目的 探究骨痹方活性成分治疗骨关节炎的抗炎机制.方法 体外培养正常人软骨细胞,脂多糖(LPS)刺激炎症,,细胞分为对照组(正常培养)、模型组(10 μg·mL-1 LPS)、斛皮素组(10 μg·mL-1 LPS+8 μmol·L-1 槲皮素)、芒柄花素组(10 μg·mL-1 LPS+50 μmol·L-1 芒柄花素)、柚皮苷组(10 μg·mL-1 LPS+10 μmol·L-1 柚皮苷)、川续断皂苷Ⅵ组(10μg·mL-1 LPS+50 μmol·L-1 川续断皂苷Ⅵ)、β-蜕皮甾酮组(10 μg·mL-1 LPS+50 μmol·L-1β-蜕皮甾酮).用细胞计数试剂盒8(CCK8)检测软骨细胞活力,用蛋白质印迹法检测高尔基体外周膜蛋白p65蛋白(P65)、核因子E2相关因子2(Nrf2)核蛋白蛋白表达水平.结果 对照组、模型组、槲皮素组、芒柄花素组、柚皮苷组、川续断皂苷Ⅵ组、β-蜕皮甾酮组的细胞活力分别为(103.10±8.55)％、(62.41±2.35)％、(76.92±1.74)％、(77.01±0.60)％、(80.39±3.06)％、(79.43±0.94)％和(55.20±0.99)％,Nrf2 蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.00、1.01±0.09、1.30±0.15、0.91±0.15、1.23±0.25、0.71±0.19、1.51±0.13 和 1.26±0.15,P65蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、2.24±0.85、0.74±0.33、1.49±0.29、0.97±0.06、1.33±0.07、1.67±0.22 和 1.52±0.17,炎症介质iNOS相对表达分别为 1.00±0.00、1.52±0.27、1.07±0.24、1.25±0.12、1.01±0.30、1.44±0.12、1.07±0.18 和 1.11±0.16.上述结果,模型组与对照组比较,差异具有统计学意义(均P＜0.05);槲皮素组、芒柄花素组、柚皮苷组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05、P＜0.01和P＜0.001);川续断皂苷Ⅵ组和β-蜕皮甾酮组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 骨痹方活性成分槲皮素、芒柄花素和柚皮苷均能够激活Nrf2-HO-1信号,进而抑制核因子-κB(NF-κB)通路的活化发挥抗炎作用缓解骨关节炎.

目的:基于高效液相-四极杆串联飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)分析温肾宣痹汤有效成分,并运用网络药理学探究温肾宣痹汤治疗膝骨关节炎(KOA)的作用靶点及通路,探讨其治疗膝骨关节炎的作用机制.方法:采用HPLC-Q-TOF-MS/MS分析温肾宣痹汤中化学成分.检索TCMSP V2.0获得温肾宣痹汤的活性成分;运用TCMSP数据库筛选活性成分靶点,利用Uniprot数据库对靶点进行标准化命名;通过"GeneCards"等数据库,查询膝骨关节炎相关靶点;利用VennDiagram得到"中药化合物疾病"共同靶点.应用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用网络图.筛选核心作用靶点,进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果:在温肾宣痹汤的正、负离子模式下采用液质联用综合分析,共鉴定出24种化合物,分别归属于狗脊、附子、天麻、山萸肉、细辛、白术、木香、甘草.筛选出温肾宣痹汤181个活性成分和134个相应蛋白靶点,与膝骨关节炎的2171个疾病相关靶点相交集的核心靶点为72个.GO富集分析共筛选得到76条生物过程(BP)富集结果、12条细胞组成(CC)富集结果及29条分子功能(MF)富集结果.KEGG富集分析共筛选得到相关通路共27条.结论:温肾宣痹汤可以通过抗炎、免疫调节、抗血管生成、抗氧化等作用,发挥治疗膝骨关节炎的功效.

目的 探究痹祺胶囊祛风除湿、活血止痛功能的药效物质基础.方法 通过建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7体外炎症模型、细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-stimulating factor,M-CSF)与 RAW264.7 细胞共培养建立破骨细胞分化模型、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞RA-HFLS增殖模型,分别探讨痹祺胶囊发挥抗炎活性、抑制破骨细胞形成、抑制RA-HFLS细胞增殖的作用机制及药效物质基础.MTS法检测细胞增殖活性,ELISA法检测细胞上清中一氧化氮(nitric oxide,NO)、TNF-α和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量,TRAP染色法检测破骨细胞分化数量,流式细胞术检测细胞凋亡情况,RT-qPCR法检测细胞中组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、RANKL mRNA相对表达情况.结果 痹祺胶囊及其19个单体成分均能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内NO、TNF-α和IL-6的释放,推测19个化合物是痹祺胶囊发挥抗炎作用的药效物质基础.痹祺胶囊及其13个单体成分均能显著减少RANKL和M-CSF诱导RAW264.7分化为破骨细胞的数量,并能明显降低破骨细胞标志基因CTSK和TRAP的相对表达量,推测马钱子碱、士的宁、党参炔苷、茯苓酸、丹参素、丹酚酸B、迷迭香酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、藁本内酯、甘草次酸和甘草苷为痹祺胶囊发挥治疗骨破坏、缓解关节疼痛作用的主要物质基础.痹祺胶囊及其9个单体成分能明显抑制TNF-α诱导的RA-HFLS细胞增殖,并且能显著促进RA-HFLS细胞的凋亡以及明显降低MMP-3和RANKL基因的相对表达量,推测马钱子碱、士的宁、丹参素、丹参酮ⅡA、阿魏酸、藁本内酯、蜕皮甾酮、次黄嘌呤、甘草次酸为痹祺胶囊中发挥抑制滑膜增生作用的药效物质基础.结论 通过体外细胞实验初步确定马钱子碱、士的宁、党参炔苷、白术内酯Ⅲ、茯苓酸、丹参素、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、迷迭香酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、阿魏酸、藁本内酯、蜕皮甾酮、牛膝皂苷D、次黄嘌呤、甘草次酸、甘草苷为痹祺胶囊主要药效物质基础.

目的:采用网络药理学方法及分子对接技术探讨苍膝通痹胶囊治疗骨关节炎(osteoarthri-tis,OA)的分子机制.方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine sys-tems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)筛选苍膝通痹胶囊的活性成分及对应靶点;运用Drugbank、人类基因数据库(the human gene database,GeneCards)、药物靶标数据库(therapeutic targetdatabase,TTD)、比较毒理基因组学数据库(comparative toxicogenomics database,CTD)检索OA的已知疾病靶点;使用Venny平台得到苍膝通痹胶囊治疗OA的药效靶点.运用Cytoscape 3.7.2软件构建"药物-成分-靶点-疾病"网络,运用STRING数据库建立蛋白-蛋白互作网络(protein-protein interactions,PPI),利用CytoHubba工具对所得PPI网络进行拓扑分析筛选出关键靶点.借助DAVID数据库对作用靶点进行基因本体论功能富集分析(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)获取其潜在作用机制,构建苍膝通痹胶囊"通路-靶点"作用网络.从RCSBPDB数据库获取靶点的晶体结构文件,从Pubchem数据库获取活性成分的结构文件,利用Auto vina软件进行分子对接验证.结果:共得到苍膝通痹胶囊活性成分60个、作用靶点140个.OA疾病靶点469个,苍膝通痹胶囊治疗OA的靶点52个.核心成分有槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、木犀草素等.核心靶点包括IL-1β、IL-6、VEGFA、MAPK、JUN等.通路主要涉及PI3K-Akt、NF-κB、FoxO、雌激素、MAPK通路等.有效成分在与核心靶点对接中具有较强的结合能力.结论:苍膝通痹胶囊通过调控细胞增殖、抑制炎症等多成分、多靶点、多通路治疗OA.

基于网络药理学和细胞功能实验研究国医大师经验方蠲痹强骨方(JBQGF)治疗类风湿关节炎(RA)的潜在分子作用机制.通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药百科全书数据库(ETCM)等获取JBQGF的主要活性成分和作用靶点,对核心靶点进行功能富集分析以及信号通路分析,采用Cytoscape 3.6.0 构建JBQGF的"活性成分-靶点-信号通路"的可视化网络.通过筛选获得JBQGF潜在作用通路 9 条,主要包括G蛋白偶联受体信号通路、酪氨酸激酶受体的信号传导通路等.结合课题组前期通过单细胞测序发现FGFR1 信号通路在RA活动期滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)中高度活化,通过细胞及动物实验证实抑制成纤维细胞生长因子受体 1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)信号通路可以明显减轻CIA大鼠关节炎症及关节破坏.随后聚焦于酪氨酸激酶受体信号传导通路,对其进一步靶基因分析发现FG-FR1 可能是JBQGF治疗RA的潜在靶点.通过Western blot实验、Transwell侵袭实验以及血管翳骨片侵蚀实验初步验证了JBQGF抑制FGFR1 的磷酸化而发挥生物学效应,进而抑制基质金属蛋白酶 2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和NF-κB配体受体激活因子(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)从而抑制RA成纤维细胞的侵袭,抑制血管翳的骨片侵蚀效应,为进一步通过网络药理学方法寻找治疗RA潜在的靶点和中医药治疗药物提供了思路.

淫羊藿作为我国传统中药, 具有补肝肾、强筋骨、祛风湿的功效, 是补肾壮阳、强阳起痿方剂的常用中药, 主要用于肾阳不足, 风湿痹痛和骨痿的治疗.现代研究表明, 淫羊藿中的主要化学成分淫羊藿苷具有广泛的生物活性, 如抗炎、抗氧化应激、抗抑郁和抗肿瘤等.分子药理学研究表明, 淫羊藿苷可通过调控多个细胞信号转导通路中的靶点治疗神经系统疾病、骨质疏松症、心血管系统疾病、免疫性疾病和生殖系统疾病等.淫羊藿苷在骨保护方面的作用机制广泛, 主要涉及雌激素受体α (ERα) -分泌型糖蛋白 (Wnt) /β-链蛋白 (β-catenin), 核转录因子-κB (NF-κB), 环磷酸腺苷 (cAMP) 依赖蛋白激酶 (PKA) /cAMP/cAMP应答元件結合蛋白 (CREB), 细胞外信号调节激酶 (ERK) 和p38有丝分裂原活化蛋白激酶 (MAPK), 磷脂酰肌醇3激酶 (PI3K) /蛋白激酶B (protein kinase B, Akt) /内皮型一氧化氮合酶 (e NOS) /NO/环磷鸟苷 (c GMP) /c GMP依赖性蛋白激酶 (PKG), Rho A-TAZ和PI3K/Akt/下调糖原合成激酶3β (GSK3β) /β-catenin等多个信号通路, 显著地成骨作用使其成为治疗骨质疏松症的首选先导化合物.回顾文献, 淫羊藿苷对于调节神经系统, 保护心血管, 调节免疫系统, 改善性功能和抗肿瘤等机制研究方面缺乏详细的总结.为了加快淫羊藿苷药理作用分子机制的探索和发现, 扩大其应用前景, 本文综述近年来淫羊藿苷的药理作用及分子机制研究进展, 为临床合理用药和新药研发提供参考依据.

目的:综述天然药物基于核转录因子κB(NF-κB)信号通路抗类风湿性关节炎的机制,为抗类风湿性关节炎的新药研发提供参考.方法:以"NF-κB""天然药物""中药""民族药""类风湿性关节炎""Natural medicine""Traditional Chinese medicine""Eth-nomedicine""Rheumatoid arthritis"等为关键词,组合查询2013年1月-2018年11月中国知网、万方数据、维普网、PubMed、Elservi-er等数据库中的相关文献,从组方制剂、单味药材提取物、中药活性成分三个方面总结天然药物基于NF-κB信号通路抗类风湿性关节炎的实验研究进展.结果与结论:共检索到相关文献645篇,其中有效文献54篇.组方制剂如双藤痹痛酊、仙方活命饮、二妙散、桂枝芍药知母汤、龙钻通痹方、金乌健骨汤,单味药材如龙须藤、类叶牡丹、黑骨藤、天麻,中药活性成分如雷公藤红素、青藤碱、姜黄素、黄芩苷、芍药苷等均能通过抑制NF-κB信号通路中相关蛋白[如NF-κB蛋白、NF-κB抑制蛋白(IκB)]和酶[如IκB激酶(IKK)]的表达,阻断NF-κB信号通路的激活,从而抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6等多种促炎细胞因子的生成,改善炎症反应,进而抑制类风湿性关节炎的病理变化.由于天然药物成分复杂,其药理活性一般是多种活性成分协同作用的结果,建议在后续的研究中,应进一步通过实验明确天然药物基于NF-κB信号通路抗类风湿性关节炎的作用机制及药效基础,为研发抗类风湿性关节炎新型药物提供新的思路与实验依据.

目的 通过网络药理学探究骨痹方治疗膝骨关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)的药理学机制.方法 通过Disgenet数据库搜集KOA靶点;通过TCMSP、TCMID数据库搜集骨痹方各成分作用靶点,使用Cytoscape软件构建成分-靶点网络分析骨痹方的重要成分.借助Genomics平台分析骨痹方和KOA共有靶点,并利用STRING平台构建共有靶点互作网络(Protein-Protein interaction network,PPI network)预测KOA潜在治疗靶点.在Systems Dock WebSite在线平台对重要成分和潜在靶点进行分子对接评估其结合活性.最后,利用Cytoscape软件"ClueGo插件"分析共有靶点KEGG信号通路并构建成分-靶点-通路网络进行可视化分析.结果 共筛选出92个KOA靶点;骨痹方共有66种成分,263个靶点.骨痹方重要成分包含槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇和刺芒柄花素等.其中,共有靶点17个,潜在治疗靶点可能有IL-6、TNF、PTGS2.分子对接显示槲皮素、山柰酚和β-谷甾醇与潜在治疗靶点具有较强的结合能力.KEGG通路富集分析提示共有靶点参与IL-17信号通路、TNF信号通路和NF-κB信号通路等22条通路.结论 骨痹方中槲皮素、山奈酚和β-谷甾醇等成分很可能通过IL-6、TNF、PTGS2等靶点作用于IL-17信号通路、TNF信号通路和NF-κB信号通路,发挥治疗KOA的作用.故骨痹方治疗KOA的药理学机制可能是通过多组分、多靶点、多通路实现,但需进一步通过基础和临床研究验证.

背景:大量研究发现“乳香-没药”是中药复方治疗膝骨关节炎的常用配伍药对,但其药理机制尚不明确.目的:利用网络药理学技术探讨“乳香-没药”作为中医临床治疗痹病的常用配伍药对治疗膝骨关节炎的作用靶点及其相关作用机制.方法:使用TCMSP中药系统药理学数据库与分析平台收集乳香、没药的化学成分,根据药物生物口服利用度≥30％,类药性≥0.18对乳香、没药可能的生物活性成分进行筛选,并通过蛋白质数据库(Uniprot)筛选出各活性成分可能存在的靶点.查询GeneCards、OMIM、TTD、DrugBank数据库挖掘膝骨关节炎相关基因靶点,将两者取交集后获取疾病-药物蛋白靶基因.将获得的关键靶点基因上传至STRING数据库计算分析,筛选出重要的关键基因构建蛋白质间相互作用网络,构建PPI网络图.采用Cytoscape软件绘制药物-靶点和疾病-靶点可视化网络图,并进一步借助DAVID在线工具进行GO分析和KEGG通路富集分析.结果 与结论:①获得乳香生物活性成分8个,没药生物活性成分45个,同时检测出乳香、没药药物靶点蛋白412个,膝骨关节炎相关基因1 889个,药物与疾病共有靶点105个;②蛋白互作网络发现AKT1、TP53、IL6、TNF、JUN、MAPK1等可能是“乳香-没药”治疗膝骨关节炎的关键靶点;③富集分析确定了66个GO条目,涉及到细胞对缺氧的反应、上皮细胞增殖的负调控、免疫反应、胰岛素刺激的细胞反应、成纤维细胞增殖的正调控等;④KEGG通路富集分析确定了95条相关信号通路,涉及到炎症、细胞凋亡、细胞衰老等.利用David富集分析显示乳香-没药干预膝骨关节炎的关键靶点主要与炎症反应、细胞凋亡与免疫系统等生物过程有关;⑤结果表明,“乳香-没药”药对治疗膝骨关节炎具有多途径、多靶点作用的特点,主要起到抗炎镇痛的作用,初步揭示了其作用的关键靶点及涉及的生物学过程和信号通路,为今后临床用药组方治疗膝骨关节炎提供新思路.

目的 研究七味通痹口服液治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的主要活性成分和潜在的分子作用机制.方法 通过分子对接获得七味通痹口服液成分作用的潜在靶蛋白,结合文本挖掘、数据库联用检索出与RA相关的靶蛋白,将其投射到KEGG数据库阐释七味通痹口服液的分子作用机制,并采用体外抗炎活性实验进行验证.结果 数据分析结果表明,七味通痹口服液中107个潜在活性成分作用于与RA相关的116个靶点和237条通路.进一步的网络特征分析发现高网络度和介数的分子主要为三萜类、黄酮类、甾醇类和生物碱化合物,部分化合物在实验中对炎症介质的释放具有抑制活性;靶蛋白和通路主要发挥抗炎镇痛,免疫调节,滑膜成纤维细胞的增殖、凋亡、迁移与侵袭和破骨细胞分化、迁移、骨吸收等药理作用.结论 七味通痹口服液的活性成分通过与多个靶点蛋白作用,调控多条生物通路,起到减轻关节炎症和肿痛、防止和减少关节的破坏、促进已破坏的关节和骨修复的作用,为七味通痹口服液药效成分分析和作用机制探索提供了研究基础.