative stress is also recognized as one of the main causes of PD, and excessive reactive oxygen species (ROS) and reactive nitro-gen species can lead to dopaminergic neuron vulnerability and eventual death. MicroRNAs control a range of physiological and pathological functions, and may serve as potential targets for intervention against PD to mitigate damage to the brain. Several studies have demonstrated that microRNAs can regulate oxidative stress and prevent ROS-mediated damage to dopaminergic neurons, suggesting that specific microRNAs may be putative targets for novel therapeutic strategies in PD. Recent human and animal studies have identified a large number of dysregulated microRNAs in PD brain tissue samples, many of which were downregulated.The dysregulated microRNAs affect downstream targets such as SNCA, PARK2, LRRK2, TNFSF13B, LTA, SLC5A3, PSMB2, GSR, GBA, LAMP-2A, HSC. Apart from one study, none of the studies reviewed had used agomirs or antagomirs to reverse the levels of downregulated or upregulated microRNAs, respectively, in mouse models of PD or with isolated human or mouse dopaminergic cells. Further large-scale studies of brain tissue samples collected with short postmortem interval from human PD patients are warranted to pro-vide more information on the microRNA profiles in different brain regions and to test for gender differences.
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编辑人员丨2023/8/6
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17β-雌二醇在改善卵巢切除小鼠压力性尿失禁的作用机制研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 雌激素是改善绝经期女性尿道压力的重要内分泌因素,通过动物模型研究17β-雌二醇(E2)在提高卵巢切除(OVX)雌激素缺失小鼠尿道压力的作用机制.方法 将雌性C57B/6小鼠随机分为对照组(假手术组)、OVX组(行卵巢切除术后给予安慰剂);OVX+E2组(行卵巢切除术后给予17β-E2组).检测各组小鼠的膀胱内压及漏尿点压力(BLPP)、最大膀胱排尿压(MVP)、膀胱最大容量(MBV)、腹压漏尿点压(ALPP)、尿道内压(MUP)和尿道闭合压(MUCP)等指标;Weston-blot检测尿道组织mRNA及相关蛋白产物:6-磷酸葡糖酸内酯酶(Pgls)、角蛋白10 (KRT10)、运动神经元生存蛋白(SMN)、蛋白酶体β4(Psmb4)、ATP合成酶亚基D(ATP5H)等指标.观察各组间的尿流动力学临床指标的改善,分析其不同分组之间的分子生化指标的改变情况.结果 在6周后,发现切除卵巢后小鼠膀胱压力和尿道压力明显降低(t=0.004,P<0.01).17β-E2治疗后尿动力学指标明显改善,其中BLPP[(16.2 ± 1.0)cmH2O(1 cmH2O=0.098 kPa)比(26.2 ± 5.1)cmH2O]、MVP[(21.3 ± 3.1)cmH2O比(31.9 ± 4.2)cmH2O]、MUP[(24.0 ± 5.1)cmH2O比(33.2 ± 5.2)cmH2O]和MUCP[(21.0 ± 4.2)cmH2O比(30.2 ± 4.3)cmH2O]改善最为明显(P<0.01).OVX 组小鼠的尿道组织中 Pgls、KRT10、SMN mRNA 表达明显降低,Psmb4和 ATP5H mRNA的表达却明显增加;OVX+E2组小鼠尿道组织中Pgls(0.86 ± 0.21比0.41 ± 0.11)、KRT10 (0.89 ± 0.17比0.46 ± 0.15)、SMN mRNA(0.96 ± 0.23比0.26 ± 0.09)表达有所上调,其中SMN mRNA表达上调最为明显(P<0.01),Psmb4和ATP5H mRNA的表达有所下调.结论 雌激素与小鼠尿道压力有关,17β-E2可导致尿道组织中SMN mRNA的表达升高,可能主要通过SMN信号转导通路调节下游蛋白水解、神经修复等方面来促进尿道及膀胱平滑肌收缩能力而发挥治疗压力性尿失禁作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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小鼠基质重塑相关7(MXRA7)基因产物在肝内互作蛋白质的鉴定
编辑人员丨2023/8/6
基质重塑相关7 (matrix remodeling associated 7,MXRA7)基因于2002年被命名,但无论在人类或其他动物体系,该基因或其蛋白质产物的功能均未知.直至我们最近的研究表明,该基因可能参与眼睛发育或肝损伤及修复.在本研究中,应用酵母双杂交策略,用小鼠MXRA7诱饵载体对小鼠肝cDNA文库进行筛选,发现23种蛋白质(MUP1,Cpt1a,Mat1a,aldh1l1,Cytb,H2-K1,Psmb1,marc2,Atp5j2,Sec24D,Trf,Rdh7,Apoe,Glud1,Gmfb,Alb,Hdlbp,Pzp,Etnk2,Nrn1,Serpina1a,Apoa2,GNMT)可能直接或间接地与MXRA7蛋白发生相互作用.其中,主要尿蛋白1(major urinary protein,MUP1)或其同家族蛋白质占所有候选克隆的1/6,提示其很可能是小鼠肝内与MXRA7蛋白有较强相互作用的蛋白质.通过基因重组在Hepa 1-6肝癌细胞系中同时过表达MXRA7和MUP1蛋白,荧光染色证明这两种蛋白质在细胞内共定位,应用抗MXRA7或MUP1的抗体进行Pull-down检测,则证明二者共同存在于细胞裂解液中.另外,重组MXRA7蛋白和MUP1蛋白在无任何其他蛋白质的缓冲液体系中直接形成复合体.因此,至少在小鼠肝组织体系中,MXRA7蛋白可能通过与MUP1等蛋白质的相互作用而发挥作用.
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编辑人员丨2023/8/6
