Objective:Bladder outlet obstruction(BOO)results in significant fibrosis in the chronic stage and elevated bladder pressure.Piezo1 is a type of mechanosensitive(MS)channel that directly responds to mechanical stimuli.To identify new targets for intervention in the treatment of BOO-induced fibrosis,this study investigated the impact of high hydrostatic pressure(HHP)on Piezo1 activity and the progression of bladder fibrosis.Methods:Immunofluorescence staining was conducted to assess the protein abundance of Piezo1 in fibroblasts from obstructed rat bladders.Bladder fibroblasts were cultured under normal atmospheric conditions(0 cmH2O)or exposed to HHP(50 cmH2O or 100 cmH2O).Agonists or inhibitors of Piezol,YAP1,and ROCK1 were used to determine the underlying mechanism.Results:The Piezo1 protein levels in fibroblasts from the obstructed bladder exhibited an elevation compared to the control group.HHP significantly promoted the expression of various pro-fibrotic factors and induced proliferation of fibroblasts.Additionally,the protein expression levels of Piezol,YAP1,ROCK1 were elevated,and calcium influx was increased as the pressure increased.These effects were attenuated by the Piezol inhibitor Dookul.The Piezo1 activator Yoda1 induced the expression of pro-fibrotic factors and the proliferation of fibroblasts,and elevated the protein levels of YAP1 and ROCK1 under normal atmospheric conditions in vitro.However,these effects could be partially inhibited by YAP1 or ROCK inhibitors.Conclusion:The study suggests that HHP may exacerbate bladder fibrosis through activating Piezo1.

目的:探讨基质刚度对尿道成纤维细胞(UFBs)活化的影响及其机制。方法:2020年6月至2021年2月从福建医科大学附属第一医院泌尿外科手术患者获得的尿道瘢痕组织中提取原代UFBs；用聚二甲基矽氧烷分别以60∶1(Soft)、40∶1(Moderate)、30∶1(Stiff)的比例加入固化剂，制备不同刚度的基质凝胶，将UFBs接种其上培养。倒置显微镜观察在不同刚度基质凝胶上生长的UFBs形态学特点；蛋白质印迹法(Western blot)检测UFBs活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)表达水平；进一步检测FAK/ROCK-1/YAP通路标志蛋白表达水平，并观察整合素抑制剂Cilengtide (20 ng/ml)对其影响，探索基质刚度是否通过此通路影响UFBs活化；采用方差分析和独立样本 t检验比较组间差异。 结果:随着基质凝胶刚度的增加，接种其上的UFBs形态由椭圆形转变为偏梭形，细胞伪足增长、增多；Soft、Moderate、Stiff组UFBs的α-SMA相对表达量分别为(0.140±0.004、0.815±0.030和1.385±0.051， F＝989.247， P<0.05)；collagen Ⅰ相对表达量分别为(0.138±0.004、0.947±0.021和1.263±0.028， F＝2 415.159， P<0.05)；collagen Ⅲ相对表达量分别为(0.284±0.005、1.089±0.017和1.374±0.038， F＝1 661.310， P<0.05)，均随基质刚度增加而升高；Stiff组中UFBs的p-FAK(1.282±0.029比0.430±0.009， t＝ 48.262， P<0.05)、ROCK-1(1.366±0.111比0.474±0.034， t＝13.300， P<0.05)和YAP(1.272±0.020比0.908±0.007， t＝30.254， P<0.05)表达水平均显著高于Soft组，而p-YAP(0.589±0.006比1.028±0.008， t＝-74.860， P<0.05)表达水平显著低于Soft组；在加入整合素抑制剂Cilengtide后，基质刚度增加引起的p-FAK、ROCK-1、YAP和p-YAP表达改变均减弱。 结论:细胞外基质刚度通过整合素介导的FAK/ROCK-1/YAP通路调控人尿道成纤维细胞活化。

目的:通过加权基因共表达网络分析揭示腹主动脉瘤(AAA)发生的潜在机制。方法:对数据库编号GSE47472和数据库编号GSE57691两个AAA转录组测序数据合并，进行基因差异表达分析得到差异基因，加权基因共表达网络分析(WGCNA)得到中心基因，两者取交集得到差异中心基因，并对其进行功能富集分析。建立小鼠AAA模型进行定量聚合酶链反应(qPCR)验证差异中心基因表达。使用GraphPad Prism 8进行统计分析。Kolmogorov-Smirnov检验数据正态性，采用独立样本 t检验分析基因差异表达。 结果:共筛选出745个差异表达基因，建立16个基因共表达模块，其中中心模块包含119个基因，取交集后共得到60差异中心基因。对差异中心基因进行功能富集分析结果示AAA中平滑肌增殖分化功能和细胞黏附功能相关基因低表达。低表达的细胞黏附相关基因为钙黏着蛋白-2(CDH2)，(钙黏着蛋白-13)CDH13，整合素相互作用蛋白-2(FERMT2)，Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)，层黏蛋白α5(LAMA5)，进行qPCR验证其表达差异显著性。相对表达倍数分别为FERMT2＝0.31 ( t＝2.454， P<0.05)，ROCK1＝0.22( t＝3.686， P<0.05)，LAMA5＝0.45( t＝3.168， P<0.05)，CDH13＝1.36( t＝0.103， P>0.05)，CDH2＝1.71( t＝0.702， P>0.05)。 结论:FERMT2、ROCK1、LAMA5低表达可能通过介导血管平滑肌细胞与细胞外基质间黏附作用异常参与AAA形成。

目的:探讨Ras超家族亚群A(RhoA)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rock-1)在无机磷酸盐中诱导大鼠瓣膜间质细胞(VICs)成骨分化的作用机制。方法:取8只雄性大鼠(购自上海西普尔必凯动物实验有限公司)的主动脉瓣膜消化培养至第3代后免疫荧光鉴定。小干扰RNA(siRNA)-RhoA转染VICs后用无机磷酸盐成骨培养基(IP-OIM)分别诱导转染组(RNAi)，阴性对照组(NC)及空白对照组(CON)的成骨分化，并通过蛋白质印迹法(Western blot)与聚合酶链反应(PCR)评估转染后RhoA、Rock-1、Runt相关转录因子2(Runx-2)及骨钙素(OST)的变化；7 d行碱性磷酸酶(ALP)活性相关检测，14 d行钙含量相关检测评估其早期与晚期成骨分化趋势。用IP-OIM刺激转染后的VICs 60 min，并通过Western blot检测SMAD1/5/9的磷酸化变化。采用单因素方差分析。结果:鉴定后的VICs转染siRNA-RhoA并用IP-OIM培养，经过Western blot及PCR检测后可知RNAi的RhoA(Western blot：0.330±0.020；PCR：0.357±0.060)及Rock-1(Western blot：0.366±0.020；PCR：0.383±0.040)比CON均出现表达下调(RhoA Western blot： t＝36.680， P<0.05 PCR： t＝10.610， P<0.05；Rock-1 Western blot： t＝31.240， P<0.05 PCR： t＝13.210， P<0.05)，差异有统计学意义，RNAi的OST(Western blot：0.520±0.030；PCR：0.510±0.070)和Runx-2(Western blot：0.573±0.020；PCR：0.57±0.060)比CON也出现了下降(OST Western blot： t＝16.630， P<0.05；PCR： t＝6.970， P<0.05；Runx-2 Western blot： t＝21.040， P<0.05；PCR： t＝6.710， P<0.05)，差异有统计学意义。在7 d的ALP染色中RNAi的颜色最浅，ALP活性检测中RNAi [(1.005±0.101) U/mg]活性比较NC[(2.042±0.116) U/mg]和CON[(1.931±0.136) U/mg]明显下降( t＝10.570， P<0.05； t＝9.400， P<0.05)，差异有统计学意义。在14 d的相对钙含量测定中RNAi[(22.290±1.981) ng/L]钙含量比较NC[(41.100±2.440) ng/L]和CON[(41.760±1.215) ng/L]明显下降( t＝10.530， P<0.05； t＝14.510， P<0.05)，差异有统计学意义；同样茜素红钙沉积染色中，也是RNAi颜色最浅。经IP-OIM分别刺激60 min，RNAi的SMAD1/5/9的磷酸化水平(0.337±0.030)比CON明显下降( t＝25.480， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:无机磷酸盐可通过RhoA/Rock-1引起瓣膜间质细胞的成骨分化，SMAD1/5/9的磷酸化在此过程中起重要作用。

目的:探讨轴突生长抑制因子(Nogo)-少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(Omgp)/Ras同源基因(Rho)-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rock)信号通路在一氧化碳(CO)中毒急性脑损伤中的作用，以及Rock抑制剂盐酸法舒地尔对其治疗的可行性。方法:将135只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、CO中毒组和盐酸法舒地尔组，每组45只。后2组大鼠采用高压氧舱吸入法建立急性重症CO中毒模型。各组大鼠均接受高压氧治疗2周，其中盐酸法舒地尔组大鼠同时给予腹腔注射盐酸法舒地尔[15 mg/(kg·d)，1次/d，共2周]，CO中毒组和正常对照组大鼠给予相同体积的生理盐水注射。于造模后1周时应用透射电镜观察各组大鼠海马组织超微结构的改变，于造模后1 d、1周、1个月、2个月时采用免疫组化染色或免疫荧光染色检测各组大鼠脑组织中Nogo、OMgp及Rock阳性细胞染色强度，采用Western blotting检测各组大鼠脑组织中Nogo、OMgp及Rock蛋白的表达水平。结果:CO中毒组大鼠海马组织超微结构及血脑屏障损伤明显，以细胞核、线粒体及突触结构改变显著，而盐酸法舒地尔治疗能有效地维持海马组织超微结构及功能的完整性，减轻脑水肿。造模后1 d、1周、1个月、2个月时，CO中毒组大鼠脑组织中Nogo、OMgp、Rock阳性细胞染色强度及Nogo、OMgp、Rock蛋白表达水平均明显高于同一时间点的正常对照组，盐酸法舒地尔组大鼠脑组织中Nogo、OMgp、Rock阳性细胞染色强度及Nogo、OMgp、Rock蛋白表达水平均明显低于同一时间点的CO中毒组，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:Nogo-OMgp/Rho-Rock信号通路相关分子的激活与CO中毒急性脑损伤密切相关，而盐酸法舒地尔能有效下调Nogo、OMgp和Rock蛋白的表达水平，从而明显减轻CO中毒后脑损伤程度。

目的:探索尘肺病并发肺结核的影响因素，为制定尘肺结核预防策略提供科学依据。方法:于2019年7月至2020年1月，对1958至2018年广州市报告的全部职业性尘肺病患者进行回顾性调查，共1 155例。患者性别、诊断年份、诊断年龄、接尘工龄、尘肺病期别、病种、工种和行业信息来源于尘肺病病例卡和网络报告数据库。肺结核资料收集自广州市职业病防治院职业病诊断档案，并通过电话随访补充数据。对广州市尘肺结核流行特征进行分析。用二元logistic回归分析模型对尘肺病并发肺结核的影响因素进行分析。结果:1 155例尘肺病新发病例中尘肺结核患者357例，肺结核并发率为30.9%。诊断年份、诊断年龄、接尘工龄、矿物性粉尘所致尘肺病和建筑业均为尘肺病并发肺结核的影响因素（ OR=0.948、1.048、0.972、3.112、2.815， P<0.05）。调整性别、诊断年份、诊断年龄、接尘工龄和诊断期别后，凿岩工矽肺患者并发肺结核的风险是其他工种的1.462倍（ P<0.05）。 结论:尘肺病患者肺结核并发率较高，诊断年份、诊断年龄、接尘工龄、尘肺病病种和行业等为其主要影响因素。建议加强接尘工人和尘肺病患者的职业健康检查和肺结核防治知识的宣教，具有易感因素的人群应作为重点特别关注。

目的:分析烟台市2006～2018年新发尘肺病病例发病与分布情况，为控制尘肺病提供依据。方法:收集2006～2018年烟台市新发尘肺病病例资料并进行数据统计分析。结果:2006～2018年烟台市尘肺病中新发病例为3 862例，其中Ⅰ期病例3 428例(88.8%)，Ⅱ期病例330例(8.5%)，Ⅲ期病例104例(2.7%)，以2018年新发病病例最高为459例(11.89%)，2016年尘肺病新发病最低为171例(4.43%)，病种主要以矽肺为主，3 438例(89.0%)。尘肺病病例诊断年龄为(53.21±9.26)岁，主要集中在45～54岁，占40.1%(1 550例)；接尘工龄主要是集中在10～29年，占69.6%(2 689例)；性别主要是男性，占98.0%(3 786例)，不同期别的尘肺接尘工龄比较差异有统计学意义( F＝52.742， P<0.001)，但诊断年龄比较差异无统计学意义( F＝1.824， P＝0.162)。工种分布主要集中在运搬工与凿岩工，分别有1 136例(29.4%)与1 068例(27.7%)。行业分布主要集中在有色金属矿采选业(1 414例，36.6%)和金矿采选(575例，14.9%)。企业规模分布，集中在大型企业1 914例(49.6%)与中型企业1 270例(32.9%)；企业经济分布，主要集中在国有经济、集体经济，分别占53.0%(2 046例)、34.4%(1 330例)。 结论:烟台市尘肺病新发病例较多，需加强尘肺病防治工作，特别是对于高发行业、重点工种、重点企业以及重点人群需严格加强监督，并制订合适的防治措施，从而控制烟台市尘肺病发病情况，促进人们身体健康。

目的:探讨Zeste基因抑制子12(SUZ12)在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法:选取2019年1月到2022年1月商丘市第一人民医院收治的67例宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析肿瘤组织和癌旁组织SUZ12蛋白表达水平。将宫颈癌细胞系CaSki分为对照组和SUZ12 KD组，分别采用对照慢病毒和SUZ12短发卡RNA(shRNA)慢病毒感染细胞，筛选稳定细胞系。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和体外移植瘤实验分析两组细胞增殖能力；采用Transwell分析细胞的侵袭能力；采用划痕实验分析细胞迁移能力；采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析SUZ12调控的靶基因表达水平。组间计量数据比较采用t检验。结果:宫颈癌组织中SUZ12蛋白相对表达水平(2.17±0.14)明显高于癌旁组织(0.77±0.09)，差异有统计学意义( t＝36.640， P<0.05)。对照组细胞48 h吸光度( A)值(2.07±0.13)明显高于SUZ12 KD组细胞(1.39±0.10)，差异有统计学意义( t＝10.100， P<0.05)。对照组细胞在体内成瘤的体积[(1 055.70±125.27) mm 3]明显高于SUZ12 KD组细胞[(613.30±76.33) mm 3]，差异有统计学意义( t＝9.537， P<0.05)。对照组细胞在体内成瘤的重量[(5.57±0.52) g]明显高于SUZ12 KD组细胞[(3.28±0.83) g]，差异有统计学意义( t＝7.433， P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(142.17±9.45)个]明显高于SUZ12 KD组细胞[(76.50±7.74)个]，差异有统计学意义( t＝13.170， P<0.05)。对照组细细胞划痕愈合率[(87.36±4.95)%]明显高于SUZ12 KD组细胞[(50.68±7.63) mm 3]，差异有统计学意义( t＝9.884， P<0.05)。对照组细胞ROCK1和ROBO1 mRNA表达水平(0.47±0.07、0.54±0.12)明显高于SUZ12 KD组细胞(1.05±0.07、1.14±0.12)，差异有统计学意义( t＝14.750、8.667， P<0.05)。 结论:SUZ12通过调节KLF2和ROBO1基因表达，促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移等恶性细胞生物学行为。

Background::Hyperthermia in combination with DnaJA4-knockout (KO) obviously affects the anti-viral immunity of HaCaT cells. The mechanisms of this process are not yet fully explored. However, it is known that DnaJA4 interacts with actin cytoskeleton after hyperthermia. Our aim was to investigate the effects of DnaJA4 on F-actin in HaCaT cells following hyperthermia.Methods::Wild-type (WT) and DnaJA4-KO HaCaT cells were isolated at either 37°C (unheated) or 44°C (hyperthermia) for 30 min followed by testing under conditions of 37°C and assessing at 6, 12, and 24 h after hyperthermia. The cytoskeleton was observed with immunofluorescence. Flow cytometry and Western blotting were used to detect the expression of F-actin and relevant pathway protein.Results::DnaJA4-KO and hyperthermia changed the cytoskeleton morphology of HaCaT cells. F-actin expression levels were elevated in DnaJA4-KO cells compared with WT cells (6364.33 ± 989.10 vs. 4272.67 ± 918.50, P < 0.05). In response to hyperthermia, F-actin expression levels of both WT and DnaJA4-KO cells showed a tendency to decrease followed by an obvious recovery after hyperthermia (WT cells: unheated vs. 6 h after hyperthermia or 24 h after hyperthermia: 0.34 ± 0.02 vs. 0.24 ± 0.01, 0.31 ± 0.01, P < 0.001, P < 0.05; DnaJA4-KO cells: unheated vs. 6 h after hyperthermia or 24 h after hyperthermia: 0.44 ± 0.01 vs. 0.30 ± 0.01, 0.51 ± 0.02, P < 0.001, P < 0.01). WT cells restored to baseline levels observed in the unheated condition, while DnaJA4-KO cells exceeded baseline levels in the recovery. As the upstream factors of F-actin, a similar profile in rho-associated serine/threonine kinase 1 (ROCK 1) and RhoA expressions was observed after hyperthermia. While E-cadherin expression was decreased in response to hyperthermia, it was increased in DnaJA4-KO cells compared with WT cells. Conclusions::Hyperthermia affects the expression levels of F-actin in HaCaT cells. DnaJA4 knockout increases the expression of F-actin in HaCaT cells after hyperthermia. DnaJA4 regulates the expressions of F-actin and the related pathway proteins in response to hyperthermia in HaCaT cells.

目的:探讨法舒地尔通过Rho/ROCK信号通路调控转化生长因子TGF-β1(TGF-β1)诱导的尿道瘢痕成纤维细胞表型转化及细胞外基质合成的机制。方法:体外分离培养人尿道瘢痕组织来源成纤维细胞，将其分为对照组、TGF-β1诱导模型组及法舒地尔组；采用CCK-8测定各组细胞的增殖情况，采用ELISA法测定细胞分泌Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅲ)及纤维结合素蛋白(FN)的表达情况，采用Western blot法检测Rho相关蛋白激酶1、2(ROCK-1、ROCK-2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。再用梯度浓度法舒地尔处理TGF-β1诱导的尿道瘢痕成纤维细胞模型，采用同样方法检测评估尿道瘢痕成纤维细胞表型转化及细胞外基质合成情况。结果:TGF-β1诱导的细胞培养液随着TGF-β1浓度增加作用时间延长，其增殖活性增高，且5和10 ng/mL TGF-β1诱导的细胞增殖率均显著高于0 ng/mL(均 P<0.01)。Col Ⅲ、FN含量随TGF-β1浓度和作用时间的增加而增高，与浓度、时间呈相关性(均 P<0.01)。12.5、25.0、50.0 μmol /L法舒地尔组的活细胞增殖减少。各组细胞的Col Ⅲ、FN含量随法舒地尔的浓度增加而降低，与浓度、时间有相关性(均 P<0.01)。随着不同浓度法舒地尔梯度干预后，细胞中ROCK-1、ROCK-2、α-SMA表达逐步降低(均 P<0.01)。 结论:TGF-β1可体外诱导人尿道瘢痕成纤维细胞表型转化及细胞外基质过度合成；法舒地尔可通过下调ROCK-1、ROCK-2、α-SMA的表达水平，从而抑制尿道瘢痕成纤维细胞的表型转化，降低细胞外基质Col Ⅲ及FN的分泌。