目的:探讨miR-615-3p及其靶基因纤维蛋白 1(FBLN1)在脂肪干细胞(ADSCs)成骨分化中的作用及其相互调控机制.方法:利用慢病毒转染ADSCs分别敲低miR-615-3p及过表达FBLN1,Western blot和实时荧光定量PCR检测miR-615-3p敲低效率和FBLN1 过表达效率以及敲低miR-615-3p后FBLN1 的表达,通过碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色检测敲低miR-615-3p和过表达FBLN1 对ADSCs的成骨分化能力的影响,通过实时荧光定量PCR检测敲低miR-615-3p和过表达FBLN1 ADSCs成骨细胞特异性转录因子 Osterix(OSX)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白-1(DMP1)的基因表达,通过Western blot检测敲低miR-615-3p和过表达FBLN1 后ADSCs DMP1 和DSPP蛋白表达.结果:敲低ADSCs中miR-615-3p后,miR-615-3p基因表达降低,ALP活性升高(P＜0.05),矿化结节增多,OSX、DMP1、DSPP 基因表达水平上升(P＜0.05),DMP1、DSPP蛋白表达升高.低表达miR-615-3p的ADSCs中FBLN1 表达升高.过表达FBLN1 后,ADSCs中FBLN1 蛋白和基因表达升高,ALP活性升高(P＜0.05),矿化结节增多,OSX、DMP1、DSPP基因表达水平上升(P＜0.05),DMP1、DSPP 蛋白表达升高.结论:miR-615-3p通过下调FBLN1 抑制ADSCs的成骨分化.

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员4A1反义RNA1(SLCO4A1-AS1)靶向微小RNA-615-5p(miR-615-5p)对食管癌细胞增殖、凋亡和炎症因子表达的影响.方法 运用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)分析 LncRNA SLCO4A1-AS1 和 miR-615-5p 在食管癌组织、细胞系中表达情况.将 si-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1、miR-NC、miR-615-5p 模拟物、pcDNA、pcDNA-LncRNA SLCO4A1-AS1、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC、si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p分别转染Eca109细胞.CCK-8和流式细胞术用于检测细胞活力和凋亡率;平板克隆实验用于检测细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测培养液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.采用双荧光素酶报告基因法确定LncRNA SLCO4A1-AS1与miR-615-5p的关系.结果 食管癌组织、细胞系中 LncRNA SLCO4A1-AS1表达上调,miR-615-5p表达下调.抑制LncRNA SLCO4A1-AS1表达后,细胞活力、细胞克隆形成数量以及培养液中IL-6和TNF-α水平降低,miR-615-5p表达量、细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与miR-NC组比较,miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率升高,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中IL-6和TNF-α水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与 si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-NC 比较,si-LncRNA SLCO4A1-AS1+anti-miR-615-5p组Eca109细胞中miR-615-5p表达量、Cleaved-caspase-3蛋白水平、凋亡率降低,细胞活力、细胞克隆形成数量、培养液中 IL-6和TNF-α水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LncRNA SLCO4A1-AS1能够促进食管癌的发生和发展.抑制LncRNA SLCO4A1-AS1能够减少食管癌细胞的增殖,降低炎症因子的表达,诱导癌细胞凋亡.

目的 探讨miRNAs在甘草酸治疗大鼠酒精性肝损伤过程中的作用及其机制.方法 将45只雄性SD大鼠随机分成甘草酸组(灌胃56％白酒和甘草酸)、模型组(灌胃56％白酒)和对照组(灌胃蒸馏水),给药8周后采集血液和肝组织.检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;提取肝组织RNA,大鼠miRNA芯片检测,对miRNA表达量进行分析,对差异miRNA进行靶基因预测,并采用Gene Ontology(GO)和KEGG Pathway富集分析了解差异miRNA的功能,使用Cytoscape构建差异miRNA-mRNA-Pathway调控网络进一步筛选调控关键miRNA与通路,qRT-PCR对挑选的miRNA进行表达量验证分析.结果 与模型组相比,甘草酸组能改善肝组织病变,降低肝血清AST和ALT水平(P<0.05).通过比较分析甘草酸组和模型组芯片数据,共筛选出差异表达miRNA 13个(P<0.05,fold change≥1.5),其中上调10个,下调3个.差异miRNA靶基因GO分类注释显示,差异miRNA主要与细胞黏附、抗氧化活性、代谢过程、生物过程调控、细胞杀伤、免疫系统等功能相关.差异miRNA靶基因KEGG Pathway通路分析显示,MAPK信号通路、mTOR信号通路、Ras信号通路、Hippo信号通路、PI3K-Akt信号通路、wnt信号通路、细胞凋亡等信号通路可能在甘草酸改善酒精性肝损伤病变过程中发挥着重要的调控作用.结论 该研究建立了甘草酸治疗大鼠酒精性肝损伤的miRNA表达谱,提示miR-615、miR-107-3p和miR-292-5p可能在甘草酸治疗酒精性肝损伤过程中起着重要的作用.

目的 探索与慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)显著相关的微RNA (miR).方法 通过整合Affymetrix miR芯片数据以及从高通量基因表达数据库(GEO)公共数据库上下载的GSE56914数据.两套芯片数据均来自于CTEPH患者和匹配的健康受试者的外周血标本.筛选两套数据中的差异表达miR,搜索这些miR的靶基因.并对这些miR进行功能富集分析.最后构建了包括miR、靶基因和通路的疾病关联网络.结果 筛选出hsa-miR-885-5p、hsa-miR-501-5p、hsa-miR-615-3p、hsa-miR-610和hsa-miR-346等5个对该疾病起重要作用的miR,而且这5个miR在两个数据集中均为显著下调.hsa-miR-885-5p和hsa-miR-501-5p显著参与细胞周期通路,hsa-miR-615-3p显著参与细胞因子-细胞因子受体相互作用,轴突导向,黏着斑和细胞周期通路,hsa-miR-610显著参与黏着斑通路,hsa-miR-346显著参与细胞因子-细胞因子受体相互作用,轴突导向和黏着斑通路.结论 hsa-miR-885-5p、hsa-miR-501-5p、hsa-miR-615-3p、hsa-miR-610和hsa-miR-346是与CTEPH显著相关的miR.

miR-615-3p是miRNA家族的一员.为了探讨miR-615-3p在胃癌诊断和预后中的作用,我们应用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测了35例胃癌组织(13例低分化,22例中高分化)及良性胃病组织,以及此35例患者的治疗前血清及35例健康体检者血清中miR-615-3p的相对表达情况,分析了其和胃癌的临床病理因素之间的关系,计算其用于区分胃癌和健康人群的灵敏度、特异度.检测数据显示,低分化胃癌组中miR-615-3p的水平显著高于良性病变组及中高分化胃癌组(p＜0.01),而在中高分化胃癌组的表达水平与良性病变组比较差异无统计学意义(p＞0.05).低分化和中高分化胃癌患者血清中miR-615-3p的水平均显著高于健康组(p＜0.01),低分化胃癌患者血清中miR-615-3p的水平显著高于中高分化胃癌血清组(p＜0.01).miR-615-3p的表达水平与胃癌患者的性别、年龄无关(p＞0.05),与病理类型、TNM分期相关(p＜0.05).miR-615-3p受试者的工作特征曲线下面积为0.803 (95％ CI (0.707,0.906)),与A=0.5比较,差异有统计学意义.以上结论表明,miR-615-3p的表达水平与胃癌组织的分化和分期呈正相关,检测组织和血清中miR-615-3p的水平对胃癌有较高的诊断价值.miR-615-3p可作为胃癌诊断、预后的潜在标志物.

目的 研究miR-615-3p对胃癌细胞HGC-27增殖与凋亡的影响.方法 脂质体转染miR-615-3p抑制剂(miR-615-3p inhibitor)和inhibitor阴性对照进入胃癌细胞HGC-27中,MTT法检测miR-615-3pinhibitor对胃癌细胞HGC-27增殖情况的影响,Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测转染后胃癌细胞HGC-27凋亡的变化.结果 MTT结果显示:转染miR-615-3p inhibitor 48 h、72 h时,A490分别为0.527±0.011、0.787±0.020,inhibitor阴性对照A490分别为0.583±0.022、0.906±0.038,与inhibitor阴性对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05),胃癌细胞HGC-27的增殖变慢;转染96 h时,A490值为0.857±0.017,inhibitor阴性对照A490为0.951±0.016,与inhibitor阴性对照对比,细胞活性抑制得更明显(P＜0.01).流式细胞术结果显示:miR-615-3p inhibitor在转染48 h、72 h后,细胞凋亡率达(15.403±0.209)％、(20.130±0.239)％,inhibitor阴性对照为(12.655±0.112)％、(14.810±0.643)％,与inhibitor阴性对照比较,胃癌细胞HGC-27的凋亡率显著增高,凋亡数目明显高于inhibitor阴性对照(P＜0.01).结论 降低miR-615-3p在HGC-27细胞的表达水平,能有效抑制HGC-27细胞的增殖能力并促进其凋亡.

目的 探讨重组人脑利钠肽对老年ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后心功能的影响.方法 选取2012年3月至2016年3月在西安市第一医院接受急诊PCI治疗的老年STEMI患者83例,按照随机数字表法分为2组.2组患者PCI术后均接受常规治疗,观察组(41例)在常规治疗基础上给予重组人脑利钠肽治疗,对照组(42例)则给予等量0.9％氯化钠溶液.比较2组患者PCI术后临床症状及体征,监测患者入院3d内心肌坏死标志物血清肌酸激酶同工酶和肌钙蛋白I,采用Image J软件计算曲线下面积;比较2组患者PCI术后1周和术后6个月超声心动图指标,比较2组患者入院时、术后24h和术后1周血清结缔组织生长因子(CTGF)、微小RNA-92a(miR-92a)的表达.结果 PCI术后观察组患者呼吸频率、心率、胸腔积液和急性左心衰竭比例以及术后1、2、3d中心静脉压水平均明显低于对照组,血氧饱和度明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).观察组患者PCI术后3d内肌酸激酶同工酶和肌钙蛋白I曲线下面积均小于对照组[(3 251±1 004) U/L比(4 481±1 615)U/L,(3 668±939) μg/L比(4 539±1 096) μg/L],差异均有统计学意义(均P＜0.001).术后1周,2组患者左心室舒张末期容积、左心室收缩末期容积、左心室射血分数以及二尖瓣口舒张早期血流速度/二尖瓣口舒张晚期血流速度比值比较差异均无统计学意义(均P ＞0.05),观察组二尖瓣口舒张早期血流速度/二尖瓣环舒张早期运动速度比值、室壁运动积分均低于对照组[(12±3)比(15±4),(1.73±0.18)分比(2.43±0.54)分],差异均有统计学意义(均P ＜0.001).术后6个月,2组患者左心室舒张末期容积比较差异无统计学意义(P＞0.05);但观察组左心室射血分数高于对照组[(52±12)％比(47±9)％],室壁运动积分低于对照组[(1.68±0.36)分比(1.93±0.48)分],差异均有统计学意义(均P＜0.05).入院时,2组患者血清CTGF和miR-92a水平比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);术后24 h和术后1周,2组患者血清CTGF和miR-92a水平均明显低于本组入院时,且观察组低于对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 老年STEMI患者PC1术后给予重组人脑利钠肽治疗,可明显缓解患者临床症状,抑制心脏重塑,并有效阻抑患者早期和远期心室重构,维护左心室功能,疗效显著.

目的 探讨抑制miR-218的表达对人去势抵抗型前列腺癌C4-2细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制.方法 培养人去势抵抗型前列腺癌C4-2细胞,分为空白组、阴性对照组( NC组)、miR-218组;空白组未予以任何处理,NC组转染阴性对照序列,miR-218组转染miR-218抑制剂.各组细胞处理后继续培养5 d,然后收集细胞,采用实时荧光定量 PCR(qPCR)检测转染后各组细胞miR-218的表达情况,采用WST-1细胞增殖实验和细胞平板克隆形成实验检测转染后各组C4-2细胞增殖、活性情况,采用划痕实验检测各组C4-2细胞迁移距离,采用Transwell小室检测细胞侵袭数量和迁移数量,采用半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测TOB1基因mRNA表达情况,采用Western blot检测TOB1基因蛋白表达情况.结果 qPCR结果显示:转染后NC组、miR-218组人去势抵抗型前列腺癌C4-2细胞miR-218的相对表达量分别为1.02 ± 0.06、0.38 ± 0.04,miR-218组中miR-218的表达明显低于NC组,差异有统计学意义(t=15.372, P<0.05). WST-1细胞增殖实验结果显示:(1)转染后空白组、NC组随着时间的延长,光密度(OD)值呈上升趋势,而miR-218组OD值在24、48 h时呈上升趋势,72 h时OD值开始明显下降;(2)空白组、NC组、miR-218组组间比较,OD值在0、24 h时3组间差异均无统计学意义(P值均>0.05),48、72 h时miR-218组OD 值均小于空白组、NC组,差异均有统计学意义(F=12.615、24.523,P值均<0.05).细胞平板克隆形成实验结果显示:转染后空白组、NC组和miR-218组克隆形成数分别为(42.2 ± 1.2)个、(41.3 ± 2.4)个、(20.6 ± 1.2)个,miR-218组明显少于空白组、NC组,差异均有统计学意义(F=155.530,P<0.05).划痕实验和Transwell小室细胞侵袭、迁移实验结果显示:转染后,miR-218组细胞迁移距离、侵袭细胞数和迁移细胞数均低于空白组和NC组,差异均有统计学意义(F=17.625、48.625、38.352,P值均<0.05);而空白组和NC组间细胞迁移距离、侵袭细胞数和迁移细胞数比较,差异均无明显统计学意义(P 值均 >0.05).RT-PCR和Western blot检测结果显示:转染后空白组、NC组、miR-218组TOB1基因mRNA的相对表达量分别为0.20 ± 0.02、0.19 ± 0.03、0.35 ± 0.02,TOB1基因蛋白的相对表达量分别为0.22 ± 0.01、0.23 ± 0.02、0.68 ± 0.02,miR-218组细胞中TOB1 mRNA和蛋白水平均明显高于空白组和NC组,差异均有统计学意义( F=18.615、22.523,P值<0.05);而空白组细胞中TOB1 mRNA和蛋白水平与NC组比较,差异均无统计学意义( P 值 >0.05).结论 抑制人去势抵抗型前列腺癌 C4-2 细胞miR-218的表达,可抑制该细胞的增殖和活性,并抑制其侵袭和迁移能力,其机制可能与上调TOB1基因mRNA和蛋白表达有关.

目的 探讨肺腺癌病人血液中miR-1293、miR-5571和miR-615的表达水平及其与预后的相关性.方法 收集100例经术后病理诊断为肺腺癌病人的新鲜血液标本(肺腺癌组),抽提血液中的总RNA,应用实时荧光定量PCR方法检测其miR-1293、miR-5571和miR-615的表达水平,并分析其与预后的相关性.以100例健康体检者血液标本作为对照组.结果 与对照组比较,肺腺癌组miR-1293和miR-615表达显著增高,miR-5571表达降低,差异有统计学意义(t=23.106～27.375,P<0.05).Log-rank分析显示,3种miRNA的表达均与肺腺癌病人的总生存率和无病生存率相关(χ2=18.357～19.620,P<0.05),其中miR-1293和miR-615表达水平越高,病人总生存率和无病生存率越低;miR-5571表达水平越高,病人总生存率和无病生存率越高.结论 miR-1293、miR-5571和miR-615在外周血中的表达水平可能成为肺腺癌病人预后判断的标志物.

目的 研究微小RNA-615-3p(miR-615-3p)通过调控色素框同源蛋白6(CBX6)对肺癌细胞吉西他滨敏感性的影响及其机制.方法 将肺癌吉西他滨化疗抵抗细胞株A549/GEM分为4组:空白组、吉西他滨(GEM)组、GEM转染-1组和GEM转染-2组.分别在A549/GEM中转染anti-miR-615-3p和Si-CBX6后,用GEM处理48 h.用噻唑蓝检测A549/GEM细胞增殖活力(OD值);流式细胞术检测A549/GEM细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测CBX6蛋白表达水平.结果 空白组、GEM组、GEM转染-1组在2 d时的增殖活力分别为1.43±0.10,1.02±0.09和0.63±0.06,GEM组与空白组比较,或GEM转染-1组与GEM组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).GEM组、GEM转染-1组和GEM转染-2组的CBX6蛋白相对表达分别为1.02±0.09,1.66±0.09和1.21±0.11;这3组的胞凋亡率分别为(12.18±1.08)％,(19.28±1.65)％和(13.81±1.21)％;这3组的在2 d时的增殖活力分别为0.91±0.07,0.64±0.05和0.88±0.11.GEM转染-1组与GEM组比较,或GEM转染-2与GEM转染-1组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 敲降miR-615-3p通过上调CBX6表达,促进肺癌细胞对GEM的敏感性.