目的:筛选AS患者PBMCs中差异表达的环状RNA（circRNA），分析其表达谱以探讨circRNAs在AS发病中的作用。方法:采用circRNA微阵列芯片技术检测3例AS活动期（ASA）患者，3例AS稳定期（ASS）患者和3名健康对照者（HC）PBMCs中circRNAs的表达并通过倍数变化（FC）和 P值进行筛选，找到差异表达的circRNAs；从差异表达靠前的circRNAs中随机选择4个circRNAs，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证芯片结果；对差异表达的circRNAs进行基因本体论（GO）分析，京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析，并通过微RNA（miRNA）靶标预测软件对circRNA/miRNA相互作用关系进行预测。采用 t检验和Mann-Whitney U检验等方法对数据进行统计分析。 结果:芯片结果显示，ASA组较HC组共有800个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中466种上调，334种下调；ASS组较HC组共有1 149个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中589种上调，560种下调；ASA组较ASS组间共有233个显著差异表达的circRNAs（FC>1.5， P<0.05），其中145种上调，88种下调。RT-qPCR验证结果提示，4个差异表达的circRNAs表达趋势与芯片结果一致。GO分析结果提示，这些差异表达的circRNAs主要参与无义介导的mRNA衰变、Rho GTPase酶结合等过程；KEGG分析结果在辅助性T细胞（Th）17细胞分化、趋化因子信号通路等处得到富集；miRNA靶标预测软件结果提示差异表达的circRNAs可能靶向结合miR-650、let-7b-5p等miRNAs发挥作用。 结论:和HC组相比AS患者PBMCs中存在差异表达的circRNAs，推测这些circRNAs可能参与AS的发病。

目的:利用生物信息学管理对乳腺癌和癌旁组织进行长链非编码RNA-生长停滞特异基因5（lncRNA GAS5）差异表达分析，以探讨GAS5对三阴性乳腺癌发生发展的影响。方法:用基因图谱计划（The Cancer Genome Atlas，TCGA）的乳腺癌数据分析各个乳腺癌亚型及病理分期中GAS5的表达情况。利用基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus，GEO）中三阴性乳腺癌数据GSE76124和GSE83937对GAS5进行相关性分析，选取相关性基因并取交集。利用所得到的正相关基因做GO功能和KEGG通路富集分析。用TCGA数据库和GEO76124数据进行GAS5的GSEA分析。选取GEO数据集GSE40525和GSE76250进行三阴性乳腺癌的差异miRNA和mRNA的筛选，通过预测，构建GAS5-miRNA-mRNA的ceRNA网络。结果:GAS5在乳腺癌各亚型组织中表达均较癌旁组织低。GAS5主要参与多种代谢进程包括有机物代谢、大分子代谢、氮化合物代谢等，在通路方面主要影响真核生物中的核糖体生物发生，WNT信号通路等。通过构建GAS5在三阴性乳腺癌中ceRNA调控网络，发现GAS5最有可能通过吸附hsa-miR-650和has-miR-532-5p调控包括SLC7A2和LONRF2在内的25个基因的表达，发挥抑癌基因的作用。结论:lncRNA GAS5可能在乳腺癌中起到抑癌基因的作用，可为乳腺癌的基因治疗提供新的治疗靶点。

目的:分析miR-650是否靶向磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1)促进口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖和糖酵解.方法:生物信息学筛选出差异表达且与细胞增殖、糖酵解有关的基因.构建稳定过表达PCK1的CAL-27和Tca8113细胞系,分成Vector组和PCK1组.构建稳定过表达miR-650的OSCC细胞,分成miR-NC组、miR-650组和miR-650+PCK1组.CCK-8和克隆形成检测各组细胞增殖能力.裸鼠成瘤实验检测瘤体质量、体积.免疫组织化学检测肿瘤组织中PCK1表达水平.免疫印迹测定各组细胞PCK1蛋白表达水平.葡萄糖和乳酸试剂盒检测各组细胞内葡萄糖和乳酸变化.数据库预测PCK1靶标,双荧光酶素报告实验进行验证.RT-qPCR测定转染后OSCC细胞中miR-650的表达.结果:PCK1在OSCC中表达下调,且与细胞增殖和糖酵解相关.与Vector组相比,PCK1组中PCK1蛋白水平升高;过表达PCK1抑制细胞增殖;过表达PCK1抑制裸鼠移植瘤体积和质量增长;过表达PCK1促进细胞葡萄糖产生和抑制其消耗,同时抑制乳酸产生.与癌旁组织相比,miR-650在OSCC中表达上调.数据库预测及双荧光酶素报告实验证实miR-650与PCK1的靶向关系.与miR-NC组相比,miR-650组中PCK1 mRNA和蛋白表达水平明显降低.miR-650通过调节PCK1表达,促进OSCC细胞增殖,调控细胞糖酵解.结论:miR-650可以通过靶向结合PCK1促进OSCC细胞增殖和糖酵解.

目的:研究外周血 miR-497 mRNA表达水平对不同类型缺血性脑卒中的诊断价值及预后预测效能.方法:入选我院收治的650例缺血性脑卒中病人,经临床诊断后将病人分为短暂性脑缺血发作(TIA)组、可逆性脑缺血损伤(RIND)组、进展性卒中(SIP)组和完全性卒中(CS)组.另选取同期在我院体检的健康体检者 50名纳入对照组.采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测外周血血清中 miR-497 mRNA表达水平,比较不同类型缺血性脑卒中病人和对照组miR-497表达水平,并进行 9个月随访.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析 miR-497对不同类型缺血性脑卒中的诊断效能及对病人预后的预测效能.结果:脑卒中病人入院时血清miR-497表达水平低于对照组(P<0.001),4组间的 miR-497水平比较差异有统计学意义(P<0.001).脑卒中病人出院时 miR-497水平高于入院时(P<0.05),4组间的 miR-497水平比较差异有统计学意义(P<0.001).ROC曲线显示:入院时 miR-497 水平诊断缺血性脑卒中的ROC曲线下面积(AUC)为 0.729,最佳诊断阈值为<4.902,敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为 73.85%、70.00%、96.97%、17.07%.出院时 miR-497水平预测缺血性脑卒中病人预后良好的 AUC为 0.614,最佳诊断阈值为<2.720,此时预测敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为 30.96%、95.33%、93.10%和 40.40%.结论:缺血性脑卒中病人血清 miR-497 水平明显下降,且 miR-497水平降低提示缺血性脑卒中病人病情进展和预后不良.

林麝(Moschus berezovskii)是药用经济动物,其雄麝分泌的麝香是中成药和香水的重要成分,具有极高的药用价值和经济价值.miRNAs在动物细胞发育、分化、凋亡及疾病发生发展过程中起着至关重要的作用,并且在不同组织中miRNAs选择性表达.本研究利用RNA-seq技术在Hi-seq 2500测序平台对林麝的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉组织进行高通量测序,运用生物统计学和生物信息学方法分析这6种器官和组织中miRNAs的表达情况,采用RT-qPCR对测序结果进行验证.结果表明,林麝的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉组织中共表达的miRNAs有1 650个,特异表达的miRNAs分别有86个、54个、44个、68个、83个和50个(P＜0.01),共表达的miRNAs在不同器官和组织中表达水平存在显著差异(P＜0.05),林麝心脏中部分特异miRNAs的表达水平远远高于其他5种器官和组织中特异miRNAs的表达水平.KEGG分析表明:林麝肝脏特异表达miR-NA 靶基因主要涉及 Wnt 信号通路(ko04310)、cAMP信号通路(ko04024)、ECM 受体相互作用(ko04512)、Notch 信号途径(ko04330)、AMPK信号通路(ko04152)等(P＜0.01).随机选择9个miRNAs,利用RT-qPCR验证其在健康和化脓性林麝肝脏中的表达情况,结果表明其中9个miRNAs的表达趋势与测序结果一致.

目的 探讨环状RNA(CircRNA)SEPT9调节miR-650/热休克蛋白B1(HSPB1)轴对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响.方法 通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、Western blot法检测胶质瘤组织、癌旁组织、人类正常神经胶质细胞HEB及胶质瘤细胞系LN18、SW1088、U251中CircSEPT9、miR-650、HSPB1蛋白表达水平.将U251细胞分为对照组(NC组)、si-NC组、si-CircSEPT9组、mimic NC组、miR-650 mimic组、si-CircSEPT9+inhibitor NC组、si-CircSEPT9+miR-650 inhibitor组、si-CircSEPT9+pcDNA组、si-CircSEPT9+pcDNA-HSPB1组.采用qRT-PCR法检测CircSEPT9、miR-650表达水平.采用Western blot法检测HSPB1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Caspase-3、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达水平.通过双荧光素酶基因实验验证CircSEPT9与miR-650、miR-650与HSPB1的关系.结果 在胶质瘤组织和细胞中,CircSEPT9和HSPB1蛋白呈高表达,miR-650呈低表达,且在U251细胞中CircSEPT9以及HSPB1蛋白表达水平最高,miR-650表达水平最低,差异有统计学意义(P<0.05).沉默CircSEPT9或过表达miR-650均可抑制U251细胞增殖、侵袭、迁移及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平,促进细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达.下调miR-650或过表达HSPB1均可减弱沉默CircSEPT9对U251细胞的作用影响.CircSEPT9与miR-650、miR-650与HSPB1存在靶向关系.结论 沉默CircSEPT9可能通过海绵化上调miR-650来抑制HSPB1表达,进而抑制U251细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡.

目的 探讨骨肉瘤组织和细胞系中miR-650的表达及其在肿瘤形成中的作用机制.方法 用实时荧光定量 PCR的方法,检测并比较肿瘤组织及癌旁正常组织、骨肉瘤细胞系(M G63)及健康人成骨细胞(hFOB1.19)之间的miR-650表达情况;用M T T实验检测不同组细胞的增殖情况;用Western blot的方法检测调节生长抑制因子4(ING4)蛋白的表达情况.结果miR-650在骨肉瘤组织及细胞系中的表达显著高于癌旁正常组织及健康人成骨细胞;抑制miR-650的表达后,M G63细胞的增殖能力显著减弱.此外,miR-650表达减低后,ING4的表达显著升高,其中阴性对照组、乱序组、miR-650抑制剂组的ING4 mRNA分别为1.00 ± 0.16、1.08 ± 0.14、5.35 ± 0.32;蛋白表达分别为:0.62 ± 0.06、0.59 ± 0.12、2.45 ± 0.20;miR-650抑制组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);而抑制ING4升高后,M G63细胞的增殖能力有一定的恢复.结论 miR-650可以通过降低ING4的表达促进M G63细胞的增殖,提示miR-650可能成为骨肉瘤治疗的新靶点.

目的 探讨miR-200b-3p通过血管内皮生长因子A(VEGFA)调控胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胰腺癌组织和细胞中miR-200b-3p表达水平;胰腺癌细胞PANC-1分为NC组、miR-200b-3p mimic组、si-VEGFA组及si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组.CCK-8和Transwell检测胰腺癌PANC-1细胞增殖活力以及细胞迁移和侵袭能力;Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡实验检测PANC-1细胞凋亡;Western blotting和双荧光素酶报告基因验证miR-200b-3p与VEGFA的靶向关系.结果 miR-200b-3p在胰腺癌组织和细胞中低表达.PANC-1细胞过表达miR-200b-3p 48 h后,NC组和miR-200b-3p mimic组细胞增殖活性分别为1.250±0.028、0.983±0.044;迁移细胞数分别为402.700±21.530、158.000±17.620,侵袭细胞数分别为478.300±31.050、170.000±32.470,细胞凋亡百分比为(5.280±0.352)％、(7.430±0.393)％;miR-200b-3p mimic组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均显著低于NC组(t=5.060,P=0.007;t=8.796,P=0.001;t=6.863,P=0.002),细胞凋亡百分比显著高于NC组(t=4.076,P=0.015).VEGFA-WT单独转染细胞荧光强度为1.000±0.027,显著高于VEGFA-WT+miR-200b-3p mimic共转染细胞(0.632±0.048;t=6.637,P=0.003).VEGFA-MUT单独转染细胞荧光强度为1.000±0.049,与VEGFA-MUT+miR-200b-3p mimic共转染细胞差异无统计学意义(0.868±0.047;t=1.944,P=0.124).PANC-1细胞过表达miR-200b-3p 48 h后,NC组和miR-200b-3p mimic组中VEGFA相对表达量分别为1.000±0.058、0.762±0.020,miR-200b-3p mimic组显著低于NC组(t=3.908,P=0.017).PANC-1细胞转染si-VEGFA或同时转染si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor 48 h后,NC组、si-VEGFA组及si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组PANC-1细胞增殖活性分别为1.300±0.058、0.943±0.047、1.143±0.023,迁移细胞数分别为446.000±17.350、206.300±19.360、428.300±30.330,侵袭细胞数分别为510.300±24.550、175.700±24.290、473.700±35.530,组间差异具有统计学意义(F=15.830,P=0.004;F=33.530,P=0.001;F=38.860,P<0.001).si-VEGFA组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均显著低于NC组(P=0.003,P<0.001,P<0.001),而si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组细胞增殖活性、迁移和侵袭能力与NC组差异无统计学意义(P=0.107,P=0.854,P=0.671).NC组、si-VEGFA组及si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组细胞凋亡百分比分别为(3.810±0.577)％、(7.373±0.482)％、(3.650±0.514)％,组间差异具有统计学意义(F=16.020,P=0.004),si-VEGFA组细胞凋亡百分比显著高于NC组(P=0.007),而si-VEGFA+miR-200b-3p inhibitor组与NC组差异无统计学意义(P=0.975).结论 miR-200b-3p通过靶向下调VEGFA表达,进而抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡.

目的:探究miR-650是否通过介导LATS1表达参与TNF-α 对结肠癌细胞增殖和凋亡的调控.方法:双荧光素酶报告基因分析法验证miR-650对LATS1的靶向作用.用不同浓度TNF-α处理SW480细胞,分别构建miR-650抑制表达、LATS1过表达和经TNF-α处理的miR-650过表达SW480细胞株,qRT-PCR检测miR-650表达水平,Western blot检测LATS1、CyclinD1、Bcl-2、p21和Bax蛋白表达水平,MTT实验检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:LATS1是miR-650的靶基因,miR-650可负性调控LATS1的表达.TNF-α处理可抑制SW480细胞的增殖,促进细胞凋亡,并可抑制miR-650、CyclinD1和Bcl-2的表达,促进LATS1、Bcl-2和p21的表达.抑制miR-650表达或LATS1过表达均可抑制SW480细胞的增殖,促进细胞凋亡.miR-650过表达可部分逆转TNF-α对SW480细胞的增殖抑制和凋亡促进作用.结论:TNF-α通过下调miR-650/LATS1抑制结肠癌细胞的增殖,促进细胞凋亡.

目的 探讨miR-27a rs895819(T>C)的基因多态性与广东地区冠心病遗传易感性的关系,为冠心病的防治提供新思路.方法 提取广东地区563例冠心病患者与650例排除冠心病的对照者血液基因组DNA,使用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)方法对标本进行基因分型.采用非条件Logistic回归评价该位点基因多态性与冠心病风险的相关性.结果 TT、CT、CC基因型在病例组中的分布频率分别为5.7％、38.0％、56.3％,在对照组中分别为5.9％、37.3％、56.8％.两组间基因型分布差异无统计学意义(P>0.05).携带miR-27a rs895819 T等位基因或C等位基因与冠心病的遗传易感性无明显相关性(OR=0.94,95％CI=0.72～1.27,P=0.518).结论 miR-27a rs895819(T>C)的基因多态性与广东地区冠心病遗传易感性无相关性.