目的:探讨α-酮戊二酸/铁依赖性双加氧酶同源蛋白1(ALKBH1)基因低甲基化在肝细胞癌发病机制及病情评估中的临床价值。方法:肝癌细胞(SMMC-7721、Bel-7402、MHCC97、HepG2及Hep3B)和正常肝细胞(HL-7702)购自美国典型培养物保存中心。选择2016年6月至2018年6月90例肝细胞癌患者为研究对象。采用重亚硫酸盐基因组测序聚合酶链反应(BSP)法检测ALKBH1基因甲基化并定量，采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测ALKBH1基因甲基化。统计并比较肝细胞癌患者肿瘤组织中ALKBH1基因甲基化和未甲基化患者平均疾病进展时间及3年生存率差异。计量资料比较行 t检验，计数资料采用 χ2检验。 结果:本组肝细胞癌患者肿瘤组织ALKBH1基因甲基化定量显著低于癌旁正常组织[甲基化定量(15.6±1.7)%比(57.8±3.5)%]，差异有统计学意义( χ2＝10.245， P<0.05)。SMMC-7721、Bel-7402、MHCC97、HepG2及Hep3B肝癌细胞ALKBH1基因甲基化定量显著低于HL-7702正常肝细胞[甲基化定量(25.1±2.1)%、(19.5±1.8)%、(16.7±1.3)%、(23.6±1.9)%、(20.3±1.5)%比(62.1±4.2)%]，差异有统计学意义( χ2＝16.133， P<0.05)。本组肝细胞癌患者肿瘤组织ALKBH1基因甲基化率显著低于癌旁正常组织(25.6%比63.3%)，差异有统计学意义( χ2＝36.897， P<0.05)。肝细胞癌患者肿瘤组织ALKBH1基因甲基化率在肿瘤最大径、病灶数量、分化程度和临床分期方面存在显著差异，肿瘤最大径≥5 cm、病灶数量多发、低中分化和Ⅲ期期肝细胞癌患者肿瘤组织ALKBH1基因甲基化率显著低于肿瘤最大径<5 cm、病灶数量单发、高分化和Ⅰ期+Ⅱ期肝癌患者(甲基化率分别21.2%比38.6%、5.0%比31.4%、12.8%比35.3%、4.0%比31.9%)，差异有统计学意义( χ2＝4.328、4.406、4.745、4.881，均 P<0.05)。肿瘤组织ALKBH1基因未甲基化患者平均疾病进展时间为(23.7±2.1)个月，3年生存率为52.4%，ALKBH1基因甲基化患者平均疾病进展时间为(29.5±2.7)个月，3年生存率为78.8%，ALKBH1基因未甲基化患者平均疾病进展时间和3年生存率显著低于ALKBH1基因甲基化患者( t或 χ2＝14.233、9.788， P<0.05)。 结论:ALKBH1基因低甲基化与肝细胞癌发病机制明显相关，可作为肝细胞癌病情及预后评估的基因水平标志物。

目的:分析丹参酮ⅡA对缺血/再灌注（I/R）所致心力衰竭（心衰）模型大鼠心肌重构的影响。方法:①体内实验：将30只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、心衰模型组和丹参酮ⅡA组，每组10只。采用结扎大鼠左冠状动脉（冠脉）待心电监护出现明显ST段抬高30 min后放松结扎线进行再灌注2 h来制备I/R后心衰模型；假手术组于同期开胸，仅丝线绕过左冠脉而不结扎。丹参酮ⅡA组术后3 d开始腹腔注射丹参酮ⅡA 10 mg/kg，连续用药9周；其他两组于同期腹腔注射等量生理盐水。干预9周后观察各组大鼠的行为学表现，检测血流动力学相关指标。处死大鼠取心脏组织，Masson染色后光镜下观察心肌组织纤维化程度；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测半乳糖凝集素-3（Galectin-3）含量；采用荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的mRNA表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测MMP-2和TIMP-1的蛋白表达。②体外实验：提取并分离大鼠的原代心肌成纤维细胞，分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ组（给予7~10 mmol/L血管紧张素Ⅱ）和血管紧张素Ⅱ+丹参酮ⅡA组（同时给予7~10 mmol/L血管紧张素Ⅱ+ 5~10 mmol/L丹参酮ⅡA）。分别于培养24 h和48 h时，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测细胞吸光度（ A）值并计算细胞增殖率；采用qRT-PCR法检测型胶原、型胶原、MMP-2和TIMP-1的mRNA表达；采用ELISA法检测Galectin-3含量。 结果:①体内实验：大鼠活动状态、毛发顺帖程度及进食量由好到差依次为假手术组、丹参酮ⅡA组和心衰模型组。与假手术组相比，心衰模型组大鼠心率（HR）明显下降、心功能明显受损，Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1的mRNA和蛋白表达及Galectin-3含量均明显升高，MMP-2的mRNA和蛋白表达均明显降低。与心衰模型组相比，丹参酮ⅡA组大鼠HR明显升高、心功能明显改善，Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的mRNA表达均明显降低，TIMP-1的mRNA和蛋白表达及Galectin-3含量均明显降低，MMP-2的mRNA和蛋白表达均明显升高，以制模9周变化最为明显〔Ⅰ型胶原mRNA（2 -ΔΔCt）：4.70±1.19比10.21±1.62，Ⅲ型胶原mRNA（2 -ΔΔCt）：3.03±0.46比13.84±1.93，TIMP-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.90±0.19比4.55±0.43，TIMP-1/GAPDH：0.33±0.04比0.67±0.05，Galectin-3（ng/L）：489.93±79.30比821.72±94.09，MMP-2 mRNA（2 -ΔΔCt）：0.37±0.07比0.03±0.01，MMP-2/GAPDH：0.69±0.09比0.21±0.04，均 P<0.05〕。Masson染色显示，心衰模型组大鼠心肌组织出现明显纤维化，而丹参酮ⅡA干预能够改善大鼠心肌组织的纤维化。②体外实验：与空白对照组相比，血管紧张素组培养24 h和48 h心肌成纤维细胞增殖率、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1表达及Galectin-3含量均明显升高，MMP-2表达明显降低。与血管紧张素组相比，血管紧张素+丹参酮ⅡA组心肌成纤维细胞增殖率及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1表达及Galectin-3含量均明显降低，MMP-2 mRNA表达明显升高，以培养48 h改变最明显〔细胞增殖率：（57.0±3.7）%比（67.0±2.4）%，Ⅰ型胶原mRNA（2 -ΔΔCt）：551.43±67.10比871.48±12.25，Ⅲ型胶原mRNA（2 -ΔΔCt）：233.76±18.73比385.51±31.35，TIMP-1 mRNA（2 -ΔΔCt）：238.69±17.37比351.84±26.17，Galectin-3（ng/L）：283.76±28.73比415.51±31.35，MMP-2 mRNA（2 -ΔΔCt）：108.54±12.10比51.47±6.25，均 P<0.05]。 结论:丹参酮ⅡA可以改善I/R后心衰大鼠的心功能，抑制心肌纤维化，改善心衰大鼠的心肌重构。

目的 探讨临床检测的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中Ⅲ型分泌系统(T3SS)4种毒力基因(exoT、exoY、exoS、exoU)的表达情况及其对抗菌药物的耐药性.方法 收集安徽医科大学附属安庆第一人民医院2022-2023年临床检测的各种来源的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌87株,采用Vitek2-Compact仪器对菌株进行鉴定,并且进行药敏试验,采用聚合酶链反应对T3SS的4种毒力基因(exoT、exoY、exoS、exoU)进行检测,比较不同毒力基因型组合与抗菌药物耐药性之间的关系.结果 87株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌表达exoT与exoY基因的阳性率均为100.00％(87/87),exoS基因阳性率为77.01％(67/87),exoU基因阳性率为27.59％(24/87).共检出4种类型的T3SS毒力基因型组合,以exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合为主,阳性率为71.26％(62/87),其次是exoT+/exoY+/exoS-/exoU+基因型组合,阳性率为21.84％(19/87).药敏试验结果显示,exoT+/exoY+/exoS-/exoU+基因型组合对大部分常见抗菌药物,如阿米卡星、妥布霉素、头孢吡肟、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、哌拉西林的耐药率均明显高于exoT+/exoY+/ex-oS+/exoU-基因型组合,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 该院检出的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌携带表达的T3SS毒力基因主要以exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合为主,不同毒力基因型组合的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对常见抗菌药物的耐药性存在差异.

目的 探讨镰形棘豆总黄酮对四氯化碳诱发的肝纤维化(HF)大鼠的作用,以及对肝转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路的影响.方法 将48只雄性大鼠随机分为正常组(腹腔注射花生油,灌胃给予0.9％NaCl)、模型组(腹腔注射40％CC14花生油溶液诱导HF模型+灌胃给予0.9％NaCl)、阳性对照组(HF模型+灌胃秋水仙碱0.2 mg·kg-1)和低、中、高剂量实验组(HF模型+分别灌胃镰形棘豆总黄酮提取物100、200、400 mg·kg-1),每组8只,连续4周.用苏木精-伊红(HE)、Masson染色方法观察组织病理变化;检测血清肝功能、肝纤维化水平;检测血清炎症因子水平,用荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定肝中基因的表达水平.结果 模型组大鼠肝组织病理损伤严重,大量炎症因子和胶原纤维堆积,而其余给药组均有不同程度缓解.正常组、模型组、阳性对照组和低、中、高剂量实验组的谷丙转氨酶水平分别为(49.28±12.44)、(5 885.42±948.37)、(4 454.60±489.27)、(4 650.47±843.53)、(3 761.75±887.30)和(3 544.90±1 066.75)μg·L-1,谷草转氨酶水平分别为(186.90±46.89)、(5 936.23±793.81)、(3 971.37±780.28)、(4 360.30±863.35)、(3 943.10±439.47)和(3 971.38±631.08)μg·L-1,透明质酸水平分别为(45.08±17.16)、(104.32±36.06)、(66.83±20.09)、(70.30±21.07)、(60.00±9.68)和(59.02±10.73)μg·L-1,层粘连蛋白水平分别为(23.13±3.89)、(60.85±13.66)、(35.67±9.92)、(39.98±9.39)、(36.55±12.21)和(34.68±24.83)μg·L-1,Ⅲ型前胶原水平分别为(24.98±5.34)、(82.58±30.14)、(40.70±16.14)、(51.08±23.21)、(43.60±12.48)、(44.20±11.66)μg·L-1,白细胞介素(IL)-1β 水平分别为(37.63±1.24)、(46.10±3.23)、(39.22±2.36)、(41.33±0.93)、(40.25±2.04)和(39.18±2.23)pg·mL-1,肿瘤坏死因子-a 水平分别为(314.58±20.56)、(383.71±16.97)、(349.00±7.93)、(348.88±25.11)、(325.75±27.84)和(335.07±21.33)pg·mL-1,TGF-βl mRNA 相对表达水平分别为1.00±0.00、60.99±15.70、9.61±1.59、7.37±1.09、6.41±0.64 和6.87±1.09,Smad7 mRNA 相对表达水平分别为 1.00±0.00、0.34±0.05、0.21±0.03、0.35±0.02、0.38±0.02和0.42±0.03.模型组的上述指标与正常组比较,中、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 镰形棘豆总黄酮对CC,4诱导的大鼠肝纤维化具有保护作用,其机制可能与调节TGF-β/Smad通路有关.

旨在探讨坤泰胶囊(Kuntai Capsules,KTC)对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型大鼠的影响及可能的作用机制.将50只雌性SD大鼠随机分为5组:对照组,模型组,KTC低、中、高剂量组,每组10只.除对照组外,其余各组采用颈背部皮肤注射脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)联合高脂饮食(high-fat diet,HFD)诱导PCOS大鼠模型,造模 28 d.将 KTC 溶于等量生理盐水,分别予以低(0.315 g·kg-1·d-1)、中(0.63 g·kg-1·d-1)、高(1.26 g·kg-1·d-1)剂量进行灌胃,对照组和模型组均给予等量生理盐水,持续灌胃15 d.给药结束后,血糖仪测定空腹血糖(FBG);酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清空腹胰岛素(FINS)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH),计算LH/FSH比值和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理形态;蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光法检测Ⅲ型胶原α1链(COL3A1)、凋亡因子 Bcl-2 关联 X 的蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)和 B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR,RT-PCR)检测卵巢组织中COL3A1、Bax、Bcl-2 mRNA表达水平.结果显示,与对照组相比,模型组大鼠体质量、FBG、FINS、LH、T、LH/FSH、HOMA-IR水平均升高(P＜0.05或P＜0.01),FSH水平下降(P＜0.05),其阴道脱落细胞可见大量白细胞,以动情间期为主;卵巢表面囊性突起较多,颗粒细胞层厚度减少,卵母细胞缺失;卵巢组织中COL3A1、Bax蛋白表达水平上升(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.01),卵巢组织中COL3A1、Bax mRNA表达水平上升(P＜0.05).与模型组相比,KTC低、中、高剂量组大鼠体质量、FBG、FINS、LH、T、LH/FSH、HOMA-IR水平均下降(P＜0.05或P＜0.01),KTC中、高剂量组FSH水平升高(P＜0.05或P＜0.01);KTC低、中、高剂量组大鼠逐渐出现稳定的动情周期;卵巢表面较光滑,卵巢组织可见卵母细胞及成熟卵泡,颗粒细胞层厚度增加;KTC低、中剂量组COL3A1蛋白表达水平下降(P＜0.05或P＜0.01),KTC低剂量组Bax蛋白表达水平下降(P＜0.05或P＜0.01)、Bcl-2蛋白表达水平上升(P＜0.01);KTC低剂量组COL3A1、Bax mRNA表达水平下降(P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达水平上升(P＜0.05).综上所述,KTC通过调节AGE-RAGE 信号通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,减少卵泡闭锁,促进胰岛素分泌,降低血糖和体质量,恢复血清激素水平,改善PCOS的症状,减轻卵巢形态学损伤,恢复卵巢功能,对PCOS的治疗具有重要价值.

该研究通过对皮革肾岛衣地衣型真菌转录组数据的分析,利用RT-PCR技术,首次克隆得到1个Ⅲ型聚酮合酶基因(N p PK S3),并分析该基因在不同培养基上的表达,以选择皮革肾岛衣地衣型真菌的最佳培养基,为研究NpPKS3基因功能奠定基础,并为异源表达皮革肾岛衣地衣型真菌的聚酮类化合物提供研究材料.结果表明:(1)NpPKS3基因(GenBank登录号MF351559)全长1335 bp,编码444个氨基酸,其产物为NpPKS3蛋白,在细胞质基质中发挥功能.(2)系统进化分析显示,N p PK S3基因编码的氨基酸序列与Ⅲ型聚酮合酶的csyB亚组聚为一支,推测该基因编码csyB类酶蛋白.(3)采用"一菌多产物"策略研究发现,N p PK S3基因在BMG培养基中表达能力最强,在BD培养基上表达能力最弱.

目的 调查研究患儿感染耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)耐药性及基因分型,为MRCNS感染的抗菌药物选择、NRCNS感染的防治提供科学参考依据.方法 收集2011年1月-2016年12月期间儿科164例感染性疾病患儿送检的164份临床标本,行菌株培养、表型筛选;采用标准琼脂倍比稀释法对MRCNS进行抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)检测,确定耐药状况;采用聚合酶链反应(PCR)扩增基因检测葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)各分型.结果 164份标本中共检出78株MRCNS,检出率为47.56％;其中耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE) 35株占44.87％,耐甲氧西林溶血性葡萄球菌(MRSH) 19株占24.36％,耐甲氧西林人葡萄球菌(MRSHo) 10株占12.82％;MRCNS对青霉素、头孢哌酮、头孢曲松、头孢噻肟、亚胺培南均完全耐药,耐药率为100.00％,对红霉素、阿奇霉素、克林霉素的耐药率均＞80.00％,对万古霉素完全敏感,耐药率为0;MRCNS的SCCmec基因分型Ⅰ～Ⅵ型有检出,Ⅶ～Ⅷ型未检出,其中Ⅲ型基因38株占48.72％,混合型19株占24.36％,7株Ⅳ型占8.97％.结论 患儿感染性疾病时MRCNS检出率较高,MRCNS对临床常用的多种抗菌药物耐药率高,具有多药耐药性,MRCNS所携带的SCCmec基因型主要为Ⅲ型及混合型,以上基因可能与MRCNS耐药关系密切.

了解临床分离的产ESBLs大肠埃希菌(ESBLs-producing Escherichia coli,ESBL-EC)中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子及ESBL-EC基因型的分布.收集2014年1月至12月某三甲医院住院患者分离的大肠埃希菌,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性,双纸片协同试验确定ESBL-EC,采用聚合酶链反应(PCR)对整合子基因和ESBLs基因进行检测.K-B法比较整合子阳性菌株与阴性菌株的耐药率.结果发现,98株临床非重复ESBL-EC对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类、单环酰胺类和庆大霉素耐药率均大于50％,对妥布霉素耐药率为31.62％,对呋喃妥因、阿莫西林/克拉维酸和阿米卡星较敏感,分别为11.11％、13.4％和6.12％;对碳青霉烯类抗菌素、替加环素和哌拉西林/他唑巴坦敏感率为100％.98株菌中检出47株含Ⅰ类整合子(47.96％),3株含Ⅱ类整合子(3.06％),所有菌株中有1株同时含Ⅰ类和Ⅱ类整合子,未检出Ⅲ类整合子.整合子阳性菌株对四环素和复方新诺明的耐药率高于整合子阴性菌株(P＜0.05).98株菌中β-内酰胺酶基因TEM、CTX-M-9、CTX-M-1、CTX-M-2和SHV阳性率分别为62.24％、53.06％、32.65％、4.08％和3.06％,ESBL-EC基因分型分布以TEM合并CTX-M-9型(共30株)最多见,占30.61％.结果表明,Ⅰ类整合子在产ESBLs大肠埃希菌中分布广泛,本研究尚不足以证明整合子的存在可影响ESBL-EC菌株抗生素耐药水平.同时携带TEM和CTX-M-9基因是安徽医科大学解放军174临床学院产ESBLs大肠埃希菌临床耐药菌株产生的主要原因.

植物Ⅲ型聚酮合酶(Polyketide synthases,PKSs) 催化形成一系列结构迥异、生理活性不同的聚酮类化合物的基本骨架结构,是聚酮类化合物生物合成途径的关键酶.目前已从植物中克隆和鉴定了多种功能不同的Ⅲ型 PKSs.定点突变技术是研究蛋白质结构与功能之间复杂关系的重要方法.文中综述了近年来基于定点突变的植物Ⅲ型 PKSs 结构与功能关系的研究进展,包括利用定点突变技术修饰各种可能影响植物Ⅲ型 PKSs 结构的氨基酸残基,来研究其对功能的影响(如控制起始底物的特异性、缩合反应次数以及中间产物环化方式),以期为植物Ⅲ型PKSs结构与功能关系的研究提供参考.

作为新型Ⅲ型聚酮合酶,米曲霉来源的CsyB能够依次接受一个起始单元为短链脂肪酰辅酶A、一个延伸单元为丙二酰辅酶A和另一个延伸单元为乙酰乙酰辅酶A的3个底物形成短链的csypyrone B1-3.基于CsyB的晶体结构分析,显示它的活性中心存在一个长约16(A)的能够接受脂肪酰辅酶A结合通道,这个通道很可能能够接受多种底物.为了检测该酶的底物多样性,将CsyB基因导入到存在长链脂肪酰辅酶A前体的大肠杆菌中表达.高效液相结果显示,相比对照菌株,重组菌株产生了一系列长链的csypyrone衍生物.利用紫外可见光特征吸收值和高分辨液相色谱-质谱联用仪对这些新产物作了初步分析.对3个具有羟基的csypyrone产物的结构进行了核磁共振一维谱和二维谱的详细鉴定,确定了其羟基的位置.上述结果显示,CsyB具有广泛的底物特异性,不但可以接受多种长链饱和或不饱和脂肪酰辅酶A,还可以接受具有羟基修饰的长链脂肪酰辅酶A作为底物.