目的 从肠道菌群探讨化痰活血通络方治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机制,为化痰活血通络方临床应用提供依据.方法 25只雄性ApoE-/-小鼠,高脂饲料喂养12周,制备AS模型;分为模型组、全方组、通络组、化痰组、他汀组各5只,另设C57BL/6J雄性小鼠5只作为正常组,各组相应药物灌胃治疗12周.采用16S rRNA扩增子测序检测肠道菌群;苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉及肠道的病理形态;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清中相关指标,Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、核因子-κB(NF-κB)、白介素-6(IL-6)蛋白含量.结果 与正常组相比,模型组中物种丰富度及多样性下降明显,厚壁菌门(Fir-micutes)与拟杆菌门(Bacteroidetes)的比例(F/B)显著上升,血清中脂多糖(LPS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),主动脉中TLR4、NLRP3、NF-κB、IL-6蛋白含量显著上升(P＜0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量显著下降(P＜0.01),小鼠主动脉斑块面积显著增加(P＜0.01)并伴有大量泡沫细胞及炎性浸润,肠内有大片绒毛脱落与固有层裸露,与模型组相比全方组可显著增加物种丰富度及多样性,降低F/B的比例(P＜0.01),提高有益菌的相对丰度,降低有害菌的相对丰度,在全方组与阿托伐他汀组中LPS、TG、TC、LDL-C、TLR4、NLRP3、NF-κB、IL-6均显著下降(P＜0.01),HDL-C显著上升(P＜0.01),并且可明显缓解上述病理改变.结论 化痰活血通络方可改善肠道菌群的组成及脂代谢,减少LPS的产生,并通过TLR4/NF-KB/NLRP3信号通路下调主动脉中炎性因子的表达,减少脂质的积累来缓解ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化.

目的:观察达原饮对幽门螺杆菌(Hp)感染模型大鼠胃组织和口周皮肤Toll样受体4/核因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子的影响,探讨达原饮治疗Hp感染的机制.方法:选取44只雄性SD大鼠,随机分为空白组8只及造模组36只,造模组予以Hp菌液灌胃造模,造模成功后,将造模组随机分为模型组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组、西药组,每组各8只,分别予以相应药物灌胃,空白组、模型组予以等量生理盐水灌胃,灌胃2周.观察大鼠造模前后一般情况改变,苏木精-伊红(HE)染色观察口周皮肤和胃组织病理学变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠口周皮肤和胃组织TLR4、NF-κB、NLRP3表达以及血清中TNF-α、IL-1β表达水平.结果:给药干预后,与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠皮毛柔顺光泽,饮食水量增加,大便逐渐成型,胃黏膜上皮细胞层次基本分明,排列较整齐,炎症细胞浸润减少,口周皮肤角化过度、棘层增厚、毛囊周围轻度炎症细胞浸润等情况均有不同程度改善.与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠胃组织和口周皮肤TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达水平均有不同程度的下调(P＜0.05或P＜0.01),血清炎症因子TNF-α、IL-1β表达明显下降(P＜0.01).结论:达原饮可能通过干预TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制TLR4、NF-κB、NLRP3及下游炎症因子的表达,减轻Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤炎症损伤.

目的 探讨白芍总苷对自身免疫性甲状腺炎(AIT)大鼠炎症损伤及TLR4/NF-κB/NLRP3通路的影响.方法 实验分为对照组(Control)、模型组(Model)、白芍总苷组(TGP)、TLR4 抑制剂组(TLR4 inhibitor)和 TGP+TLR4 激动剂组(TGP+TLR4 agonist),每组各10只.除Control组外,其余各组大鼠采用皮下注射甲状腺球蛋白与弗氏佐剂诱导AIT大鼠模型.给药6周后,苏木精-伊红(HE)染色观察甲状腺组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TPOAb、TgAb、TSH、T3、T4、TNF-α、INF-γ、IL-1 β、IL-18 水平;RT-qPCR 和 Western blot 检测甲状腺组织 TLR4/NF-KB/NL-RP3信号通路mRNA和蛋白表达.结果 与Control组相比,Model组大鼠甲状腺滤泡上皮明显受损,TPOAb、TgAb、TSH、T3、T4、TNF-α、INF-γ、IL-1 β、IL-18 水平升高(P＜0.01),TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路mRNA和蛋白表达升高(P＜0.01).与 Model 组相比,TGP 组、TLR4 inhibitor 组大鼠甲状腺滤泡上皮损伤减轻,TPOAb、TgAb、TSH、T3、T4、TNF-α、INF-γ、IL-1 β、IL-18 水平降低(P＜0.01),TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01).与TGP组相比,TGP+TLR4 agonist组大鼠甲状腺滤泡上皮损伤加重,TPOAb、TgAb、TSH、T3、T4、TNF-α、INF-γ、IL-1 β、IL-18 水平升高(P＜0.05 或 P＜0.01),TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 TGP通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,改善甲状腺组织炎症损伤发挥甲状腺保护作用.

目的 探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法 大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、依那普利(10mg/kg)组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),每组12只.除假手术组外,其余5组建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,各组灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药2周.全自动生化分析仪检测大鼠血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化,试剂盒检测大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达,Western blot法检测大鼠肾组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NLRP3蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠肾组织可见肾小管扩张,上皮细胞出现部分空泡化,肾间质内大量炎性细胞浸润、纤维细胞生成及胶原纤维沉积,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平、肾组织TGF-β1阳性表达、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达升高(P＜0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达降低(P＜0.05);与模型组比较,柴胡皂苷B2各剂量组大鼠肾脏病变逐渐减轻,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平,肾组织TGF-β1阳性表达,TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达均降低(P＜0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达均升高(P＜0.05);与柴胡皂苷B2高剂量组比较,依那普利组上述指标无明显变化(P＞0.05).结论 柴胡皂苷B2能够缓解UUO大鼠肾间质纤维化,改善肾功能和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-KB/NLRP3信号通路的表达有关.

目的 探讨圣草酚(eriodictyol,ERD)对高血压小鼠肾脏损害的保护作用及可能机制.方法 将30只C57BL/6J小鼠随机分为5组,每组6只.分别为对照组(Ctrl)、高血压模型组(DOCA/Salt)、圣草酚低剂量(DOCA/Salt+ERD-L)、高剂量(DOCA/Salt+ERD-H)及阳性药培哚普利组(DOCA/Salt+Perindopril).通过 DOCA/Salt 诱导经典的高血压模型,ERD持续给药4周,检测血压、血清尿素氮、肌酐等指标;苏木精-伊红染色(HE)、Masson染色观察肾脏病理学变化;Western blot检测肾脏上皮间充质转化EMT标志蛋白 α-SMA、Vimentin、E-cadherin 和 FN 的表达;Real-Time PCR 检测肾脏炎症因子 Nlrp3、TNF-α、IL-1 β、IL-18、MCP-1和NADPH氧化酶(NOXs)的表达.通过Western blot检测小鼠 TGF-β1、磷酸化(p)-Smad2、TLR4、NF-KB p65 蛋白的表达水平.结果 ERD干预能延缓高血压的发生,改善肾脏组织病理损伤,减轻肾脏胶原沉积,降低肾脏炎症和氧化应激水平,改善EMT蛋白水平,明显降低TGF-β1、p-Smad2、TLR4、NF-κB p65蛋白表达.结论 ERD对DOCA/Salt高血压肾脏损害有明显保护作用,其机制可能与调控TGF-β1/Smad2、TLR4/NF-κB p65等信号通路有关.

目的 研究复方银花解毒颗粒(Compound Yinhua Jiedu Granule)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致幼龄大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及Toll 样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核转录因子-kB(nuclear factor-kB,NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响.方法 将120只幼龄大鼠随机分为6组,分别为对照组、模型组、布洛芬颗粒组(0.8 g/kg)及复方银花解毒颗粒低、中、高剂量(1.25、2.5、5g/kg)组,ig给药1周,末次给药lh后尾iv LPS(1 mg/kg)制备急性肺炎模型,6h后采用麻醉后颈椎脱臼处死.采用ELISA试剂盒检测各组大鼠肺泡灌洗液及血清中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的变化;HE染色观察肺组织形态学变化;运用免疫组化染色法检测肺组织TLR4,入核NF-κB和NLRP3蛋白的表达,Western blotting法检测肺组织中TLR4、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、磷酸化核转录因子-kB抑制蛋白α(nuclear factor-kB inhibitor protein α,p-IkBα)和NLRP3蛋白的表达.结果 复方银花解毒颗粒预处理对LPS诱导幼龄大鼠急性肺损伤具有较强的保护作用,可降低模型大鼠肺泡灌洗液及血清中炎症因子IL-1β、IL-17、TNF-α的水平,减少肺组织中TLR4、NF-κB的激活和NLRP3蛋白的表达.结论 复方银花解毒颗粒对LPS致幼龄大鼠急性肺炎模型具有抗炎作用,其机制可能与下调TLR4/NF-κB/NLRP3炎症信号通路有关.

目的 探讨黄芩苷对LPS诱导的感染性早产大鼠子宫平滑肌的改善作用及可能机制.方法 将孕鼠分为空白组(Control)、感染性早产组(LPS)、黄芩苷低剂量组(Baicalin L)及黄芩苷高剂量组(Baicalin H),每组10只.检测子宫肌张力;HE观察子宫病理组织学变化;ELISA检测各组血清中SOD、CAT、MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α含量;Western-blot检测NLRP3、pro-IL1β和pro-caspase 1以及TLR4/NF-κB信号通路的表达.结果 黄芩苷改善感染性早产大鼠子宫肌张力,减轻子宫病理损伤,降低炎症反应,抑制氧化应激;同时下调NLRP3、pro-IL1β和pro-caspasel表达水平,抑制TLR4/NF-KB信号通路蛋白表达水平.结论 黄芩苷缓解感染性早产大鼠子宫平滑肌收缩,与抑制NLRP3炎性小体与TLR4/NF-κB信号通路有关.

为了考察中等强度运动(MIE)对脑缺血再灌注(CIR)大鼠脑功能修复的促进作用.本研究将Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组、CIR组和MIE组(n=30),CIR组和MIE组大鼠通过大脑中动脉闭塞(MCAO)建立CIR模型.假手术组大鼠进行相同的手术,但不结扎中动脉;MIE组大鼠进行为期4周的中等强度跑台运动,运动完成后,评价各组大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死区域,通过免疫荧光染色对大鼠缺血半影区BrdU和NeuN进行双染色.Western blotting检测大鼠脑缺血半影区TLR4、NF-κB p65、p-NF-KB p65、NLRP3、IL-1β和Caspase-1的表达,通过单因素方差分析和LSD检验比较假手术组、CIR组和MIE组之间的差异(p＜0.05).研究显示,MIE组的梗死面积和神经功能缺损评分显著低于CIR组,MIE组大鼠缺血半影区的NeuN+/BrdU+阳性细胞数显著高于CIR组;MIE组大鼠脑缺血半影区中TLR4、p-NF-KB p65、NLRP3、IL-1β和Caspase-1的表达水平显著低于CIR组.本研究发现中等强度运动通过抑制TLR4/NF-KB/NLRP3信号通路来促进脑缺血再灌注后的神经发生,从而改善神经功能并减轻脑梗死.

目的 探究microRNA-223(miR-223)对甲型流感病毒(IAV)诱导的肺上皮细胞(human bronchial epithelial cells,BEAS-2B)炎症反应、氧化应激和凋亡的作用机制.方法 RT-qPCR检测流感患者和正常受试者血清中miR-223和NOD样受体蛋白3(NLRP3)mRNA的表达量,并检测不同时间的IAV处理对miR-223和NLRP3表达量的影响;CCK-8实验检测肺上皮细胞BEAS-2B的细胞活力;Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测BEAS-2B细胞的凋亡水平;Western blot 实验检测凋亡相关蛋白 Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表达水平;活性氧(ROS)指示剂DCFH-DA检测ROS的水平.结果 miR-223在流感患者血清中的表达量低于正常受试者;IAV抑制miR-223并促进NLRP3 mRNA的表达,且具有时间依赖性(P＜0.05);过表达miR-223可有效降低IAV诱导的BEAS-2B的细胞凋亡率和炎症因子的水平(P＜0.05);此外,过表达miR-223还可以缓解IAV诱导的BEAS-2B的氧化应激(P＜0.05);进一步的实验提示,miR-223抑制TLR4和p65的表达,并抑制NLRP3炎症小体的表达(P＜0.05).结论 miR-223能够缓解IAV诱导的肺上皮细胞的氧化应激和凋亡,减轻细胞损伤,其作用机制是通过抑制TLR4/NF-κB信号通路并抑制NLRP3炎症小体的活化来实现的.

目的:采用网络药理学分析和实验验证相结合的方法,研究芪蛭通络胶囊对脑缺血再灌注损伤的治疗作用和作用机制.方法:利用网络药理学的方法获取芪蛭通络胶囊中的化学成分和潜在靶点并获得脑缺血再灌注病理过程相关的靶点,构建"中药-化合物-疾病网络图",同时对核心靶点进行京都基因与基因组百科全书数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes Genomes,KEGG)富集分析;采用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血90 min再灌注模型,观察芪蛭通络胶囊0.8、1.6、3.2 g/kg和阳性药尼莫地平30 mg/kg给药7 d后的治疗作用;采用神经行为学评分和矿场试验检测大鼠神经功能和运动能力;TTC染色、苏木素伊红(hematoxy-lin-eosin,HE)染色、尼氏染色检测以及酶联免疫吸附法检测脑组织损伤和相关指标的变化;Western Blot检测Toll样受体4/髓样分化因子/核因子 κB(toll-like receptor 4/myeloiddifferentiationfactor88/nuclear factor kappa-B,TLR4/MyD88/NF-KB)通路和 NOD 样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体相关蛋白的变化.结果:网络药理学分析揭示,芪蛭通络胶囊治疗脑缺血再灌注的主要活性成分包括常春藤素、异欧前胡素、芒柄花黄素等19种化合物,其中涉及磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinos-itol-3-kinase/protein serine threonine kinase,PI3K/AKT)信号通路、炎症信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路等.实验研究表明,与模型对照组相比,芪蛭通络胶囊各组和尼莫地平30 mg/kg组均能明显改善脑缺血再灌注后大鼠神经功能和运动能力,减小缺血部位脑梗死体积(P＜0.05或P＜0.01),有效改善病理损伤,明显调控MyD88、NFκB、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase1)蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01).结论:网络药理学及实验验证表明芪蛭通络胶囊可能通过TLR4/MyD88/NFKB通路及NLRP3炎症小体治疗脑缺血再灌注损伤.