目的:了解不同类型氟骨症大鼠骨组织5-甲基胞嘧啶（5-mC）、5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）水平，并分析其相关性。方法:选取4周龄SPF级健康SD大鼠30只，适应性喂养1周后，采用随机数字表法将大鼠按体重（100 ~ 120 g）分为对照组（4 ml·kg -1·bw去离子水灌胃+标准维持饲料）、骨硬化组[20 mg·kg -1·bw氟化钠（NaF）灌胃+标准维持饲料]、骨质疏松/骨软化组（20 mg·kg -1·bw NaF灌胃+低钙低蛋白偏食饲料），每组10只，雌雄各半；每周灌胃6 d，实验周期为5个月。实验结束后采集大鼠心脏血、下肢股骨样本。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清甲基供体S-腺苷甲硫氨酸（SAM）及其代谢产物S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）含量，骨组织5-mC、5-hmC水平；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测大鼠骨组织DNA甲基转移酶（DNMTs），DNA羟甲基化酶（TETs）蛋白表达情况；并分析各组大鼠血清SAM含量、SAM/SAH比值与骨组织5-mC水平以及骨组织5-mC与5-hmC水平的相关性。 结果:对照组、骨硬化组、骨质疏松/骨软化组大鼠血清SAM[11.03（7.06，18.63）、3.96（2.32，9.09）、3.91（2.35，4.46）nmol/L]、SAH含量[（4.69 ± 0.55）、（5.41 ± 1.13）、（13.90 ± 1.09）ng/L]，SAM/SAH比值[2.58（1.54，4.12）、0.62（0.52，1.69）、0.14（0.13，0.15）]及骨组织5-mC[103.39（97.37，109.35）、52.50（50.19，68.13）、55.03（49.97，59.57）ng/L]、5-hmC水平[（32.61 ± 8.84）、（56.96 ± 8.48）、（20.34 ± 6.22）ng/L]比较，差异均有统计学意义（ H/ F = 12.81、284.24、21.85、19.37、55.23，均 P < 0.01）。与对照组比较，骨硬化组、骨质疏松/骨软化组血清SAM含量、SAM/SAH比值、骨组织5-mC水平及骨质疏松/骨软化组骨组织5-hmC水平均较低，而骨质疏松/骨软化组血清SAH含量和骨硬化组骨组织5-hmC水平均较高（均 P < 0.05）；与骨硬化组比较，骨质疏松/骨软化组血清SAH含量较高，而SAM/SAH比值、骨组织5-hmC水平均较低（均 P < 0.05）。Western blot检测结果显示，对照组、骨硬化组、骨质疏松/骨软化组大鼠骨组织DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、TET1、TET2蛋白表达比较，差异均有统计学意义（ F = 285.45、345.58、239.83、311.52、318.24，均 P < 0.001）；其中，骨硬化组、骨质疏松/骨软化组骨组织DNMT1、DNMT3A、DNMT3B蛋白表达均低于对照组，且骨质疏松/骨软化组均低于骨硬化组（均 P < 0.05）；骨硬化组骨组织TET1、TET2蛋白表达均高于对照组和骨质疏松/骨软化组，且骨质疏松/骨软化组均低于对照组（均 P < 0.05）。Spearman秩相关分析结果显示，对照组、骨硬化组、骨质疏松/骨软化组大鼠血清SAM含量、SAM/SAH比值与骨组织5-mC水平均呈正相关（ rs = 0.89、0.92、0.81，0.73、0.87、0.73，均 P < 0.05）；而各组大鼠骨组织5-mC水平与5-hmC水平均呈负相关（ rs = - 0.69、- 0.68、- 0.72，均 P < 0.05）。 结论:骨硬化型氟骨症大鼠骨组织5-mC水平较低、5-hmC水平较高，骨质疏松/骨软化型氟骨症大鼠骨组织5-mC、5-hmC水平均较低；不同类型氟骨症大鼠骨组织5-mC水平差异不显著，这可能与骨组织5-hmC水平存在差异有关。

目的:探讨十-十一易位蛋白(TETs)和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)在食管鳞癌组织的表达及临床意义。方法:随机选取2020年1月至2022年8月于郑州大学第一附属医院进行手术治疗的食管鳞癌患者癌组织和癌旁组织(距离癌组织2～3 cm)各10例，采用高效液相-质谱联用法(LC-MS/MS)检测5hmC在食管鳞癌中的修饰水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测TETs mRNA在食管鳞癌中的表达；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测TETs在食管鳞癌中的蛋白表达水平，组间比较采用 t检验。 结果:食管鳞癌组织中5hmC修饰水平显著高于食管癌癌旁组织[(0.21±0.03)%比(0.05±0.01)%， t＝3.095， P<0.01]。TCGA数据库分析，食管癌组织中TET1表达水平显著高于食管癌癌旁组织(1.48±0.08比0.22±0.05， t＝5.032， P<0.01)；TET2表达水平显著高于食管癌癌旁组织(6.12±0.32比2.86±0.45， t＝11.035， P<0.05)；TET3表达水平显著高于食管癌癌旁组织(3.69±0.46比2.46±0.55， t＝15.339， P<0.05)。RT-qPCR结果表明，食管癌组织中TET1 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(5.93±0.28比2.58±0.15， t＝15.854， P<0.05)；TET2 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(5.08±0.12比2.82±0.25， t＝14.012， P<0.05)；TET3 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(4.88±0.28比3.05±0.17， t＝12.715， P<0.05)。Western blot结果表明，TET2蛋白表达水平显著高于食管癌癌旁组织(2.86±0.45比1.00±0.00， t＝7.895， P<0.01)；TET3 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(2.57±0.26比1.00±0.00， t＝8.331， P<0.01)。 结论:食管鳞癌组织中5hmC表达水平高于癌旁组织，癌组织中TET2及TET3 mRNA及蛋白水平均呈高表达。

目的 探讨十-十一易位蛋白(TETs)和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)在食管鳞癌组织的表达及临床意义.方法 随机选取2020年1月至2022年8月于郑州大学第一附属医院进行手术治疗的食管鳞癌患者癌组织和癌旁组织(距离癌组织2～3 cm)各10例,采用高效液相-质谱联用法(LC-MS/MS)检测5hmC在食管鳞癌中的修饰水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测TETs mRNA在食管鳞癌中的表达;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测TETs在食管鳞癌中的蛋白表达水平,组间比较采用t检验.结果 食管鳞癌组织中5hmC修饰水平显著高于食管癌癌旁组织[(0.21±0.03)％比(0.05±0.01)％,t=3.095,P＜0.01].TCGA 数据库分析,食管癌组织中TET1表达水平显著高于食管癌癌旁组织(1.48±0.08比0.22±0.05,t=5.032,P＜0.01);TET2表达水平显著高于食管癌癌旁组织(6.12±0.32比2.86±0.45,t=11.035,P＜0.05);TET3表达水平显著高于食管癌癌旁组织(3.69±0.46比2.46±0.55,t=15.339,P＜0.05).RT-qPCR结果表明,食管癌组织中TET1 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(5.93±0.28比2.58± 0.15,t=15.854,P＜0.05);TET2 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(5.08±0.12比2.82± 0.25,t=14.012,P＜0.05);TET3 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(4.88±0.28比3.05± 0.17,t=12.715,P＜0.05).Western blot结果表明,TET2蛋白表达水平显著高于食管癌癌旁组织(2.86±0.45比1.00±0.00,t=7.895,P＜0.01);TET3 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(2.57±0.26比1.00±0.00,t=8.331,P＜0.01).结论 食管鳞癌组织中5hmC表达水平高于癌旁组织,癌组织中TET2及TET3 mRNA及蛋白水平均呈高表达.

目的 探讨CT图像纹理分析在预测胸腺上皮性肿瘤(TETs)简化病理分型中的价值.方法 回顾性分析经手术或病理证实的114例TETs患者的CT图像,将TETs分型简化为低危胸腺瘤(LRT)、高危胸腺瘤(HRT)和胸腺癌(TC);提取肿瘤CT平扫及增强扫描各期的纹理参数,对纹理参数进行筛选、降维后求得加权影像组学评分(Rad-score)值,使用受试者工作特征(ROC)曲线分析纹理特征的预测效能.结果 114例TETs患者中,LRT45例,HRT44例,TC25例.基于CT图像纹理分析,在鉴别LRT与HRT和TC时,CT平扫、动脉期和静脉期的曲线下面积(AUC)分别为0.776、0.885和0.761.在鉴别HRT与TC时,CT平扫、动脉期和静脉期的AUC分别为0.828、0.808和0.804.在鉴别胸腺瘤与TC时,CT平扫、动脉期和静脉期的AUC分别为0.808、0.769和0.774.结论 CT图像纹理分析可以作为预测TETs简化病理分型的有效辅助手段,有助于为TETs患者制订个性化的治疗方案,其中CT增强扫描动脉期纹理参数具有最高的鉴别诊断效能.

目的 结合临床资料及CT影像特征,术前预测胸腺瘤(TETs)高、低危组织学类型.方法 回顾性分析2018年1月—2023年1月行TETs切除术患者114例,以病理学分型分为低危组(33例)和高危组(81例),并从病灶最大直径、平扫及增强扫描动脉期CT值、强化幅度、增强均匀性、形状、轮廓、钙化等方面评估其影像学特征.基于患者的临床信息(性别、年龄、吸烟史、是否伴随重症肌无力)与上述影像学特征,采用多因素Logistics筛选相关因素构建预测模型,创建列线图.通过受试者工作特征曲线、校准曲线和临床决策曲线来评估预测模型性能.结果 经统计学分析,动脉期CT值(P=0.002)、强化幅度(P=0.002)、增强均匀性(P=0.049)、年龄(P=0.038)是TETs高、低危分型的独立预测因素(P＜0.05).其余特征均无统计学差异.模型的训练集(AUC=0.779)和验证集(AUC=0.810)都表现出良好诊断效能.结论 临床资料及CT影像学特征对鉴别TETs高、低危分型有重要价值,构建的列线图预测模型显示出良好的诊断性能.

目的 探讨基于增强CT图像的列线图模型在预测胸腺上皮性肿瘤(TETs)WHO简化分型中的应用价值.方法 回顾性分析术前行胸部增强CT检查并经手术病理证实的165例TETs,按照8:2的比例随机划分为训练集132例与验证集33例.于静脉期图像手动勾画感兴趣区(ROI)并提取影像组学特征,经数据降维筛选出有效特征并建立影像组学公式,计算每位患者的得分(radscore)并构建影像组学模型.纳入多个CT特征,经多因素逻辑回归筛选出具有独立预测价值的特征并构建CT特征模型.联合具有独立预测价值的CT特征及radscore构建列线图模型.采用受试者工作特性曲线(ROC)评估模型的诊断效能,校正曲线及决策曲线(DCA)评估模型的预测准确性及临床应用价值.结果 在训练集中,纵隔脂肪浸润与radscore共同构建了列线图模型,模型在训练集的曲线下面积(AUC)值为0.902(95％CI:0.838～0.947),在验证集的AUC值为0.824(95％CI:0.652～0.934).结论 基于增强CT影像组学的列线图模型对于TETs WHO简化分型有较高的预测价值,可作为一种无创的术前评估工具辅助临床决策制订.

目的 探讨在干细胞定向分化以及胚胎早期发育中,miRNA-29b对DNA去甲基化酶TET蛋白功能的调控机制.方法 采用生物信息学的方法结合双荧光素酶报告基因检测进行体外验证获得靶miRNAs;通过受精卵显微注射进行体内验证;对脂肪来源的间充质干细胞(adipose-derived stromal cells,ASCs)定向分化,确认靶miRNAs对Tets基因的影响.结果 小鼠Tet1、Tet2、Tet3基因都是miR-29abc的靶基因,且miR-29b抑制效率最高(P＜0.05);通过CRISPR/Cas9技术突变,miR-29b能增强Tets的表达(P＜0.05),并能显著促进ASCs向成骨细胞分化的效率(P＜0.05).结论 miR-29b可以下调Tets表达,并且下调miR-29b能显著促进间充质干细胞向成骨细胞分化的效率.

目的 探讨氧合酶家族分子(TET)在叶酸缺乏条件下对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y、IMR 32细胞的增殖能力及淀粉样前体蛋白(APP)基因、早老素1(PS1)基因以及β位淀粉样前体裂解酶-1(BACE1)基因表达的影响及机制. 方法 体外培养SH SY5Y、IMR-32细胞,分为叶酸缺乏组、低剂量组、正常对照组,采用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖、实时荧光定量PCR(RTPCR)检测细胞中APP、PS1、BACE1、TETs、甲基转移酶(DNMTs)基因mRNA的表达;构建TET1低表达稳转细胞株,采用荧光倒置显微镜观察荧光蛋白,MTT法观察细胞增殖,RT PCR检测细胞中TET1、APP、PS1、BACE1的转录水平. 结果 (1)在叶酸缺乏组及低剂量组,培养120 h和144 h后SH-SY5Y、IMR 32细胞增殖能力明显降低(均P＜0.001);SH-SY5Y细胞中APP、PS1、BACE1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的mRNA水平升高(F=80.315、35.386、101.979、786.407、80.331、131.545、28.000、9.165、102.167,均P＜0.05),IMR-32细胞中APP、PS1、BACE1、DNMT1、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的mRNA水平升高(F=12.283、93.669、40.815、157.234、24.835、147.594、54.794、73.068,均P＜0.05).(2)构建TET1低表达稳转细胞株,低表达组(SH SY5Y shTET1)细胞内TET1的相对表达量分别为0.25±0.02,低于阴性对照组1.00±0.09(P=0.007);低表达组(IMR-32-shTET1)细胞内TET1的相对表达量分别为0.28±0.07,低于阴性对照组1.00±0.01(P=0.003).(3)相较于阴性对照组,低表达组(SH-SY5Y-shTET1、IMR-32-shTET1)的增殖能力均增加(均P＜0.01);且细胞内APP、BACE1的mRNA水平降低(P＜0.01或P＜o.05). 结论 在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y、IMR 32中,叶酸缺乏上调TETs的表达,通过TET蛋白去甲基化途径增加细胞中APP、BACE1表达,并抑制细胞生长.

神经系统的正常发育是多种因素相互协调作用的结果,一旦特定因素失衡将引起相关疾病的发生.近年来不断有研究发现,DNA去甲基化过程的一类中间产物5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC)作为一种新的表观遗传标记,在神经系统中高水平分布,并参与认知、记忆等重要的神经功能.5hmC的形成由氧合酶家族分子(ten-eleven translocation protein,TET)催化,在多种神经系统相关疾病中,5hmC水平和TETs分子的表达都发生改变,提示TET-5hmC表观遗传机制在复杂的神经系统发生发展过程中发挥了重要的调控作用.此外,作为基因表达调控的DNA标记物,5hmC的基因定位与基因表达水平的关系也是重要的研究方向.本文就近年来5hmC和TET家族蛋白分子在神经系统发育和相关疾病方面的重要研究发现进行了综述总结,希望为相关领域研究人员深入开展研究提供重要的思路,并为相关疾病设计治疗策略提供理论支持.

Increasing evidence suggests that epigenetic dysfunction may influence the stability of normal pregnancy.The ten-eleven translocation (TET) family and 5-hydroxymethylcytosine (5-hmC) were found to be linked with epigenetic reprogramming.The present study aimed to examine the expression of the TET family and 5-hmC in the villi of human embryos and compared their expression between normal pregnancy and early pregnancy loss (EPL).Embryonic villi were collected from normal pregnant women (control) experiencing medical abortion and from EPL patients at gestation ages of 6,7 and 8 weeks.The mRNAs of TET family were analysed using quantitative polymerase chain reaction (qPCR),and TET proteins using Western blotting and immunohistochemical analysis.The MethylFlashTM Kit was used to quantify the absolute amount of 5-methylcytosine (5-mC) and 5-hmC.Our results showed that the expression of the TETs and 5-hmC in the normal villus decreased with increasing gestational age.Immunohistochemistry revealed that the TET proteins were expressed in the cytoplasm of trophoblasts and their expression was the highest in the 6-week tissue samples,which was consistent with the qPCR and Western blot results.The expression of TET1,TET2,and TET3 was lower in the villi in EPL group than in normal pregnancy group (P＜0.05 for all).It was concluded that the TET family and 5-hmC are critical in epigenetic reprogramming of human embryo.The findings also suggest that a deficiency of TETs in the villus might be associated with human EPL.