Objective:Obesity-induced kidney injury contributes to the development of diabetic nephropathy(DN).Here,we identified the functions of ubiquitin-specific peptidase 19(USP19)in HK-2 cells exposed to a combination of high glucose(HG)and free fatty acid(FFA)and determined its association with TGF-beta-activated kinase 1(TAK1).Methods:HK-2 cells were exposed to a combination of HG and FFA.USP19 mRNA expression was detected by quantitative RT-PCR(qRT-PCR),and protein analysis was performed by immunoblotting(IB).Cell growth was assessed by Cell Counting Kit-8(CCK-8)viability and 5-ethynyl-2'-deoxyuridine(EdU)proliferation assays.Cell cycle distribution and apoptosis were detected by flow cytometry.The USP19/TAK1 interaction and ubiquitinated TAK1 levels were assayed by coimmunoprecipitation(Co-IP)assays and IB.Results:In HG+FFA-challenged HK-2 cells,USP19 was highly expressed.USP19 knockdown attenuated HG+FFA-triggered growth inhibition and apoptosis promotion in HK-2 cells.Moreover,USP19 knockdown alleviated HG+FFA-mediated PTEN-induced putative kinase 1(PINK1)/Parkin pathway inactivation and increased mitochondrial reactive oxygen species(ROS)generation in HK-2 cells.Mechanistically,USP19 stabilized the TAK1 protein through deubiquitination.Importantly,increased TAK1 expression reversed the USP19 knockdown-mediated phenotypic changes and PINKl/Parkin pathway activation in HG+FFA-challenged HK-2 cells.Conclusion:The findings revealed that USP19 plays a crucial role in promoting HK-2 cell dysfunction induced by combined stimulation with HG and FFAs by stabilizing TAK1,providing a potential therapeutic strategy for combating DN.

目的:探讨泛素特异性肽酶22（USP22）在结直肠癌多药耐药中的作用以及与多药耐药基因P-糖蛋白（P-gp）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的相关性。方法:筛选USP22低表达的结直肠癌细胞系RKO、SW480，转染USP22过表达质粒使USP22表达上调。用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测USP22对结直肠癌细胞奥沙利铂耐药的影响。用相同的奥沙利铂浓度处理细胞，Western 印迹检测细胞中凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、Bcl-2和耐药蛋白MRP1、P-gp的表达。细胞外排实验检测上调USP22对钙黄绿素AM（Calcein-AM）和罗丹明123（rhodamine123）的影响。免疫组化方法检测奥沙利铂化疗敏感组与耐药组中USP22、MRP1及P-gp的表达以及分析USP22与MRP1及P-gp的相关性。结果:CCK-8实验结果表明，SW480-USP22（SW480细胞过表达USP22）对奥沙利铂处理24 h和48 h的IC 50为（4.62±0.05）μmol/L和（2.32±0.04）μmol/L，与对照细胞相比分别高2.7倍和3.0倍。用1.25 μmol/L的奥沙利铂处理细胞48 h，USP22过表达可抑制SW480细胞凋亡；细胞外排实验中SW480-USP22组Calcein-AM和rhodamine123的荧光强度与对照细胞相比明显升高，差异有统计学意义（均 P<0.01）；SW480-USP22细胞中MRP1和P-gp的蛋白表达水平与对照细胞相比显著增加，差异有统计学意义（均 P<0.01）。免疫组化结果表明，奥沙利铂化疗敏感组USP22、MRP1、P-gp的阳性表达率和化疗耐药组相比显著降低，差异有统计学意义（ P<0.05），USP22与MRP1、P-gp在结直肠癌组织中的表达均呈正相关（ r1=0.377， r2=0.423， P<0.05）。 结论:USP22上调与结直肠癌细胞对奥沙利铂的获得性耐药有关，USP22可能通过调控P-gp、MRP1的表达参与结直肠癌铂类化疗耐药的过程。

目的:探讨USP47促进乳腺癌进展的作用及其机制。方法:应用蛋白质印迹法(Western blot)和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)实验技术检测USP47在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT-549和正常乳腺细胞系MCF-10A(乳腺癌和正常乳腺细胞系均购自ATCC细胞库)中的表达。利用siRNA-USP47敲低MDA-MB-231、BT-549中USP47的表达。应用Transwell检测乳腺癌细胞的迁移能力。利用细胞计数实验(CCK-8)、平板克隆和EDU实验检测MDA-MB-231、BT-549细胞的增殖能力。采用Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达。两组之间比较采用独立样本 t检验。 结果:USP47在MDA-MB-231和BT-549中USP47的表达明显高于正常乳腺癌细胞MCF-10A(MDA-MB-231：2.70±0.53，BT-549：2.50±0.65，MCF-10A：1.00±0.00)。差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝4.49， P<0.05，BT-549： t＝3.25， P<0.05)；在USP47敲低细胞系中USP47的表达量显著低于阴性对照细胞(MDA-MB-231敲低组：0.22±0.06，MDA-MB-231对照组：1.00±0.00。BT-549敲低组：0.23±0.09，BT-549对照组：1.00±0.00)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝17.92， P<0.001，BT-549： t＝5.25， P<0.001)。Transwell结果表明，USP47敲低组转移细胞数明显低于对照组(MDA-MB-231敲低组：26.67±4.03，MDA-MB-231对照组：85.67.00±7.37。BT-549敲低组：21.67±4.64，BT-549对照组：45.67±5.50)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝12.20， P<0.001，BT-549： t＝11.98， P<0.001)。USP47敲低组CCK-8实验吸光度值显著低于对照组(MDA-MB-231敲低组：0.68±0.09，MDA-MB-231对照组：1.25±0.20。BT-549敲低组：0.84±0.10，BT-549对照组：1.54±0.16)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝4.50， P<0.05，BT-549： t＝6.08， P<0.05)。细胞克隆实验结果表明敲低USP47后细胞克隆数显著低于对照组(MDA-MB-231敲低组：20.00±4.90，MDA-MB-231对照组：74.00±12.50。BT-549敲低组：23.67±5.70，BT-549对照组：56.67±5.86)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝6.75， P<0.05，BT-549： t＝6.25， P<0.05)；EDU实验表明，USP47敲低组增殖低于对照组(MDA-MB-231敲低组：(31.33±7.59)%，MDA-MB-231对照组：(56.00±4.36)%。BT-549敲低组：(23.67±5.7)%，BT-549对照组：(56.67±5.86)%，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝4.10， P<0.05，BT-549： t＝4.16， P<0.05)，USP47 KD组细胞p-Akt、Cyclin D1和MMP-9的表达明显低于对照组，差异有统计学意义。 结论:USP47通过调控Akt通路及Cyclin D1和MMP-9的表达促进乳腺癌细胞的迁移及增殖。

目的:库欣病(Cushing′s disease, CD)是由于垂体促肾上腺皮质激素(adrenocorticotroph hormone, ACTH)腺瘤分泌过多促肾上腺皮质激素，引起血浆皮质醇水平升高，导致血糖血脂代谢异常等一系列病理生理变化。若得不到有效治疗，病死率较高，因此阐明库欣病的发病机制十分重要。本研究旨在利用全基因组测序技术探索垂体ACTH腺瘤的发病机制。方法:选取9例确诊为垂体ACTH腺瘤并经过手术治疗患者的垂体瘤组织和与之配对的外周血样本进行了全基因组测序，并进行单核苷酸突变、小的插入或缺失、拷贝数变异、染色体结构变异的分析与验证。结果:5例患者发现USP8基因体细胞热点突变(p.Ser718del、p.Ser718Pro、p.Pro720Arg、p.Pro720Gln)，突变率为55.6%；1例患者检测出USP8拷贝数增加；1例USP8野生型患者检测出TP53(p.Cys135Tyr)、NF1(p.Val1049Glufs*11)及KMT2C(c.3323+1G>A)突变。拷贝数变异分析结果显示1例USP8野生型患者存在多条染色体的杂合性缺失。结构变异分析发现2例意义未明的结构变异。本研究未发现胚系基因突变。结论:USP8基因的体细胞突变和拷贝数增加、TP53等肿瘤相关基因的突变、广泛的体细胞拷贝数变异共同参与垂体ACTH腺瘤的致病。染色体结构变异可能有助于识别高危垂体ACTH腺瘤，患者需要更密切的随访和更积极的治疗。

目的:探索三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中USP5的表达及其对细胞生物学行为的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测USP5在TNBC细胞MDA-MB-231和BT-549细胞中的表达。通过转染慢病毒(shRNA)敲低USP5的表达。采用免疫共沉淀(CO-IP)实验验证USP5对活化C激酶1受体(RACK1)泛素化水平的影响。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测细胞增殖能力，Transwell检测细胞迁移能力的变化。两组之间的比较采用独立样本 t检验。 结果:MDA-MB-231细胞和BT-549细胞中USP5的表达(3.167±1.102，4.700±1.609)，明显高于正常乳腺细胞系MCF-10A(1.000±0.300)，差异有统计学意义( t＝3.287、3.915， P<0.05)。在USP5稳定敲低的细胞系中USP5蛋白的表达(MDA-MB-231：0.160±0.012；BT-549：0.190±0.028)显著低于阴性对照细胞(MDA-MB-231：1.000±0.179；BT-549：1.000±0.015)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝5.279， P<0.001；BT-549： t＝6.538， P<0.001)。USP5敲低的细胞中，RACK1的表达量(MDA-MB-231：0.250±0.023；BT-549：0.210±0.034)低于阴性对照细胞(MDA-MB-231：1.000±0.163；BT-549：1.000±0.036)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝6.729， P<0.01；BT-549： t＝5.172， P<0.001)。敲低USP5后RACK1泛素化水平显著增高。在CCK-8实验中，敲低USP5后细胞增殖显著弱于(MDA-MB-231：1.140±0.102；BT-549：1.100±0.073)阴性对照细胞(MDA-MB-231：1.710±0.173，BT-549：1.950±0.087)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝4.053， P<0.05；BT-549： t＝10.550， P<0.001)。EDU实验证明，USP5敲低细胞株[阳性细胞率MDA-MB-231：(30.33±7.76)%；BT-549：(31.60±5.70)%]比阴性对照细胞[阳性细胞率MDA-MB-231：(64.33±4.50)%；BT-549：(75.42±4.10)%]细胞增殖明显降低，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝5.361， P<0.01；BT-549： t＝9.826， P<0.001)。敲低USP5后细胞迁移能力(MDA-MB-231：47.67±5.73；BT-549：51.00±8.60)较阴性对照细胞(MDA-MB-231：87.33±14.88；BT-549：93.69±6.12)显著下降，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝3.517， P<0.05；BT-549： t＝5.713， P<0.01)。 结论:USP5通过调节RACK1表达促进TNBC迁移和增殖。

目的:探讨去泛素化酶22(USP22)在乳腺癌组织中的表达及对其恶性细胞生物学行为的影响。方法:选取郑州大学第三附属医院2018年9月到2020年1月手术切除的76例乳腺癌和癌旁组织作为研究对象，采用蛋白质组学和蛋白质印迹法(Western blot)分析乳腺组织和癌旁组织的差异表达蛋白及其表达水平。采用慢病毒在乳腺癌细胞MCF-7构建USP22敲降(USP22 KD组)和对照细胞系(对照组)，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖能力；采用划痕实验分析两组细胞迁移能力；采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)细胞凋亡检测试剂盒分析两组细胞凋亡水平；采用克隆形成实验分析两组细胞克隆形成能力；采用荧光定量PCR分析两组细胞肿瘤干细胞基因；采用Western blot分析分析两组细胞BMI1蛋白表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织USP22蛋白平均表达水平(1.08±0.21)明显高于乳腺癌组织(2.62±0.47)，差异有统计学意义( t＝26.190， P<0.05)。USP22 KD组细胞吸光度( A)值(1.39±0.17)明显低于对照组(2.10±0.06)，差异有统计学意义( t＝8.798， P<0.05)。划痕实验结果显示，USP22 KD组细胞迁移数量[(73.40±9.96)个]明显低于对照组[(113.61±11.41)个]，差异有统计学意义( t＝7.382， P<0.05)。对照组细胞凋亡比例[(3.27±0.56)%]明显低于USP22 KD组[(19.49±2.88)%]，差异有统计学意义( t＝12.351， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(75.41±6.77)%]明显高于USP22 KD组[(36.20±4.21)%]，差异有统计学意义( t＝11.000， P<0.05)。对照组细胞SOX2、OCT4和Nanog mRNA表达水平(1.04±0.10、1.06±0.07、1.06±0.078)明显高于USP22 KD组(0.44±0.08、0.54±0.05、0.52±0.09)，差异有统计学意义( t＝9.318、12.100、10.030， P<0.05)。癌旁组织BIM1蛋白平均表达水平(1.02±0.18)明显高于乳腺癌组织(2.86±0.42)，差异有统计学意义( t＝14.790， P<0.05)。对照组细胞BIM1表达水平(2.24±0.16)明显高于USP22 KD组(1.24±0.16)，差异有统计学意义( t＝9.272， P<0.05)。 结论:USP22在乳腺癌组织中呈高表达，通过调节BMI1表达调控乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡和干细胞特性。

目的:探讨腱鞘纤维瘤（fibroma of tendon sheath，FTS）的临床病理特征、免疫表型及分子遗传学特征。方法:收集四川大学华西医院病理科2008年1月至2019年4月诊断为FTS或腱鞘滑膜纤维瘤的病例共134例。回顾上述病例的临床及组织学特点，并进行免疫组织化学、荧光原位杂交（FISH）及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测。结果:FTS共134例，男性67例，女性67例。中位年龄38岁（范围2~85岁）。肿瘤中位大小1.8 cm（范围0.1~6.8 cm）。最常见的病变部位为上肢（76/134，57%）。获得随访的28例患者均无复发。组织学上，经典型FTS 114例，边界较清，细胞成分较少，少量梭形的纤维母细胞杂乱地分布于致密的胶原硬化间质中，可见特征的狭长裂隙或薄壁血管；富于细胞型FTS（CFTS）20例，大多边界较清，细胞丰富区多与经典的少细胞区同时存在，偶见核分裂象，但缺乏病理性核分裂象。经典型FTS中，8例进行了免疫组织化学检测，多数病例（5/8）表达平滑肌肌动蛋白（SMA）。CFTS中，13例进行了免疫组织化学检测，均表达SMA。对20例CFTS和32例经典型FTS进行USP6基因重排的FISH检测，CFTS中11/20具有USP6基因重排，伴结节性筋膜炎（nodular fasciitis，NF）特征的12例CFTS中有7例具有USP6基因重排，不伴NF特征的8例CFTS中具有USP6基因重排占比为4/8；经典型FTS有3%（1/32）具有USP6基因重排。对所有经过FISH检测USP6基因重排结果为阳性，并可获得足够组织样本的病例（8例CFTS和1例经典型FTS）进行RT-PCR实验，CFTS中1例（1/8）成功检测到MYH9-USP6融合基因；经典型FTS未检测出目标融合基因。结论:FTS是一种相对少见的良性的纤维母细胞/肌纤维母细胞肿瘤。本研究及近来文献报道发现部分经典型FTS中也具有USP6基因重排，提示经典型FTS和CFTS可能为同一疾病谱系的不同阶段。USP6基因重排的FISH检测可作为FTS与其他肿瘤的重要辅助诊断工具。

目的:明确泛素特异性蛋白酶41（ubiguitin-specific peptidase 41，USP41）在三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）的表达情况，及其与TNBC恶性表型及阿霉素敏感性的相关性和潜在作用机制。方法:采用Western blot、qPCR检测USP41在TNBC耐药细胞株及临床组织样本的表达情况。随后确定USP41分子高表达，并通过CCK8、克隆形成实验、Transwell、Western blot及CoIP-MS等细胞生物学方法评价USP41在TNBC恶性表型及阿霉素耐药中的作用及机制。结果:USP41在TNBC样本的表达显著高于癌旁组织。USP41在阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/DXR中表达量高出近40倍，IC50值为6.86 μM。干扰USP41可显著增加MDA-MB-231/DXR细胞对阿霉素的敏感性。干扰USP41可显著的抑制细胞的细胞增殖、克隆形成及迁移能力，克隆数量降低30%~80%，迁移细胞数量降低超过70%，差异有统计学意义。此外，USP41敲低可提高MDA-MB-231细胞对阿霉素的敏感性，IC50由5.49 μM降低到2.36 μM和2.56 μM。CO-IP结果显示USP41可与活化的蛋白激酶C1受体（receptor of activated protein kinase C1，RACK1）直接相互作用，且RACK1在癌组织的表达显著高于癌旁。干扰RACK1可抑制MDA-MB-231细胞增殖，IC50由9.87μM降低到4.67 μM和4.36 μM。克隆形成能力下降超过30%，差异有统计学意义。相较于对照组，USP41敲减使细胞迁移能力下降超过70%。结论:USP41高表达与TNBC恶性表型及阿霉素耐药相关，且RACK1可能是USP41发挥作用的关键分子。

目的:探讨少见部位结节性筋膜炎（nodular fasciitis，NF）的临床病理、免疫表型及分子遗传学特征。方法:收集河南省人民医院病理科2015年1月至2021年1月诊治的50例NF患者的临床及病理资料，其中少见部位14例，采用免疫组织化学染色检测相关蛋白的表达情况，采用荧光原位杂交（FISH）检测USP6基因断裂情况。结果:14例少见部位NF中，男性、女性各7例，位于肢端、会阴部、乳腺、腕关节内、腰4/5椎间隙，其中8例存在少见组织累及（骨骼肌内6例、神经根1例、血管内1例），肿瘤边界不清，呈浸润性生长，梭形肌纤维母细胞束状或杂乱排列，形态温和，可见小核仁及多少不等核分裂象，间质胶原化至黏液样变，可见红细胞外渗及炎性细胞浸润；免疫组织化学示梭形细胞局灶或部分表达平滑肌肌动蛋白，弥漫强表达p16。FISH示14例中12例存在USP6基因断裂，其中2例发生于胸壁骨骼肌内者同时合并USP6基因红色信号扩增。结论:少见部位NF具有与经典部位相似的临床病理和遗传学特征，但肿瘤组织边界多呈浸润性生长，存在非特异性p16强表达和USP6红色信号扩增现象。少见部位NF的病理诊断需保持高度警惕。

结节性筋膜炎（nodular fasciitis，NF）是一种相对常见的纤维母细胞/肌纤维母细胞性肿瘤，通常为自限性病变，复发、转移少见；有丝分裂活跃，但通常无病理性核分裂。本文报道1例具有恶性行为的NF，8年间虽经手术切除、髂内动脉化疗栓塞治疗，肿瘤仍复发并转移，显微镜下可见不典型有丝分裂，二代测序发现罕见的MIR22HG-USP6融合。