目的:本研究旨在探讨绝经后女性骨质疏松症（osteoporosis，OP）中分泌型卷曲相关蛋白2（secreted frizzled-related protein-2，SFRP2）基因DNA甲基化对转录和蛋白表达的影响，及miR-152-3p对SFRP2基因甲基化水平调控的分子机制。方法:选择2017年9月至2020年9月于衡水市人民医院骨科就诊的绝经后OP患者作为研究对象，并纳入同期在本院进行体检的200例自然绝经健康女性作为对照组。定量检测OP患者和对照组的SFRP2基因甲基化水平；采用定量实时聚合酶联反应检测SFRP2基因mRNA和miRNA-148a的相对表达量；使用酶联免疫吸附测定法检测SFRP2和DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase，DNMT1）的蛋白表达水平；使用miRNA-152-3p模拟物（mimic）、抑制物（inhibitor）及其阴性对照（mimic NC和inhibitor NC）处理SD大鼠成骨细胞，检测DNMT1表达水平和SFRP2基因甲基化水平。结果:OP组的SFRP2基因甲基化水平为（3.87±0.76）%，显著低于对照组（6.36±1.44）%（ t=4.632， P<0.001）；OP组的SFRP2基因mRNA表达量为3.35±0.79，显著高于对照组（2.28±0.52）（ t=4.858， P<0.001）；OP组的SFRP2基因蛋白表达水平为（4.15±0.62）pg/ml，显著高于对照组（2.83±0.51）pg/ml（ t=4.858， P<0.001）；OP组的miRNA-152-3p相对表达量为（3.14±0.76），显著高于对照组（1.63±0.51）（ t=5.318， P<0.001）；SD大鼠成骨细胞转染miR-152-3p后，mimic组的DNMT1表达水平和SFRP2基因甲基化水平显著降低，inhibitor组的DNMT1表达水平和SFRP2基因甲基化水平显著升高（ P<0.001）。 结论:miR-152-3p可通过DNMT1调控SFRP2基因甲基化水平并参与OP的发生发展。

目的:探讨稀土氧化钕（Nd 2O 3）致小鼠肺纤维化过程中miR-29a对转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad同源物3（Smad3）通路的调控作用。 方法:于2021年3月，选择SPF级C57/BL6J雄性小鼠72只，随机分为对照组、Nd 2O 3组、Nd 2O 3+miR-29a干预剂（agomir）组、Nd 2O 3+NC agomir组，每组18只。Nd 2O 3组、Nd 2O 3+miR-29a agomir组、Nd 2O 3+NC agomir组采用非暴露式气管滴注法染毒，染尘浓度为250 mg/ml，染尘体积为0.1 ml，对照组给予同体积生理盐水。染尘后，每3天Nd 2O 3+miR-29a agomir组小鼠尾静脉注射0.1 ml（5 nmol）miR-29a agomir，Nd 2O 3+NC agomir组小鼠尾静脉注射0.1 ml NC agomir。染尘后第7、14、28天每组各处死6只小鼠，取小鼠肺组织，HE染色观察小鼠肺组织病理状况；ELISA法检测TGF-β1、结缔组织生长因子（CTGF）含量；qRT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达量；免疫荧光法检测小鼠肺组织中Smad3的表达量，利用TargetScan7、miRDB等网站工具预测miR-29a靶基因。计量资料满足正态分布时用 ± s表示，组间比较用两独立样本 t检验，两两比较方差齐时用 LSD法检验。 结果:HE染色显示，Nd 2O 3组小鼠肺组织初期出现明显的炎症细胞浸润、肺泡结构紊乱，28 d时，小鼠肺组织胶原纤维增多且肺组织呈纤维化蜂窝状变，Nd 2O 3+miR-29a agomir组小鼠肺组织纤维化程度明显减轻；与Nd 2O 3+NC agomir组比较，Nd 2O 3+miR-29a agomir组小鼠肺组织中TGF-β1、CTGF的含量较低，小鼠肺组织中TGF-β1 mRNA的相对表达量较低，细胞核中Smad3表达水平较低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。miR-29a相关下游靶基因有152个，其中FBN1、MAP2K6、KPNB1、COL1A2、SNIP1、LAMC1、SP1可能与TGF-β1/Smad3通路的调控有关。 结论:miR-29a可能通过调节TGF-β1/Smad3信号通路影响稀土Nd 2O 3暴露所致的小鼠肺纤维化，过表达miR-29a可能抑制TGF-β1/Smad3信号通路而减轻小鼠肺纤维化程度。

目的:探讨miR-152-5p及miR-210-5p在儿童IgA肾病(IgAN)中的表达及其临床价值。方法:选取2018年1月至2022年6月由本院收治的109例IgAN患儿(IgAN组)、100例非IgA肾病的肾炎患儿(非IgAN组)和60例体检正常者(对照组)作为研究对象。其中IgAN患儿根据牛津分型评分(MEST)分为MEST≥3分组(41例)和MEST<3分组(68例)，并根据尿蛋白量分为尿蛋白≥1.0 g/24 h组(56例)和尿蛋白<1.0 g/24 h组(53例)。比较各组的miR-152-5p、miR-210-5p、IgA/C3及半乳糖缺乏型IgA1分子(Gd-IgA1)水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-152-5p、miR-210-5p、IgA/C3及Gd-IgA1诊断IgAN的价值。采用Pearson相关分析miR-152-5p、miR-210-5p表达水平与IgA/C3及Gd-IgA1的相关性。结果:IgAN组的miR-152-5p、miR-210-5p、IgA/C3及Gd-IgA1水平均明显高于非IgAN组和对照组(均 P<0.001)；MEST≥3分组的miR-152-5p、miR-210-5p、IgA/C3及Gd-IgA1水平均明显高于MEST<3分组(均 P<0.001)；尿蛋白≥1.0 g/24 h组的miR-152-5p、miR-210-5p、IgA/C3及Gd-IgA1水平均明显高于尿蛋白<1.0 g/24 h组(均 P<0.001)。ROC曲线分析结果显示，miR-152-5p、miR-210-5p、IgA/C3及Gd-IgA1四项联合诊断IgAN的曲线下面积高达0.951(95% CI：0.889~0.994)，其灵敏度为97.4%，特异度为85.2%。Pearson相关分析显示，IgAN患儿的血清miR-152-5p、miR-210-5p表达水平与IgA/C3及Gd-IgA1均呈正相关( r＝0.796、0.875、0.745、0.817，均 P<0.001)。 结论:miR-152-5p及miR-210-5p在IgAN患儿中呈高表达，与肾脏损伤进展有关，其联合IgA/C3及Gd-IgA1检测对儿童IgAN诊断具有很高的应用价值。

目的:探讨AP患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p的表达水平及其临床价值。方法:选取2017年1月至2020年9月间儋州市人民医院收治的152例AP患者的临床资料，根据病情严重程度将患者分为MAP组(70例)、MSAP组(40例)和SAP组(42例)，SAP组又根据患者预后情况分成生存组(25例)和死亡组(17例)。另选取50例体检健康者作为对照组。于患者发病当天采集空腹静脉血，采用实时定量PCR法检测各组血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)，计算曲线下面积(AUC)，分析血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平对SAP预后判断的价值。采用Pearson法分析SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平的相关性。结果:AP组患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平均明显高于对照组(3.18±1.27比0.96±0.28，1.94±0.85比0.51±0.12， P值均<0.001)。SAP组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于MSAP组、MAP组(4.36±1.70比2.84±1.10、2.50±0.92，2.80±1.04比1.68±0.53、1.42±0.45， P值均<0.001)。死亡组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于生存组(5.30±1.95比3.47±1.40，3.62±1.37比2.08±0.91， P值均<0.001)。ROC曲线分析显示，miR-148a-3p与miR-551b-5联合判断SAP预后的AUC值明显高于miR-148a-3p、miR-551b-5p单项指标[0.943(95% CI0.886～0.997)比0.860(95% CI0.797～0.924)、0.822(95% CI0.765～0.880)]，其灵敏度为98.3%，特异度为84.6%。相关分析显示，SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平呈正相关( r＝0.835， P<0.001)。 结论:AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平明显升高，两者联合检测对判断SAP患者预后具有较好的价值。

目的:旨在探讨小核仁RNA宿主基因4（SNHG4）在胃癌组织中的表达、预后价值及可能作用机制。方法:运用UALCAN数据库分析SNHG4在胃癌中的表达情况；Kaplan-Meier Plotter数据库分析SNHG4与胃癌预后的关系；StarBase、Targetscan、microT-CDS数据库及Cytoscape软件构建SNHG4-miRNA-mRNA调控网络；DAVID数据库对SNHG4相关miRNA的靶基因进行生物学功能及通路分析。结果:SNHG4在胃癌组织中的表达明显高于正常组织（ P=8.882E-16）。生存分析发现SNHG4高表达的胃癌患者总体生存时间少于低表达组（ P=8.900E-05）。通过RNA调控网络的构建，发现在胃癌中hsa-let-7a-5p（ P=1.02E-03）、hsa-miR-152-3p（ P=4.51E-06）、hsa-miR-204-5p（ P=6.68E-04）和hsa-miR-363-3p（ P=8.06E-03）可作为SNHG4的结合位点。SNHG4作用于这4种miRNA进一步调控250个靶基因。对靶基因的GO注释及KEGG富集分析，发现这些靶基因在蛋白质磷酸化的调节、转录负调控、RNA聚合酶II启动子的转录等生物过程中发挥作用，且通过阻断或激活Wnt等信号通路参与胃癌的发生及发展。 结论:SNHG4可作为胃癌潜在的诊断性肿瘤标志物，判断胃癌预后情况，通过构建SNHG4-miRNA-mRNA调控网络，从分子水平研究胃癌的发病机制，为实验研究及临床研究提供明确方向。

目的:分析及验证ISL1基因在心肌梗死中的表达，挖掘其在心肌梗死中的作用机制。方法:通过对GEO数据库中芯片表达谱数据进行分析找到ISL1基因在心肌梗死中的表达特征，以及ISL1基因高度共表达的相关基因及富集的通路功能，纳入急性心肌梗死患者及其健康对照，采用RT-PCR方法验证ISL1、GRIN2D等基因的表达。结果:ISL1基因在心肌梗死样本的表达量高于对照组样本。GSE59867和GSE29111两个数据集中，top2000、top2500、top3000的相关性基因交集分别共有152个、231个、329个。共表达基因功能注释交集基因发现，交集基因与胚胎时期器官发生发育、基质蛋白的形成、上皮细胞的分化以及相关信号通路的活动密切相关。最后，ISL1相关ceRNA调控网络构建中，有12个基因位于ISL1 top2000的相关性交集中，与miRNA共参与形成21对miRNA-mRNA。并且通过多个队列找出其关键的调控基因为GRIN2D，该基因与ISL1竞争性结合多个miRNA且表达量在两个独立数据集中呈现高度负相关( r＝－0.52，－0.41)。RT-PCR结果发现急性心肌梗死组miR-128-3p、miR-27a-3p、miR-27b-3p表达水平低于对照组，ISL1、GRIN2D表达水平高于对照组(均 P<0.01)。 结论:ISL1可能通过参与基质蛋白的形成、上皮细胞的分化以及相关信号通路的活动，对心肌梗死发挥保护作用。

Systemic sclerosis (SSc) is characterized by immune dysfunction, vasculopathy, chronic fibrosis of skin and internal organs with complex etiology. With the rapid development and the application in biomedicine of epigenetics, accumulating evidence has shown that epigenetics plays an important role in the pathogenesis of SSc. Environmental factors via epigenetics are needed to trigger and maintain for the disease in the subjects with genetic predisposition to SSc. The role of epigenetics in the pathogenesis of SSc includes hypermethylation of the promoter region of nitric oxide synthase and bone morphogenetic protein receptors II, up-regulation of histone deacetylases 4 and 5 expression, and down-regulation of miR-193b and miR-152 in endothelial cells inducing vascular dysfunction; DNA hypermethylation and hypoacetylation of histone H3 and H4 in Friend leukemia virus integration 1 and Kruppel-like factor 5 genes, and the abnormal expression of miR-29, miR-129-5p and miR-135b in fibroblasts causing excessive fibrosis; DNA hypomethylation in the promoter regions of CD11a and CD70 genes in CD4+T cells resulting in immune dysfunction. Studies on the role of epigenetics in SSc are of great significance for better understanding the pathogenic machanism of SSc, which is helpful to find new molecular targets for treating SSc, and consequently, improve the prognosis of SSc.

目的 探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制.方法 ①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23 μmol·L-1)与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI).Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达.②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平.脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证.随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达.结果 ①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8.与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01).②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01).与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05).③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01).转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01).结论 miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的.

目的:探讨微小RNA-152-3p(miR-152-3p)在结肠癌(CC)中的表达情况及靶向Krüppel样因子4(KLF4)对CC细胞的增殖、迁移和侵袭的影响.方法:通过starBase及TCGA数据库分析预测miR-152-3p与KLF4之间的靶向关系,以及各自在正常组织和CC组织中的表达情况差异;双荧光素酶和RIP实验验证miR-152-3p与KLF4之间的靶向关系;RT-qPCR检测miR-152-3p与KLF4在CC细胞系中的mRNA表达量;Western blot实验检测KLF4在CC细胞系中的蛋白表达水平;MTT实验检测细胞的增殖能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;细胞周期实验和凋亡实验检测细胞的周期分布情况和凋亡百分率.结果:miR-152-3p在CC组织和细胞系中高表达(P＜0.001),而KLF4低表达(P＜0.01),且miR-152-3p能够靶向下调KLF4的表达(P＜0.01).miR-152-3p过表达能增高CC细胞系的增殖、迁移和侵袭能力,降低细胞周期在G0/G1期的分布,并抑制其凋亡(P＜0.05);KLF4过表达可以抑制miR-152-3p对CC细胞增殖、迁移和侵袭能力的促进作用(P＜0.05),使G0/G1期细胞比例增加(P＜0.05),并促进细胞凋亡(P＜0.05).结论:miR-152-3p通过靶向下调KLF4的表达促进CC细胞的增殖、迁移和侵袭.

背景:研究表明长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因4(LncRNA SNHG4)参与了多种炎症性疾病的进展,而关于LncRNA SNHG4对牙周炎治疗过程中人牙周膜干细胞成骨分化的影响尚不明确.目的:探讨LncRNA SNHG4通过调节miR-152-3p对人牙周膜干细胞成骨分化的影响.方法:从因正畸需要而拔除的前磨牙牙周膜组织中分离出人牙周膜干细胞,将其进行成骨诱导分化0,7,14 d后,qRT-PCR检测Runt相关转录因子2、骨钙素、LncRNA SNHG4及miR-152-3p表达.取第3代人牙周膜干细胞,将其分为NC组、pcDNA组、pcDNA-SNHG4组、inhibitor NC组、miR-152-3p inhibitor组、pcDNA-SNHG4+mimic NC组、pcDNA-SNHG4+miR-152-3p mimic组,qRT-PCR检测各组人牙周膜干细胞中LncRNA SNHG4、miR-152-3p表达,CCK-8法检测细胞增殖情况;比色法检测碱性磷酸酶活性;茜素红染色检测矿化结节形成情况;Western blot检测Runt相关转录因子2、骨钙素、碱性磷酸酶蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA SNHG4与miR-152-3p的关系.结果与结论:①与成骨诱导0 d比较,成骨诱导7,14 d后人牙周膜干细胞中Runt相关转录因子2、骨钙素、LncRNA SNHG4表达升高,miR-152-3p表达降低(P<0.05);②过表达LncRNA SNHG4或抑制miR-152-3p均可提高人牙周膜干细胞的增殖能力及碱性磷酸酶活性、矿化结节形成量和Runt相关转录因子2、骨钙素、碱性磷酸酶的蛋白表达(P<0.05);miR-152-3p mimic减弱了过表达LncRNA SNHG4对人牙周膜干细胞成骨分化的促进作用;LncRNA SNHG4与miR-152-3p存在靶向关系;③结果表明,过表达LncRNA SNHG4可能通过抑制miR-152-3p促进人牙周膜干细胞成骨分化.