目的:探讨LINC00472对脂多糖(LPS)诱导的血管内皮细胞氧化损伤的影响及其机制。方法:LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)建立血管内皮细胞氧化损伤模型，将si-NC、si-LINC00472、微小RNA(miR)-NC、miR-496 mimics、si-LINC00472与anti-miR-NC(共转染)、si-LINC00472与anti-miR-496分别转染至HUVECs；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LINC00472和miR-496表达；检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量；流式细胞仪检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告实验检测LINC00472与miR-496的靶向关系；蛋白质印迹法检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(cleaved-Caspase-9)蛋白表达。两组间比较行 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:LPS组HUVECs中LINC00472的表达量高于Con组(2.77±0.25比0.93±0.02)，miR-496的表达低于Con组(0.35±0.03比0.91±0.03)，差异有统计学意义( t＝21.231、64.789， P<0.05)。LPS+si-LINC00472组LDH的活性和MDA表达低于LPS+si-NC组[LDH活性(212.58±17.33) U/L比(662.85±29.17) U/L、MDA(3.93±0.32) nmol/mg比(13.42±1.26) nmol/mg]，SOD活性高于LPS+si-NC组[(58.31±5.76) U/mg比(17.87±1.65) U/mg]，差异有统计学意义( t＝52.399、42.608， P<0.05)。LPS+si-LINC00472组细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9蛋白表达低于LPS+si-NC组[(9.86±0.85)%比(26.49±2.17)%、0.31±0.03比0.67±0.06、0.21±0.02比0.58±0.05]，差异有统计学意义( t＝41.245、35.291、19.738， P<0.05)。LPS+miR-496组细胞LDH活性、MDA水平、细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白表达低于LPS+miR-NC组[(254.91±21.97) U/L比(651.05±26.25) U/L、(5.64±0.47) nmol/mg比(14.17±1.05) nmol/mg、(12.92±1.13)%比(25.18±2.16)%、0.37±0.03比0.68±0.05、0.29±0.02比0.57±0.03]，SOD活性高于LPS+miR-NC组(49.01±4.12比18.02±1.53)，差异有统计学意义( t＝34.718、22.245、21.154、15.088、15.949、23.297， P<0.05)。LPS+si-LINC00472+anti-miR-496组细胞LDH活性、MDA水平、细胞凋亡率、cleaved-Caspase-3和cleaved-Caspase-9蛋白表达高于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组[(594.06±27.59) U/L比(206.34±21.91) U/L、(9.48±0.77) nmol/mg比(3.88±0.25) nmol/mg、(19.64±1.18)%比(9.34±0.71)%、0.57±0.04比0.29±0.03、0.47±0.04比0.20±0.02]，SOD活性低于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组(27.52±2.53比56.58±5.44)，差异有统计学意义( t＝33.015、20.752、14.531、22.438、16.800、18.112， P<0.05)。 结论:LINC00472可通过促进miR-496表达来抑制氧化应激及细胞凋亡，并减轻LPS诱导的血管内皮细胞氧化损伤。

目的:探讨环状RNA(circRNA)_BANP对前列腺癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测circ_BANP、miR-496的表达量；体外培养人前列腺癌细胞DU145，并敲低细胞中circ_BANP或miR-496的表达；双荧光素酶报告实验检测circ_BANP与miR-496的靶向关系；功能实验分析细胞表型变化；蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达量；计量资料以均数±标准差( ± s)表示，比较采用独立样本 t检验，以及单因素方差分析。 结果:circ_BANP和miR-496在癌旁组织中的表达量分别是0.96±0.19和1.02±0.17，在前列腺癌组织中的表达分别是3.10±0.39和0.50±0.13，且差异有统计学意义( t＝35.228、17.352， P<0.05)。Circ_BANP和miR-496在si-NC组中的表达分别是1.00±0.00以及1.00±0.00，在si-circ_BANP组中的表达分别是0.26±0.03和3.41±0.10，且差异有统计学意义( t＝74.000、72.300， P<0.05)。circ_BANP能够负向调控miR-496的表达。相对于si-NC组和miR-NC组，si-circ_BANP组和miR-496组中克隆形成数减少，细胞增殖抑制率升高；相对于si-circ_BANP+抗miR-NC组，si-circ_BANP+抗miR-496组中克隆形成数增加，细胞增殖抑制率降低；且差异有统计学意义( F＝268.325、1535.056， P<0.05)。当分别与si-NC组和miR-NC组比较时，si-circ_BANP组和miR-496组中细胞凋亡率和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)蛋白水平升高，B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白水平降低；与si-circ_BANP+抗miR-NC组比较，细胞凋亡率、bax和bcl-2表达在si-circ_BANP+抗miR-496组中有相反趋势；且差异有统计学意义( F＝420.149、397.476、255.709， P<0.05)。当分别与si-NC组和miR-NC组比较时，si-circ_BANP组和miR-496组中划痕愈合率降低，迁移细胞数减少；与si-circ_BANP+抗miR-NC组比较，划痕愈合率和迁移细胞数在si-circ_BANP+抗miR-496组中有相反趋势；且差异有统计学意义( F＝322.543、490.268， P<0.05)。 结论:沉默circ_BANP可通过靶向调控miR-496表达而减弱前列腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移能力及诱导细胞凋亡。

目的 探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清脂肪细胞因子前神经降压素(Pro-NT)和微小RNA-122(miRNA-122)水平变化及其诊断非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的潜在价值.方法 2017 年1 月～2022 年6 月我院诊治的NAFLD患者159 例和同期入院体检的健康人90 例,行腹部超声检查,采用ELISA法检测血清Pro-NT水平,采用RT-PCR法检测血清miRNA-122.对NAFLD患者行肝活检检查,确定NASH诊断.应用受试者工作特征曲线(ROC)并计算曲线下面积(AUC)评估指标诊断的敏感度和特异度.结果 在 159 例NAFLD患者中,经肝活检检查诊断NASH患者49 例和单纯性脂肪肝110 例;NASH患者BMI为(28.4±1.2)kg/m2,显著大于NAFLD患者[(27.3±1.4)kg/m2,P＜0.05];NASH患者血清ALT、AST、空腹血糖(FBG)、胰岛素、HOMA-IR和尿酸水平分别为62(48,96)U/L、56(47,85)U/L、(5.9±0.6)mmol/L、10.2(8.8,13.4)μU/mL、2.6(1.8,3.4)和496(392,515)μmol/L,均显著高于NAFLD患者38(25,53)U/L、32(21,49)U/L、(5.3±0.6)mmol/L、9.0(7.2,12.6)μU/mL、2.2(1.3,2.7)和 446(351,495)μmol/L,P＜0.05];血清Pro-NT和miRNA-122 分别为167(148.4,186.9)pmol/L和 8.2(2.0,29.3),显著高于 NAFLD患者[分别为 82(53.0,100.4)pmol/L和2.2(1.4,10.6),P＜0.05];NAFLD患者上述指标又显著高于健康人(P＜0.05);分别以血清Pro-NT≥112 pmol/L和miRNA-122≥7.08 为截断点,结果 Pro-NT诊断NASH的AUC为0.824,灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为80.0%、80.0%、84.9%和 82.3%,经 Delong 法检验,显著优于 miRNA-122 诊断(分别为 0.637、56.0%、70.0%、76.5%和56.8%,P＜0.05).结论 应用血清Pro-NT水平在NAFLD患者中初筛NASH可能有一定的临床价值,值得进一步研究.

目的 探究微小RNA-210(miR-210)在乳腺癌组织中的表达及临床意义,并探究其在体外对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及转移能力的影响.方法 收集湖南省肿瘤医院病理科2013年12月至2015年9月乳腺癌组织及相应癌旁组织标本各82例,荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测组织及细胞中miR-210的表达水平,分析miR-210与患者临床资料及预后的关系.三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231转染含miR-210全长的载体作为实验组,转染空白载体作为对照组,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移及侵袭能力.结果 qRT-PCR结果显示乳腺癌组织中miR-210的表达水平为0.198±0.014,显著高于癌旁组织的0.084±0.009,差异具有统计学意义(t=8.141,P<0.001);三阴性乳腺癌组织miR-210表达水平为0.254±0.026,显著高于非三阴性乳腺癌组织0.167±0.015,差异具有统计学意义(t=3.175,P=0.003).miR-210高表达、低表达两组患者TNM分期、分子分型差异有统计学意义(χ2=7.859,P=0.005;χ2=7.053,P=0.008);而miR-210高表达的患者4年生存率显著低于低表达患者(49.37％:76.80％),差异具有统计学意义(χ2=4.743,P=0.024).qRT-PCR结果显示,实验组细胞miR-210的表达水平为0.517±0.038,显著高于对照组细胞的0.284±0.022,差异具有统计学意义(t=9.280,P<0.001).CCK-8实验结果显示实验组细胞48、72及96 h时增殖能力显著高于对照组细胞(3.771±0.452:3.206±0.314;7.662±0.619:6.736±0.552;15.477±1.425:11.592±1.243),差异具有统计学意义(t=2.296,P=0.025;t=2.496,P=0.019;t=4.594,P=0.001).Transwell侵袭实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(107.8±13.0)个,显著高于对照组细胞的(74.4±10.9)个,差异具有统计学意义(t=3.732,P=0.001);迁移实验结果显示实验组细胞下室面细胞数为(136.5±18.5)个,显著高于对照组细胞的(87.4±15.7)个,差异具有统计学意义(t=4.256,P<0.001).结论 miR-210在乳腺癌组织中高表达,且与患者病情进展、肿瘤恶性程度及预后密切相关,体外miR-210可促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性行为,是潜在的分子标志物及靶向治疗位点.

[目的]蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis(简称球囊菌)是一种特异性侵染蜜蜂幼虫肠道的致死性真菌病原.微小RNA(microRNA,miRNA)是一种在转录后水平对mRNA进行负调控的关键调控因子.本研究旨在对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称意蜂)幼虫肠道在球囊菌胁迫后期的差异表达miRNAs(DEmiRNAs)及其靶基因进行深入分析,为揭示DEmiRNAs在胁迫应答中的作用提供重要信息.[方法]利用small RNA-seq (sRNA-seq)技术对正常及球囊菌侵染的意蜂6日龄幼虫肠道(分别表示为AmCK和AmT)进行测序,通过相关生物信息学软件对DEmiRNAs进行预测和分析.利用TargetFinder软件预测DEmiRNAs的靶基因,然后利用Blast软件对靶基因进行GO和KEGG数据库的功能注释.通过Cytoscape软件构建DEmiRNAs与其靶mRNAs的调控网络.通过茎环实时荧光定量PCR(stem-loop RT-qPCR)验证测序数据的可靠性.[结果]AmCK和AmT的测序分别得到9 230 496和10 823 667条有效序列标签;AmCKvsAmT比较组中包含15个上调和6个下调miRNAs,分别结合3 503和3 252个靶基因,它们可分别注释到40和39个GO terms以及104和99条代谢通路;进一步分析发现调控网络中的17个DEmiRNAs靶向结合116个与丝氨酸蛋白酶相关的mRNAs,14个DEmiRNAs靶向结合54个与泛素介导的蛋白水解相关的mRNAs.Stemloop RT-qPCR验证结果显示随机选择的4个DEmiRNAs(miR-251-x,miR-9277-y,miR-1672-x和miR-4968-y)的表达量变化趋势与测序结果一致,表明测序数据真实可信.[结论]本研究率先对意蜂幼虫肠道在球囊菌胁迫后期的DEmiRNAs及其靶基因进行预测与分析,提供了miRNAs的表达谱和差异表达信息.ame-miR-927b,miR-429-y和miR-8440-y等DEmiRNAs可能参与对丝氨酸蛋白酶的调控和对泛素介导的蛋白水解的调控,DEmiRNAs与靶基因之间存在复杂的调控网络关系.DEmiRNAs可参与到意蜂幼虫肠道与球囊菌间的互作.

目的 探讨白藜芦醇对人恶性脑胶质瘤模型裸鼠体内肿瘤生长的影响及其机制.方法 选取4周龄BALB/c雌性裸鼠10只,按随机数字表法分为白藜芦醇组和对照组,每组5只.两组均采用皮下移植成瘤法在裸鼠右前肢前臂皮下接种人恶性脑胶质瘤U251细胞悬液,建立裸鼠恶性脑胶质瘤模型.肿瘤种植后第10天,裸鼠右前肢皮下明显触及肿块,提示造模成功;白藜芦醇组裸鼠用浓度为50 mmol/L白藜芦醇溶液200 μL灌胃,对照组裸鼠以等量等浓度二甲基亚砜生理盐水灌胃,每3日给药1次,共用药7次.第1次用药前记录肿瘤的最长径、最短径,计算肿瘤体积.每次给药后第3天测量肿瘤大小.完成最后一次测量后处死动物,完整取出瘤块.采用Western blot法检测白藜芦醇组和对照组肿瘤组织标本中FOXP2蛋白的表达,实时荧光定量PCR( qPCR)测定miR-9的表达.结果 白藜芦醇组和对照组均成功建立恶性脑胶质瘤移植瘤动物模型.皮下接种肿瘤细胞第10天白藜芦醇组肿瘤体积(12. 94 ± 10. 17)mm3 ,对照组肿瘤体积(6. 46 ± 2. 67) mm3 .第1、2、3、4次给药后,白藜芦醇组肿瘤体积分别为( 25. 58 ± 16. 41 ) mm3 、 ( 32. 33 ± 17. 62 ) mm3 、 ( 58. 81 ± 7. 66)mm3 、(97. 67 ± 20. 76)mm3 ,对照组肿瘤体积分别为(12. 02 ± 8. 71) mm3、(30. 73 ± 15. 74) mm3 、(52. 88 ± 20. 03)mm3 、(88. 50 ± 37. 01)mm3,白藜芦醇组肿瘤体积均大于对照组,但差异均无统计学意义(P 值均 >0. 05);第5、6、7 次给药后,白藜芦醇组肿瘤体积分别为(114. 94 ± 29. 35) mm3 、(237. 42 ± 23. 3)mm3 和(231. 27 ± 12. 6) mm3,均小于对照组的(191. 71 ± 53. 79) mm3 、(314. 67 ± 24. 4)mm3和(374. 03 ± 21. 6)mm3,两组比较差异均有统计学意义( t= -2. 802、-5. 114、-6. 320, P值均<0. 01).白藜芦醇组FOXP2蛋白相对表达量为100. 60 ± 41. 75,低于对照组的165. 51 ± 16. 31, miR-9相对表达量为0. 971 ± 0. 369,高于对照组的0. 496 ± 0. 008,差异均有统计学意义( t=3. 238、2. 878, P值均<0. 05).结论 白藜芦醇能抑制恶性脑胶质瘤模型裸鼠体内肿瘤的生长,其机制可能是通过调节miR-9和FOXP2的表达实现.

目的:检测卵巢浆液性癌中微小RNA-496(microRNA-496,miR-496)的表达,关注其表达意义及与同源异型蛋白SIX1(homologous heteroprotein SIX1,SIX1)的靶向关系.方法:选择75例卵巢浆液性癌作为观察组,选择75例卵巢浆液性囊腺瘤作为对照组,应用实时荧光定量PCR法检测2组中miR-496的表达,应用免疫组化法检测观察组中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和B 细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)的表达,应用Western blot检测观察组中SIX1的表达.选择人卵巢浆液性癌细胞系SKOV-3,设置空白对照组、miR-496转染组、miR-496和SIX1共转染组,采用双荧光素酶基因实验验证miR-496与靶基因SIX1的关系.结果:miR-496在观察组的表达量明显低于对照组(1.52± 0.36 vs.2.03± 0.25,t=7.56,P=0.001),miR-496的表达在不同肿瘤最大径(1.65±0.36 vs.1.42± 0.33,t=5.32,P=0.012)、病理分级(1.64±0.35 vs.1.43±0.40,t=5.11,P=0.010)、有无脉管累犯(1.60±0.44 vs.1.35±0.43,t=5.11,P=0.011)、是否双侧发生(1.61 ±0.36 vs.1.40±0.32,t=5.11,P=0.010)、有无淋巴结转移(1.62±0.42vs.1.35 ±0.41,t=5.66,P=0.008)和不同TNM 分期(1.70±0.37 vs.1.42±0.39,t=5.65,P=0.009)的分组中有统计学差异.miR-496与生存时间有关(x2=4.13,P=0.010),miR-496与PCNA(r=-0.54,P=0.0186)、miR-496与SIX1(r=-0.58,P=0.0130)均具有负相关性,miR-496与BAX(r=0.52,P=0.0110)具有正相关性.双荧光素酶基因实验显示,miR-496能引起转染pGL3-SIX1-WT的细胞系中荧光素酶活性明显降低.结论:卵巢浆液性癌中miR-496的表达下降,是促进肿瘤形成和进展的重要分子因素,检测miR-496对判断预后可能有一定价值.miR-496可能通过负向调节靶基因SIX1调控肿瘤细胞的增殖和凋亡.

目的 探讨长链非编码RNA NNT-AS1(LncRNA NNT-AS1)靶向微小核糖核酸(miR)-496抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA NNT-AS1与miR-496在卵巢癌细胞及正常卵巢上皮细胞中的表达;双荧光素酶报告基因检测LncRNA NNT-AS1与miR-496之间的相互作用.MTT实验检测抑制LncRNA NNT-AS1及miR-496过表达后卵巢癌细胞增殖能力;Transwell迁移及侵袭实验检测抑制LncRNA NNT-AS1及miR-496过表达后卵巢癌细胞迁移及侵袭能力变化情况.qRT-PCR检测LncRNA NNT-AS1与miR-496之间的调控关系.结果 与正常卵巢上皮细胞相比,LncRNA NNT-AS1在卵巢癌细胞中表达显著上调,miR-496表达水平显著下调;双荧光素酶实验证实LncRNA NNT-AS1可miR-496特异性结合并可调控miR-496表达;抑制LncRNA NNT-AS1表达与miR-496过表达后均可抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭;抑制miR-496表达可逆转抑制NNT-AS1表达对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭的作用.结论 LncRNA NNT-AS1可通过靶向调控miR-496表达进而促进卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭.

背景与目的:微小RNA(microRNA,miRNA)已被证实与子宫颈癌的发病相关.分析miR-496与SFMBT1的相互关系,阐明miR-496在子宫颈癌中的作用及其机制.方法:预测并验证miR-496的靶基因.实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-496 mimics对SFMBT1表达的影响.使用免疫荧光和Western blot分析SFMBT1在子宫颈癌组织中的表达变化.细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法和transwell实验分别检测miR-496和SFMBT1对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响.观察miR-496在BALB/c裸小鼠移植瘤模型中对肿瘤生长的影响.结果:相比癌旁正常组织,SFMBT1在子宫颈癌组织中的mRNA(1.69±0.23 vs 1.00±0.12)以及蛋白(1.73±0.28 vs 1.00±0.15)均呈高表达,miR-496能通过特异性结合SFMBT1的3'-UTR抑制SFMBT1的mRNA(0.81±0.07 vs 1.00±0.15)以及蛋白表达(0.26±0.02 vs 1.00±0.14);细胞实验中相比对照组,miR-496 mimics处理组能抑制HeLa细胞增殖(1.39±0.10 vs 2.01±0.09)、迁移(40.50±3.17 vs 28.42±1.21)和侵袭能力(15.03±1.67 vs 25.71±2.56),但相比miR-496 mimics处理组,miR-496+SFMBT1处理组迁移(33.21±2.66 vs 19.28±1.50)和侵袭能力增强(30.11±2.73 vs 15.03±1.67).子宫颈癌裸小鼠移植瘤模型发现,相比对照组miR-496组裸小鼠中移植瘤体积、重量均明显降低.miR-496组裸小鼠中病变程度、SFMBT1表达和Ki-67增殖指数均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论:miR-496通过靶向调控SFMBT1抑制子宫颈癌细胞的生物学行为和裸小鼠移植瘤的生长.