Kallmann综合征是一种罕见的先天性疾病，主要表现为嗅觉缺陷和低促性腺激素性性腺功能减退 ［1］。迄今为止，已发现30余种基因与该病相关。本文报道1例因自幼嗅觉缺失、发现阴茎短小4年就诊的青少年男性，经基因检测诊断为由少见基因SPRY4错义突变引起的Kallmann综合征，旨在丰富疾病基因突变谱，同时提高临床医生对该病的认识。

目的:基于多重PCR方法针对Turner综合征患者，建立快速检测Y染色体特有序列的多重PCR方法。方法:在Y染色体不同区域选择9个基因设计引物，其中Y染色体短臂特有基因为 SRY、TBL1Y、TSPY，长臂特有基因为 DDX3Y、HSFY1、RPS4Y2、CDY1，以及X和Y染色体拟常染色体区(PAR)短臂的 SHOX和长臂的 SPRY3基因。建立并优化Y染色体9个基因的多重PCR方法，通过使用基因组DNA不同用量对多重PCR进行灵敏性测试，并对确诊的36例Turner综合征患者(2例患者核型携带mar，1例患者核型为45，X[40]/47XYY[21])以及1例核型为46，X，+mar的男性矮小症患者进行检测。 结果:优化多重PCR反应体系(50 μL)结果，每对引物上下游的终浓度为0.1 μM时，9对引物的多重PCR反应扩增出与理论大小一致的目的条带，无非特异性扩增，条带清晰易区分。在灵敏性试验中，多重PCR反应体系的基因组DNA用量低至1 ng时条带仍清晰可见。使用该方法检测36例Turner综合征患者，1例核型为45，X[40]/47XYY[21]的Turner综合征患者扩增出Y染色体特有目的基因，35例Turner综合征患者只扩增出 SHOX和 SPRY3两个目的基因，而无Y染色体特有的7个基因，与患者临床表现一致。 结论:本研究建立的9个基因多重PCR反应体系可快速准确的筛查Turner综合征患者是否携带Y染色体物质，具有检测成本低、操作简便、特异性强、检测周期短等优点，可供临床及时检出携带Y染色体物质的Turner综合征患者，为是否预防性切除性腺而防止恶性性腺肿瘤的发生提供诊断依据。

目的 探讨长链非编码 RNA(lncRNA)SPRY4 -IT1对宫颈癌细胞增殖侵袭及迁移的影响.方法 宫颈癌细胞株 HeLa中设计并合成 SPRY4 -IT1 RNA片段及其转染形成的 siRNA片段(si-SPRY4 -IT1 RNA),qRT-PCR技术检测其沉默效率,MTT检测 SPRY4 -IT1 RNA片段对 HeLa细胞的增殖影响,Transwell实验检测 HeLa细胞的侵袭、迁移能力,研究 si-SPRY4 -IT1 RNA对宫颈癌细胞HeLa侵袭凋亡能力的影响.结果 长链非编码 RNA SPRY4 -IT1在人宫颈癌细胞 HeLa中的表达明显增高,si -SPRY4 -IT1 RNA可下调 HeLa细胞中 SPRY4 -IT1的表达,并抑制宫颈癌细胞 HeLa的增殖和侵袭迁移能力.结论 SPRY4 -IT1是宫颈肿瘤的一个致癌基因,可作为新的靶向治疗目标.

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200 nt、只能被转录、不能被翻译的非编码RNA.既往认为lncRNA是RNA聚合酶Ⅱ的副产物,没有生物学功能.但随着科技发展,尤其是高通量测序技术迅速发展,以及基因组相关研究的不断深入,发现lncRNA参与机体许多重要的生理病理过程,与肿瘤、子痫前期、胎儿生长受限等疾病的发生发展密切相关.近年,lncRNA已成为研究领域的“新宠”,在多种疾病中研究进展迅速,但在妊娠相关疾病及胎盘功能和调控方面处于起步阶段,尚有许多问题有待解决.总结胎盘组织中lncRNA的一些类别如H19、HOTAIR、MALAT-1、SPRY-4 IT1、LINC-HELLP、lncRHOXF1、NEAT1、MEG3、lncRNA-ATB和RPAIN的研究成果,发现他们异常表达可影响胎盘滋养层细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡,与妊娠及胎盘疾病的发生发展相关,但相关研究甚少,具体作用机制有待进一步研究.

目的 观察沉默炎症因子CRP基因对H9c2心肌细胞活力的影响,并探讨其机制.方法 ①取H9c2心肌细胞,随机分为CRP沉默组和对照组.CRP沉默组转染对CRP特异性沉默的pLV-shRNA-CRP慢病毒,对照组转染无敲减作用的pLV-shRNA-Scramble慢病毒.筛选与鉴定慢病毒载体成功转染H9c2心肌细胞.转染48 h后,采用实时定量PCR法观察两组H-19c2心肌细胞CRP基因的沉默效率、miR-21及PDCD4、PTEN、Spry1 mRNA.②取H9c2心肌细胞,随机分为空白组、对照组和CRP沉默组,空白组不转染病毒加入等量的DMEM培养基,对照组转染pLV-shRNA-Scramble慢病毒颗粒,CRP沉默组转染pLV-shRNA-CRP慢病毒颗粒.转染24h后,采用MTT法检测三组H9c2心肌细胞活力.结果 ①CRP沉默组和对照组H9c2心肌细胞中CRP mRNA相对表达量分别为0.320±0.069、1±0.090,miR-21相对表达量分别为0.740±0.099、0.280±0.010,两组相比P均＜0.01.CRP沉默组PDCD4、PTEN和Spry1 mRNA表达均低于对照组(P均＜0.01).②CRP沉默组、对照组和空白组细胞活力分别为0.78±0.030、0.66 +0.010、1.00±0.013;与空白组相比,CRP沉默组和对照组细胞活力均下降(P均＜0.01);与对照组相比,CRP沉默组细胞活力上升(P＜0.05).结论 沉默CRP基因可促进H9c2心肌细胞存活,这可能与其可增加H9c2心肌细胞中miR-21表达,抑制PDCD4、PTEN和Spry1的基因表达有关.

目的 了解长链非编码RNA (long non-coding RNA,LncRNA)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的诊断价值研究的进展,为HCC的早期诊断寻求有用的肿瘤标志物.方法 复习近年来关于LncRNA在HCC中研究的相关文献并加以综述.结果 LncRNA能通过RNA免疫沉淀、测序技术、基因芯片、实时定量PCR等技术在患者的血液及尿液中被检测到.随着RNA测序技术的兴起,鉴定出的LncRNA数量迅速增加,其在肝脏疾病领域的研究也取得了显著进展.目前与HCC相关的LncRNA主要有尿路上皮癌相关1、肝癌高表达基因、肺腺癌转移相关转录子1、HOXA远端转录本、H19、SPRY4内含子转录物1、浆细胞瘤多样异位基因1、uc002mbe.2、uc007biz.1等,其在血液或尿液中具有稳定性且在HCC中异常表达,单独或作为甲胎蛋白的补充可显著提高诊断HCC的灵敏度和特异度,甚至可使灵敏度提高至100％.结论 LncRNA在HCC中特异性表达,有望成为早期诊断HCC的新型生物标志物.但是LncRNA种类众多、结构多样、分子调控机制复杂,想要从中找出强有力的一种或多种组合来替代或补充传统的生物标志物且适用于临床还是有困难,还需要在未来进一步努力.相信随着LncRNA在HCC中研究的深入,其在HCC的早期筛查、诊断及预后方面会拥有更加广阔的前景.

哺乳动物肠上皮是一种拥有快速自我更新能力的组织,在维持机体免疫稳态与肠道应激后的损伤修复中发挥重要作用.源于隐窝底部的多能肠干细胞不断进行增殖、迁移与分化,并沿隐窝-绒毛轴向上移动,从而维持肠上皮完整性.该过程受严格而复杂的基因调控网络参与.越来越多的数据表明,肠上皮完整性受到广泛的非编码RNA的调控,主要包括肠黏膜再生、保护与上皮屏障功能等方面.本文重点讨论了两类非编码RNA(包括microRNAs和lncRNAs)转录后调控肠上皮屏障功能的研究进展.其中,miR-503、miR-146和lnc-uc.173、lnc-SPRY4-IT1、lnc-plncRNA1、lnc-Gata6等,能够促进肠黏膜的更新,增强上皮屏障功能;相反,miR-222、miR-29b、miR-195和lnc-H19与lnc-BC012900等,抑制肠上皮再生并破坏肠上皮屏障功能.miRNAs、mRNAs与lncRNAs间构成复杂的分子网络,共同调控肠上皮稳态.深入研究与肠上皮相关的miRNAs和IncRNAs分子及其作用机制,探寻引起肠黏膜炎症的关键分子靶标,为肠道炎症临床诊治提供新方向与新方法.

目的:研究毒蕈碱型M3受体拮抗剂(4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide,4-DAMP)对黑色素瘤增殖的抑制作用,从而探讨M3受体拮抗剂在抗肿瘤领域的发展前景及意义.方法:利用MTT[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]检测肿瘤细胞活力;EdU荧光染色观察细胞增殖情况.成年雄性BALB/c裸小鼠分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fluorou-racil,5-Fu)组(20 mg?kg-1?d-1)及4-DAMP组(2 mg?kg-1?d-1),建立荷瘤模型.连续给药21 d后处死小鼠,计算抑制率、脾指数.实时定量PCR(quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测A375细胞系中M3R、MIA(melanoma inhibitory activity)、SP-1(transcrip-tion factor Sp1)、Lnc-SPRY4-IT1(SPRY4 Intronic Transcript 1)的基因表达.Western Blot检测ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2)蛋白含量的表达.结果:MTT及EdU均表明,4-DAMP可明显抑制A375细胞的活力(P<0.01).动物实验结果表明,5-Fu组与4-DAMP组肿瘤体积及质量均明显减小(P<0.05);H&E染色可见细胞间隙变大,结缔组织纤维增多.qRT-PCR结果表明,4-DAMP或转染si-M3R均可降低细胞内MIA、SP-1以及LncRNA-SPRY4-IT1的表达.Western Blot结果表明,4-DAMP或转染si-M3R后均可降低细胞内ERK1/2的表达.结论:M3受体拮抗剂4-DAMP在细胞及动物实验中均能抑制黑色素瘤增殖发挥抗肿瘤功效,降低肿瘤细胞内MIA、SP-1的mRNA和LncRNA-SPRY4-IT1的表达,同时抑制了ERK1/2的表达.

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200 nt、没有编码蛋白能力的非编码RNA.近年研究表明,lncRNA与肺癌的发生发展密切相关,对肺癌的发生、发展、转移和预后有重要作用.lncRNA分为致癌lncRNA和抑癌lncRNA.与肺癌相关的致癌基因有肺腺癌转移相关因子1(MALAT1)、HOX转录反义RNA(HOTAIR)、结肠癌相关转录本2(CCAT2)、生长停滞特异性蛋白6-反义RNA1(DLX6-AS1)、H19、吸烟和癌症相关的长链非编码RNA1(SCAL1)、Sox2重叠转录本(Sox2ot)等,与肺癌的生长、迁移和侵袭相关.与肺癌相关的抑癌基因有生长停滞特异性转录本5(GAS5)、AK126698、生长停滞特异基因转录的反义RNA(GAS6-AS1)、SPRY4内含子转录本1(SPRY4-IT1)、BRAF基因激活的非编码RNA(BANCR),可以抑制肿瘤的发生发展.

长非编码RNAs (lncRNAs)在转录水平和转录后水平均对细胞的多种功能发挥重要的调节作用.大量研究已经表明,lncRNAs在肿瘤细胞的糖代谢过程中发挥了不可忽视的作用.然而,其具体的机制仍需进一步探究.该文研究了lncRNA SPRY4-AS1通过糖代谢调控人肝癌细胞(HepG2细胞和Huh7细胞)体外增殖与凋亡的影响及其相关机制.首先,利用TCGA数据库预测了SPRY4-AS1的表达对肝癌患者生存率的影响.进而通过siRNA或慢病毒载体构建SPRY4-AS1的HepG2细胞或Huh7细胞的低表达株和高表达株探究其机制.并通过CCK-8、流式细胞仪(FCM)、细胞耗氧率(OCR)、Western印迹和荧光定量PCR等方法,分别检测细胞的体外增殖能力、细胞周期变化及凋亡相关蛋白质水平的变化与糖酵解能力的变化,同时也检测了IRS-1、AKT和PI3K磷酸化基因在蛋白质水平的表达量.结果 表明,促进lncRNA SPRY4-AS1的表达可以提高肝癌患者的生存能力,并对其机制进一步探究发现:与对照组(si-NC)相比,实验组(si-lncRNASPRY4-AS1)细胞增殖能力明显增强(P＜0.05),而在过表达细胞中,细胞增殖能力明显下降(P＜0.05).此外,在过表达lncRNA SPRY4-AS1的细胞中,S期细胞所占比例显著减少(P＜0.05),G2/M期细胞比例增加(P＜0.05),Bcl-2基因在蛋白质水平的表达量降低,Cytc基因在蛋白质水平的表达上升.在低表达lncRNA SPRY4-AS1细胞中,PI3K/AKT信号通路被激活;而过表达细胞中,PI3K/AKT信号通路被抑制.然而,细胞胞外产酸能量增强,HK与PFK的mRNA表达量上升(P＜0.05),并且酶活显著增强(P＜0.05).综上所述,lncRNA SPRY4-AS1可以通过抑制PI3K/AKT信号通路,降低糖酵解水平,导致其凋亡,从而抑制细胞的增殖,延缓肝癌患者的寿命.