目的:了解贵州省H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)的流行与遗传变异情况，为AIV的防控提供依据。方法:统计2018年10月—2019年3月贵州省活禽市场外环境AIV检出情况，对选取的H9N2亚型AIV进行基因组的提取、血凝素(hemagglutinin, HA)基因的RT-PCR扩增与测序，并对获得的 HA基因序列进行同源性、遗传进化和关键位点变异分析。 结果:贵州省活禽市场外环境AIV检出率为52.2%，H9N2占阳性的83.7%。H9N2亚型AIV HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为91.6%～100.0%和91.0%～100.0%，均属于Y280亚系，G57基因型；与致病性相关的裂解位点序列均为PSRSSRGLF和LSRSSRGLF，符合低致病性AIV的分子特征；与宿主特异性相关的受体结合关键位点存在H191N、E198T/A和Q234L三个位点的突变，具有人样受体结合特征；与毒力相关的糖基化位点均具有7个，其中因突变218位点均存在一个糖基化位点缺失，313位点均存在一个增加。与人感染毒株相比关键位点未发生重要突变。 结论:贵州省活禽市场外环境AIV检出率较高，污染较严重，且以H9N2为优势流行亚型；H9N2亚型AIV均属于Y280亚系，G57基因型，为低致病性AIV，毒株遗传差异在增大，关键氨基酸位点存在变异，具有感染人的风险，故应加强监测该病毒的分子遗传变异情况。

目的:了解江苏省首例人感染H9N2亚型禽流感病例的流行病学特点和相应H9N2禽流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)基因特征。方法:逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测不明原因急重症呼吸道感染病例咽拭子标本甲/乙型及各亚型流感病毒核酸。Sanger法对H9N2阳性标本进行病毒HA基因测序，与禽流感病毒数据库中的参考序列进行比对分析。构建HA基因系统进化树。结果:苏州市疾病预防控制中心于2019年3月报告了江苏省首例人感染H9N2亚型禽流感病毒实验室确诊病例。HA基因序列分析表明苏州A/Suzhou/S683/2019(H9N2)病毒株为欧亚谱系Y280-like亚系分支，与A/chicken/Shanghai/S1171/2018 (H9N2)核酸序列同源性最高，为99.23%。HA蛋白裂解位点氨基酸序列为PSRSSR↓GLF，并且受体结合位点关键氨基酸中发生了Q226L突变。与F98疫苗株相比，该禽流感病毒HA潜在糖基化位点位置发生了一定程度的改变。结论:苏州H9N2禽流感病毒仍为低致病性，但可能获得了适应人类宿主的部分能力。

目的:评价脊髓P2Y1嘌呤受体(P2Y1R)在瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏形成中的作用及其与脊髓NMDA受体(NR)1和NR2B功能的关系。方法:鞘内置管成功的健康成年雄性SD大鼠48只，10~12周龄，体重250~280 g，采用随机数字表法分为6组( n＝8)：对照组(C组)、P2Y1R拮抗剂MRS2179组(M组)、瑞芬太尼组(R组)、瑞芬太尼+MRS2179组(R+M组)、切口痛+瑞芬太尼组(I+R组)和切口痛+瑞芬太尼+MRS2179组(I+R+M组)。C组鞘内注射生理盐水10 μl，10 min后经尾静脉输注生理盐水0.1 ml·kg -1·min -1 60 min；M组鞘内注射MRS2179 0.6 nmol/kg，10 min后经尾静脉输注生理盐水0.1 ml·kg -1·min -1 60 min；R组鞘内注射生理盐水10 μl，10 min后经尾静脉输注瑞芬太尼1 μg·kg -1·min -1 60 min；R+M组鞘内注射MRS2179 0.6 nmol/kg，10 min后经尾静脉输注瑞芬太尼1 μg·kg -1·min -1 60 min；I+R组鞘内注射生理盐水10 μl，10 min后经尾静脉输注瑞芬太尼1 μg·kg -1·min -1 60 min，瑞芬太尼输注开始后10 min制备切口痛模型；I+R+M组鞘内注射MRS2179 0.6 nmol/kg，10 min后经尾静脉输注瑞芬太尼1 μg·kg -1·min -1 60 min，瑞芬太尼输注开始后10 min制备切口痛模型。分别于输注瑞芬太尼或生理盐水前24 h、输注停止后2、6、24和48 h时测定机械缩足反应阈(MWT)、热缩足潜伏期(TWL)和冷板抬足次数。最后一次痛阈测定结束后处死大鼠，取脊髓L 4-6节段，采用Western blot法检测脊髓P2Y1R、磷酸化NR1(p-NR1)、NR1、磷酸化NR2B(p-NR2B)和NR2B表达，并计算p-NR1/NR1比值及p-NR2B/NR2B比值，采用RT-PCR法检测P2Y1R、NR1和NR2B的mRNA表达。 结果:与C组比较，R组MWT降低，TWL缩短，冷板抬足次数增加，脊髓P2Y1R及其mRNA、NR1及其mRNA、p-NR1、NR2B及其mRNA、p-NR2B表达上调，p-NR1/NR1比值和p-NR2B/NR2B比值升高( P<0.01)。与R组比较，R+M组MWT增加，TWL延长，冷板抬足次数减少，脊髓P2Y1R、p-NR1、NR1及其mRNA、p-NR2B、NR2B及其mRNA表达下调，p-NR1/NR1比值和p-NR2B/NR2B比值降低( P<0.05或0.01)；与I+R组比较，I+R+M组MWT增加，TWL延长，冷板抬足次数减少，脊髓P2Y1R、p-NR1、NR1及其mRNA、p-NR2B、NR2B及其mRNA表达下调，p-NR1/NR1比值和p-NR2B/NR2B比值降低( P<0.01)。 结论:脊髓P2Y1R可增强NR1和NR2B功能，该作用可能参与了瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏的形成。

目的 建立重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)衣壳蛋白电荷异质性的成像毛细管等电聚焦电泳(imaged capillary isoelectric focusing,iCIEF)检测方法,并进行方法验证,以期为rAAV产品的表征研究、质量控制及生产工艺稳定性的监控提供可靠的检测方法.方法 将待测样品经变性处理后,采用紫外荧光检测模式进行iCIEF分析,进样时间设为55 s,电压为1 500 V,聚焦时间为1 min;随后将电压调整至3 000 V,并继续聚焦10 min.激发波长设为280 nm,发射荧光检测曝光时间设为80 s.以rAAV 5型空心颗粒(rAAV-E)为待测样品,验证方法的专属性、精密性、线性范围、准确性及定量限.采用建立的方法检测rAAV 5型实心颗粒(rAAV-F)样品的电荷异质性.结果 rAAV-E样品在pH 6.9～7.1之间呈现2个明显主峰(Peak1和Peak2),空白对照未检测到病毒衣壳蛋白峰;6次重复检测rAAV-E样品2个主峰Peak1和Peak2的pI均值分别为6.91和7.04,RSD均为0.14％,峰面积百分比均值分别为35.6％和55.8％,RSD分别为1.1％和0.4％;3个时间点检测rAAV-E样品2个主峰Peak1和Peak2峰面积百分比的RSD 分别为 3.45％和 3.38％,pI 的RSD分别为0.10％和0.11％;rAAV-E浓度在(4.08～6.12)× 1012vp/mL范围内,与Peak1和Peak2的总峰面积均值呈良好的线性关系,线性回归方程为y=54 888 x-76 556,R2=0.976;80％、100％和120％预期浓度rAAV-E样品2个主峰总峰面积的回收率均在80％～120％范围内;Peak1的定量限为1.02× 1012 vp/mL,Peak2定量限为0.76 × 1012 vp/mL.rAAV-F样品呈现Peak1 和 Peak2外,在酸性区域(pI＜5.85)还观察到明显的额外峰,这是rAAV-F区别于rAAV-E的主要特征,也表明其具有复杂的电荷异质性分布.结论 建立的iCIEF法具有良好的专属性、精密性及准确性,可用于rAAV衣壳蛋白电荷异质性的分析.

目的 建立基于紫外可见光谱检测抗体偶联药物(ADC)药物-抗体偶联比(DAR)的检测方法并进行验证.方法 使用盐酸胍作为变性剂,修正基于氨基酸组成推算的抗体在 280 nm 处消光系数.利用比尔-朗伯定律测定抗体和小分子药物在 252 nm 处的消光系数及小分子药物在280 nm 处的消光系数.确定基于紫外可见光谱检测 ADC的 DAR 公式参数和检测方法.根据《中华人民共和国药典》(2020)指导原则,对方法进行验证.结果 抗体在 252 nm 和 280 nm 处的摩尔消光系数分别为 91258 和 228913 L/(mol·cm);tubulysin 衍生物小分子药物在 252 和 280 nm 处的摩尔消光系数分别为 12798和 3186 L/(mol·cm).DAR =(A280-ADC×91258-A252-ADC×228913)/(A252-ADC×3186-A280-ADC×12798).方法 专属性符合要求.模拟 DAR 值为 1.881～15.045 的 ADC 药物进行准确性验证,回收率为 79.38%～99.13%.重复性相对标准偏差(RSD%)为 1.93%,中间精密度 RSD%为2.36%.以 252 nm 处吸光值与 280 nm 处吸光值的比值为纵坐标,以模拟 DAR 值为横坐标进行线性回归的方程为y = 0.0408x + 0.414,相关系数 r2 为 0.9954.根据 DAR 测定公式推算该方法的检测范围为 0.60～82.56.不同检测波长[(280±1)或(252±1)nm]、不同放置时间(0～60 min)、不同批次的比色皿条件下,DAR 值检测结果的 RSD%均<5.0%.结论 基于紫外可见光谱法进行抗体偶联药物 DAR 测定的方法简单、可操作性强,专属性、准确度、精密度、耐用性满足检测需求,该方法可以用于抗体偶联药物的质量分析和质量控制.

1案 例1.1简要案情23年前,某镇一女性被强奸杀害.检验死者阴道擦拭物,获得一男性常染色体STR分型,多年一直未找到嫌疑人.为进一步增加位点信息,当地公安重新检验该样本,获得41个Y-STR分型,比中安徽、江苏、山东、江西、湖北、湖南等地280个家系,其中0个基因座容差家系9个、1个基因座容差家系142个、2个基因座容差家系129个,覆盖9千余人.当地公安先后检验985份血样均未比中嫌疑人及其近亲属.本鉴定中心指导办案单位筛选72份家系样本(其中0个基因座容差14份,1个基因座容差58份),使用法医SNP系谱推断技术进行家系比对.

目的 分析北京市2004-2015年细菌性痢疾的分布特征,探讨气候因素对其时空分布的影响.方法 收集2004-2015年北京市气象资料及细菌性痢疾的发病资料,采用描述性分析方法了解其时空分布特征,直线相关分析和多元线性回归探讨细菌性痢疾发病率与平均降水量、平均气温、日照时数、平均风速、平均气压、大风日数和雨日数的关系.结果 北京市2004-2015年共报告细菌性痢疾患者280 704例,死亡36例,年平均报告发病率130.15/10万,发病集中在每年的5-10月,占报告总病例数的80.75％,0～岁组报告发病率最高,职业以散居儿童和学生最多,男女性别发病比例为1.22∶1.细菌性痢疾的报告发病率与平均降水量、平均气温和雨日数呈正相关,相关系数分别为0.931、0.878和0.888,与平均气压呈负相关,相关系数值为-0.820;多元逐步回归分析方法拟合细菌性痢疾与气象因素的回归方程为Y=3.792+0.162X1.结论 北京市细菌性痢疾报告发病率远高于全国发病水平,发病高峰在7-8月,平均降水量是影响细菌性痢疾报告发病率的重要气象因素.

目的 建立血液中甲卡西酮法医学检测方法.方法 在含有甲卡西酮的血液中,加入内标双苯戊二氨酯(SKF525A),加氢氧化钠溶液调节pH＞ 12,用乙酸乙酯提取,提取液在50℃氮气流下挥干,用甲醇溶解残余物,用GC-MS分析.GC-MS条件:HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)石英毛细管柱;柱温:初温60℃保持1.5 min,以10℃·min-1速率升温至200℃保持10 min,以5℃·min-1速率升温至250℃保持5 min;接口温度280℃;离子源:EI源,温度230℃;四极杆温度:150℃;扫描方式:SCAN 40～450 amu,SIM甲卡西酮m/z 58、77、105,SKF525A m/z 86、99、165.结果 甲卡西酮在20～2000 ng·mL-1内与峰面积线性关系良好,线性方程为y=0.3053×10-3x+ 0.0112(r=0.999),检出限为10 ng·mL-1.添加浓度为100～1000 ng·mL-时,平均相对回收率为92.6％～98.9％,绝对回收率为81.6％～86.6％,RSD为6.5％～8.9％(n=5),日内和日间精密度在7.0％～8.8％.结论 该方法操作简便、检测灵敏度较高,可应用于涉毒案件血液中甲卡西酮的测定.

目的 了解2015-2017年贵州省威宁H9N2亚型禽流感病毒的分子特征,为禽流感病毒的研究与防控提供依据.方法 对选取的13株病毒进行核酸的提取、血凝素基因(hemagglutinin,HA)的扩增和测序,运用生物信息学软件对H9N2禽流感病毒(AIV) HA基因的同源性、遗传进化、受体结合关键位点、致病相关位点和糖基化位点变异情况进行分析.结果 13株H9N2AIV的HA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为96.1％ ～99.9％和95.7％～100％,均属于DK/HK/Y280/97分支.HA基因与致病性高低相关的裂解位点区域2株为PSRSNR↓GLF,11株为PSRSSR↓GLF,均属于低致病性毒株.与传播感染相关的受体结合位点均发生E198T和Q234L的突变,具有人样受体结合特征.13株毒株HA均含7个与毒力相关的糖基化位点,218位点均存在一个糖基化位点缺失,3 13位点均存在一个糖基化位点的增加.结论 贵州省威宁县H9N2AIVs属于DK/HK/Y280/97系,均为低致病性禽流感病毒,存在人易感位点,病毒一直处于不断的变异之中,故应加强其监测与防控.

目的 对工作场所空气中砷的原子荧光光谱分析方法进行改进.方法 以硝酸-高氯酸溶液作为消化体系,在自动控温电热板上280℃直接消化处理样品,使用原子荧光光谱仪和标准曲线法对工作场所空气中砷浓度进行测定.结果 该方法在0～20 μg/L的砷浓度范围内,标准曲线回归方程为y=60.660 3x-16.099 0,相关系数为0.999 5,方法的检出限为0.021 9 μg/L,定量下限为0.073 μg/L,批内精密度(相对标准偏差)为0.51％～ 1.02％,批间精密度为2.25％～4.38％,加标回收率为100.36％～102.35％.结论 该方法具有灵敏、准确、稳定、检出限低、操作简单、耗时短等优点,具有一定推广价值.