目的 探索经方四妙丸防治高尿酸血症痛风的药效物质.方法 建立高尿酸血症药理模型,采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱联用技术(UPLC-Q-Exactive-MS)分析四妙丸体内外化学成分;以入血成分为基础,采用网络药理学构建四妙丸调控高尿酸血症痛风"活性成分-靶点-通路"网络;以关键活性成分与高尿酸血症痛风关键靶点尿酸生成酶(XDH),尿酸转运体(ABCG2、GLUT9、OAT1、URAT1)及炎症靶点(PTGS2、TLR2、TLR4)进行分子对接,根据对接结果进行实验验证,探讨四妙丸防治高尿酸血症痛风的关键药效物质.结果 UPLC-Q-Exactive-MS法共鉴定四妙丸 89 个成分,包含 74 个入血成分,即候选成分;网络药理学构建了"入血成分-靶点-通路"网络,入血成分匹配 116 个高尿酸靶点和 173 痛风靶点,涉及调节糖脂代谢、氧化应激、炎症反应、ERK1、ERK2 和MAPK级联反应、PI3K信号传导等生物过程;调节血脂与动脉粥样硬化、凋亡、AGE-RAGE、TNF、PI3K-Akt、MAPK、TLRs、JAK-STAT、NF-κB等信号通路,发挥多途径调控高尿酸血症痛风疾病网络的作用.分子对接研究表明小檗碱、黄柏碱、木兰花碱、药根碱、巴马汀、黄柏酮、柠檬苦素、苍术素、花旗松素、白术内酯Ⅲ及β-蜕皮甾酮等成分与尿酸合成酶、尿酸转运体及炎症靶点的亲和力良好,Western Blot验证发现花旗松素具有负调节尿酸盐转运蛋白 1(URAT1)表达的作用,其是四妙丸防治高尿酸血症痛风的主要药效物质.结论 该研究阐述了四妙丸调控高尿酸血症痛风的主要药效物质,可为四妙丸临床应用、质量评价和标准提升提供科学依据.

目的 探究骨痹方活性成分治疗骨关节炎的抗炎机制.方法 体外培养正常人软骨细胞,脂多糖(LPS)刺激炎症,,细胞分为对照组(正常培养)、模型组(10 μg·mL-1 LPS)、斛皮素组(10 μg·mL-1 LPS+8 μmol·L-1 槲皮素)、芒柄花素组(10 μg·mL-1 LPS+50 μmol·L-1 芒柄花素)、柚皮苷组(10 μg·mL-1 LPS+10 μmol·L-1 柚皮苷)、川续断皂苷Ⅵ组(10μg·mL-1 LPS+50 μmol·L-1 川续断皂苷Ⅵ)、β-蜕皮甾酮组(10 μg·mL-1 LPS+50 μmol·L-1β-蜕皮甾酮).用细胞计数试剂盒8(CCK8)检测软骨细胞活力,用蛋白质印迹法检测高尔基体外周膜蛋白p65蛋白(P65)、核因子E2相关因子2(Nrf2)核蛋白蛋白表达水平.结果 对照组、模型组、槲皮素组、芒柄花素组、柚皮苷组、川续断皂苷Ⅵ组、β-蜕皮甾酮组的细胞活力分别为(103.10±8.55)％、(62.41±2.35)％、(76.92±1.74)％、(77.01±0.60)％、(80.39±3.06)％、(79.43±0.94)％和(55.20±0.99)％,Nrf2 蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.00、1.01±0.09、1.30±0.15、0.91±0.15、1.23±0.25、0.71±0.19、1.51±0.13 和 1.26±0.15,P65蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、2.24±0.85、0.74±0.33、1.49±0.29、0.97±0.06、1.33±0.07、1.67±0.22 和 1.52±0.17,炎症介质iNOS相对表达分别为 1.00±0.00、1.52±0.27、1.07±0.24、1.25±0.12、1.01±0.30、1.44±0.12、1.07±0.18 和 1.11±0.16.上述结果,模型组与对照组比较,差异具有统计学意义(均P＜0.05);槲皮素组、芒柄花素组、柚皮苷组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05、P＜0.01和P＜0.001);川续断皂苷Ⅵ组和β-蜕皮甾酮组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 骨痹方活性成分槲皮素、芒柄花素和柚皮苷均能够激活Nrf2-HO-1信号,进而抑制核因子-κB(NF-κB)通路的活化发挥抗炎作用缓解骨关节炎.

瑶药红牛膝为苋科植物柳叶牛膝(Achyranthes longifolia)的根及根茎,为瑶族地区习用药材,目前仅有个别省区收载了其质量控制方法.该文对广西壮族自治区区内采集的 14 批红牛膝药材进行了性状鉴别、显微鉴别和薄层色谱鉴别,并采用飞诺美Gemini-NX C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-水溶液(15∶85)进行等度洗脱,柱温 25℃,流速 1.0 mL·min-1,检测波长 243 nm,建立红牛膝中β-蜕皮甾酮的HPLC含量测定方法.结果表明:(1)红牛膝药材性状、显微鉴别特征明显,显微鉴别可见栓内层、维管束、异常维管束、导管、射线细胞、草酸钙砂晶或方晶等.(2)薄层色谱分离好,β-蜕皮甾酮和人参皂苷RO对应的斑点清晰.(3)含量测定中,β-蜕皮甾酮在 5.606～224.224 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均加样回收率为97.68%,RSD为1.37%(n=6).(4)14 批样品中β-蜕皮甾酮含量为0.005%～0.158%,平均含量为 0.095%.该研究建立了完整的显微鉴别、薄层鉴别及含量测定方法,为合理评价红牛膝质量和临床合理用药提供科学依据.

目的 研究何首乌-牛膝药对的抗骨质疏松作用及筛选活性成分.方法 采取液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用法分析何首乌-牛膝药对指纹共有峰并进行成分确认;采用维甲酸复制大鼠骨质疏松模型及酶联免疫吸附(ELISA)方法,探讨何首乌-牛膝药对的抗骨质疏松作用;应用SPSS分析色谱结果与肝、肾湿重、骨干湿比数据和ELISA测定结果的相关性筛选何首乌-牛膝药对抗骨质疏松活性成分.结果 HPLC-MS联用法分析结果共确定10个共有指纹峰成分,分别为:没食子酸、杯苋甾酮、β-蜕皮甾酮、25-R-牛膝甾酮、二苯乙烯苷、25-S-牛膝甾酮、大黄素、大黄素甲醚、齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、牛膝皂苷D.生物学指标测定结果表明何首乌-牛膝药对能使维甲酸所致骨质疏松大鼠血清骨碱性磷酸酶(BALP)和骨钙素(BGP-OCN)指标升高,抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)和血清Ⅰ型胶原C端肽(CTX-1)降低;何首乌-牛膝药对组肝、肾指数明显下降,骨干湿比上升,体质量变化明显.结论 何首乌-牛膝药对具有抗骨质疏松作用,筛选出作用最显著活性成分为没食子酸、β-蜕皮甾酮、大黄素和齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷.

目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定麝香接骨胶囊中芍药苷、盐酸麻黄碱、柚皮苷、β-蜕皮甾酮、川续断皂昔Ⅵ、儿茶素、蛇床子素的含量.方法 分析采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mmx2.1 mm,1.7 μm);流动相0.1％甲酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温30 ℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式.结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(r＞0.990 0),平均加样回收率85.6％～110.1％,RSD 2.9％～6.4％.20批样品中有5批检出蛇床子素;儿茶素、柚皮苷、β-蜕皮甾酮、盐酸麻黄碱含量在各批次样品中差异较大,而且有2批未检出儿茶素.结论 麝香接骨胶囊有独活混入情况,儿茶、骨碎补、牛膝、麻黄质量参差不齐,建议该制剂现行标准补充儿茶等药味的质量控制方法.

目的:建立HPLC法同时测定怀牛膝饮片中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮3种牛膝甾酮类成分的含量测定方法,优选怀牛膝酒炙法炮制工艺.方法:采用Kromasil(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水-甲酸(16?84?0.1)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm;检测时间40 min.取生牛膝加10%黄酒闷润至黄酒吸尽(约3～4 h),以牛膝中3种牛膝甾酮为指标,单因素考察不同炒制温度(140、160、180℃)及不同炒制时间对牛膝中,优选牛膝酒炙法炮制工艺参数.结果:3种牛膝甾酮均在定量范围内呈现良好的线性关系,平均加样回收103.5%～104.9%.牛膝酒炙过程中,β-蜕皮甾酮、25S-牛膝甾酮的含量均未见明显变化;25R-牛膝甾酮含量在160℃和180℃炒制后略有下降,3种成分的总含量未见明显变化.综合牛膝中牛膝甾酮类成分含量及生产效率、炮制程度控制,确定优选怀牛膝酒炙工艺为:牛膝加10%黄酒闷润至黄酒吸尽(3～4 h),160℃炒制20～25 min.结论:本研究所建立的含量测定方法稳定,重复性好,准确度高.怀牛膝酒炙过程中在文火条件下(140、180℃)炒制,炒制温度变化对怀牛膝中牛膝甾酮含量影响较小.

目的:建立清脑降压片一测多评测定方法,同时测定其中11种成分含量,并构建其OPLS-DA、EM-TOPSIS法综合质量评价模型.方法:以Agilent Extend C18柱为色谱柱,乙腈-0.1％甲酸为流动相,同时测定18批清脑降压片中β-蜕皮甾酮、异钩藤碱、钩藤碱、黄芩苷、汉黄苓苷、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C、橙黄决明素、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的含量,采用主成分分析(PCA)法和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)其整体质量进行综合评价.结果:11种成分分别在各自范围内线性关系良好(r≥0.999),精密度、重复性、稳定性、准确度良好(RSD＜2.0％).以汉黄芩苷为参照物,β-蜕皮甾酮、异钩藤碱、钩藤碱、黄芩苷、红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷C、橙黄决明素、丹参素、丹酚酸B、丹参酮ⅡA的平均相对校正因子分别为1.648 9、0.925 7、1.434 6、1.299 1、0.751 6、0.836 9、1.129 5、1.573 0、0.788 5 和 1.256 9;ESM 法与 QAMS 法测定结果比较,差异无统计学意义(P＞0.05).PCA结果显示不同批次清脑降压片质量存在差异;OPLS-DA筛选出黄芩苷、汉黄芩苷、丹酚酸B、红镰霉素-6-0-β-龙胆二糖苷和β-蜕皮甾酮等5种引起清脑降压片质量差异的主要因素.结论:所建立的方法对清脑降压片的质量控制和整体评价具有重要意义.

骨质疏松是骨稳态失衡的一种全身性骨代谢紊乱疾病.临床常用药物如双膦酸盐、地诺单抗及雷奈酸锶等具有胃肠道刺激、肾毒性等不良反应,亟待安全长期有效的新型药物弥补空白.中医学中骨质疏松症属于"骨痿"范畴,牛膝是中医药治疗"骨痿"的常见药物,β-蜕皮甾酮为其主要活性成分.通过β-蜕皮甾酮对于骨质疏松的治疗机制进行系统性综述,并以其对骨骼与肌肉分子调控为切入,结合牛膝中医中药理论及结合现代分子医学及生物学研究,总结出增加成骨细胞活性、促进骨髓间充质干细胞成骨分化、提高肌肉质量以及类雌激素等作用.

目的:探究牛膝最佳盐炙工艺.方法:采用超高效液相色谱串联质谱技术,以牛膝补肾壮骨的5种有效成分——β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷R0及竹节参皂苷Ⅳa为评价指标,采用单因素和Box-Behnken设计方法,选择加盐量、炒制温度和炒制时间为考察因素,优化牛膝的盐炙工艺.结果:牛膝盐炙最佳工艺为2%加盐量,炒制温度100℃,炒制时间20 min.结论:所得牛膝盐炙工艺稳定可靠,有利于提高牛膝盐炙品的质量均一性.

目的 研究不同生长年限与采收期对怀牛膝化学成分与质量的影响,明确怀牛膝适宜的生长年限及采收期.方法 采用高效液相色谱法对2015年4月至2021年12月不同生长年限(2～6年)与采收期(9～12月)怀牛膝中的有机化学成分(β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、齐墩果酸)进行含量测定.对结果进行含量分析及主成分分析.结果 同一生长年限中,4种化学成分含量在不同月份采收存在差异,10、11月含量相对较高,9、12月含量相对偏低.同一采收月份中,齐墩果酸、β-蜕皮甾酮生长4年含量最高,其次为5年、3年;25S-牛膝甾酮生长3年含量最高,而25R-牛膝甾酮生长5年含量最高.4年生11月中旬的牛膝样品综合得分最高,其次为4年生10月份采收,3年、5年生的10、11月份采收的质量接近.结论 以β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、齐墩果酸为怀牛膝药材质量的考核指标,建议4年生11月中旬为牛膝的最佳采收期.