Background::Perturbations in bone marrow mesenchymal stem cell (BMSC) differentiation play an important role in steroid-induced osteonecrosis of the femoral head (SONFH). At present, studies on SONFH concentrate upon the balance within BMSC osteogenic and adipogenic differentiation. However, BMSC apoptosis as well as proliferation are important prerequisites in their differentiation. The hedgehog (HH) signaling pathway regulates bone cell apoptosis. Baicalin (BA), a well-known compound in traditional Chinese medicine, can affect the proliferation and apoptosis of numerous cell types via HH signaling. However, the potential role and mechanisms of BA on BMSCs are unclear. Thus, we aimed to explore the role of BA in dexamethasone (Dex)-induced BMSC apoptosis in this study.Methods::Primary BMSCs were treated with 10 -6 mol/L Dex alone or with 5.0 μmol/L, 10.0 μmol/L, or 50.0 μmol/L BA for 24 hours followed by co-treatment with 5.0 μmol/L, 10.0 μmol/L, or 50.0 μmol/L BA and 10 -6 mol/L Dex. Cell viability was assayed through the Cell Counting Kit-8 (CCK-8). Cell apoptosis was evaluated using Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide (PI) staining followed by flow cytometry. The imaging and counting, respectively, of Hochest 33342/PI-stained cells were used to assess the morphological characteristics and proportion of apoptotic cells. To quantify the apoptosis-related proteins (e.g., apoptosis regulator BAX [Bax], B-cell lymphoma 2 [Bcl-2], caspase-3, and cleaved caspase-3) and HH signaling pathway proteins, western blotting was used. A HH-signaling pathway inhibitor was used to demonstrate that BA exerts its anti-apoptotic effects via the HH signaling pathway. Results::The results of CCK-8, Hoechst 33342/PI-staining, and flow cytometry showed that BA did not significantly promote cell proliferation (CCK-8: 0 μmol/L, 100%; 2.5 μmol/L, 98.58%; 5.0 μmol/L, 95.18%; 10.0 μmol/L, 98.11%; 50.0 μmol/L, 99.38%, F = 2.33, P > 0.05), but it did attenuate the effect of Dex on apoptosis (Hoechst 33342/PI-staining: Dex+ 50.0 μmol/L BA, 12.27% vs. Dex, 39.27%, t = 20.62; flow cytometry: Dex + 50.0 μmol/L BA, 12.68% vs. Dex, 37.43%, t= 11.56; Both P < 0.05). The results of western blotting analysis showed that BA reversed Dex-induced apoptosis by activating the HH signaling pathway, which down-regulated the expression of Bax, cleaved-caspase 3, and suppressor of fused (SUFU) while up-regulating Bcl-2, sonic hedgehog (SHH), and zinc finger protein GLI-1 (GLI-1) expression (Bax/Bcl-2: Dex+ 50.0 μmol/L BA, 1.09 vs. Dex, 2.76, t= 35.12; cleaved caspase-3/caspase-3: Dex + 50.0 μmol/L BA, 0.38 vs. Dex, 0.73, t= 10.62; SHH: Dex + 50.0 μmol/L BA, 0.50 vs. Dex, 0.12, t= 34.01; SUFU: Dex+ 50.0 μmol/L BA, 0.75 vs. Dex, 1.19, t= 10.78; GLI-1: Dex+ 50.0 μmol/L BA, 0.40 vs. Dex, 0.11, t= 30.68. All P < 0.05). Conclusions::BA antagonizes Dex-induced apoptosis of human BMSCs by activating the HH signaling pathway. It is a potential candidate for preventing SONFH.

目的:探讨一个多指(趾)畸形家系潜在的致病基因及机制。方法:收集多指(趾)家系5代11人的临床资料及外周血，全外显子测序，Sanger测序进行验证，确定突变位点。构建重组质粒，在293T细胞中进行外源表达，进行免疫印迹实验和免疫共沉淀实验确定突变蛋白分子量及融合抑制因子(suppressor of fused，SUFU)相互作用情况。结果:先证者及其外曾外祖母、外祖母、母亲、舅舅均存在NM_000168.6( GLI3)：[c.2880del，p.(Asp962MetfsTer41)]移码突变，正常成员未见异常。其表达一个分子量约为130 kDa截短的突变体，与SUFU的相互作用显著降低，音速刺猬(sonic hedgehog signaling，SHH)信号通路激活强度受限。根据美国医学遗传学和与基因组学学会遗传变异分类标准与指南评级为致病变异。 结论:GLI3：c.2880del突变是家系中多指(趾)的致病因， GLI3基因突变谱进一步丰富。

髓母细胞瘤是儿童期颅内高发肿瘤之一，分为Wnt亚型、Shh亚型、Group 3和Group 4亚型。手术切除肿瘤后可以辅以放疗和化疗，患者的5年无进展生存率可达50%～70%以上。部分患者伴有一些遗传性疾病，例如Gorlin-Goltz综合征、Li-Fraumeni综合征、家族性腺瘤性息肉病综合征等，不同综合征伴随着不同的胚系基因突变，其治疗方案、临床预后与患者的年龄、病理、分子亚型有密切关系。Shh亚型是合并基因胚系突变的高危亚型，需要常规行基因检测，以排除 TP53、 PTCH1、 SUFU、 GPR161、 ELP1等基因胚系突变，其他亚型的发病率相对较低，但需要排除 APC、 PALB2、 BRCA2等基因胚系突变。

目的:探讨环状RNA circ-MYBL2在前列腺癌组织中的表达及影响前列腺癌发生和转移的分子机制。方法:选取2017年2月—2021年4月荆门市第二人民医院泌尿外科收治的45例前列腺癌患者手术切除的前列腺癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测前列腺癌组织和癌旁组织中circ-MYBL2的表达差异、前列腺癌细胞系和永生化前列腺导管上皮细胞中circ-MYBL2的表达差异，筛选circ-MYBL2低表达细胞系，分别转染circ-MYBL2质粒(circ-MYBL2组)或阴性对照质粒(对照组)至前列腺癌细胞。qRT-PCR检测circ-MYBL2质粒转染效率。CCK-8法和细胞划痕实验分别检测circ-MYBL2对细胞增殖和迁移能力的影响。starBase v2.0软件分别预测circ-MYBL2作用的miRNA及miRNA的靶基因。用双荧光素酶报告基因实验验证circ-MYBL2和miRNA之间的调控关系。qRT-PCR分别检测circ-MYBL2对miRNA表达的影响及miRNA对靶基因mRNA表达的影响。Western blotting检测靶基因蛋白和Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。计量资料以均数±标准差( Mean± SD)表示，多样本均数间比较采用单因素方差分析，两样本均数间比较采用 t检验。 结果:前列腺癌组织中，circ-MYBL2表达量显著低于癌旁组织，差异具有统计学意义( P<0.01)。前列腺癌细胞系中，circ-MYBL2表达量显著低于前列腺导管上皮细胞，DU-145细胞表达量最低，差异均具有统计学意义( P<0.01)。与对照组相比，circ-MYBL2组DU-145细胞circ-MYBL2表达量显著增加( P<0.01)，circ-MYBL2能够降低DU-145细胞的增殖活性( P<0.05)和迁移能力( P<0.01)。circ-MYBL2作为海绵吸附miR-324-3p，miR-324-3p互补结合 SUFU基因。circ-MYBL2抑制miR-324-3p的表达( P<0.01)， SUFU基因表达增加( P<0.01)，Wnt/β-catenin信号通路转导被抑制。 结论:circ-MYBL2通过吸附miR-324-3p促进 SUFU基因的表达，抑制Wnt/β-catenin信号通路，进而降低前列腺癌细胞增殖活性和迁移能力。

目的 探讨融合抑制因子(SUFU)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达水平及其低表达对OSCC细胞生物学行为的影响.方法 利用IHC检测OSCC组织及邻近正常组织中SUFU的蛋白表达,qRT-PCR和Western blot技术测定OSCC细胞(SCC15、CAL27)及人口腔上皮角质细胞(HOK)中SUFU mRNA及蛋白的表达水平,并通过Pearson卡方检验探索其组织蛋白表达与OSCC患者临床病理特征之间的关系;进一步在OSCC细胞株中降低SUFU的表达,通过CCK-8增殖实验、Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测siSUFU组及siNC组细胞的增殖、侵袭和迁移能力.结果 实验表明在OSCC组织中SUFU蛋白的表达水平低于邻近正常组织(P＜0.05);OSCC细胞中SUFU mRNA及蛋白的表达水平低于人口腔上皮角质细胞(P＜0.05);且SUFU蛋白表达与OSCC患者的肿瘤临床分期和分化程度具有相关性(P＜0.05);通过转染SUFU干扰片段发现siSUFU组细胞的增殖活性、侵袭细胞数量以及划痕愈合率相比siNC组明显提高(P＜0.05).结论 SUFU在OSCC中呈现低表达,与肿瘤的临床分期和分化程度相关,且参与调节OSCC细胞增殖、侵袭和迁移功能,并可能通过调控Hh信号通路影响OSCC的发生及进展.

本研究利用选择信号分析方法在美系杜洛克猪和丹系杜洛克猪中筛选与重要经济性状相关的候选基因.选取健康状态良好、饲养管理水平一致的成年美系杜洛克公猪33头、丹系杜洛克公猪11头,提取DNA并重测序,利用Fst&Pi的联合分析,保留候选区域,对注释基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,进一步筛选与重要经济性状相关的相关候选基因.美系杜洛克猪和丹系杜洛克猪的全基因组重测序平均测序深度在13×以上,测序数据平均效率为99.82％,Q30平均值分别为91.91％、91.93％,G+C含量分别在42.90％-43.83％和42.48％～43.55％,均表明本次测序数据质量较高.以5％为筛选阈值,关联Fst&Pi提取相关候选区域,采用选择性消除方法检测到相应的选择信号区域,美系杜洛克猪和丹系杜洛克猪之间的Fst值为0.268,θπ比值分别为0.495和-1.415,Pi值分别为4.206和3.506.在美系杜洛克猪的选择性消除分析中有557个受选择区域,注释到1 323个基因;丹系杜洛克猪的选择性消除分析中有207个受选择区域,注释到338个基因.GO分析和KEGG通路富集分析发现,在美系和丹系杜洛克群体中初步筛选到ERLIN2、TMCO2、PITX2、SORCS3和SUFU等5个与精子发生、脂肪形成、生殖功能等性状相关的候选基因.在美系杜洛克猪中筛选到ATP1B1、LAMA4、EP300、ELOVL3、ECHS1、THEME5、PIP5K1A、PPT1、UBQLN1、1L2、CNTFR、ITGA10、SEC24D、MAP3K5 和 HSP90B1 等 15 个与肉质、脂肪合成与代谢、精子发生、生长发育、骨发生和饲料效率等性状相关的候选基因.在丹系杜洛克猪中筛选到PDIA3、CBLIN2、CYCS和CDH7等4个候选基因,分别与产奶量、肉质性状、骨骼肌、饲料效率相关;BMI1、LHX8、ELL3、CATSPER2和CSMD1等5个与繁殖性状相关的候选基因.本研究发现美系杜洛克猪群体和丹系杜洛克猪群体间存在较大的遗传分化,为进一步研究杜洛克公猪的遗传特性提供了基因组数据支撑.

目的:基于Hedgehog信号通路探讨石斛提取物毛兰素(erianin,ER)抑制结直肠癌HT29细胞上皮间质转化(EMT)和血管生成的作用机制.方法:将HT29细胞分为空白对照组、ER-L(25 μg/mL)组、ER-M(50 μg/mL)组、ER-H(75 μg/mL)组、ER-H(75 μg/mL)+PM(Hedgehog通路激活剂,1.5 μmol/L)组.MTT法检测细胞增殖活力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,血管拟态形成实验检测血管生成能力,WB法检测与EMT进程、Hedgehog信号通路和拟态血管生成相关蛋白质的表达.结果:HT29细胞增殖活性随着ER质量浓度的升高而逐渐降低(P<0.05);与空白对照组比较,ER各组细胞克隆形成率、迁移与侵袭能力、血管形成能力、间质标志蛋白(N-cadherin、vimentin)、血管生成相关蛋白(VEGF、VE-cadherin)及Hedgehog通路相关蛋白(SHH、GLI1、SMO、c-Myc)表达均显著下降(均P<0.05),上皮标志蛋白(E-cadherin)、Hedgehog通路中融合蛋白抑制剂(SUFU)蛋白表达均显著上升(均P<0.05);PM处理在一定程度上逆转了ER对于HT29细胞增殖、EMT和血管生成的抑制作用(均P<0.05).结论:ER可以抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移与侵袭、EMT和血管生成,其机制可能与抑制Hedgehog信号通路激活有关.

本文旨在研究黄芩苷调控Hedgehog信号通路抗炎性结直肠癌的机制.不同剂量黄芩苷给予结直肠癌SW620 细胞和结直肠癌 AOM/DSS 小鼠,采用 MTT 法、Hoechst33342/PI 双染法、ELISA、RT-qPCR 以及 Western blot 等多种技术进行检测.结果显示,黄芩苷能够明显抑制SW620细胞增殖且在高剂量和长时间培养情况下对NCM460细胞具有一定抑制作用,同时伴随Caspase-9和Caspase-3活性的增加.此外,黄芩苷抑制细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,降低Hedgehog信号通路SHH、SMO以及Gli1相关mRNA和蛋白的表达水平,同时提高SUFU mRNA和蛋白的表达水平.在AOM/DSS结直肠癌小鼠中,黄芩苷降低组织IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,同时抑制Hedgehog信号通路SHH、SMO以及Gli1相关蛋白的表达水平,提高SUFU蛋白的表达水平.上述结果提示,黄芩苷能够抑制SW620细胞的增殖、克隆以及诱导细胞凋亡,同时降低细胞和组织中炎症因子的表达水平,其机制可能涉及对于Hedgehog信号通路的抑制.

目的 探讨黄芪甲苷、人参皂苷Rg1对慢性萎缩性胃炎大鼠Hedgehog信号通路的影响.方法 雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组、Purmorphamine组及叶酸组,运用幽门弹簧法制备萎缩性胃炎模型.应用HE染色评价胃黏膜病理损伤,应用Western Blot、RT-PCR和量子点介导的免疫荧光化学法分别检测各组大鼠胃组织Hedgehog信号通路的蛋白和基因表达水平.结果 与空白组相比,模型组大鼠Shh、Ptch、Gli-1基因及蛋白含量均显著降低(P<0.05),SUFU 蛋白表达明显升高(P<0.01),CyclinD1表达减弱(P<0.01).与模型组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组及叶酸组Shh蛋白表达明显升高(P<0.05),各给药组均能显著升高Ptch蛋白含量(P<0.05).人参皂苷Rg1高剂量组、Purmorphamine组Gli-1蛋白表达明显升高(P<0.05),黄芪甲苷高剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组和Purmorphamine组SUFU蛋白表达明显减弱(P<0.05).黄芪甲苷高剂量组和Purmorphamine组 CyclinD1蛋白表达增强(P<0. 05).结论 黄芪甲苷、人参皂苷 Rg1对Hedgehog信号通路关键因子有一定的激活作用,进而改善慢性萎缩性胃炎大鼠的胃黏膜病变.

目的 探讨黄芪、三七及其配伍对萎缩性胃炎癌前病变大鼠神经胶质瘤关联癌基因同源物(Gli1/2/3)、丝氨酸激酶抑制物(SUFU)及细胞周期蛋白CyelinD1水平的影响.方法 雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪组、三七组、黄芪三七组、Purmorphamine组、环巴明组及叶酸组,每组10只.采用MNNG负荷多因素法制备萎缩性胃炎癌前病变模型,并给予相应药物治疗8周.Western blot及RT-PCR检测大鼠Gli1/2/3蛋白及基因水平.量子点介导的免疫荧光化学法检测SUFU及CyclinD1蛋白表达.结果 与空白组相比,模型组大鼠Gli-1 mRNA含量降低明显(P＜0.01),Gli-2及Gli-3蛋白含量均显著升高(P＜0.01),SUFU蛋白表达明显增强(P＜0.01),CyclinD1蛋白表达明显减弱(P＜0.01).与模型组相比,三七组可明显升高Gli-1基因表达(P＜0.05),降低Gli-2、Gli-3和SUFU的蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01),黄芪三七组对Gli-3及SUFU的蛋白表达具有改善作用(P ＜0.05,P＜0.01),而黄芪组仅能降低SUFU蛋白表达(P＜0.01),对其余指标均未见明显改善.结论 活血药三七可影响萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜hedgehog信号通路中关键因子的表达,从而对萎缩性胃炎癌前病变起到防治作用.