目的:探讨微小RNA-205(miR-205)在人增生性瘢痕中的表达及作用。方法:采用实验研究方法。收集于2019年10月—2020年1月在北部战区总医院就诊的符合入选标准的6例增生性瘢痕患者[男1例、女5例，年龄(36±7)岁]的增生性瘢痕组织及同时期于同单位就诊的6例符合入选标准的外伤患者[男2例、女4例，年龄(38±9)岁]行皮瓣移植手术后剩余的正常皮肤组织，采用实时荧光定量反转录PCR法检测miR-205和血小板反应蛋白1(TSP-1)的mRNA表达情况。取增生性瘢痕组织，培养第3～5代成纤维细胞(Fb)，用于后续实验。取2批增生性瘢痕Fb，分成TSP-1＋miR-205对照组、TSP-1＋miR-205模拟物组和TSP-1突变＋miR-205对照组、TSP-1突变＋miR-205模拟物组，分别转染相应的序列。转染后48 h，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测荧光素酶和肾荧光素酶的表达，并计算两者比值，以此表示TSP-1的活性。取2批增生性瘢痕Fb，分为miR-205对照组、miR-205模拟物组、miR-205抑制物组及miR-205对照组、miR-205模拟物组、miR-205模拟物＋TSP-1组，分别转染相应的序列，转染后0(即刻)、12、24、36、48 h，用酶标仪检测细胞活力。取2批增生性瘢痕Fb，同细胞活力检测实验进行分组及处理，转染后24 h，行Hoechst 33258染色，观察细胞核皱缩情况，以此反映细胞凋亡情况。细胞实验中样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、 t检验及 χ2检验。 结果:增生性瘢痕组织中miR-205的mRNA表达量为0.54±0.05，明显低于正常皮肤组织中的1.26±0.07( t＝8.213, P<0.01)。增生性瘢痕组织中TSP-1的mRNA表达量为1.46±0.07，明显高于正常皮肤组织中的0.68±0.11( t＝6.031， P<0.01)。转染后48 h，TSP-1＋miR-205模拟物组细胞表示TSP-1活性的荧光素酶/肾荧光素酶比值为0.532±0.028，明显低于TSP-1＋miR-205对照组的0.998±0.012( t＝26.500， P<0.01)；TSP-1突变＋miR-205模拟物组细胞荧光素酶/肾荧光素酶比值为0.963±0.012，与TSP-1突变＋miR-205对照组的0.976±0.010相近( t＝0.816， P>0.05)。转染后12、24、36、48 h，miR-205模拟物组细胞活力明显低于miR-205对照组( t＝6.169、12.670、27.130、12.670， P<0.05或 P<0.01)；转染后0、12、24、36、48 h，miR-205抑制物组细胞活力明显高于miR-205对照组( t＝6.169、7.221、7.787、7.835、13.030， P<0.05或 P<0.01)。转染后12、24、36、48 h，miR-205模拟物组细胞活力明显低于miR-205对照组和miR-205模拟物＋TSP-1组( t＝8.118、26.970、39.550、42.490，14.570、12.240、36.830、45.220， P<0.05或 P<0.01)。转染后24 h，与miR-205对照组相比，miR-205模拟物组细胞凋亡增加，miR-205抑制物组细胞凋亡减少。转染后24 h，与miR-205模拟物组相比，miR-205对照组和miR-205模拟物＋TSP-1组细胞凋亡减少。 结论:miR-205可以通过抑制TSP-1的表达，抑制人增生性瘢痕Fb的增殖，促进Fb的凋亡，可能成为增生性瘢痕潜在的治疗靶点。

目的:探讨微小RNA(microRNA，miR)-205-5p靶向调节轴抑制蛋白2(AXIN2)基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法:收集2017年1月至2019年1月山西省人民医院手术切除结肠癌组织组织标本并购买结肠癌细胞系，分别以距肿瘤边缘5 cm的癌旁组织和人正常结肠黏膜上皮细胞系为对照。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测分别检测组织和细胞中miR-205-5p和AXIN2表达水平。荧光素酶报告实验验证miR-205-5p与AXIN2的靶向关系。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测各组转染细胞增殖和凋亡变化，两组和多组间比较分别采用 t检验和单因素方差分析。 结果:结肠癌组织及细胞系中miR-205-5p低表达(2.16±0.24比1.00±0.04， t＝10.660， P<0.01)，AXIN2高表达(mRNA，0.21±0.02比1.00±0.04， t＝30.600， P<0.01；蛋白，0.64±0.03比1.44±0.06， t＝26.670， P<0.05)，差异均有统计学意义。AXIN2是miR-205-5p的靶基因。mimic组AXIN2蛋白表达量显著低于Blank组和NC组，差异有统计学意义(0.33±0.03， t＝116.490， P<0.05)；miR-205-5p抑制剂(inhibitor)组AXIN2蛋白表达量显著高于Blank组和NC组，差异有统计学意义(1.67±0.11， t＝11.270， P<0.05)。miR-205-5p mimic组(增殖，48 h 0.82±0.09， t＝5.375， P<0.05；72 h 1.46±0.13， t＝3.333， P<0.05；凋亡，28.71±2.27， t＝12.350， P<0.05)和AXIN2沉默表达(siRNA-AXIN2)组(增殖，48 h 1.11±0.11， t＝2.814， P<0.05；72 h 1.68±0.06， t＝4.959， P<0.05；凋亡，4.45±0.64， t＝5.090， P<0.05)结肠癌细胞增殖率显著低于Blank组和NC组，细胞凋亡率显著高于Blank组和NC组，差异有统计学意义；而miR-205-5p inhibitor组(增殖，48 h 2.11±0.18， t＝4.386， P<0.05；72 h 2.66±0.19， t＝4.898， P<0.05；凋亡，4.71±0.26， t＝5.155， P<0.05)和AXIN2过表达(OE-AXIN2)组(增殖，48 h 0.44±0.05， t＝0.002， P<0.05；72 h 0.88±0.11， t＝7.446， P<0.05；凋亡，25.65±2.12， t＝10.900， P<0.05)结肠癌细胞增殖率显著高于Blank组和NC组，细胞凋亡率显著低于Blank组和NC组，差异有统计学意义。 结论:miR-205-5p在结肠癌中异常升表达，AXIN2呈低表达。miR-205-5p抑制表达靶向上调AXIN2表达可抑制结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡。

目的:探索miR-205-5p/E2F1信号轴在脑胶质瘤U251、U87细胞放射耐受中的调控机制。方法:利用X射线逐步递增递间歇诱导方法照射U251、U87细胞，建立放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞。对两种细胞进行形态学、细胞运动、侵袭及增殖能力分析。通过荧光素酶基因检测系统及点突变技术分析E2F1基因对U251/TR、U87/TR细胞的调控机制。结果:放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞分别比251、U87细胞的增殖活力增强，运动、侵袭能力增强，X射线照射下细胞凋亡下降。miR-205-5p mimics转染能够下调U251/TR细胞E2F1因子表达，抑制细胞增殖、侵袭及运动，增加放射敏感性。miR-205-5p mimics转染协同E2F1下调是通过抑制细胞Wnt/β-catenin信号通路活性发挥抑制肿瘤作用，并降低细胞耐受。结论:逐步递增递间歇诱导方法能较好地建立U251/TR、U87/TR细胞。miR-205-5p/E2F1信号轴通过经典Wnt/β-catenin信号通路发挥抑癌作用，可以作为提高胶质瘤放射敏感性的治疗靶点。

目的:探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Frizzled 2(FZD2)基因激活Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的作用机制。方法:体外培养胃癌MKN-45细胞；在胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立微小RNA(miR)-30a-5p的敲除和过表达模型，胃癌MKN-45细胞分为3组：miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组，miR-30a-5p过表达RNA(miR-30a-5p mimics)组和空白对照组(negative control，NC)，荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-30a-5p的直接靶基因FZD2基因及Wnt/β-catenin信号通路下游关键基因c-myc的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与直接靶基因FZD2的靶向调节关系；在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮，分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力，细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力；通过免疫组织化学方法验证FZD2基因的蛋白表达水平。各组间比较采用 t检验。 结果:qPCR实验结果显示FZD2 mRNA表达水平miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(0.62±0.02比1.01±0.13， t＝5.042， P<0.01)，c-myc mRNA表达水平miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(0.46±0.07比1.01±0.15， t＝5.805， P<0.01)，Western blot实验结果显示，FZD2蛋白表达水平miR-30a-5p inhibitor组明显高于NC组(1 181 347.00±39.27比206 382.00±8.33， t＝1 080.000， P<0.01)，miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(996 269.00±54.50比1 168 775.00±99.80， t＝1 104.000， P<0.01)，c-myc蛋白表达水平miR-30a-5p inhibitor组明显高于NC组(3 307 840.00±81.00比253 663.00±33.29， t＝1 072.000， P<0.01)，miR-30a-5p mimics组明显低于NC组(138 137.00±131.68比205 780.00±77.69， t＝766.300， P<0.01)；双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中FZD2基因活性显著低于对照组(1.02±0.14比0.59±0.06， t＝99.638， P<0.01)；CCK-8结果显示转染48 h后miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组细胞增殖能力低于miR-30a-5p inhibitor组(93.09±4.18比146.42±5.80， t＝12.920， P<0.01)。Transwell结果显示miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量低于miR-30a-5p inhibitor组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个， t＝4.440， P<0.05]。免疫组织化学结果显示基因FZD2蛋白在miR-30a-5p低表达[miR-30a-5p/β-肌动蛋白(β-actin)<0.05]的胃癌组织中表达增强(评分≥5分)，与对照组比较差异有统计学意义( P<0.01)。 结论:在胃癌中miR-30a-5p可直接靶向FZD2，通过抑制FZD2的表达，降低Wnt信号通路的活性，从而抑制胃癌的发生与发展。

目的:研究miR-205-3p对P.g-LPS所致HUVECs炎症反应和凋亡的影响及调控机制.方法:利用P.g-LPS刺激HUVECs构建细胞损伤模型,实验分为Con组、LPS组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-205组、LPS+si-NC组、LPS+si-PRMT5组、LPS+miR-205+pc-NC组和LPS+miR-205+pc-PRMT5组,RT-qPCR和Western blot检测miR-205-3p、PRMT5和凋亡蛋白表达;ELISA检测炎症因子表达;Tunel染色和流式细胞术检测HU-VECs凋亡;双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-205-3p和PRMT5的靶向关系.结果:P.g-LPS刺激HUVECs后,炎症因子表达和凋亡率显著升高,miR-205-3p下调,PRMT5上调(P＜0.05).miR-205-3p可以抑制PRMT5表达,且过表达miR-205-3p和PRMT5低表达均可以降低炎症因子表达和降低细胞凋亡率(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miR-205-3p可靶向抑制PRMT5的表达(P＜0.05).且过表达PRMT5可明显逆转过表达miR-205-3p对炎症反应和凋亡的抑制作用(P＜0.05).结论:P.g-LPS促进HUVECs炎症反应和凋亡;miR-205-3p靶向负调控PRMT5表达来改善P.g-LPS诱导的HUVECs炎症反应和凋亡.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-572P18.1对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制.方法:采用国际癌症基因组联盟(ICGC)数据库分析卵巢癌组织中RP11-572P18.1表达水平.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌细胞系 OC3、A2780、Caov-3、SK-OV-3、HO-8910 中 RP11-572P18.1 表达水平,选取表达水平最低的细胞进行后续实验.将Caov-3细胞分为RP11-572P18.1组和NC组,分别转染RP11-572P18.1过表达质粒和对照质粒.MTT实验检测Caov-3细胞增殖能力,Transwell实验检测Caov-3细胞侵袭能力.双荧光素酶报告基因实验验证RP11-572P18.1和miR-205-5p的靶向关系.采用RT-qPCR检测Caov-3细胞miR-205-5p表达.采用免疫印迹法(Western blot)检测Caov-3细胞增殖蛋白[细胞周期蛋白B(Cyclin B)、细胞周期蛋白E(Cyclin E)]和侵袭蛋白[锌指E盒同源结合蛋白1(Zeb1)、转录因子(Twist)、β-连环蛋白(β-catenin)]表达.结果:与正常组织比较,卵巢癌组织中RP11-572P18.1表达降低(P＜0.01).与正常卵巢上皮细胞IOSE80比较,卵巢癌细胞系中RP11-572P18.1表达水平降低,且Caov-3细胞降低最显著(均P＜0.05).与NC组比较,RP11-572P18.1组Caov-3细胞增殖能力及侵袭数目降低(均P＜0.05).RP11-572P18.1与miR-205-5p存在靶向关系.与NC组比较,上调RP11-572P18.1 可抑制 Caov-3 细胞 miR-205-5p 以及 Cyclin B、Cyclin E、Zeb1、Twist 和β-catenin 蛋白表达(均 P＜0.05).结论:RP11-572P18.1在卵巢癌组织和细胞系中表达降低,RP11-572P18.1通过下调miR-205-5p抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭.

目的 探讨miR-205-5p靶向ERBB3 调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管生成在痔疮中的分子机制.方法 收集 2021 年 07 月至 2022 年 06 月临床 12 例患者的痔核和正常肛周组织,通过qRT-PCR检测临床病理样本中miR-205-5p和ERBB3 的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p与ERBB3 的靶向关系.将miR-205-5p mimic、pcDNA-ERBB3、miR-205-5p inhibitor、sh-ERBB3、oe-ERBB3 及阴性对照质粒分别或共同转染至痔疮模型大鼠和HUVEC细胞.HE、TUNEL染色观察组织病理和细胞凋亡情况,免疫组化检测ERBB3、VEGFR2 蛋白定位及表达水平,Western blot检测ERBB3、VEGFR2、Cyclin D1、Cleaved-caspase 3、Bax、Bcl-2 和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平.MTT、划痕愈合、Transwell实验、流式细胞术、血管形成实验检测各组HUVEC细胞增殖、迁移、侵袭能力、凋亡率和血管生成量.结果 痔疮临床样本中miR-205-5p呈低表达,ERBB3 呈高表达(P<0.001),miR-205-5p与ERBB3(WT)的3'UTR靶向结合(P<0.001).miR-205-5p mimic组痔疮大鼠和HUVEC细胞中ERBB3 表达量显著降低(P<0.01,P<0.001),VEGFR2(P<0.001)、Cyclin D1(P<0.01)、Bcl-2(P<0.001)、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR(P<0.001)水平显著下调,Cleaved-caspase 3 和Bax水平显著上调(P<0.01),大鼠肛周组织病理状况改善,HUVEC细胞增殖、迁移和侵袭力均降低(P<0.001),凋亡率升高(P<0.001),血管生成数量及分支减少(P<0.001),pcDNA-ERBB3 逆转了这一效应(P<0.001).结论 miR-205-5p能通过靶向抑制ERBB3 表达,下调PI3K/AKT/mTOR通路活性,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,减少血管生成,从而缓解痔疮进展.

目的 探究大鼠心肌梗死后心力衰竭左心室机械卸载心肌微小RNA(miRNA)-mRNA的调控网络.方法 将SD大鼠按照随机数表法分为对照组、心力衰竭组和左心室机械卸载组(卸载组),每组8只.采用前降支结扎和主动脉弓缩窄方法构建大鼠心肌梗死后心力衰竭模型,造模后第3天进行左心室机械卸载,观察至造模后第7天.超声心动图评估大鼠心脏结构和功能,血清学酶联免疫吸附试验评估心肌炎症反应,采用高内涵成像分析系统评估心肌成纤维细胞增殖率.选取基因表达总库(GEO)数据库中缺血性心肌病患者应用左心室辅助装置进行机械卸载前后的心肌表达谱数据进行生物信息学分析,筛选出核心miRNA及其可能的下游效应mRNA.利用qRT-PCR验证心肌中核心miRNA的表达情况.结果 与心力衰竭组大鼠相比,卸载组大鼠左心室射血分数提升20.0％(F=35.37,P=0.027),血清心肌损伤标志物心肌肌钙蛋白I水平下降52.5％(F=118.9,P＜0.001)、B型利钠肽水平下降18.2％(F=112.6,P=0.001);血清中炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子a的水平分别下降58.5％(F=62.16,P＜0.001)、27.8％(F=26.44,P=0.010)和 31.2％(F=40.42,P＜0.001);心肌细胞横截面积降低 31.6％(F=204.7,P＜0.001)、心肌胶原纤维面积下降29.1％(F=34.19,P=0.026);心肌成纤维细胞增殖率显著降低(F=7.387,P=0.003).通过生物信息学分析共筛选出 4 个核心 miRNA(hsa-miR-205-3p、hsa-miR-205-5p、hsa-miR-335-3p 和 hsa-miR-335-5p).miR-335-3p(F=20.72,P=0.020)和 miR-335-5p(F=26.36,P=0.005)在卸载后的心肌中表达显著上调,miR-335的潜在下游靶基因(APOOL、ERBB4和WWTR1)表达水平显著下调(F=14.22、10.13和8.69,P=0.011、0.015和0.033).结论 左心室机械卸载可以有效逆转大鼠心肌梗死后的心肌重构,并降低急性期心肌成纤维细胞增殖率,miR-335在这一过程中可能发挥关键作用.

目的:探究甘草甜素(Gly)对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及作用机制.方法:体外培养正常人喉黏膜上皮细胞和喉癌Hep-2细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白印迹实验检测微小RNA-205-5p(miR-205-5p)、沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)mRNA和蛋白表达水平.将喉癌Hep-2细胞分为对照组、Gly低浓度组、Gly中浓度组、Gly高浓度组、Gly高浓度+空载质粒组、Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组.各组给予相应浓度的Gly干预或转染对应质粒培养48 h.Transwell实验和划痕实验分别检测各组Hep-2细胞侵袭和迁移能力.RT-qPCR法和蛋白印迹实验检测各组Hep-2细胞miR-205-5p、SIRT3 mRNA和蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验分析miR-205-5p与SIRT3的靶向关系.结果:与人喉黏膜上皮细胞比较,喉癌Hep-2细胞miR-205-5p水平降低,SIRT3 mRNA和蛋白水平升高(均P＜0.05).与对照组比较,Gly低、中、高浓度组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平依次降低,miR-205-5p水平依次升高(均P＜0.05).与Gly高浓度组和Gly高浓度+空载质粒组比较,Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平升高,miR-205-5p水平降低(均P＜0.05).miR-205-5p可靶向调控SIRT3表达.结论:Gly能够抑制Hep-2细胞侵袭和迁移,其机制可能与上调miR-205-5p表达,进而靶向下调SIRT3表达有关.

目的 探讨血清长链非编码RNA结直肠肿瘤差异表达基因(lncRNA CRNDE)、微小RNA-205-5p(miR-205-5p)表达水平在冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)诊断中的临床价值.方法 收集2018年1月-2021年12月上海中医药大学附属普陀医院收治的300例冠心病患者为冠心病组,根据患者冠状动脉造影结果将其分为单支病变组(n=106)、双支病变组(n=115)和三支病变组(n=79);同期纳入286名排除冠心病及其他系统疾病的健康体检者为对照组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清lncRNA CRNDE、miR-205-5p水平;采用Pearson相关性分析lncRNA CRNDE、miR-205-5p与血清指标的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA CRNDE、miR-205-5p水平对冠心病的诊断价值;采用logistic回归分析冠心病发病的影响因素.结果 冠心病组lncRNA CRNDE、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著低于对照组,miR-205-5p、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(t=11.272、21.722、14.667、11.439、13.571、7.147,P均＜0.05).冠心病患者血清lncRNA CRNDE水平与TC、TG、LDL-C成负相关,与HDL-C成正相关(r=-0.486、-0.492、-0.510、0.504,P 均＜0.05);miR-205-5p 水平与 TC、TG、LDL-C 成正相关,与 HDL-C 成负相关(r=0.497、0.494、0.490、-0.509,P均＜0.05).三支病变组血清lncRNA CRNDE水平显著低于双支病变组和单支病变组,miR-205-5p水平显著高于双支病变组和单支病变组;双支病变组血清lncRNA CRNDE水平显著低于单支病变组,miR-205-5p水平显著高于单支病变组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).血清lncRNA CRNDE、miR-205-5p水平联合诊断冠心病的曲线下面积(AUC)为0.843,高于lncRNA CRNDE、miR-205-5p单独诊断的0.746、0.809,差异均有统计学意义(Z=3.674、1.717,P均＜0.05).miR-205-5p是冠心病发病的独立危险因素(P＜0.05),lncRNA CRNDE是冠心病发病的保护因素(P＜0.05).结论 lncRNA CRNDE、miR-205-5p可作为冠心病诊断及疾病进展的可靠评估指标.