目的:探讨淫羊藿素调控miRNA-329（miR-329）、miRNA-1236（miR-1236）抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法:采用2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素处理肝癌细胞株HepG2，对照组仅加入二甲基亚砜（DMSO），培养36 h后采用CCK-8法检测淫羊藿素对HepG2细胞的半数抑制浓度（ IC50）及细胞增殖率。使用400 μg/L甲胎蛋白（AFP）处理HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h后，CCK-8法检测AFP对HepG2细胞增殖的影响。构建AFP-3'UTR荧光素酶报告质粒pmirGLO-AFP-3'UTR质粒，将pmirGLO空白载体质粒、pmirGLO-AFP-3'UTR质粒及miR-329或miR-1236的模拟物或抑制剂、相应的模拟物的对照质粒（NC）、相应的抑制剂的对照质粒（INC）分别共转染HepG2细胞，培养24 h后双荧光素酶报告基因检测miR-329和miR-1236对荧光素酶活性的影响。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测淫羊藿素对HepG2细胞AFP、miR-329和miR-1236表达的影响。使用miR-329、miR-1236的模拟物和抑制剂分别转染HepG2细胞，检测miR-329、miR-1236对AFP水平的影响。 结果:2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组细胞增殖率分别为（80.4±2.3）%、（73.2±1.6）%、（51.7±3.3）%、（38.2±4.6）%、（29.5±4.3）%和（94.0±2.9）%，差异有统计学意义（ F＝75.65， P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组HepG2细胞增殖率分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。淫羊藿素对HepG2细胞的 IC50为10 μmol/L。2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组AFP mRNA的相对表达量分别为0.83±0.06、0.69±0.02、0.53±0.07、0.45±0.01、0.33±0.07和1.00±0.01，差异有统计学意义（ F＝42.67， P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组AFP mRNA的相对表达量分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。400 μg/L AFP作用HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h，细胞增殖率分别为（102±5）%、（138±13）%、（186±24）%、（260±12）%、（311±15）%、（348±25）%，差异有统计学意义（ F＝27.483， P<0.01）；AFP作用不同时间分别与0 h细胞增殖率比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。与对照组比较，不同浓度淫羊藿素均能够促进miR-329和miR-1236表达（均 P<0.01）。miR-329和miR-1236模拟物与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均降低了约40%；miR-329、miR-1236抑制剂与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均增加约1.5倍。miR-329和miR-1236均可降低AFP蛋白和mRNA的表达水平（均 P<0.05）。 结论:淫羊藿素体外通过增加miR-329和miR-1236表达，促进miR-329、miR-1236与AFP-3'UTR的结合，抑制AFP mRNA的稳定性和翻译活性，抑制AFP表达，从而抑制肝癌细胞增殖。

目的:探讨LINC01352对口腔鳞状细胞癌增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法:培养口腔鳞癌SCC25细胞，分为LINC01352过表达（pc-LINC01352）组及其阴性对照（pc-NC）组、miR-629-5p mimics组及其阴性对照（miR-NC）组，将pc-LINC01352、pc-NC、miR-629-5p mimics、miR-NC分别转染相应组的SCC25细胞中。pc-LINC01352组和pc-NC组SCC25细胞转染后，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞中LINC01352、miR-629-5p的相对表达情况，采用细胞计数试剂盒（CCK）-8检测细胞活力，采用EdU检测细胞增殖能力，采用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。通过LncRNASNP2在线网站预测LINC01352潜在的下游靶基因及其与LINC01352的结合位点。使用转染后的miR-629-5p mimics组、miR-NC组的SCC25细胞，采用双荧光素酶报告基因实验验证LINC01352潜在的下游靶基因及其与LINC01352的结合位点。结果:SCC25细胞转染pc-LINC01352后，pc-LINC01352组中LINC01352的相对表达量（4.99±0.77）高于pc-NC组（1.00±0.07），miR-629-5p的相对表达量（0.32±0.01）低于pc-NC组（1.00±0.06），差异均有统计学意义（ t=8.94、15.72， P值均<0.05）。CCK-8检测结果显示，pc-LINC01352组在转染后24、48和72 h的OD值均小于pc-NC组，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。EdU检测结果显示，pc-LINC01352组细胞阳性率为9.37%±1.30%，低于pc-NC组的25.92%±2.18%，差异有统计学意义（ t=11.29， P=0.001）。pc-LINC01352组的迁移细胞数、侵袭细胞数分别为（63±6）、（50±4）个，分别低于pc-NC组的（186±9）、（146±8）个，差异均有统计学意义（ t=20.25、19.64， P值均<0.001）。预测LINC01352潜在的下游靶基因为miR·629·5p，LINC01352与miR-629-5p的结合位点为miR-629-5p的3’UTR区。双荧光素酶报告基因实验结果显示，miR-629-5p mimics组LINC01352-WT的荧光素酶活性为0.42±0.04，低于miR-NC组的1.00±0.05，差异有统计学意义（ t=19.45， P<0.001），而2组间LINC01352-MT的荧光素酶活性差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:上调口腔鳞状细胞癌SCC25细胞中LINC01352的表达水平，可以降低SCC25细胞的活力，抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力；其作用机制可能为LINC01352与miR-629-5p的3’UTR区直接结合，下调了miR-629-5p的表达水平有关。

目的:分析静止和循环张应力条件下大鼠髁突软骨细胞（mandibular condylar chondrocytes，MCC）外泌体显著差异微RNA（microRNA，miRNA）的表达谱并探究张应力调节髁突软骨内成骨的作用机制。方法:分别选择5只2周龄雄性SD大鼠（共10只）在静止和循环张应力条件下培养大鼠MCC，提取细胞外泌体，两组外泌体分别命名为对照组和实验组。采用透射电子显微镜、纳米流式检测仪、纳米颗粒追踪分析等方法观察并鉴定，通过高通量测序筛选表达显著差异的miRNA，采用TargetScan、miRanda网站进行生物信息学分析及成骨相关靶基因预测。结果:实验组大鼠MCC外泌体均呈“双凹圆盘状”单层膜结构，CD9、CD81表达阳性，粒径分布符合外泌体特征，与对照组大鼠MCC外泌体一致。高通量测序筛选表达显著差异的miRNA共85个（ P<0.05）。差异miRNA主要参与的生物学过程与分子功能分别为生物学过程和蛋白质结合；京都基因与基因组数据库通路富集分析显示在哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路有显著富集（ P<0.05）。其中miR-199a-5p的候选靶基因有骨形态发生蛋白3（bone morphogenetic protein 3，BMP3）、内皮素转换酶-1，miR-186-5p可靶向Smad8、BMP3，以发挥成骨相关功能。 结论:相比于静止状态，CTS刺激能改变大鼠MCC外泌体中miR-199a-5p、miR-186-5p等miRNA的表达量，可考虑作为调节外泌体应用潜能的一种手段。

目的:探讨微小RNA-186（miR-186）在肾癌中的作用及其靶向调控E-钙黏蛋白影响肾癌细胞增殖和转移的分子机制。方法:收集2015年1月至2019年1月山西省人民医院肾癌组织标本40例，采用实时定量PCR检测miR-186在40例肾癌组织及4种肾癌细胞系中的表达。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、克隆形成、细胞划痕、Transwell实验和流式细胞学等方法检测miR-186过表达对肾癌786-O细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的影响，裸鼠成瘤实验分析miR-186对肾肿瘤生长的影响。采用Western印迹分析miR-186对上皮-间充质转化（EMT）相关标记物如E-钙黏蛋白表达的影响，双荧光素酶报告基因验证miR-186与E-钙黏蛋白的靶向关系。结果:40例患者中，男26例、女14例；年龄（58.4±9.2）岁。miR-186在肾癌组织和细胞中表达下调（组织：0.005 2±0.000 4比0.015 5±0.001 5， P<0.001；细胞：0.334 3±0.025 1、0.457 0±0.026 6、0.229 8±0.011 0、0.741 1±0.091 0比1.000 0±0.085 2，均 P<0.001），miR-186在肿瘤直径大小（≥4 cm比<4 cm为0.003 2±0.003 4比0.008 4±0.007 2， P<0.001）、临床分期（≤Ⅱ期比>Ⅱ期为0.007 8±0.005 8比0.002 7±0.002 3， P=0.021）及组织学分级（<Ⅱ级比≥Ⅱ级为0.008 8±0.006 3比0.004 6±0.003 0， P<0.001）的组间差异有统计学意义。miR-186过表达可抑制肾癌786-O细胞增殖和侵袭迁移，诱导细胞凋亡，并抑制肿瘤生长。miR-186可以直接靶向调控E-钙黏蛋白并促进其表达。 结论:miR-186可能通过直接调控E-钙黏蛋白影响EMT并抑制肾癌细胞增殖和转移。

目的:探究LINC00662能否靶向微小RNA(miR)-186-5p/叉头框转录因子D1(FOXD1)轴调控乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭。方法:实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测28例乳腺癌组织和癌旁组织中LINC00662、miR-186-5p和FOXD1 mRNA表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测FOXD1蛋白表达。分别转染LINC00662小干扰RNA(si-LINC00662)、共转染si-LINC00662与miR-186-5p抑制剂、si-LINC00662与FOXD1过表达载体至MCF-7细胞，细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测细胞增殖，Transwell检测细胞迁移和侵袭，Western blot检测p21、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和FOXD1蛋白表达。双荧光素酶报告系统验证LINC00662与miR-186-5p、miR-186-5p与FOXD1的调控关系，两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:乳腺癌组织组中LINC00662(1.01±0.08比2.36±0.09， t＝59.324， P<0.01)、FOXD1水平(0.97±0.07比1.93±0.09， t＝44.553， P<0.01)高于癌旁组织，miR-186-5p水平(0.96±0.05比0.34±0.04， t＝51.236， P<0.01)低于癌旁组织。si-LINC00662组克隆形成数[(114.00±7.93)个比(62.00±5.81)个， t＝15.869， P<0.01]、迁移细胞数[(164±10.03)个比(75±7.14)个， t＝21.687， P<0.01]、侵袭细胞数[(103.00±7.83)个比(44.00±4.35)个， t＝19.761， P<0.01]少于si-NC组，存活率[(100.03±8.12)%比(52.29±5.34)%， t＝14.737， P<0.01]、MMP-2(0.71±0.05比0.24±0.03， t＝24.181， P<0.01)蛋白水平低于si-NC组，P21(0.15±0.02比0.58±0.04， t＝28.845， P<0.01)、E-cadherin(0.23±0.02比0.66±0.04， t＝28.845， P<0.01)蛋白水平高于si-NC组。LINC00662靶向负调控miR-186-5p；miR-186-5p靶向负调控FOXD1。si-LINC00662+抗miR-186-5p组克隆形成数[(60.00±±5.62)个比(102.00±7.23)个， t＝13.759， P<0.01]、迁移细胞数[(74.00±7.26)个比(131.00±9.91)个， t＝13.920， P<0.01]、侵袭细胞数[(45.00±4.41)个比(88.00±5.67)个， t＝17.959， P<0.01]多于si-LINC00662+抗miR-NC组，存活率[(52.31±5.35)%比(85.06±6.46)%， t＝11.714， P<0.01]、MMP-2(0.23±0.03比0.59±0.04， t＝21.600， P<0.01)蛋白水平低于si-LINC00662+抗miR-NC组，P21(0.57±0.04比0.26±0.03， t＝17.400， P<0.01)、E-cadherin(0.64±0.04比0.35±0.03， t＝12.969， P<0.01)蛋白水平高于si-LINC00662+抗miR-NC组。 结论:LINC00662通过发挥miR-186-5p分子海绵上调FOXD1促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭。

目的 探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的机制.方法 在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测是否转染成功.克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证 SNHG3 与 miR-186-5p、miR-186-5p 与 ZEB1 的靶向关系,FQ-PCR 和 Western blot 法检测 SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail 的表达水平.结果 肝癌组织中 SNHG3 表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义(P＜0.05).克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加(P＜0.05).细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组(P＜0.05).Transwell 小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3 组 HepG2 细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组(P＜0.05).双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05).FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点.

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性.方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组.比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平.采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性.乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析.血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析.结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P＜0.05).耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P＜0.05).Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均 P＜0.05).多因素 Logistic 回归分析显示,血清 miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p 是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P＜0.05).结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高.

目的:探讨微小核糖核酸(miR)-145、miR-186表达与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的关系.方法:选择2020年3月至2023年3月我院收治的128例行肺癌根治手术治疗的NSCLC患者,取其术中癌组织和癌旁组织(距离癌组织5 cm以上),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测 miR-145、miR-186 以及 PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA 表达.分析 miR-145、miR-186 表达与 NSCLC 患者临床病理特征的关系;Pearson检验分析NSCLC患者癌组织miR-145、miR-186表达与PI3K mRNA、Akt mRNA、mTORmRNA表达的相关性.结果:癌组织miR-145、miR-186表达低于癌旁组织(P＜0.05),低分化、TNM ⅢA期、淋巴结转移的NSCLC组织miR-145、miR-186表达低于中高分化、TNM Ⅰ～Ⅱ期、未发生淋巴结转移的NSCLC组织(P＜0.05).癌组织PI3KmRNA、Akt mRNA、mTORmRNA 表达均高于癌旁组织(P＜0.05),癌组织 miR-145、miR-186 表达与 PI3K mRNA、Akt mRNA、mTORmRNA表达均呈负相关(P＜0.05).结论:NSCLC组织中miR-145、miR-186表达下调,miR-145、miR-186表达下调可能激活PI3K/Akt/mTOR信号通路促使NSCLC进展,且与NSCLC患者癌组织低分化、TNM ⅢA期、淋巴结转移有关.

目的 分析冠心病(CHD)患者血清微小RNA-122-5p(miR-122-5p)变化及与斑块稳定程度、预后的关系.方法 选取2019年8月至2021年8月张家口市第五医院186例CHD患者作为研究组,根据斑块稳定程度分为不稳定斑块组(n=58)及稳定斑块组(n=128),另取同期健康体检者90名作为对照组,检测比较所有受试者血清miR-122-5p水平,采用ROC曲线分析血清miR-122-5p水平对CHD患者斑块稳定程度的诊断价值.记录CHD患者治疗后随访1年内心血管不良事件发生情况,并将心血管不良事件发生情况作为评估预后的标准,将研究组分为预后不良组(n=50)及预后良好组(n=136),采用单因素及多因素Logistic分析影响CHD患者预后的因素.结果 研究组血清miR-122-5p水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不稳定斑块组血清miR-122-5p水平均高于稳定斑块组,差异有统计学意义(P<0.05);由ROC曲线可知,血清miR-122-5p诊断CHD患者斑块稳定程度的AUC为0.845(P<0.05);预后不良组血清miR-122-5p水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic分析显示,血清miR-122-5p水平过高是CHD患者预后不良的独立危险因素(P<0.05).结论 miR-122-5p在CHD患者血清中呈高表达,对斑块稳定程度具有一定的诊断价值,其水平过高是CHD患者预后不良的独立危险因素.

目的:通过研究甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)患者和健康人的血清外泌体miRNA在不同碘水平下的表达谱差异,探寻不受高碘影响可稳定诊断PTC的生物标志物.方法:收集PTC患者和健康人的血清样本,采用砷铈催化分光光度法测定血清碘,分别纳入高碘、正常碘的PTC患者各10例,高碘、正常碘的健康人各5例作为研究对象.然后从血清中抽提外泌体,从中提取miRNA并进行高通量测序,进一步做基因本体论(gene ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclope-dia of genes and genomes,KEGG)通路分析.结果:分别筛选高碘、正常碘组中PTC患者与健康人的差异表达miRNA,再取交集得到12个共同差异表达miRNA,显著富集到6个PTC相关通路.结论:与健康人对比,PTC 患者中下调的 miR-3158-3p、miR-186-5p,上调的 miR-122-5p、miR-375-3p、miR-10a-5p、miR-10b-5p、miR-148a-3p、miR-223-5p、let-7d-3p、miR-651-5p,这 10 个 miRNA 可以作为在一般人群中区别PTC患者和健康人的稳定潜在生物标志物.