目的:探讨白细胞介素-4(IL-4)基因组蛋白乙酰化修饰水平改变及其在川崎病(KD)发病机制中的作用。方法:选取2016年10月至2018年12月在深圳市儿童医院就诊的KD患儿36例为研究对象，同年龄健康儿童28例作为对照组。KD患儿分别于急性期及静脉用丙种球蛋白(IVIG)治疗有效后4～5 d取血备检。采用染色质免疫共沉淀-荧光定量PCR检测外周血CD4 ＋ T淋巴细胞IL-4基因启动子、增强子Va组蛋白H4乙酰化和p300、CREB结合蛋白(CBP)水平；流式细胞术检测外周血Ⅱ型辅助性T淋巴细胞(Th2)(CD4 ＋ IL-4 ＋)比例及CD4 ＋ T淋巴细胞中磷酸化信号转导及转录活化因子6(pSTAT6)、GATA结合蛋白3(GATA3)、活化T细胞核因子1(NFAT1)、Ⅱ型转化生长因子β受体(TGF-βRⅡ)、磷酸化L型氨基酸转运蛋白1(pLAT1)蛋白表达水平；荧光定量PCR检测CD4 ＋ T淋巴细胞IL-4、IL-5、IL-13、IL-4受体α(IL-4Rα)、Ⅰ型转化生长因子β受体(TGF-βRⅠ)、性别决定区Y框蛋白4(SOX4) mRNA表达水平；酶联免疫吸附试验测定血浆IL-4、转化生长因子β(TGF-β)水平。 结果:1．KD患儿Th2细胞比例、功能相关分子(IL-4、IL-5和IL-13)表达及IL-4基因启动子、增强子Va组蛋白乙酰化水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中冠状动脉损伤组(CAL)前述指标均高于无冠状动脉损伤组(NCAL)，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，经IVIG治疗后显著降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。2.与对照组比较KD患儿外周血CD4 ＋ T淋巴细胞p300、CBP与IL-4基因启动子、增强子Va结合水平明显上调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，且p300与IL-4基因启动子、增强子Va结合水平与后者表达均呈正相关( r＝0.72、0.43，均 P<0.05)，经IVIG治疗后呈不同程度下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。其中CAL组p300、CBP与IL-4基因启动子、增强子Va结合水平明显高于NCAL组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。3.与对照组比较，KD患儿血浆IL-4水平及CD4 ＋ T淋巴细胞IL-4Rα/STAT6/GATA-3、pLAT1/NFATc1表达显著增高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，血浆TGF-β水平及下游信号分子TGF-βRⅡ/TGF-βRⅠ/SOX4表达明显下调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中CAL组血浆IL-4水平及CD4 ＋ T淋巴细胞IL-4Rα/STAT6/GATA-3、pLAT1/NFATc1表达均高于NCAL组，血浆TGF-β水平及下游信号分子TGF-βRⅡ/TGF-βRⅠ/SOX4表达低于NCAL组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，经IVIG治疗后呈不同程度的回调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:IL-4基因组蛋白H4过度乙酰化可能是导致KD患儿免疫功能异常的重要原因之一。

目的:探讨新疆出血热病毒（XHFV）糖蛋白的2个抗原优势区（GcⅠ和GcⅡ）以不同嵌合策略以及不同免疫方式诱导小鼠免疫应答的效果。方法:以在5'端加入或不加鼠白细胞介素-2（IL-2）信号肽与通用型辅助性T细胞（Th）表位为不同设计策略，将GcⅠ、GcⅡ及GcⅠ上已鉴定出来的表位（Gc 233~248、Gc 241~256和Gc 281~296）分别进行融合并构建至真核表达载体pVAX1与原核表达载体pET-28a上。采用间接免疫荧光法检测重组真核质粒的体外表达效果后进行大量提取，将重组原核质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达及纯化。通过基因免疫、蛋白免疫和DNA初免-蛋白加强免疫（联合免疫）3种方式免疫BALB/c小鼠，酶联免疫吸附测定法检测小鼠体内IgG抗体水平以及小鼠脾细胞培养上清中IL-4和干扰素-γ（IFN-γ）的含量，噻唑蓝比色法检测小鼠脾T淋巴细胞的增殖情况。 结果:双酶切及测序结果表明8种重组质粒构建成功。荧光显微镜下可见构建的重组真核质粒在体外细胞均能成功表达。3次免疫小鼠后，各实验组的小鼠血清IgG抗体水平和刺激指数均明显高于对照组（均 P<0.01）。Th2型细胞因子IL-4与Th1型细胞因子IFN-γ的质量浓度检测结果表明，联合免疫组引起的免疫应答偏向Th1型。 结论:成功构建了XHFV糖蛋白的多表位嵌合疫苗且靶抗原在小鼠体内可有效表达，各免疫组与对照组相比均激发了较强的体液免疫及细胞免疫应答，其中pVAX1-ST（GcⅠe+GcⅡ）联合重组蛋白r（GcⅠe+GcⅡ）的免疫效果最好，有望作为XHFV的新型候选疫苗。

目的:探讨应用生物信息学筛选的结肠癌细胞焦亡相关基因特点，对基于差异表达的细胞焦亡相关基因构建的结肠癌预后模型予以验证。方法:从癌症基因组图谱（TCGA）数据库下载结肠癌患者RNA测序的基因数据和临床数据。通过检索文献确定52个与细胞焦亡相关基因，将其与TCGA数据库中获得的结肠癌和正常结肠组织的RNA测序基因数据集进行对比，获取差异表达的临床样本细胞焦亡基因，应用STRING网站和R软件分析这些基因蛋白质互作网络。依据TCGA数据库临床样本中细胞焦亡基因的差异表达情况，将TCGA数据库中结肠癌患者分为焦亡组和未焦亡组，根据基因表达量，以 P<0.05筛选两组间差异表达明显的基因；基于这些差异表达基因，采用LASSO Cox回归构建细胞焦亡相关的结肠癌预后模型。按照模型计算的风险评分的中位值将从TCGA数据库中收集的患者分为高风险（≥中位值）和低风险（<中位值）两组，通过Kaplan-Meier生存函数分析两组总生存，采用R软件的timeROC程序包分析应用风险评分预测TCGA数据库结肠癌患者生存不同时间的效能。采用多因素Cox回归分析临床病理因素及模型风险评分对TCGA数据库患者生存的影响。通过R软件分析、获取TCGA数据库结肠癌患者高、低风险组间差异基因，应用R软件对差异表达细胞焦亡基因进行基因本体（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析及免疫细胞、免疫功能的单样本基因集富集分析（ssGESA）。 结果:依据TCGA数据库数据获得38个结肠癌组织与正常组织间差异表达的临床样本细胞焦亡相关基因。应用LASSO Cox回归建立了由13个细胞焦亡相关差异表达基因构成的预后模型，即风险评分=0.118×MID2+0.354×IL20RB+0.083×HOXC11+0.011×TMEM88+0.021×SYNGR3+0.246×UPK3B+ 0.030×EGFL7+0.109×TMPRSS11E+0.138×IFITM10+0.161×RNF207+0.097×LINGO1+0.202×HEYL+0.025×ROBO3。生存分析显示，TCGA数据库高风险组的总生存较低风险组差（ P<0.001）；受试者工作特征（ROC）曲线分析显示，预后模型风险评分预测TCGA数据库结肠癌患者生存1、3、5年的曲线下面积均>0.7。多因素Cox回归分析显示，风险评分为TCGA数据库结肠癌患者生存独立影响因素（高风险比低风险： HR=3.988，95% CI 2.865~5.551， P<0.001）。GO和KEGG富集分析显示，TCGA数据库中高、低风险组间差异表达基因（SULF1、FBLN2、COL1A1、DES、SFRP2、FNDC1、MYH11、APOE、C3、SPP1、COL1A2、COL10A1、THBS2、AEBP1、CNN1、IGHG1、SFRP4）在高风险组中均上调，主要与细胞基质结构成分和细胞外基质（ECM）受体相互作用相关。ssGSEA法分析显示，高风险组的免疫细胞浸润水平较高，尤其是B细胞、巨噬细胞、肥大细胞、辅助性T细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞明显高于低风险组；免疫功能方面，高风险组趋化因子受体、免疫检查点、人白细胞抗原、副炎症、T细胞抑制、T细胞刺激、Ⅱ型干扰素反应高于低风险组。 结论:基于细胞焦亡相关基因构建的结肠癌预后模型对结肠癌患者预后预测有一定价值。细胞焦亡相关基因在结肠癌的肿瘤免疫中可能发挥重要作用，可以用于结肠癌患者的预后分析。

研究祖师麻及其炮制品对SD大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)中辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)分化的影响.按体质量将64只SD大鼠随机分为正常组,模型组,祖师麻炙品低、高剂量组,生品低、高剂量组,祖师麻甲素组,雷公藤多苷组.除正常组外,CIA模型在第1次免疫后第7天进行二免,并在二免7 d后灌胃28 d.取材后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察CIA大鼠关节滑膜炎症的情况;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中转化生长因子-β(TGF-β)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10水平变化;实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测关节滑膜中分化簇80(B7-1)、分化簇86(B7-2)、分化簇28(CD28)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)mRNA和蛋白表达;流式细胞术用于检测大鼠关节滑膜中Th17和Treg细胞的比例.结果显示,与正常组相比,模型组大鼠的关节滑膜炎症明显加剧,关节炎指数评分明显上升,免疫器官指数上升(P＜0.01);与模型组相比,各给药组均能不同程度地改善大鼠的关节炎症,降低关节评分指数,抑制滑膜增生,降低免疫器官指数;相较于模型组,各给药组中大鼠血清中IL-2、IFN-γ 显著下降(P＜0.01),TGF-β、IL-4、IL-10 显著上升(P＜0.01),滑膜中 B7-1、CTLA-4 mRNA 及蛋白表达显著升高(P＜0.01),关节组织中的Th17细胞和Treg细胞的比例出现显著降低(P＜0.01).综上得出祖师麻通过调控B7/CD28/CTLA-4通路以及调节Th17/Treg平衡,抑制CIA大鼠中Th17细胞的表达,促进Treg细胞的表达,进而治疗RA.

哮喘是一种常见的慢性呼吸道疾病.作为一种异质性疾病,其发病机制由免疫、遗传、环境等多种因素共同驱动,由多种细胞共同参与.近些年越来越多的证据表明,气道上皮细胞在哮喘发病中发挥核心作用.气道上皮细胞作为机体呼吸系统抵御外界环境的第一道防线,主要通过细胞间各种连接阻止有害刺激进入,并通过黏液纤毛系统和抗菌肽清除变应原、病毒等外来有害因素.气道黏膜受到外来有害刺激时,气道上皮细胞屏障可能被破坏,上皮细胞释放各种上皮源性细胞因子,有效激活树突状细胞(dendritic cell,DC)和Ⅱ型固有免疫淋巴细胞(type Ⅱ innate lymphoid cell,ILC),从而引发后续辅助性T细胞2免疫级联反应,导致哮喘发生.鉴于气道上皮细胞在哮喘中的上述作用,针对气道上皮细胞来源的细胞因子,如胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)等的靶向治疗药物也逐渐投入临床应用.该文针对气道上皮细胞在哮喘发病机制中的作用,及以气道上皮细胞为潜在靶点的治疗在未来的临床应用进行综述.

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种多关节滑膜炎性反应为特点的自身免疫性疾病[1].鸡Ⅱ型胶原蛋白诱导性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)小鼠为人类RA 研究的经典动物模型[2].滤泡辅助性 T(T follicular helper,Tfh)细胞可促进淋巴滤泡生发中心的形成、B淋巴细胞的发育和高亲和力抗体的产生,高表达趋化因子受体(C-X-C chemokine receptor type,CXCR)5和协同刺激性因子(in-ducible costimulatory,ICOS),而滤泡调节性T(T follicular reg-ulatory,Tfr)细胞表达叉头盒蛋白3(forkhead/winged-helix transcription factor box P3,Foxp3)、CXCR5和ICOS,通过抑制Tfh细胞活性、生发中心 B 细胞的类别转换和抗体分泌来维持机体免疫耐受[3].因此,Tfh和Tfr细胞数量及其比例变化与机体免疫稳态维持和自身免疫性疾病发生均有密切关系.本研究旨在评估Tfh和Tfr细胞数量、比例与CIA病程相关性,探讨其在RA发病机制中的作用.

目的 探讨解毒化瘀Ⅱ方对乙型肝炎病毒(HBV)相关急性肝衰竭患者外周血Th17、Th1表达及临床疗效的影响.方法 选择2013年2月～2016年3月在广西中医药大学第一附属医院、广西中医药大学附属瑞康医院、田东县中医院治疗的118例HBV相关急性肝衰竭患者作为研究对象,根据随机数字表分为对照组和观察组,每组各59例.对照组患者采用西医常规治疗,观察组患者采用解毒化瘀Ⅱ方+西医常规治疗.治疗8周后,对两组患者临床疗效、生化指标及外周血Th17及Th1表达水平进行评估.结果 观察组总有效率显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,观察组患者谷草转氨酶、丙氨酸氨基转移酶和总胆红素均低于对照组,凝血酶原活动度高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,观察组患者Th17、Th1细胞亚群比例低于对照组,观察组患者Th1/Th17值高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 解毒化瘀Ⅱ方可有效改善HBV相关急性肝衰竭患者肝功能,降低Th17及Th1表达水平,调节Th17/Th1,临床应用价值较高.

目的 探讨宫颈癌患者的辅助性T淋巴细胞(Th)1/T h2比例变化及其相关淋巴因子对宫颈癌细胞免疫逃避的机制,为宫颈癌的治疗提供试验依据.方法 选择83例2015年6月至2017年6月在该院诊断为宫颈癌的患者,静脉取血后分离血样的淋巴细胞,采用流式细胞术检测不同分期患者中Th1与T h2比例,采用免疫组织化学试验检测不同分期样品中白细胞介素(IL)-2、IL-4、干扰素(IFN)-γ的阳性率和人乳头瘤病毒(HPV)亚型分布.结果 不同国际妇产科联盟(FIGO)分期患者HPV亚型分布差异有统计学意义(P<0.05).Ⅱ 、Ⅲ期患者外周血中Th1比例与对照组相比明显下降(P<0.05).Th2比例在Ⅱ期和Ⅲ期患者外周血中上升幅度较大(P<0.05).IFN-γ、IL-2在Ⅲ期患者中的阳性率较对照组明显下降(P<0.05);IL-4的阳性率与对照组相比明显上升(P<0.05);血清IL-4、IFN-γ、IL-2水平在不同FIGO分期患者间有明显差异(P<0.05).结论 宫颈癌患者淋巴细胞比例失衡,可能与宫颈癌的病变关系密切.

目的 分析慢性荨麻疹与辅助性T细胞22(Th22)细胞免疫之间的相关性.方法 选取山东省泗水县人民医院检验科2014年8月至2017年4月收治的82例慢性荨麻疹患者作为观察组,82例体检健康者作为对照组.参照荨麻疹活动度评分(UAS)将慢性荨麻疹患者进一步分为轻度患者(总评分 ≤4分)与重度患者(总评分>4分).检测两组研究对象血清 γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-6、IL-22水平并进行比较,同时比较轻度患者与重度患者血清IFN-γ 、IL-6、IL-22水平.分析血清IFN-γ 、IL-6、IL-22水平与慢性荨麻疹的相关性.结果 观察组患者血清IFN-γ 、IL-6、IL-22水平[(2.42±0.49)、(2.30±0.62)、(116.24±22.55)pg/L]均显著高于对照组[(1.65±0.35)、(1.81±0.54)、(93.35±20.10)pg/L],差异均有统计学意义(P<0.05),重度患者血清IFN-γ 、IL-6、IL-22水平[(2.61±0.53)、(2.44±0.67)、(121.07±19.88)pg/L]均显著高于轻度患者[(2.22±0.47)、(1.96±0.59)、(111.03±15.89)pg/L],差异均有统计学意义(P<0.05).血清IFN-γ 、IL-6、IL-22水平均与慢性荨麻疹呈明显正相关(r依次为0.719、0.579、0.633,P<0.001).结论 慢性荨麻疹患者血清IFN-γ 、IL-6、IL-22水平均明显偏高,且病情越严重,血清IFN-γ 、IL-6、IL-22水平越高,与慢性荨麻疹的发病存在明显相关性.

目的 探讨内毒素耐受树突状细胞(endotoxin tolerant dendritic cell , ETDC)免疫功能的改变,观察其对脓毒症模型小鼠的作用.方法 以脂多糖刺激小鼠来源骨髓树突状细胞制备ETDC,流式细胞仪检测ETDC表面标志物主要组织相容性复合体( major histocompatibility complex , MHC)Ⅱ、CD86和CD11c表达水平,细胞计数试剂盒检测T淋巴细胞增殖率, ELISA检测细胞上清液中细胞因子水平.将36只BALB/c小鼠分为4组,空白对照组不做任何处理,假手术组行单纯切开缝合术,脓毒症组和ETDC回输治疗组行盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型前,分别尾静脉回输0.9%氯化钠溶液和ETDC与0.9%氯化钠混悬液.检测各组小鼠血丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase , ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspatate, AST)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factro, TNF)-α、白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-10水平和脾脏辅助性T-淋巴细胞( help T cells, Th)17/调节性T淋巴细胞(regulatory T cells, Treg)比例,观察小鼠肝脏、肾脏和回肠病理学表现.组间比较采用t检验或χ2检验.结果 ETDC表面MHCⅡ、CD86和CD11c表达分别为70.4%、43.1%、73.1%,较成熟树突状细胞(mature dendritic cell, mDC)的96.1%、89.5%和84.6%显著下降(χ2 值分别为56.47、83.78和23.29,均P＜0.01). ETDC细胞上清液中IL-10、TNF-α和IL-6分别为(978.04 ±56.70)、(980.34 ±111.96)和(12 743.03 ±865.81) ng/L, mDC分别为(741.35 ±99.23)、(1 703.11 ±117.00)和(19 052.28 ±1 145.84) ng/L,差异均有统计学意义(t值分别为5.073、10.93和10.76,均P＜0.01). ETDC和T淋巴细胞1∶5、1∶10共培养的增殖率分别为(676.95 ±85.99)%和( 514.00 ±106.39 )%, mDC 为(956.25 ±127.12)%和( 772.07 ± 214.08)%.ETDC回输治疗组小鼠肝脏、肾脏和回肠病理学改变明显轻于脓毒症组. ETDC回输治疗组小鼠血清ALT 和 AST 为(299.71 ±36.91)和(690.39 ±154.92) U/L, TNF-α、IL-6 和IL-10 分别为(0.067 ±0.005)、(0.428 ±0.051)和(0.058 ±0.005) ng/L,脓毒症组ALT和AST为(620.67 ±69.27)和(1 430.17 ±134.05)U/L, TNF-α、IL-6和IL-10分别为(0.085 ±0.007)、(0.774 ±0.088)和(0.036 ± 0.005)ng/L,差异均有统计学意义( t值分别为11.60、10.96、5.991、8.657 和8.042,均P＜0.01).ETDC回输治疗组小鼠Treg/Th17比例为23.4%,脓毒症组为60.8%( χ2 ＝28.69, P＜0.01).结论ETDC回输对脓毒症模型小鼠具有保护作用,可能是通过调节T淋巴细胞分化发挥了负向免疫调控作用.