目的:探讨紫云英苷上调miRNA-513（miR-513）对前列腺癌细胞株C4-2B细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法:选取前列腺癌细胞株C4-2B，采用125 μg/L紫云英苷作用48 h者为紫云英苷组，未处理者为对照组。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测两组C4-2B细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期。采用miRNAMap预测软件预测miR-513的靶基因为叉头框蛋白R2（FOXR2），并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组细胞miR-513和FOXR2 mRNA的相对表达水平，蛋白质印迹法检测两组细胞中FOXR2、细胞周期蛋白依赖性激酶7（CDK7）、β-actin和细胞周期蛋白H（cyclin H）的表达。结果:与对照组比较，培养第2、3、4、5天紫云英苷组C4-2B细胞增殖活力均降低（均 P<0.05）。对照组和紫云英苷组S期细胞比例分别为（48.1±3.2）%和（36.0±2.1）%，紫云英苷组S期细胞比例降低（ t=3.12， P=0.021）；G 2期细胞比例分别为（24.9±3.3）%和（11.8±2.4）%，紫云英苷组G 2期细胞比例降低（ t=3.18， P=0.019）。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平分别为1.01±0.22和6.55±0.61，紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平升高（ t=7.70， P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验验证FOXR2为miR-513的靶基因。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中FOXR2 mRNA相对表达水平分别为1.04±0.14和0.19±0.06，差异有统计学意义（ t=5.53， P=0.002），提示紫云英苷促进miR-513表达后，FOXR2 mRNA表达降低。紫云英苷组C4-2B细胞FOXR2、CDK7和cyclin H蛋白相对表达水平较对照组均降低。 结论:紫云英苷可能通过上调miR-513的表达，抑制前列腺癌C4-2B细胞增殖，诱导细胞周期停滞。

miRNA是一种性质稳定的小分子RNA，在动物、植物内大量表达，可通过与目的mRNA的3’非翻译区碱基互补配对结合，在转录后水平调控靶基因的表达。某些miRNA的表达失调及其后续的异常生物学调控，与老年性黄斑变性（AMD）发生发展中的炎症反应、氧化应激损伤、吞噬功能障碍以及异常血管生成方面有着密切联系。鉴于miR-155、miR-125b及miR-34a的失调似乎对AMD的发生起到了更加重要的作用，这些miRNA或有望成为AMD的诊断标记物及治疗新靶点。

目的:探讨ICE方案(异环磷酰胺、卡铂、VP16)联合甲氨蝶呤对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的临床疗效及miR-451a、miR-15a表达的影响。方法:前瞻性选取2013年3月至2018年5月长沙市第三医院56例DLBCL患者作为研究对象，依据随机数字表法分为观察组与对照组，各28例。对照组予以ICE方案治疗，观察组予以ICE方案联合甲氨蝶呤治疗。对比两组肿瘤控制率、毒副反应、治疗前后血清miR-451a及miR-15a表达水平、免疫功能(CD3 +、CD4 +、CD8 +、CD4 +/CD8 +)、血清肿瘤标志物[β 2微球蛋白(β 2-MG)、糖类抗原125(CA125)、乳酸脱氢酶(LDH)]水平，随访6～12个月统计两组生存率。 结果:观察组肿瘤控制率(92.86%)高于对照组(71.43%)( P<0.05)；治疗后两组miR-15a较治疗前降低，miR-451a较治疗前增高，且观察组miR-15a低于对照组，miR-451a高于对照组( P<0.05)；治疗后两组CD3 +、CD4 +、CD4 +/CD8 +较治疗前降低，CD8 +较治疗前增高( P<0.05)，但组间比较差异无统计学意义( P>0.05)；治疗后两组CA125、LDH及β 2-MG水平较治疗前降低，且观察组低于对照组( P<0.05)；观察组毒副反应发生率、治疗后6、9、12个月生存率与对照组间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:ICE方案联合甲氨蝶呤治疗DLBCL可通过调节血清miR-451a、miR-15a表达，进一步提高治疗效果，降低血清肿瘤标志物水平，且毒副反应及对免疫损害小，安全性高。

目的:探讨比卡鲁胺对前列腺癌的治疗作用。方法:选择2014年1月至2019年1月建德市第一人民医院收治的前列腺癌患者95例作为研究对象，95例患者在治疗前采集血液样本为病例组，选择85例体检健康者作为对照组；记录前列腺癌患者在比卡鲁胺治疗前以及治疗后3、6、9、12个月的临床症状变化以及疗效，采集患者治疗后12个月血液样本为治疗组，并且通过反转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)法检测比卡鲁胺对前列腺癌患者血清miRNA-125b和miRNA-21表达的影响。结果:前列腺癌患者治疗后，前列腺体积和血清前列腺特异性抗原(PSA)表达量明显降低(治疗后3个月与治疗前比较，前列腺体积： t＝6.22， P＝0.00；PSA： t＝5.14， P＝0.00；治疗后6个与治疗前比较，前列腺体积： t＝8.32， P＝0.00；PSA： t＝4.11， P＝0.00；治疗后12个月与治疗前比较，前列腺体积： t＝10.14， P＝0.00；PSA： t＝9.25， P＝0.00；治疗后6个月与治疗后3个月比较，前列腺体积： t＝3.82， P＝0.00；PSA： t＝6.23， P＝0.00；有效率比较，χ 2＝6.38， P＝0.00。治疗后12个月与治疗后3个月比较，前列腺体积： t＝4.16， P＝0.00；PSA： t＝5.77， P＝0.00；有效率比较，χ 2＝5.74， P＝0.00。治疗后12个月与治疗后6个月比较，前列腺体积： t＝8.11， P＝0.00；PSA： t＝4.92， P＝0.00；有效率比较，χ 2＝4.44， P＝0.00)；RT-PCR结果显示与对照组相比，病例组miRNA-125b和miRNA-21的表达量明显升高( t＝6.22、6.88， P＝0.01、0.00)，而比卡鲁胺治疗后，前列腺癌患者血清miRNA-125b和miRNA-21的表达明显降低。 结论:比卡鲁胺可以减轻前列腺癌患者的临床症状，缩小前列腺体积，降低前列腺癌患者血清miRNA-125b和miRNA-21的表达。

目的:探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)长期应用对特发性中枢性性早熟(ICPP)女童的短期疗效及对血清miR-125b、维生素D水平的影响。方法:选择2018年5月至2020年5月杭州市第九人民医院收治的ICPP女童76例作为研究对象，设为观察组，给予GnRHa治疗。同期选择同年龄段健康体检女童70例设为对照组。比较观察组治疗前后的骨龄(BA)、体重指数(BMI)、预测成年身高(PHA)、促卵泡生成激素(FSH)、雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、骨钙素N端中分子片段(N-MID)、I型前胶原氨基端肽(PINP)、β-胶原降解产物(β-CTX)、miR-125b及维生素D变化。结果:治疗前，观察组BA、BMI、PHA、FSH、E2、LH、N-MID、PINP、miR-125b及维生素D水平与对照组比较，差异有统计学意义(均 P<0.05)；治疗后，观察组BA、PHA、BMI、维生素D均较治疗前升高，FSH、E2、LH、N-MID、PINP、miR-125b均较治疗前降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，且与对照组比较差异无统计学意义(均 P>0.05)。治疗前后观察组的β-CTX未见明显变化( P>0.05)，与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:GnRHa长期应用于ICPP女童可促进其生长发育，调节其内分泌代谢、骨代谢及血清miR-125b、维生素D水平，值得临床推广运用。

目的:研究miR-125b-1-3p在轮状病毒(rotavirus)复制过程中的作用和调控机制。方法:将MA104细胞中的miR-125b-1-3p分别上调和下调后感染轮状病毒，通过RT-PCR分析miR-125b-1-3p的表达情况和轮状病毒拷贝数；免疫荧光分析miR-125b-1-3p对轮状病毒蛋白表达情况的影响；Western blot分析miR-125b-1-3p参与调控的相关蛋白表达情况。结果:轮状病毒感染细胞后，miR-125b-1-3p的表达水平明显上调，上调miR-125b-1-3p后，轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数下降，下调miR-125b-1-3p后，轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数明显升高；上调miR-125b-1-3p的表达水平后轮状病毒蛋白荧光数下降，下调miR-125b-1-3p后，病毒蛋白荧光数增加；轮状病毒感染细胞16 h后PI3K/Akt通路活性受到抑制，上调miR-125b-1-3p能够抑制PI3K/Akt通路的活化。结论:miR-125b-1-3p通过调控PI3K/Akt通路抑制轮状病毒的复制。研究结果为探讨miR-125b-1-3p和PI3K/Akt通路之间的具体调控机制研究提供了实验基础，为轮状病毒抗感染治疗提供了靶点。

目的:探讨基于生物信息学构建胰腺癌患者预后相关微小RNA(miRNA)预测模型及其应用价值。方法:采用回顾性队列研究方法。收集肿瘤基因图谱计划(TCGA)数据库(https：//cancergenome.nih.gov/)自建库起至2017年9月171例胰腺癌患者的临床病理资料；男93例，女78例；中位年龄为65岁，年龄范围为35～88岁。171例患者中，64例临床病理资料完整。171例患者采用随机抽样法按7∶3比例分为训练集123例和测试集48例。训练集用于构建预测模型，测试集用于验证预测模型效能。从GEO基因公共表达数据库中下载包含9对胰腺癌及对应癌旁组织的miRNA测序数据的数据集GSE41372，从癌组织及癌旁组织差异表达的miRNA中筛选出候选差异表达miRNA，基于训练集患者信息，进行LASSO-COX回归分析，从候选差异表达miRNA中筛选出与生存相关miRNA，将其拟合成一个相对精简的预后相关miRNA模型。分别在训练集和测试集中对构建的预后相关miRNA模型的预测效能进行验证，以受试者工作曲线下面积(AUC)评价模型准确性，以一致性指数(C-index值)评价模型效能。观察指标：(1)患者生存情况。(2)差异表达miRNA筛选结果。(3)预后相关miRNA模型的构建。(4)预后相关miRNA模型的验证。(5)胰腺癌患者临床病理因素比较。(6)影响胰腺癌患者预后的相关因素分析。(7)预后相关miRNA模型与第8版TNM分期预测效能的比较。正态分布的计量资料以 ± s表示，两组间比较采用Student- t检验，多组间比较采用方差分析。偏态分布的计量资料以 M(范围)表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料以绝对数或百分比表示，组间比较采用 χ2检验。等级资料分析采用秩和检验。采用计数资料相关性分析，挖掘预后相关miRNA模型与患者临床病理参数之间的相关性。采用COX进行单因素及多因素分析，并判断相关性，结果以风险比及95%可信区间表示，风险比<1时，证明该因素为保护因素；风险比>1时，证明该因素为危险因素；风险比＝1时，说明对生存无明显影响。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线并计算生存率，采用Log-rank检验进行生存分析。 结果:(1)患者生存情况：123例训练集患者随访时间为31～2 141 d，中位随访时间为449 d，3、5年总体生存率分别为16.67%、8.06%。48例测试集患者随访时间为41～2 182 d，中位随访时间为457 d，3、5年总体生存率分别为15.63%、9.68%。两组患者3、5年总体生存率比较，差异均无统计学意义( χ2＝0.017，0.068， P>0.05)。(2)差异表达miRNA筛选结果：生物信息学分析结果显示，共筛选102个候选差异表达miRNA，其中63个miRNA在癌组织中上调，39个miRNA在癌组织中下调。(3)预后相关miRNA模型的构建：在102个候选差异表达基因中，筛选出5个与生存相关的miRNA。名称分别为miR-21、miR-125a-5p、miR-744、miR-374b、miR-664，差异表达模式(癌组织对比癌旁组织)分别为升高、升高、降低、升高、降低，差异表达倍数分别为4.00、3.43、3.85、2.62、2.35倍。由5个与生存相关miRNA构建的预后表达方程＝0.454×miR-21表达量－0.492×miR-125a-5p表达量－0.49×miR-744表达量－0.419×miR-374b表达量－0.036×miR-664表达量。(4)预后相关miRNA模型的验证：在训练集和测试集中，预后相关miRNA模型C-index值分别为0.643和0.642。(5)胰腺癌患者临床病理因素比较：COX分析结果显示，预后相关miRNA模型与肿瘤病理学T分期和肿瘤位置具有相关性( Z＝45.481, χ2＝10.176， P<0.05)。(6)影响胰腺癌患者预后的相关因素分析：单因素分析结果显示为肿瘤病理学N分期、接受放射治疗、接受分子靶向治疗、预后相关miRNA模型评分是胰腺癌患者预后的相关因素(风险比＝2.471，0.290，0.172，2.001，95%可信区间为1.012～6.032，0.101～0.833，0.082～0.364，1.371～2.922， P<0.05)。多因素分析结果显示：接受分子靶向治疗是胰腺癌患者预后的独立保护因素(风险比＝0.261，95%可信区间为0.116～0.588， P<0.05)；预后相关miRNA模型评分≥1.16分是胰腺癌患者预后的独立危险因素(风险比＝1.608，95%可信区间为1.091～2.369， P<0.05)。(7)预后相关miRNA模型与第8版TNM分期预测效能的比较：在训练集中，预后相关miRNA模型对胰腺癌患者3、5年生存时间预测概率与第8版TNM分期比较，差异有统计学意义( Z＝－1.671，－1.867， P<0.05)。预后相关miRNA模型与第8版TNM分期AUC分别为0.797、0.935与0.737、0.703，95%可信区间分别为0.622～0.972、0.828～1.042与0.571～0.904、0.456～0.951；C-index值分别为0.643与0.534。在测试集中，预后相关miRNA模型对胰腺癌患者3、5年生存时间预测概率与第8版TNM分期比较，差异有统计学意义( Z＝－1.729，－1.923， P<0.05)。预后相关miRNA模型与第8版TNM分期AUC分别为0.750、0.873与0.721、0.703，95%可信区间分别为0.553～0.948、0.720～1.025与0.553～0.889、0.456～0.950；C-index值分别为0.642与0.544。 结论:基于5个与胰腺癌生存相关miRNA构建可用于胰腺癌患者生存预测的预后相关miRNA模型。该模型可与现有TNM分期系统及其他临床病理参数形成互补，为患者提供个体化、准确的生存时间预测，为临床治疗提供参考。

目的:探讨Alisertib耐药的分子机制并寻找Alisertib耐药的潜在靶点。方法:用Alisertib连续处理结肠癌细胞系建立耐药细胞株并命名为HCT－8－7T细胞，将HCT－8－7T细胞及人结肠癌细胞系HCT－8接种至免疫缺陷小鼠体内，观察小鼠其他器官转移瘤的情况。采用细胞克隆实验及Transwell迁移实验检测细胞的增殖及迁移能力，采用Seahorse分析仪检测细胞糖酵解及谷氨酰胺代谢能力的差异，Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应检测糖酵解及上皮－间质转化(EMT)标志物相关蛋白表达水平及mRNA水平。结果:接种HCT－8－7T细胞的小鼠肝脏、肺脏、肾、卵巢等转移灶数量多于接种HCT－8细胞的小鼠(均 P<0.05)。HCT－8－7T细胞腺嘌呤核苷三磷酸水平[(0.10±0.01)mmol/L]、糖酵解水平[(81.77±8.21)mpH/min]及糖酵解能力[(55.50±3.48)mpH/min]均高于HCT－8细胞[分别为(0.04±0.01)mmol/L、(27.77±2.55)mpH/min和(14.00±1.19)mpH/min，均 P<0.05]。HCT－8－7T细胞中p53蛋白表达水平及mRNA表达水平低于HCT－8细胞(均 P<0.05)。HCT－8－7T细胞中miR－125b表达水平(2.21±0.12)高于HCT－8细胞(1.00±0.00， P<0.001)。在HCT－8－7T细胞中，过表达p53导致细胞克隆数[(162.00±24.00)个]及细胞迁移率[(18.53±5.67)%]低于空白对照组[分别为(274.70±40.50)个和(100.00±29.06)%，均 P<0.05]。miR－125b mimic组HCT－8－7T细胞糖酵解水平[(25.28±9.51)mpH/min]低于空白对照组[(54.38±12.70)mpH/min， P<0.05]。与空白对照组HCT－8－7T细胞比较，miR－125b mimic组HCT－8－7T细胞中p53和β－catenin蛋白水平升高，PFK1和HK1蛋白水平降低(均 P<0.05)。 结论:miR－125b沉默p53是导致Alisertib耐药的机制之一，靶向miR－125b是克服Alisertib耐药的潜在可用之策。

目的:高通量测序分析日本血吸虫童虫的微小RNA（microRNA，miRNA），鉴定已知miRNA的表达水平，预测分析miRNA靶基因及其生物学功能。方法:体外制备日本血吸虫童虫，提取童虫的总RNA构建文库进行Illumina高通量测序。采用DEGseq R语言包，结合perl脚本进行miRNA表达量的差异分析；分别利用miRanda、Blast软件和KEGG数据库对差异miRNA进行靶基因及其生物学功能预测。结果:构建文库中，日本血吸虫童虫表达的miRNAs与最新miRBase数据库比对结果显示，共有38 483条匹配序列，鉴定到已知miRNA 60个；其中，sja-miR-125b表达量最高，其次为sja-miR-61、sja-miR-71a、sja-miR-36-3p和sja-miR-10-5p，上述5种miRNA表达量占总miRNA的91%（3 263/3 585）。共预测到靶基因7 176个，基因功能集中在核苷酸转移酶活性、细胞氮复合代谢、分子功能、生物学过程、生物合成、等离子体膜及蛋白质成熟；功能富集分析显示，高表达的miRNA主要参与致病过程、生物进展及多条代谢途径通路。结论:日本血吸虫童虫显著表达的miRNA参与了血吸虫分化、生长发育和致病过程中的代谢途径调节，为研究血吸虫发育调控机制及新药物开发奠定了基础。

目的:研究耐药性癫痫患儿外周血microRNAs(miRNAs)的表达，为早期识别儿童耐药性癫痫寻找有诊断价值的生物标志物。方法:回顾性研究。收集2018年1月至2019年6月在郑州大学第一附属医院儿科神经专科门诊的癫痫患儿组成的耐药性癫痫组(R组)、药物反应性癫痫组(F组)和同期儿童保健门诊体检健康的儿童组成的健康对照组(J组)的外周全血标本各5例，采用高通量测序法检测每个标本miRNAs的表达；以相同条件再次收集R′组(5例)、F′组(7例)和J′组(6例)儿童的外周全血标本，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)验证11个候选miRNAs在3组中的表达；受试者工作特征曲线(ROC)分析7个目标miRNAs区分耐药性癫痫和药物反应性癫痫患儿的功效，在线数据库预测并筛选7个目标miRNAs的靶基因，并对候选靶基因进行基因组百科全书(KEGG)和基因功能(GO)分析。3组间比较采用Kruskal-Wallis秩和检验。结果:与F组比较，R组共68个差异表达miRNAs，其中22个miRNAs表达上调，46个miRNAs表达下调。qPCR结果显示，11个候选miRNAs中有7个(let-7f、miR-99a-5p、miR-99b-5p、miR-125a-5p、miR-125b-5p、miR-142-5p、miR-100)表达和高通量测序结果一致。ROC曲线分析发现，当miR-99a-5p、miR-99b-5p、miR-125a-5p、miR-125b-5p、miR-142-5p、miR-100的临界值分别大于0.56、1.00、3.17、2.24、2.09、0.59时，这些miRNAs均有较高的曲线下面积(AUC)(≥0.871)、敏感性(≥80.0%)及特异性(≥85.7%)，有望成为诊断儿童耐药性癫痫的生物学标志物，其中miR-125b-5p诊断耐药性癫痫最优。生物信息学分析发现miR-125b-5p可能参与调控的信号通路有缺氧诱导因子-1信号通路、胰岛素信号通路、调控干细胞多能性信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、鞘磷脂信号通路、神经营养蛋白信号通路、哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白信号通路。结论:耐药性癫痫患儿外周全血中miRNAs的表达谱和药物反应性癫痫患儿比较存在明显差异，miR-125b-5p有望成为诊断儿童耐药性癫痫的生物学标志物。