目的:探讨一个多指(趾)畸形家系潜在的致病基因及机制。方法:收集多指(趾)家系5代11人的临床资料及外周血，全外显子测序，Sanger测序进行验证，确定突变位点。构建重组质粒，在293T细胞中进行外源表达，进行免疫印迹实验和免疫共沉淀实验确定突变蛋白分子量及融合抑制因子(suppressor of fused，SUFU)相互作用情况。结果:先证者及其外曾外祖母、外祖母、母亲、舅舅均存在NM_000168.6( GLI3)：[c.2880del，p.(Asp962MetfsTer41)]移码突变，正常成员未见异常。其表达一个分子量约为130 kDa截短的突变体，与SUFU的相互作用显著降低，音速刺猬(sonic hedgehog signaling，SHH)信号通路激活强度受限。根据美国医学遗传学和与基因组学学会遗传变异分类标准与指南评级为致病变异。 结论:GLI3：c.2880del突变是家系中多指(趾)的致病因， GLI3基因突变谱进一步丰富。

髓母细胞瘤是儿童期颅内高发肿瘤之一，分为Wnt亚型、Shh亚型、Group 3和Group 4亚型。手术切除肿瘤后可以辅以放疗和化疗，患者的5年无进展生存率可达50%～70%以上。部分患者伴有一些遗传性疾病，例如Gorlin-Goltz综合征、Li-Fraumeni综合征、家族性腺瘤性息肉病综合征等，不同综合征伴随着不同的胚系基因突变，其治疗方案、临床预后与患者的年龄、病理、分子亚型有密切关系。Shh亚型是合并基因胚系突变的高危亚型，需要常规行基因检测，以排除 TP53、 PTCH1、 SUFU、 GPR161、 ELP1等基因胚系突变，其他亚型的发病率相对较低，但需要排除 APC、 PALB2、 BRCA2等基因胚系突变。

目的:探讨环状RNA circ-MYBL2在前列腺癌组织中的表达及影响前列腺癌发生和转移的分子机制。方法:选取2017年2月—2021年4月荆门市第二人民医院泌尿外科收治的45例前列腺癌患者手术切除的前列腺癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测前列腺癌组织和癌旁组织中circ-MYBL2的表达差异、前列腺癌细胞系和永生化前列腺导管上皮细胞中circ-MYBL2的表达差异，筛选circ-MYBL2低表达细胞系，分别转染circ-MYBL2质粒(circ-MYBL2组)或阴性对照质粒(对照组)至前列腺癌细胞。qRT-PCR检测circ-MYBL2质粒转染效率。CCK-8法和细胞划痕实验分别检测circ-MYBL2对细胞增殖和迁移能力的影响。starBase v2.0软件分别预测circ-MYBL2作用的miRNA及miRNA的靶基因。用双荧光素酶报告基因实验验证circ-MYBL2和miRNA之间的调控关系。qRT-PCR分别检测circ-MYBL2对miRNA表达的影响及miRNA对靶基因mRNA表达的影响。Western blotting检测靶基因蛋白和Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。计量资料以均数±标准差( Mean± SD)表示，多样本均数间比较采用单因素方差分析，两样本均数间比较采用 t检验。 结果:前列腺癌组织中，circ-MYBL2表达量显著低于癌旁组织，差异具有统计学意义( P<0.01)。前列腺癌细胞系中，circ-MYBL2表达量显著低于前列腺导管上皮细胞，DU-145细胞表达量最低，差异均具有统计学意义( P<0.01)。与对照组相比，circ-MYBL2组DU-145细胞circ-MYBL2表达量显著增加( P<0.01)，circ-MYBL2能够降低DU-145细胞的增殖活性( P<0.05)和迁移能力( P<0.01)。circ-MYBL2作为海绵吸附miR-324-3p，miR-324-3p互补结合 SUFU基因。circ-MYBL2抑制miR-324-3p的表达( P<0.01)， SUFU基因表达增加( P<0.01)，Wnt/β-catenin信号通路转导被抑制。 结论:circ-MYBL2通过吸附miR-324-3p促进 SUFU基因的表达，抑制Wnt/β-catenin信号通路，进而降低前列腺癌细胞增殖活性和迁移能力。

本研究利用选择信号分析方法在美系杜洛克猪和丹系杜洛克猪中筛选与重要经济性状相关的候选基因.选取健康状态良好、饲养管理水平一致的成年美系杜洛克公猪33头、丹系杜洛克公猪11头,提取DNA并重测序,利用Fst&Pi的联合分析,保留候选区域,对注释基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,进一步筛选与重要经济性状相关的相关候选基因.美系杜洛克猪和丹系杜洛克猪的全基因组重测序平均测序深度在13×以上,测序数据平均效率为99.82％,Q30平均值分别为91.91％、91.93％,G+C含量分别在42.90％-43.83％和42.48％～43.55％,均表明本次测序数据质量较高.以5％为筛选阈值,关联Fst&Pi提取相关候选区域,采用选择性消除方法检测到相应的选择信号区域,美系杜洛克猪和丹系杜洛克猪之间的Fst值为0.268,θπ比值分别为0.495和-1.415,Pi值分别为4.206和3.506.在美系杜洛克猪的选择性消除分析中有557个受选择区域,注释到1 323个基因;丹系杜洛克猪的选择性消除分析中有207个受选择区域,注释到338个基因.GO分析和KEGG通路富集分析发现,在美系和丹系杜洛克群体中初步筛选到ERLIN2、TMCO2、PITX2、SORCS3和SUFU等5个与精子发生、脂肪形成、生殖功能等性状相关的候选基因.在美系杜洛克猪中筛选到ATP1B1、LAMA4、EP300、ELOVL3、ECHS1、THEME5、PIP5K1A、PPT1、UBQLN1、1L2、CNTFR、ITGA10、SEC24D、MAP3K5 和 HSP90B1 等 15 个与肉质、脂肪合成与代谢、精子发生、生长发育、骨发生和饲料效率等性状相关的候选基因.在丹系杜洛克猪中筛选到PDIA3、CBLIN2、CYCS和CDH7等4个候选基因,分别与产奶量、肉质性状、骨骼肌、饲料效率相关;BMI1、LHX8、ELL3、CATSPER2和CSMD1等5个与繁殖性状相关的候选基因.本研究发现美系杜洛克猪群体和丹系杜洛克猪群体间存在较大的遗传分化,为进一步研究杜洛克公猪的遗传特性提供了基因组数据支撑.

目的 探讨黄芪甲苷、人参皂苷Rg1对慢性萎缩性胃炎大鼠Hedgehog信号通路的影响.方法 雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组、Purmorphamine组及叶酸组,运用幽门弹簧法制备萎缩性胃炎模型.应用HE染色评价胃黏膜病理损伤,应用Western Blot、RT-PCR和量子点介导的免疫荧光化学法分别检测各组大鼠胃组织Hedgehog信号通路的蛋白和基因表达水平.结果 与空白组相比,模型组大鼠Shh、Ptch、Gli-1基因及蛋白含量均显著降低(P<0.05),SUFU 蛋白表达明显升高(P<0.01),CyclinD1表达减弱(P<0.01).与模型组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组及叶酸组Shh蛋白表达明显升高(P<0.05),各给药组均能显著升高Ptch蛋白含量(P<0.05).人参皂苷Rg1高剂量组、Purmorphamine组Gli-1蛋白表达明显升高(P<0.05),黄芪甲苷高剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组和Purmorphamine组SUFU蛋白表达明显减弱(P<0.05).黄芪甲苷高剂量组和Purmorphamine组 CyclinD1蛋白表达增强(P<0. 05).结论 黄芪甲苷、人参皂苷 Rg1对Hedgehog信号通路关键因子有一定的激活作用,进而改善慢性萎缩性胃炎大鼠的胃黏膜病变.

目的 探讨黄芪、三七及其配伍对萎缩性胃炎癌前病变大鼠神经胶质瘤关联癌基因同源物(Gli1/2/3)、丝氨酸激酶抑制物(SUFU)及细胞周期蛋白CyelinD1水平的影响.方法 雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪组、三七组、黄芪三七组、Purmorphamine组、环巴明组及叶酸组,每组10只.采用MNNG负荷多因素法制备萎缩性胃炎癌前病变模型,并给予相应药物治疗8周.Western blot及RT-PCR检测大鼠Gli1/2/3蛋白及基因水平.量子点介导的免疫荧光化学法检测SUFU及CyclinD1蛋白表达.结果 与空白组相比,模型组大鼠Gli-1 mRNA含量降低明显(P＜0.01),Gli-2及Gli-3蛋白含量均显著升高(P＜0.01),SUFU蛋白表达明显增强(P＜0.01),CyclinD1蛋白表达明显减弱(P＜0.01).与模型组相比,三七组可明显升高Gli-1基因表达(P＜0.05),降低Gli-2、Gli-3和SUFU的蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01),黄芪三七组对Gli-3及SUFU的蛋白表达具有改善作用(P ＜0.05,P＜0.01),而黄芪组仅能降低SUFU蛋白表达(P＜0.01),对其余指标均未见明显改善.结论 活血药三七可影响萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜hedgehog信号通路中关键因子的表达,从而对萎缩性胃炎癌前病变起到防治作用.

Hedgehog(Hh)信号通路在胚胎发育、细胞增殖和分化中起着重要的调节作用,此通路异常激活可能会导致全身恶性肿瘤(肺癌、胃癌)的发生,尤其是口腔鳞癌,因此Hh信号通路与口腔鳞癌密切相关. Hh信号通路主要有分泌型糖蛋白配体 Hedgehog配体、跨膜蛋白受体Ptched受体、跨膜蛋白Smoothened、核转录因子GLI蛋白、Fu抑制子(SuFu)及下游目的基因组成.其中GLI1作为Hh信号通路的正向调控基因,起着激活Hh信号通路的作用;而SuFu作为Hh信号通路负向调控基因,起着抑制Hh信号通路的作用.本文就Hh信号通路在口腔鳞癌中信号传导机制及其相关基因GLI1和SuFu的研究进展进行综述,为未来口腔鳞癌的治疗、诊断和预防提供依据.

目的:探讨在髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)中磷酸化修饰对Suppressor of fused (Sufu)抑癌活性的调节和潜在机制.方法:免疫组化分析MB组织芯片中Sufu的表达及磷酸化水平.在MB细胞系DAOY中转染野生型Sufu或其磷酸化位点突变质粒,分别通过细胞免疫化学染色、Western blot、CCK8、EdU标记、细胞流式检测等分析Sufu的核浆分布以及转染细胞的增殖、凋亡等指标,通过荧光素酶报告基因实验检测转染细胞Hedgehog(Hh)信号通路下游胶质瘤相关癌基因同源物(hlioma-associated oncogene homologue,Gli)的转录活性,Western blot检测鸟氨酸脱羧酶(omithine decarboxylase,ODC1)的表达水平.结果:Sufu在MB组织的表达明显高于正常小脑,并呈现磷酸化的修饰状态.磷酸化Sufu主要聚集在细胞核.Sufu能抑制DAOY细胞的增殖及克隆形成,促进细胞凋亡.非磷酸化的Sufu突变体抑癌作用明显减弱.已知在Hh通路下游,Gli介导的转录活化以及ODC1介导的多胺合成增加均可以促进MB细胞的生长.磷酸化Sufu抑制Gli介导的转录活化,非磷酸化Sufu对Gli的抑制作用减弱,并促进ODC1的表达.结论:Sufu发生磷酸化修饰后,对MB的抑制作用增强,其机制可能与抑制Hh信号下游的Gli转导活性和细胞的多胺代谢有关.

目的:探讨卵巢癌中抑癌因子SUFU (suppressor of Fused)表达变化及其意义.方法:通过免疫组化检测人卵巢癌和癌旁组织样本中SUFU的表达量,并在数据库大样本和细胞水平上进行验证.同时在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80和卵巢癌细胞系SKOV3分别抑制和过表达SUFU后,运用MTT、EdU、流式细胞术、Western blot、Transwell、平板克隆形成实验等方法分别检测细胞的增殖、凋亡、上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、迁移与侵袭的情况,并随后用Western blot和实时定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)检测Sonic Hedgehog(SHH)信号通路的下游靶基因GLI1蛋白和mRNA水平.结果:在3例卵巢癌组织样本中,相比于癌旁组织,癌组织中SUFU蛋白表达有一定下调,而这个结果在TCGA数据库大样本中也得到验证;此外在细胞水平上,人正常卵巢上皮细胞IOSE80中SUFU蛋白和mRNA表达水平明显高于卵巢癌细胞SKOV3.进一步在SKOV3细胞中过表达SUFU能够有效抑制其增殖、EMT、克隆形成、迁移和侵袭,促进凋亡;相反,在IOSE80细胞中下调SUFU则能够促进细胞EMT、迁移和侵袭能力.同时,相比正常卵巢上皮细胞,卵巢癌细胞中GLI1 mRNA和蛋白水平明显上升;当在卵巢癌细胞中上调SUFU时,SHH信号通路的下游靶基因GLI1的表达则明显下调.结论:SUFU能够抑制卵巢癌的发生发展,其作用机制与SHH信号通路相关.

目的 探讨lncRNA HEIH对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1,RT-qPCR检测细胞中HEIH表达水平;分别转染si-HEIH和miR-98-5p mimics至A549细胞,沉默A549细胞中HEIH表达或过表达miR-98-5p;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测CCND1、caspase-3、SHH、GLI-1、PTCH和SUFU蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证HEIH与miR-98-5p之间的关系.结果 与正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞系A549、A427、H1299和TKB-1中HEIH表达水平显著升高(P<0.05).其中A549细胞中的HEIH表达最高.因此,后续实验选择A549细胞为研究对象.沉默HEIH表达或过表达miR-98-5p均可降低A549细胞培养12、48和72 h后吸光度值(A值)(P<0.05)(MTT法);升高凋亡率(P<0.05);抑制CCND1蛋白表达(P<0.05),促进caspase-3蛋白表达(P<0.05).并且过表达miR-98-5p还抑制了A549细胞中SHH和GLI-1的mRNA和蛋白表达(P<0.05),促进了PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05).过表达HEIH逆转了过表达miR-98-5p对A549细胞增殖、凋亡以及SHH、GLI-1、PTCH和SUFU的mRNA和蛋白表达的影响.结论 沉默HEIH表达可能通过靶向miR-98-5p经Hedgehog信号通路抑制肺癌细胞的增殖,并促进其凋亡.