目的:研究 miR-496在胃癌细胞中的表达情况，并探讨其在胃癌细胞增殖和凋亡过程中的作用及机制。 方法:实时荧光定量PCR(qPCR)检测 miR-496在正常胃上皮细胞株和胃癌细胞系AGS、MKN45中的的表达情况。在表达水平最低的AGS细胞中敲低 miR-496，同时设置阴性对照组和空白对照组。分别用CCK8实验和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。使用生物信息学软件筛选出 miR-496的靶基因 LYN，QPCR检测转染 miR-496对 LYN表达的影响，随后进行了Rescure拯救实验，进一步研究 miR-496通过调控 LYN对胃癌细胞的作用机制。利用GraphPad Prism 9软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差( ± s)表示，组间比较采用 t检验。 结果:miR-496在AGS、MKN45中表达显著低于胃正常上皮细胞( P<0.05)。通过转染过表达 miR-496后，可以抑制AGS细胞的增殖，同时可以使AGS细胞的凋亡比例明显升高( P<0.05)。qPCR结果显示， miR-496过表达组能够抑制 LYN的表达( P<0.05)。生物信息学分析显示， miR-496与 LYN激酶( LYN) 3’UTR区域结合，通过过表达 miR-496可抑制AGS细胞中 LYN的表达，而CCK8拯救实验显示过表达 LYN能够解除 miR-496对细胞增殖的抑制作用；流式凋亡检测显示表达 LYN能够解除 miR-496对细胞凋亡的促进作用( P<0.05)。 结论:miR-496在胃癌细胞中低表达，其通过靶向胃癌细胞中 LYN的表达抑制胃癌细胞的增殖，促进胃癌细胞的凋亡。

目的:探讨野黄芩素通过miRNA-496（miR-496）、基质细胞衍生因子1（SDF-1）对子宫颈癌细胞株HCC94细胞增殖及迁移能力的影响。方法:取对数生长期的HCC94细胞，分别加入20 μmol/L野黄芩素溶液（野黄芩素组）和二甲基亚砜（DMSO）（对照组）。分别采用CCK-8法和Transwell实验检测两组HCC94细胞增殖和迁移能力，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-496和SDF-1 mRNA的相对表达量。采用生物信息学软件TarBase预测miR-496的靶基因，并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。采用蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果:与对照组比较，培养第3、4、5天，野黄芩素组HCC94细胞增殖能力均降低（均 P<0.05）。野黄芩素组和对照组HCC94细胞的穿胶细胞数分别为（25±5）个和（134±19）个，野黄芩素组细胞迁移能力较对照组降低（ t=5.61， P<0.01）。对照组和野黄芩素组miR-496相对表达量分别为1.07±0.12和11.24±2.75，差异有统计学意义（ t=3.68， P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果证实SDF-1是miR-496的下游靶基因。野黄芩素组和对照组HCC94细胞中SDF-1 mRNA相对表达量分别为0.29±0.05和1.01±0.07，差异有统计学意义（ t=7.22， P<0.01）。与对照组比较，野黄芩素促进miR-496表达后，SDF-1蛋白、细胞增殖蛋白细胞周期蛋白依赖激酶3（CDK3）、细胞迁移蛋白Slug和Zeb-2表达均降低。 结论:野黄芩素可通过miR-496-SDF-1轴抑制子宫颈癌HCC94细胞的增殖及迁移。

目的:探讨LINC00472对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞氧化损伤的影响及其机制。方法:LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)建立血管内皮细胞氧化损伤模型，将si-NC、si-LINC00472、微小RNA(miR)-NC、miR-496 mimics、si-LINC00472与anti-miR-NC(共转染)、si-LINC00472与anti-miR-496分别转染至HUVECs；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC00472和miR-496表达；检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量；流式细胞仪检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告实验检测LINC00472与miR-496的靶向关系；蛋白质印迹法检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(cleaved-Caspase-9)蛋白表达。两组间比较行 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:LPS组HUVECs中LINC00472的表达量高于Con组(2.77±0.25比0.93±0.02)，miR-496的表达低于Con组(0.35±0.03比0.91±0.03)，差异有统计学意义( t＝21.231、64.789， P<0.05)。LPS+si-LINC00472组LDH的活性和MDA表达低于LPS+si-NC组[LDH活性(212.58±17.33) U/L比(662.85±29.17) U/L、MDA(3.93±0.32) nmol/mg比(13.42±1.26) nmol/mg]，SOD活性高于LPS+si-NC组[(58.31±5.76) U/mg比(17.87±1.65) U/mg]，差异有统计学意义( t＝52.399、42.608， P<0.05)。LPS+si-LINC00472组细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9蛋白表达低于LPS+si-NC组[(9.86±0.85)%比(26.49±2.17)%、0.31±0.03比0.67±0.06、0.21±0.02比0.58±0.05]，差异有统计学意义( t＝41.245、35.291、19.738， P<0.05)。LPS+miR-496组细胞LDH活性、MDA水平、细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白表达低于LPS+miR-NC组[(254.91±21.97) U/L比(651.05±26.25) U/L、(5.64±0.47) nmol/mg比(14.17±1.05) nmol/mg、(12.92±1.13)%比(25.18±2.16)%、0.37±0.03比0.68±0.05、0.29±0.02比0.57±0.03]，SOD活性高于LPS+miR-NC组(49.01±4.12比18.02±1.53)，差异有统计学意义( t＝34.718、22.245、21.154、15.088、15.949、23.297， P<0.05)。LPS+si-LINC00472+anti-miR-496组细胞LDH活性、MDA水平、细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白表达高于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组[(594.06±27.59) U/L比(206.34±21.91) U/L、(9.48±0.77) nmol/mg比(3.88±0.25) nmol/mg、(19.64±1.18)%比(9.34±0.71)%、0.57±0.04比0.29±0.03、0.47±0.04比0.20±0.02]，SOD活性低于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组(27.52±2.53比56.58±5.44)，差异有统计学意义( t＝33.015、20.752、14.531、22.438、16.800、18.112， P<0.05)。 结论:LINC00472可通过促进miR-496表达来抑制氧化应激及细胞凋亡，并减轻LPS诱导的血管内皮细胞氧化损伤。

目的:研究敲除 Rab4A表达对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。 方法:采用Western blot方法检测4种人胃癌细胞系MGC-803、SGC-790、MKN45和AGS中的 Rab4A的表达。在表达水平最高的AGS细胞中敲除 Rab4A，以未转染的胃癌细胞为对照组。分别用CCK8和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭。利用Western blot分析调查 Rab4A敲除引起的表皮生长因子受体(EGFR)，下游通路蛋白AKT和β-catenin表达量的改变。通过双荧光素酶报告基因检测 Rab4A和miR-496之间的相互作用，qPCR和Western blot检测转染miR-496对 Rab4A表达的影响。使用GraphPad Prism 9软件进行数据分析，两组间比较采用 t检验，正态分布的计量资料均以均数±标准差( ± s)表示。 结果:Rab4A在AGS细胞中表达量最高，敲除 Rab4A可抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭( P<0.05)。在 Rab4A敲除的胃癌细胞中，表皮生长因子受体(EGFR)的表面表达明显下降，下游通路蛋白P-AKT和β-catenin的表达也受到抑制( P<0.05)。荧光素酶报告结果显示，miR-496可以结合 Rab4A的3'UTR。此外，miR-496下调了AGS细胞中 Rab4A的表达( P<0.05)。 结论:Rab4A的表达受miR-496的抑制，抑制 Rab4A表达后通过下调EGFR的表面表达来抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨环状RNA(circRNA)_BANP对前列腺癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测circ_BANP、miR-496的表达量；体外培养人前列腺癌细胞DU145，并敲低细胞中circ_BANP或miR-496的表达；双荧光素酶报告实验检测circ_BANP与miR-496的靶向关系；功能实验分析细胞表型变化；蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达量；计量资料以均数±标准差( ± s)表示，比较采用独立样本 t检验，以及单因素方差分析。 结果:circ_BANP和miR-496在癌旁组织中的表达量分别是0.96±0.19和1.02±0.17，在前列腺癌组织中的表达分别是3.10±0.39和0.50±0.13，且差异有统计学意义( t＝35.228、17.352， P<0.05)。Circ_BANP和miR-496在si-NC组中的表达分别是1.00±0.00以及1.00±0.00，在si-circ_BANP组中的表达分别是0.26±0.03和3.41±0.10，且差异有统计学意义( t＝74.000、72.300， P<0.05)。circ_BANP能够负向调控miR-496的表达。相对于si-NC组和miR-NC组，si-circ_BANP组和miR-496组中克隆形成数减少，细胞增殖抑制率升高；相对于si-circ_BANP+抗miR-NC组，si-circ_BANP+抗miR-496组中克隆形成数增加，细胞增殖抑制率降低；且差异有统计学意义( F＝268.325、1535.056， P<0.05)。当分别与si-NC组和miR-NC组比较时，si-circ_BANP组和miR-496组中细胞凋亡率和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)蛋白水平升高，B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白水平降低；与si-circ_BANP+抗miR-NC组比较，细胞凋亡率、bax和bcl-2表达在si-circ_BANP+抗miR-496组中有相反趋势；且差异有统计学意义( F＝420.149、397.476、255.709， P<0.05)。当分别与si-NC组和miR-NC组比较时，si-circ_BANP组和miR-496组中划痕愈合率降低，迁移细胞数减少；与si-circ_BANP+抗miR-NC组比较，划痕愈合率和迁移细胞数在si-circ_BANP+抗miR-496组中有相反趋势；且差异有统计学意义( F＝322.543、490.268， P<0.05)。 结论:沉默circ_BANP可通过靶向调控miR-496表达而减弱前列腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移能力及诱导细胞凋亡。

目的 探讨食管癌组织中微小核糖核酸-375(miR-375)、矮小同源盒基因2(SHOX2)的表达及临床意义.方法 选取食管癌患者90例,均接受根治术治疗.术中收集部分癌组织及对应癌旁组织,用实时荧光定量PCR法检测miR-375、SHOX2 mRNA,通过Targetscan网站、miRTargetLink网站、miRanda网站、PicTar网站预测miR-375与SHOX2结合位点,用Pearson相关分析法分析食管癌组织中miR-375、SHOX2 mRNA表达的相关性,分析二者表达与临床病理参数的关系.对患者进行随访,统计3年生存率,分析miR-375、SHOX2 mRNA表达与3年生存率的关系.用多因素Cox回归模型分析miR-375、SHOX2 mRNA表达对食管癌患者根治术后预后的影响.结果 食管癌组织miR-375表达低于癌旁组织,SHOX2 mRNA表达高于癌旁组织(P均<0.05).经在线网站预测,miR-375与SHOX2的3'非翻译端1 489～1 496处存在结合位点;Pearson相关分析显示,食管癌组织中miR-375、SHOX2 mRNA表达呈负相关(r=-0.825,P<0.05).不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移的食管癌组织中miR-375、SHOX2 mRNA比较差异有统计性意义(P均<0.05).随访3年,90例食管癌患者死亡29例,总生存率为67.78%(61/90).高miR-375表达者总生存率高于低miR-375表达者,高SHOX2 mRNA表达者总生存率低于低SHOX2 mRNA表达者(P均<0.05).多因素Cox回归模型分析结果显示,肿瘤低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、SHOX2 mRNA≥1.38为食管癌患者根治术后预后的独立危险因素(P均<0.05),miR-375≥0.66为独立保护因素(P<0.05).结论 食管癌组织中miR-375低表达、SHOX2 mRNA高表达,二者表达变化与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后有关.

目的 探究血清外泌体miR-496与口咽鳞状细胞癌(OPSCC)患者人乳头瘤病毒(HPV)状态及预后的相关性.方法 在这项前瞻性队列研究中,共纳入2012年1月至2021年12月期间≥60岁新诊断的原发性OPSCC患者119例,包括84例HPV阳性患者和35例HPV阴性患者.通过逆转录定量聚合酶链式反应检测血清外泌体miR-496表达.随访记录患者的总生存期(OS)及无进展生存期(PFS).另外招募60例健康个体作为对照.结果 HPV阳性患者血清外泌体miR-496表达水平低于健康受试者[0.58(0.31,0.81)vs.1.08(0.75,1.33),P＜0.05]和 HPV 阴性患者[0.58(0.31,0.81)vs.1.01(0.72,1.25),P＜0.05],但是 HPV阴性患者血清外泌体miR-496表达水平与健康受试者相比无统计学差异(P＞0.05).血清外泌体miR-496水平可以良好地区分HPV阳性OPSCC患者和健康受试者,特异性和敏感性分别为79.80％和95.0％.低miR-496 表达亚组 HPV 阳性 OPSCC 患者的中位无进展生存期(27.6个月vs.65.8 个月,2=11.448,P=0.001)、总生存期(29.5个月vs.69.2个月,2=6.948,P=0.008)均显著低于高miR-496表达亚组,且血清外泌体miR-496表达水平降低是HPV阳性OPSCC患者疾病进展、死亡的独立危险因素(P＜0.05).结论 血清外泌体miR-496 可作为≥60岁HPV阳性OPSCC患者诊断和预后的一个有前景的标志物.

目的 探究微小RNA-210(miR-210)在乳腺癌组织中的表达及临床意义,并探究其在体外对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及转移能力的影响.方法 收集湖南省肿瘤医院病理科2013年12月至2015年9月乳腺癌组织及相应癌旁组织标本各82例,荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测组织及细胞中miR-210的表达水平,分析miR-210与患者临床资料及预后的关系.三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231转染含miR-210全长的载体作为实验组,转染空白载体作为对照组,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移及侵袭能力.结果 qRT-PCR结果显示乳腺癌组织中miR-210的表达水平为0.198±0.014,显著高于癌旁组织的0.084±0.009,差异具有统计学意义(t=8.141,P<0.001);三阴性乳腺癌组织miR-210表达水平为0.254±0.026,显著高于非三阴性乳腺癌组织0.167±0.015,差异具有统计学意义(t=3.175,P=0.003).miR-210高表达、低表达两组患者TNM分期、分子分型差异有统计学意义(χ2=7.859,P=0.005;χ2=7.053,P=0.008);而miR-210高表达的患者4年生存率显著低于低表达患者(49.37％:76.80％),差异具有统计学意义(χ2=4.743,P=0.024).qRT-PCR结果显示,实验组细胞miR-210的表达水平为0.517±0.038,显著高于对照组细胞的0.284±0.022,差异具有统计学意义(t=9.280,P<0.001).CCK-8实验结果显示实验组细胞48、72及96 h时增殖能力显著高于对照组细胞(3.771±0.452:3.206±0.314;7.662±0.619:6.736±0.552;15.477±1.425:11.592±1.243),差异具有统计学意义(t=2.296,P=0.025;t=2.496,P=0.019;t=4.594,P=0.001).Transwell侵袭实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(107.8±13.0)个,显著高于对照组细胞的(74.4±10.9)个,差异具有统计学意义(t=3.732,P=0.001);迁移实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(136.5±18.5)个,显著高于对照组细胞的(87.4±15.7)个,差异具有统计学意义(t=4.256,P<0.001).结论 miR-210在乳腺癌组织中高表达,且与患者病情进展、肿瘤恶性程度及预后密切相关,体外miR-210可促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性行为,是潜在的分子标志物及靶向治疗位点.

目的 探讨胎盘组织miR-496表达水平与子痫前期相关性.方法 选取2015年5月-2017年7月间江苏省苏北人民医院和扬州大学临床医学院收治的120例孕产妇作为研究对象,分为正常孕产妇30例(A组),妊娠期高血压30例(B组),子痫前期轻度30例(C组),子痫前期重度30例(D组)4组;使用HE染色对各组胎盘组织进行检测,并采用RT-PCR检测胎盘组织中miR-496及GAPDH表达情况.结果 胎盘组织可见各级绒毛干不同程度动脉粥样硬化,并且多例合并合胞体结节增多;单例可见合胞体滋养层空泡变性;轻度子痫、重度子痫、妊娠高血压及正常妊娠孕产妇miR-496/GAPDH水平比较差异有统计学意义(P＜0.05),且重度子痫组显著高于轻度子痫组、妊娠高血压组及正常妊娠组(P＜0.05),轻度子痫组显著高于正常妊娠组(P＜0.05);胎盘组织中miR-496表达水平与子痫前期病情正性相关,等级相关系数r=0.738 (P＜0.05).结论 随着子痫前期患者病情加重其胎盘组织中miR-496表达水平也随之升高,可有效反应患者病情.

[目的]蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis(简称球囊菌)是一种特异性侵染蜜蜂幼虫肠道的致死性真菌病原.微小RNA(microRNA,miRNA)是一种在转录后水平对mRNA进行负调控的关键调控因子.本研究旨在对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称意蜂)幼虫肠道在球囊菌胁迫后期的差异表达miRNAs(DEmiRNAs)及其靶基因进行深入分析,为揭示DEmiRNAs在胁迫应答中的作用提供重要信息.[方法]利用small RNA-seq (sRNA-seq)技术对正常及球囊菌侵染的意蜂6日龄幼虫肠道(分别表示为AmCK和AmT)进行测序,通过相关生物信息学软件对DEmiRNAs进行预测和分析.利用TargetFinder软件预测DEmiRNAs的靶基因,然后利用Blast软件对靶基因进行GO和KEGG数据库的功能注释.通过Cytoscape软件构建DEmiRNAs与其靶mRNAs的调控网络.通过茎环实时荧光定量PCR(stem-loop RT-qPCR)验证测序数据的可靠性.[结果]AmCK和AmT的测序分别得到9 230 496和10 823 667条有效序列标签;AmCKvsAmT比较组中包含15个上调和6个下调miRNAs,分别结合3 503和3 252个靶基因,它们可分别注释到40和39个GO terms以及104和99条代谢通路;进一步分析发现调控网络中的17个DEmiRNAs靶向结合116个与丝氨酸蛋白酶相关的mRNAs,14个DEmiRNAs靶向结合54个与泛素介导的蛋白水解相关的mRNAs.Stemloop RT-qPCR验证结果显示随机选择的4个DEmiRNAs(miR-251-x,miR-9277-y,miR-1672-x和miR-4968-y)的表达量变化趋势与测序结果一致,表明测序数据真实可信.[结论]本研究率先对意蜂幼虫肠道在球囊菌胁迫后期的DEmiRNAs及其靶基因进行预测与分析,提供了miRNAs的表达谱和差异表达信息.ame-miR-927b,miR-429-y和miR-8440-y等DEmiRNAs可能参与对丝氨酸蛋白酶的调控和对泛素介导的蛋白水解的调控,DEmiRNAs与靶基因之间存在复杂的调控网络关系.DEmiRNAs可参与到意蜂幼虫肠道与球囊菌间的互作.