目的 通过生物信息学和细胞实验探究HNRNP A1在结直肠癌中的临床意义及其在肿瘤组织中的表达情况.方法 使用HPA、TIMER和GEPIA数据库,分析HNRNP A1在结直肠癌组织中的表达水平,并检验HNRNP A1与Ki-67/VEGFA在结直肠癌中表达的相关性.使用Kaplan-Meier Plotter数据库评估HNRNP A1 mRNA水平与结直肠癌患者生存率之间的联系.通过基因富集途径分析,预测HNRNP A1在结直肠癌中的潜在生物学作用.通过免疫组织化学(IHC)和Western blotting技术检测HNRNP A1在结直肠癌及其癌旁组织中的蛋白表达.利用TIMER数据库网站对HNRNP A1在免疫浸润细胞中的表达进行预测.使用慢病毒敲低RKO/Caco2细胞中HNRNP A1的表达;通过CCK-8实验检测细胞增殖,使用克隆形成实验检测HNRNP A1对细胞增殖能力的影响;利用细胞划痕实验和Transwell迁移实验评估两组细胞(RKO/Caco2-nc、RKO/Caco2-sh)的迁移能力.最后验证HNRNP A1小分子抑制剂(VPC-80051)对肿瘤细胞增殖的影响.结果 在结直肠癌(CRC)肿瘤组织中HNRNP A1的表达显著上调并与患者的不良预后显著相关(P<0.01).TIMER数据库的分析结果指出,HNRNP A1与肿瘤微环境中的免疫细胞之间存在一定的相关性.根据GEPIA数据库的分析,CRC组织中HNRNP A1、MKI67和VEGFA的表达均较高(P<0.05),且HNRNP A1与这两者之间存在正相关关系.通过Kaplan-Meier Plotter进行的生存分析表明,在CRC中,HNRNP A1的高表达预示着较差的总生存期(P=0.0081)和无进展生存期(P=0.012).基因富集通路分析的数据显示,HNRNP A1可能参与到多个与CRC进展相关的生物途径中.HNRNP A1影响RKO/Caco2细胞的增殖和迁移能力,对照组(RKO/Caco2-nc)的增殖能力、克隆形成能力和迁移能力均优于实验组(RKO/Caco2-sh),差异有统计学意义(P<0.05);HNRNP A1小分子抑制剂(VPC-80051)可以有效抑制结直肠癌增殖活性,并具有时间和浓度依赖性;IHC显示HNRNP A1在结直肠癌中高表达,且与肿瘤分期有密切关系(P<0.0001).结论 HNRNP A1基因在CRC组织中表达较高,并可调节细胞的增殖和迁移能力,与不良预后密切相关,同时HNRNP A1小分子抑制剂(VPC-80051)也可以抑制结直肠癌细胞的增殖,因而可作为CRC治疗过程中新的潜在治疗靶点.

目的:探讨环指蛋白152(RNF152)在结肠炎相关结肠癌(CAC)发生发展过程中的作用及其作用机制。方法:联合应用氧化偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导C57BL/6小鼠，建立CAC发生发展4个阶段(分别为正常上皮组织、炎症恢复期、轻度不典型增生、腺癌)的小鼠模型。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测不同阶段小鼠结肠组织中RNF152 mRNA的表达。利用人结直肠癌RKO细胞建立稳定高表达RNF152的细胞系。采用流式细胞术检测RNF152高表达对细胞凋亡的影响，Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表达。使用NO自由基供体DETA NONOate处理细胞，比较RNF152高表达对NO诱导细胞凋亡的影响。结果:AOM和DSS联合使用能有效地模拟人类CAC的病程，AD3组小鼠成瘤率为100%。CAC小鼠模型的结肠全基因组表达谱芯片显示，RNF152 mRNA的表达水平随着结肠癌的发生发展逐步降低。RT-qPCR检测结果显示，腺癌组结肠组织中RNF152 mRNA的表达水平为1.23±0.18，高于对照组结肠组织(0.52±0.08, P<0.01)。RNF152稳定高表达的RKO-RNF152细胞中，sub-G1期细胞比例[(3.6±0.4)%]高于RKO-PCDB细胞[(1.8±0.1)%, P<0.01]，Bcl-XL和Bcl-2的蛋白表达水平明显下调。DETA NONOate处理后，RKO-RNF152细胞的凋亡比例为(31.2±3.1)%，高于RKO-PCDB细胞[(14.2±2.1)%, P<0.001]。 结论:RNF152的表达降低与CAC的发生发展有关，可能通过抑制细胞凋亡促进了CAC的发生发展。

目的:探讨微小RNA(miR)-6791-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其分子机制。方法:采集培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、HCT116以及人正常结肠上皮细胞NCM460。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-6791-5p在各细胞系中的表达水平(表达倍数为0.52±0.04、0.83±0.06、0.60±0.12、0.68±0.07)，并构建miR-6791-5p模拟物(miR-6791-5p mimic)及其阴性对照Negative control，并将其转染至RKO细胞。使用RT-qPCR检测miR-6791-5p和PACS2 mRNA的表达水平(表达倍数为0.468±0.032)。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测PACS2蛋白的表达水平[RKO：(51.590±6.018)%]。使用两样本 t检验进行统计分析，结果以均数±标准差( ± s)表示，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:miR-6791-5p在人结直肠癌细胞系表达水平显著低于人结肠上皮细胞，其中RKO和DLD1下调最明显(RKO组低于460组：0.52±0.04比1.00、DLD1组低于460组0.60±0.12比1.00)，差异有统计学意义(RKO： t＝17.811， P<0.0001；DLD1： t＝5.372， P<0.01)。RKO转染后，mimic组miR-6791-5p表达水平高于mimic NC组(3.28±0.44比1.00)，差异有统计学意义(RKO： t＝8.764， P<0.01)。细胞计数试剂(CCK-8)检测表明mimic组24、48、72、96 h细胞吸光度值显著低于mimic NC组(24 h吸光度值为0.185±0.004比0.250±0.030，48 h吸光度值为0.275±0.040比0.376±0.020，72 h吸光度值为0.497±0.120比0.657±0.010，96 h吸光度值为0.691±0.004比0.905±0.019)，差异有统计学意义(RKO： t＝10.821， P<0.01)。平板克隆实验表明mimic组集落形成数低于mimic NC组(115.70±12.51比176.00±19.18)，差异有统计学意义(RKO： t＝4.581， P<0.05)。划痕愈合实验显示miR-6791-5p mimic组划痕愈合率低于NC组[(14.960±0.848)%比(36.480±1.340)%]，差异有统计学意义( t＝23.491， P<0.0001)。Transwell迁徙和侵袭实验显示穿透微孔膜的细胞数mimic组低于mimic NC组(迁移数目miR-6791-5p mimic组比NC组42.330±3.512比125.700±7.760，侵袭数目分别为54.33±4.16比159.30±7.76)，差异有统计学意义(Transwell迁移 t＝16.931， P<0.01)、(Transwell侵袭 t＝20.641， P<0.01)。在线靶预测软件(miRWalk、mirtarbase、targetscan)预测miR-6791-5p可能的靶基因，并通过qRT-PCR及Western blot验证，mimic组PACS2的mRNA及蛋白表达水平低于mimic NC组[比例为(51.590±6.018)%比1.00]，差异有统计学意义[mRNA(RKO： t＝27.951， P<0.0001)；Western blot(RKO： t＝13.931， P<0.001)]。 结论:miR-6791-5p在结直肠癌细胞中低表达，过表达miR-6791-5p能抑制结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力，并且明显下调PACS2的mRNA和蛋白表达水平，说明miR-6791-5p可能通过PACS2调控结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

目的:探讨泛素特异性肽酶22（USP22）在结直肠癌多药耐药中的作用以及与多药耐药基因P-糖蛋白（P-gp）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的相关性。方法:筛选USP22低表达的结直肠癌细胞系RKO、SW480，转染USP22过表达质粒使USP22表达上调。用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测USP22对结直肠癌细胞奥沙利铂耐药的影响。用相同的奥沙利铂浓度处理细胞，Western 印迹检测细胞中凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、Bcl-2和耐药蛋白MRP1、P-gp的表达。细胞外排实验检测上调USP22对钙黄绿素AM（Calcein-AM）和罗丹明123（rhodamine123）的影响。免疫组化方法检测奥沙利铂化疗敏感组与耐药组中USP22、MRP1及P-gp的表达以及分析USP22与MRP1及P-gp的相关性。结果:CCK-8实验结果表明，SW480-USP22（SW480细胞过表达USP22）对奥沙利铂处理24 h和48 h的IC 50为（4.62±0.05）μmol/L和（2.32±0.04）μmol/L，与对照细胞相比分别高2.7倍和3.0倍。用1.25 μmol/L的奥沙利铂处理细胞48 h，USP22过表达可抑制SW480细胞凋亡；细胞外排实验中SW480-USP22组Calcein-AM和rhodamine123的荧光强度与对照细胞相比明显升高，差异有统计学意义（均 P<0.01）；SW480-USP22细胞中MRP1和P-gp的蛋白表达水平与对照细胞相比显著增加，差异有统计学意义（均 P<0.01）。免疫组化结果表明，奥沙利铂化疗敏感组USP22、MRP1、P-gp的阳性表达率和化疗耐药组相比显著降低，差异有统计学意义（ P<0.05），USP22与MRP1、P-gp在结直肠癌组织中的表达均呈正相关（ r1=0.377， r2=0.423， P<0.05）。 结论:USP22上调与结直肠癌细胞对奥沙利铂的获得性耐药有关，USP22可能通过调控P-gp、MRP1的表达参与结直肠癌铂类化疗耐药的过程。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-518c-5p调控结直肠癌细胞HT-29细胞凋亡的机制。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测人结直肠癌细胞和人正常结直肠细胞中miR-518c-5p的表达量。通过过表达或敲低miR-518c-5p，检测结直肠癌细胞HT-29的凋亡水平。通过TargetScan和荧光素酶报告试验筛选miR-518c-5p的靶标并验证。通过敲低聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)或跨膜蛋白61(TMEM61)，检测结直肠癌细胞HT-29的凋亡水平。敲低miR-518c-5p和PTBP1或过表达miR-518c-5p和PTBP1，检测结直肠癌细胞HT-29的凋亡水平。采用Student’s t检验分析。 结果:miR-518c-5p在结直肠癌细胞HCT116(0.94±0.23)，HT29(2.41±0.40)，RKO(0.84±0.22)，COLO-678(1.04±0.33)，C2BBe1(1.45±0.41)，GP2d(0.97±0.30)中的表达量均低于正常结直肠细胞NCM460[(0.32±0.05)%， F＝14.010， P<0.01]，差异均有统计学意义。过表达miR-518c-5p[(2.40±0.36)%比(4.14±1.01)%， t＝2.811， P<0.05]，HT-29d的凋亡率显著增加[(0.22±0.07)%比(0.77±0.22)%， t＝4.126， P<0.05]；敲低miR-518c-5p[(2.51±0.70)%比(0.45±0.11)%， t＝5.011， P<0.05]；HT-29d的凋亡率显著降低[(0.20±0.10)%比(0.10±0.03)%， t＝2.970， P<0.05]；敲低PTBP1后，HT-29d的凋亡水平上升[(0.23±0.04)%比(0.67±0.03)%， t＝15.240， P<0.05]；但是，敲低TMEM61后，HT-29d的凋亡水平差异无统计学意义[(0.24±0.04)%比(0.26±0.01)%， t＝0.840， P>0.05]。过表达miR-518c-5p(2.31±0.30比4.02±1.01， t＝2.828， P<0.05]和PTBP1后，HT-29d的凋亡水平差异无统计学意义[(0.24±0.08)%比(0.23±0.04)%， t＝0.194， P>0.05]；敲低miR-518c-5p[(2.40±0.70)%比(0.38±0.09)%， t＝4.975， P<0.05]和PTBP1后，发现HT-29d的凋亡水平差异无统计学意义[(0.21±0.07)%比(0.25±0.09)%， t＝0.608， P>0.05]。 结论:miR-518c-5p能够通过靶向PTBP1 mRNA的3’端非编码区(3’UTR)来减少PTBP1的表达，以达到促进结直肠癌细胞HT-29凋亡的目的。

目的:探讨长链非编码RNA微小RNA-503宿主基因（LncRNA MIR503HG）通过调控miRNA-224-5p硫酸软骨素合酶1 (miR-224-5pCHSY1 ）的表达对结肠癌细胞放射敏感性的影响。方法:选取2019年3月至2022年1月火箭军特色医学中心收治的48例结肠癌患者为组织样本获取对象，进行回顾性分析，其中男性28例、女性20例，年龄（57.43±5.28）岁。根据放疗后的病灶情况将患者分为放射抵抗组（23例）和放射敏感组（25例）。采用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测2组患者结肠癌组织及各细胞株（CCD841、COLO320、SW480、RKO、HCT116）中LncRNA MIR503HG、miR-224-5pCHSY1的表达情况；构建放射抵抗的结肠癌细胞株HCT116R，将HCT116R细胞株分为过表达LncRNA MIR503HG(MIR503HG）组及其阴性对照组（mimiC-NC）、miR-224-5pCHSY1抑制组（anti-miR-224-5p）及其阴性对照组（anti-miR-NC）、过表达LncRNA MIR503HG+过表达miR-224-5pCHSY1组（MIR503HG+miR-224-5p）、过表达LncRNA MIR503HG＋阴性对照组（MIR503HG+miR-NC）；通过双荧光素酶报告验证LncRNA MIR503HG与miR-224-5pCHSY1的靶向作用；检测各组细胞的存活分数（SF）和凋亡率。两组间数据的比较使用 t检验。 结果:与放射敏感组相比，放射抵抗组结肠癌组织中LncRNA MIR503HG的相对表达量明显降低（1.40±0.36对0.72±0.17），miR-224-5pCHSY1的相对表达量明显升高（1.06±0.25对1.54±0.27 ），且差异均有统计学意义（ t=8.247、6.529，均 P<0.05）。CCD841、COLO320、SW480、RKO、HCT116及HCT116R各细胞株LncRNA MIR503HG的相对表达量分别为2.38±0.06、1.03±0.05、0.87±0.03、0.86±0.02、0.77±0.04、0.54±0.09，miR-224-5pCHSY1的相对表达量分别为0.38±0.06、0.56±0.01、0.59±0.02、0.59±0.05、0.63±0.04、0.82± 0.06，与正常细胞株CCD841相比，结肠癌细胞株COLO320、SW480、RKO、HCT116的LncRNA MIR503HG相对表达量均明显降低（ t=2.061、1.665、4.058、6.201，均 P<0.05），miR-224-5pCHSY1的相对表达量均明显增加（ t=1.238、1.930、2.037、1.742，均 P<0.05 ）。与HCT116细胞株相比，HCT116R的LncRNA MIR503HG相对表达量明显降低[（0.77±0.04）对（0.54±0.09）]，miR-224-5pCHSY1的相对表达量明显增加[（0.63±0.04）对（0.82±0.06）]，差异均有统计学意义（ t=1.267、2.370，均 P<0.05 ）。在照射剂量分别为4、6、8 Gy时，MIR503HG组的HCT116R细胞SF明显低于mimic-NC组[（7.25±1.11）%对（11.34±2.65）%、（2.85±0.58）%对（6.08±1.10）%、（0.58±0.05 ）%对（3.08±0.84）%]，且差异均有统计学意义（ t=1.064、1.937、2.650，均 P<0.05 ）。过表达LncRNA MIR503HG后，MIR503HG组HCT116R的放射增敏比（SER）为1.399。mimic-NC组、MIR503HG组、mimic-NC+4 Gy组、MIR503HG+4 Gy组的细胞凋亡率分别为（8.10± 0.23）%、（18.44±1.57）%、（17.33±2.35）%、（29.83±1.89）%，与mimic-NC组相比，MIR503HG组、mimic-NC+4 Gy组HCT116R细胞的凋亡率均明显升高，且差异均有统计学意义（ t=2.003、1.475，均 P<0.05 ）。与anti-miR-NC组相比，anti-miR-224-5p组MIR503HG-Wt的荧光素酶活性明显增加（1.02±0.20对1.60±0.25 ），且差异有统计学意义（ t=5.366， P<0.05）；miR-224-5pCHSY1与LncRNA MIR503HG结合位点突变后，与anti-miR-NC组相比，anti-miR-224-5p组MIR503HG-Mut的活性无明显变化（0.97±0.25对1.00±0.22），2组间的差异无统计学意义（ t=0.291， P> 0.05 ）。与mimic-NC组相比，MIR503HG组miR-224-5pCHSY1的表达水平明显降低（1.97±0.13对1.12±0.12），差异有统计学意义（ t=3.915， P<0.05）。与anti-miR-NC组相比，anti-miR-224-5p组中miR-224-5pCHSY1的表达水平明显降低（1.99±0.19对0.92±0.18 ），差异有统计学意义（ t=2.664 ， P<0.05 ）。在照射剂量分别为4、6、8 Gy时，anti-miR-224-5p组HCT116R细胞的SF均明显低于anti-miR-NC组[（0.59±0.08 ）%对（0.79±0.12）%、（0.39±0.06 ）%对（0.67±0.07）%、（0.19±0.04 ）%对（0.52±0.04）%]，且差异均有统计学意义（ t=1.281、2.034、2.911，均 P<0.05）。抑制表达miR-224-5pCHSY1后，anti-miR-224-5p组HCT116R细胞的SER为1.403。anti-miR-NC组、anti-miR-224-5p组、anti-miR-NC+4 Gy组、anti-miR-224-5p+4 Gy组的细胞凋亡率分别为（5.08±0.78）%、（14.48±1.21）%、（13.89±1.36）%、（23.64±1.03）%，与anti-miR-NC组相比，anti-miR-224-5p组与anti-miR-NC+4 Gy组的细胞凋亡率均明显增加，且差异有统计学意义（ t= 2.067、1.934，均 P<0.05 ）；与anti-miR-NC+4 Gy组相比，anti-miR-224-5p+4 Gy组的细胞凋亡率明显增加，差异均有统计学意义（ t=4.026 ， P<0.05 ）。照射剂量为4 Gy时，mimic-NC组、MIR503HG组、MIR503HG+miR-NC组、MIR503HG+miR-224-5p组的SF分别为（0.82±0.17）%、（0.53±0.12）%、（0.54±0.11）%、（0.78±0.15）%，照射剂量为6 Gy时，分别为（0.66±0.13）%、（0.38±0.09）%、（0.35±0.08）%、（0.57±0.10）%，照射剂量为8 Gy时，分别为（0.49±0.10）%、（0.15±0.06）%、（0.13±0.05）%、（0.43±0.11）%，与mimic-NC组相比，照射剂量≥4 Gy时，MIR503HG组HCT116R细胞的SF明显降低（ t=1.609、1.533、1.927，均 P<0.05 ），MIR503HG+ miR-NC组HCT116R细胞的SF明显降低（ t=1.294、1.490、1.825，均 P<0.05 ）；与MIR503HG+ miR-NC组相比，照射剂量≥4 Gy时，MIR503HG+miR-224-5p组HCT116R细胞的SF明显增加，且差异均有统计学意义（ t=1.573、1.204、1.937，均 P<0.05 ），过表达miR-224-5pCHSY1后，MIR503HG+miR-224-5p组HCT116R细胞的SER为0.825，相比MIR503HG组明显降低。mimic-NC组、MIR503HG组、MIR503HG+miR-NC组、MIR503HG+miR-224-5p组的细胞凋亡率分别为（11.61±2.10）%、（24.97±0.91）%、（24.81±1.27）%、（16.15±1.10）%，与mimic-NC组比较，MIR503HG组和MIR503HG+miR-NC组HCT116R的细胞凋亡率明显增高，且差异有统计学意义（ t=2.304、2.159，均 P<0.05 ）；与MIR503HG+miR-NC组比较，MIR503HG+miR-224-5p组HCT116R的细胞凋亡率明显降低，且差异有统计学意义（ t=2.067， P<0.05）。 结论:过表达LncRNA MIR503HG可通过抑制miR-224-5pCHSY1表达增加结肠癌细胞的放射敏感性。

目的:探讨微小RNA(miR)-17-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响及其机制。方法:培养人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460，以上细胞购自美国典型培养物保藏中心。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p在各细胞系内的表达，构建miR-17-5p抑制剂miR-17-5p inhibitor及其阴性对照negative control并转染至RKO细胞，分别设为miR-17-5p抑制剂(miR-17-5p inhibitor)组和阴性对照(NC)组。qRT-PCR法检测miR-17-5p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。平板克隆实验检测细胞克隆形成能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后细胞内转移生长因子β受体2(TGFBR2)表达水平变化。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。 结果:人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116中miR-17-5p的表达倍数均高于人正常结肠上皮细胞NCM460(3.22±0.72、1.99±0.36、2.26±0.51、1.77±0.60比1.07±0.05， F＝5.153， P<0.05)，差异有统计学意义。miR-17-5p inhibitor组miR-17-5p表达水平低于NC组(0.55±0.07比1.03±0.06， t＝9.714， P<0.05)，差异有统计学意义。CCK-8实验证实miR-17-5p inhibitor组细胞增殖能力低于NC组(24、48、72、96 h吸光度值分别为(0.21±0.00比0.33±0.03，0.33±0.01比0.54±0.01，0.54±0.02比0.79±0.00，0.83±0.05比1.10±0.08， t＝5.041、16.840、17.530、3.977， P<0.05)，差异有统计学意义。平板克隆实验提示miR-17-5p inhibitor组细胞克隆形成能力低于NC组[克隆形成数目(327.33±9.53)个比(504.67±10.96)个， t＝27.290， P<0.05]，差异有统计学意义。划痕及Transwell实验结果显示，miR-17-5p inhibitor组细胞迁移及侵袭能力显著低于NC组[划痕实验细胞迁移率(16.83±1.21)%比(35.70±1.04)%，Transwell迁移实验细胞迁移数目(46.00±3.27)个比(146.33±4.92)个，Transwell侵袭实验细胞侵袭数目(131.00±5.35)个比(243.00±5.10)个， t＝16.700、24.020、21.420， P<0.05]，差异有统计学意义。生物信息学预测并筛选出miR-17-5p靶基因TGFBR2，qRT-PCR法检测提示miR-17-5p inhibitor组TGFBR2 mRNA表达水平高于NC组(3.22±0.81比0.99±0.07， t＝3.888， P<0.05)，差异有统计学意义；Western blot结果表明miR-17-5p inhibitor组TGFBR2蛋白表达水平高于NC组。 结论:miR-17-5p在结直肠癌中表达升高，并且可以通过调控TGFBR2表达水平促进结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

目的:探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620，同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差( ± s)表示，采用两样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降，其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO：(0.311±0.165)倍比1.000倍， t＝7.783， P<0.05；SW620：(0.354±0.079)倍比1.000倍， t＝15.72， P<0.01]，差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p，过表达组表达倍数高于对照组 [RKO：(2.913±0.602)倍比1.000倍， t＝5.409， P<0.01；SW620：(3.194±0.427)倍比1.000倍， t＝8.765， P<0.001]，差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示，过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO：0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021， t＝3.064， P<0.01；SW620：0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032， t＝2.432， P<0.01)，差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO：(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个， t＝7.127， P<0.05；SW620：(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个， t＝9.387， P<0.05]，差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO：(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%， t＝394.900， P<0.01；SW620：(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%， t＝21.350， P<0.01]，差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组，迁移实验[RKO：(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个， t＝44.290， P<0.01；SW620：(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个， t＝16.090， P<0.01]，差异有统计学意义；侵袭实验[RKO：(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个， t＝33.950， P<0.01；SW620：(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个， t＝50.980， P<0.01]，差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测，并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示，DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC，过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组，mRNA表达倍数[RKO：(0.170±0.050)倍比1.000倍， t＝18.400， P<0.01; SW620：(0.256±0.069)倍比1.000倍， t＝26.800， P<0.01]，差异有统计学意义；蛋白倍数[RKO：(45.504±6.076)%比100.000%， t＝15.540， P<0.01；SW620：(43.567±3.760)%比100.000%， t＝26.000， P<0.01]，差异有统计学意义。 结论:结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降，并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

目的:探讨微小RNA-217(miR-217)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响途径。方法:采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人正常结肠上皮细胞NCM460和人结直肠癌细胞SW620、RKO、HT-29、HCT116中miR-217表达水平。将miR-217模拟物(mimic)与阴性对照(mimic NC)分别转染于RKO细胞系，检测miR-217表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)与平板克隆实验检测细胞增殖活力；采用划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力；采用RT-qPCR与蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默信息调节因子1(SIRT1) mRNA与蛋白表达水平。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。 结果:miR-217在人结直肠癌细胞系中表达水平降低，其中RKO细胞系明显低于NCM460细胞系[(0.286±0.022)倍比(1.000±0.090)倍， t＝13.360， P<0.01]，差异有统计学意义。RKO细胞系转染miR-217 mimic后，miR-217表达水平高于NC组[(5.276±0.437)倍比(1.000±0.168)倍， t＝15.820， P<0.01]，差异有统计学意义。CCK-8实验表明miR-217 mimic组细胞24、48、72 h吸光度值低于NC组[(0.867±0.030)倍比(1.260±0.0222)倍， t＝18.440， P<0.01]，差异有统计学意义。平板克隆实验表明miR-217 mimic组细胞集落形成能力低于NC组[(80.570±43.320)倍比(116.600±81.230)倍， t＝3.823， P<0.01]，差异有统计学意义。划痕实验及Transwell实验证实miR-217 mimic组细胞迁移及侵袭能力低于NC组[划痕实验：(0.133±0.009)倍比(0.365±0.010)倍， t＝29.960， P<0.01；Transwell迁移实验：(157.000±3.000)倍比(248.300±13.580)倍， t＝11.380， P<0.01；Transwell侵袭实验：(149.000±7.937)倍比(287.000±5.568)倍， t＝24.650， P<0.01]，差异有统计学意义。通过生物信息学分析并筛选出miR-217靶基因人SIRT1，RT-qPCR结果表明miR-217 mimic组细胞中SIRT1 mRNA表达水平低于NC组[(0.682±0.162)倍比(1.000±0.075)倍， t＝3.090， P<0.05]，差异有统计学意义。Western blot表明，转染miR-217 mimic后，结直肠癌细胞中SIRT1蛋白表达水平发生显著下降。 结论:miR-217在人结直肠癌中低表达，且可能通过SIRT1抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。

目的:探讨6尿素神经酰胺对结肠癌细胞增殖的影响及其分子生物学机制。方法:体外培养人源低分化结肠癌细胞系RKO细胞(购自美国典型菌种保藏中心)，经过5(低剂量组)、10(中剂量组)、20 μmol/L(高剂量组)不同浓度的6尿素神经酰胺分别诱导处理RKO细胞24、48、72 h，同时设立空白对照组。分别利用噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测各组细胞相对生存率、凋亡率；蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞中Wnt信号通路相关蛋白表达情况。采用SPSS 23.0软件中方差分析和 t检验进行数据统计学分析。 结果:随着药物浓度升高和药物作用时间延长，RKO细胞相对生存率[空白组为100%、100%、100%；低剂量组为(85.35±12.52)%、(72.95±10.11)%、(53.55±8.56)%；中剂量组为(70.75±10.74)%、(56.33±7.05)%、(40.05±10.11)%；高剂量组为(50.55±7.42)%、(35.58±5.75)%、(20.98±7.11)%]显著降低( F＝23.803， P<0.05)，凋亡率显著升高( F＝18.284， P<0.05)，差异均有统计学意义；各组细胞在相应条件下培养24 h后总蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶3(GSK3β)蛋白表达量差异无统计学意义( F＝1.093， P>0.05)，但随着药物浓度增加磷酸化Akt、磷酸化GSK3β和β-连环蛋白(β-catenin)表达量显著降低( F＝6.824， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:6尿素神经酰胺可以通过抑制Akt磷酸化，从而抑制GSK3β磷酸化，减少β-catenin表达，抑制结肠癌细胞增殖。