目的:探讨三七皂苷对经皮动脉腔内血管成形术后炎症、应激和增生的影响。方法:30只新西兰兔颈动脉模型，10只作为对照组，20只大白兔用球囊制备颈动脉损伤模型，随机数字表法分为模型组和三七皂苷组，每组10只。三七皂苷组给予腹腔注射三七皂苷R1 50 mg/kg，对照组和模型组给予等体积生理盐水。治疗4周后，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定3组炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6的水平；采用放免法测定3组氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽氧化物酶(GSH-px)和丙二醛(MDA)的水平。HE染色分析血管增生情况。蛋白质免疫印迹分析血管核因子-κB(NF-κB)信号通路变化。计量数据比较采用 t检验。 结果:三七皂苷组血管内膜面积[(0.15±0.02) mm 2]明显低于对照组[(0.30±0.03) mm 2]，差异有统计学意义( t＝14.300， P<0.05)。三七皂苷组血管内膜/中膜比(1.46±0.17)明显低于模型组(2.69±0.21)，差异有统计学意义( t＝14.240， P<0.05)。三七皂苷组大白兔血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平[(78.36±13.70)、(67.80±12.44)、(47.40±13.34) ng/ml]明显低于模型组[(129.50±15.17)、(133.40±14.79)、(73.40±13.34) ng/ml]，差异有统计学意义( t＝7.676、10.320、3.919， P<0.05)。三七皂苷组大白兔血清中SOD和GSH-Px水平[(36.10±5.02)、(45.90±7.06) ng/ml]明显高于模型组[(24.70±5.33)、(25.90±5.15) ng/ml]，差异有统计学意义( t＝25.820、7.224， P<0.05)。三七皂苷组大白兔血清中MDA水平[(4.68±0.74) nmol/ml]明显低于模型组[(7.51±0.53) nmol/ml]，差异有统计学意义( t＝9.854， P<0.05)。三七皂苷组大白兔血管磷酸化p65和p50水平(1.45±0.13、0.91±0.07)明显低于模型组(2.01±0.13、1.57±0.18)，差异有统计学意义( t＝9.589、10.490， P<0.05)。 结论:三七皂苷可显著抑制动脉损伤后血管增殖、炎症和氧化应激，主要通过NF-κB通路来实现的。

目的:评价腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-沉默信息调节因子1(SIRT1)-核因子-κB(NF-κB)信号通路在三七总皂苷(PNS)减轻机械通气大鼠脑损伤中的作用。方法:SPF级雄性SD大鼠72只，10周龄，体质量357～377 g，采用随机数字表法将大鼠分为6组( n＝12)：假手术组、模型组、PNS低剂量组、PNS中剂量组、PNS高剂量组和PNS高剂量＋compound C组。PNS低剂量组、PNS中剂量组和PNS高剂量组分别腹腔注射PNS 12.5、25.0和50.0 mg/kg；PNS高剂量＋compound C组在腹腔注射PNS 50 mg/kg后10 min时，尾静脉注射compound C 0.2 mg/kg；假手术组和模型组腹腔注射10 ml/kg生理盐水。各组于机械通气前30 min注射药物或生理盐水。机械通气模型：模型组通气频率40次/min，潮气量40 ml/kg，机械通气6 h；假手术组机械通气6 h，潮气量10 ml/kg。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆功能，采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α及多巴胺(DA)浓度，尼氏染色进行海马CA1区神经元计数，采用Western blot法检测海马CA1区P2Y1嘌呤受体(P2Y1R)、(肌)营养不良短小蛋白结合蛋白1(dysbindin-1)、AMPK的表达、磷酸化SIRT1(p-SIRT1)/SIRT1比值和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)/NF-κB比值。 结果:与假手术组比较，模型组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，目标象限停留时间缩短，血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高，血清DA浓度降低，海马CA1区神经元计数降低，P2Y1R、dysbindin-1表达上调，AMPK表达下调，p-SIRT1/SIRT1比值降低，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高( P<0.05)；与模型组比较，PNS低剂量组、PNS中剂量组和PNS高剂量组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增多，目标象限停留时间延长，血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度降低，血清DA浓度升高，海马CA1区神经元计数升高，P2Y1R、dysbindin-1表达下调，AMPK表达上调，p-SIRT1/SIRT1比值升高，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低( P<0.05)；与PNS高剂量组比较，PNS高剂量＋compound C组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，目标象限停留时间缩短，血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高，血清DA浓度降低，海马CA1区神经元计数降低，P2Y1R、dysbindin-1表达上调，AMPK表达下调，p-SIRT1/SIRT1比值降低，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高( P<0.05)。 结论:PNS减轻机械通气大鼠脑损伤的机制可能与激活AMPK-SIRT1-NF-κB信号通路有关。

目的 建立血塞通片溶出度检验方法,测定血塞通片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的整合溶出度.方法 以小杯法进行溶出度实验,采用高效液相色谱法(HPLC)测定5种指标成分的溶出量,采用质量分数权重系数法进行溶出度整合.绘制溶出曲线,采用f2相似因子法比较各成分溶出曲线与整合溶出曲线的相似性,对整合溶出数据进行模型拟合,计算溶出参数T50、Td和T85.结果 以水为溶出介质,转速50 r/min,60 min取样.5种指标成分溶出曲线与整合溶出度溶出曲线的f2相似因子分别为64.5,61.6,79.8,60.0和68.2.溶出数据拟合模型以Weibull模型最优,溶出参数T50、Td和T85分别为12.29 min、18.09 min和56.09 min.结论 建立的溶出度检查方法准确、可行,采用质量分数权重系数法整合溶出度能较好地表征血塞通片的体外溶出行为,可为血塞通片的质量一致性评价研究及质量控制提供技术借鉴.

目的:通过血浆代谢组学研究三七皂苷R1(notoginsenside R1,NGR1)治疗神经炎症的分子作用机制.方法:采用腹腔注射 0.83 mg?kg-1 脂多糖(LPS)构建小鼠神经炎症模型,应用NGR1(30 mg?kg-1)进行给药治疗,眼眶静脉丛取血并分离血浆.在使用苏木素-伊红(HE)染色法检测小鼠脑组织损伤情况、采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测神经炎症相关指标及酶联免疫吸附反应(ELISA)技术分析血清炎症因子变化的基础上,应用液相色谱-质谱法(LC-MS)对各组小鼠血浆样品进行代谢组学分析,通过人类代谢组数据库(HMDB)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行差异内源代谢物的鉴定,并应用MetaboAnalyst和Metscape数据库进一步分析差异内源代谢物的关键代谢途径,最后通过qRT-PCR检测调控关键代谢途径基因表达水平的变化.结果:NGR1 能够明显改善小鼠脑组织神经损伤,明显降低中枢神经炎症因子离子化钙结合适配分子 1(Iba-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6 的mRNA水平,显著提高转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA水平,显著降低血清炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.此外,代谢组学发现模型组与给药组之间小鼠血浆中皮质酮、吲哚丙酮酸、泛酸、12S-羟基 5Z,8Z,10E,14Z-二十碳四烯酸、PC(18:3(9Z,12Z,15Z)/16:1(9Z))等 22 个差异内源代谢物发生明显变化,主要涉及甘油磷脂代谢、亚油酸代谢及类固醇激素生物合成等代谢通路.qRT-PCR结果显示,给药后能显著逆转关键代谢途径中 2A型磷脂酶A2(PLA2G2A)、1B型磷脂酶A2(PLA2G1B)、12A型磷脂酶A2(PLA2G12A)、醛酮还原酶 1D1(AKR1D1)、羟基类固醇 11β脱氢酶 1(HSD11B1)、羟基类固醇 11β脱氢酶 2(HSD11B2)mRNA表达水平.结论:NGR1 对LPS诱导的神经炎症具有治疗作用,并可能通过调控皮质酮等关键代谢物及甘油磷脂代谢、亚油酸代谢及类固醇激素生物合成等关键途径发挥抗神经炎症的作用,将为深入研究NGR1 抗神经炎症的作用机制提供参考.

目的 探究三七茎叶总皂苷改善缺血性脑卒中、促进缺血性脑卒中损伤后血管新生作用及机制.方法 采用网络药理学技术预测三七茎叶总皂苷促进缺血性脑卒中损伤后血管新生可能的机制,利用分子对接技术对筛选出的核心靶点与主要成分的结合进行初步验证.雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及三七茎叶总皂苷低、中、高剂量(73、146、292 mg/kg)组和 3-正丁基苯酞(3-n-butylphthalide,NBP,60 mg/kg)组,每组 20 只.建立大鼠脑中动脉阻塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,给药 7 d后取材.每隔 1 d对大鼠进行神经功能评分;通过 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠脑梗死体积及脑神经细胞形态状况;通过激光多普勒血流仪观察大鼠梗死脑侧血流恢复情况;通过光学相干断层扫描血管成像观察大鼠脑微血管新生状况;通过ELISA和Western blotting测定与血管新生相关蛋白表达.结果 网络药理学分析显示,共收集到 60 个三七茎叶总皂苷活性成分和 297 个关键靶点,与血管新生和缺血性脑卒中取交集后得到 64 个交集靶点,并且三七茎叶总皂苷主要成分与这些核心靶点均有较好结合力.三七茎叶总皂苷促进血管新生改善缺血性脑卒中的关键通路主要富集在磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)等通路.动物实验结果显示,与模型组比较,三七茎叶总皂苷能够显著降低MCAO/R大鼠神经功能评分(P＜0.01),改善大鼠神经功能,降低大脑梗死体积(P＜0.01、0.001),减少脑组织损伤,恢复梗死脑侧脑血流(P＜0.05、0.01、0.001),促进梗死脑侧皮层微血管密度(P＜0.05、0.01、0.001),提高血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)水平和HIF-1α、PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达(P＜0.05、0.01、0.001).结论 三七茎叶总皂苷能够显著改善MCAO/R大鼠脑损伤,有效促进MCAO/R大鼠缺血脑区血管新生,促血管新生机制可能与提高MCAO/R大鼠大脑中VEGF、bFGF、HIF-1α表达和激活PI3K/Akt通路有关.

目的 基于网络药理学与分子对接技术探讨三七总皂苷治疗脓毒症的作用机制.方法 通过检索TCMSP、Swiss Target Prediciton和PharmMapper数据库得到三七总皂苷的作用靶点;在Genecard、Drugbank、Disgenet和OMIM数据库检索脓毒症的疾病相关靶点;将筛选出的三七总皂苷作用靶点与脓毒症疾病相关靶点取交集,作为三七总皂苷治疗脓毒症的潜在作用靶点.通过STRING数据库构建潜在作用靶点的蛋白互作(PPI)网络,并筛选关键靶点;对潜在作用靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析,构建药物-疾病-靶点-通路网络;利用AutoDock Vina软件对三七总皂苷 5 种单体皂苷成分与三七总皂苷治疗脓毒症的关键靶点进行分子对接验证.结果 获得三七总皂苷治疗脓毒症的潜在作用靶点 206 个;筛选得到 AKT1、TP53、SRC、STAT3、JUN、TNF、IL6、MAPK1、PIK3R1 和IL1B等关键靶点.潜在作用靶点GO功能富集分析得到 2 548 项生物过程(BP)条目,174 项分子功能(MF)条目,47 项细胞组分(CC)条目;KEGG通路富集分析共得到 171 条信号通路.三七总皂苷主要活性成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd与关键靶点AKT1、TP53、STAT3、SRC、JUN具有较强的结合活性.结论 三七总皂苷可能通过AKT1、TP53、SRC、STAT3、TNF等关键靶点,作用于PI3K-Akt、AGE-RAGE等主要信号通路,进而影响脓毒症的炎症反应、细胞凋亡和凝血反应等生理过程,发挥治疗脓毒症的作用.

目的:利用网络药理学和实验验证探究三七总皂苷活性成分调控铁死亡干预口腔黏膜下纤维化的药效物质基础、潜在靶标及作用机制.方法:结合前期研究,通过文献检索确定网络药理学分析的三七总皂苷中的候选有效成分,并通过PubChem(有机小分子生物活性数据库,http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)检索有效成分,使用GeneCards数据库获得三七总皂苷活性成分的对应靶基因.在GeneCards、OMIM数据库中搜集口腔黏膜下纤维化的相关靶点.将三七总皂苷活性成分与口腔黏膜下纤维化的交集靶点通过Cytoscape 3.7.0软件绘制相应"活性成分-作用靶点"网络,并借助CytoHubba插件获得三七总皂苷活性成分的度值(Degree)排名,并对关键核心靶点进行分析.基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析通过DA-VID数据库进行.将三七总皂苷活性成分干预口腔黏膜下纤维化的靶基因与通过FerrDb数据库获取得到的铁死亡过程中的标记基因及调控因子取交集,获得通过调控铁死亡过程干预口腔黏膜下纤维化的三七总皂苷靶基因.利用AutoDockTool1.5.7软件进行化合物和核心靶点的分子对接.人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞系)体外培养后分为空白对照组、模型对照组、三七总皂苷12.5、25、50 μg/mL组;各组在相应不含药或含药的完全培养液中培养24 h后收集细胞;采用Western blot法检测各组细胞I型胶原(COL-Ⅰ)、低氧诱导因子-1(HIF-1α)、轻链溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达;透射电镜观察细胞线粒体形态学变化.结果:共筛选出三七总皂苷中5个活性成分,包括人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、三七皂苷R1和人参皂苷Re,以及前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、一氧化氮合酶2(NOS2)等20个作用靶标.三七总皂苷中的5个活性成分与RNA聚合酶Ⅱ启动子对pri-miRNA转录的正向调控、细胞对缺氧的反应及转化生长因子受体信号通路等生物过程,核浆、胞质和胞核等细胞组成,酶结合、相同的蛋白质结合和RNA聚合酶ii序列特异性DNA结合转录因子结合等分子功能密切相关;KEGG发现其可通过介导PI3K-AKT信号通路、癌症途径、脂肪细胞因子信号通路、肿瘤中PD-L1表达和PD-1检查点等信号通路调控铁死亡,从而发挥干预口腔黏膜下纤维化的作用.细胞实验结果表明,模型对照组较空白对照组COL-Ⅰ、HIF-1α蛋白表达显著上调,SLC7A11、GPX4蛋白表达显著下调(P＜0.01);与模型对照组比较,三七总皂苷12.5、25、50 μg/mL组COL-Ⅰ、HIF-1α蛋白表达明显下调(P＜0.05),SLC7A11、GPX4蛋白表达明显上调(P＜0.05).空白对照组细胞线粒体形态结构正常;模型对照组细胞线粒体形态结构萎缩,线粒体变小,嵴明显减少,呈典型的铁死亡表现;三七总皂苷12.5、25、50 μg/mL组细胞线粒体形态结构逐渐恢复正常.结论:三七总皂苷具有多成分、多靶点、多通路干预口腔黏膜下纤维化的作用特点,下调HIF-1α信号通路抑制铁死亡可能是其抗纤维化重要机制之一.

目的 鉴定九味肝泰胶囊的化学成分,同时测定制剂中 10 种指标成分的含量.方法 查阅TCMSP、ChemSpider、中国知网、PubMed等数据库中的相关文献,收集制剂的核心化学成分 181 个,采用Agilent"formula-database generator"软件建立化学成分数据库,采用高效液相色谱-飞行时间质谱联用法鉴定制剂的化学成分;采用超高效液相色谱串联质谱法测定制剂中 10种指标成分的含量.结果 共鉴定出 45种化学成分.姜黄素在 1～50 ng/mL,大黄酚、大黄素、吉马酮、五味子醇甲、五味子甲素在 200～10000 ng/mL,尿囊素、黄芩苷、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 在 1 000～50 000 ng/mL质量浓度范围内与待测成分和内标峰面积比值线性关系良好(r均大于 0.999 0),定量限分别为 0.05,10,0.5,10,0.05,0.05,0.05,0.5,0.5,10 ng/mL,检测限分别为 0.01,1,0.25,1,0.01,0.01,0.01,0.1,0.1,1 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于 5.0%;平均加样回收率为 98.13%～102.64%,RSD为 0.54%～4.10%(n=6).结论 该方法快速简便,可用于九味肝泰胶囊的化学成分鉴定和指标成分含量测定.

人参为补气强身之要药,三七具有散血定痛之功,常用于治疗心脉瘀阻所致的心肌缺血性疾病.线粒体功能障碍常伴随线粒体形态的异常改变,其可塑性和动态性在心血管疾病中至关重要.该研究将原代乳鼠心肌细胞缺氧培养 4 h再复氧2 h,构建心肌细胞缺氧复氧损伤模型.采用荧光探针MitoTracker Deep Red标记心肌细胞线粒体,Hoechst 33342 标记细胞核,使用高内涵荧光成像系统采集心肌细胞荧光图像,运用ImagePro Plus软件对图像自动批量处理并提取线粒体形态特征的量化参数,选取代表性参数用于评价线粒体形态功能改变进而筛选人参、三七有效组分;进一步整合UPLC-Triple-TOF-MS技术,筛选人参、三七有效成分.结果显示组分RS-2、RS-4、SQ-1、SQ-4可以同时显著提高线粒体 3 个形态参数值,增加线粒体长度、分支程度和面积,有效改善缺氧复氧损伤引起的心肌细胞线粒体形态改变.对有效组分的主要成分筛选发现 20(R)-人参皂苷Rg3、人参皂苷Re、七叶胆苷ⅩⅦ对心肌细胞线粒体保护作用最佳,进一步研究表明 20(R)-人参皂苷Rg3 可能通过上调视神经萎缩蛋白 1(optic atrophy 1,OPA1)和线粒体融合蛋白 2(mitofusin 2,MFN2)表达,人参皂苷Re和七叶胆苷ⅩⅦ通过上调OPA1 蛋白表达,促进线粒体膜融合,减轻线粒体损伤,从而发挥心肌细胞的保护作用.该研究为从人参、三七中发现创新药物提供了实验依据,也为中药心肌保护有效组分与有效成分的规模化筛选提供了新方法.

目的 对母鸡油制三七的质量进行评价.方法 采用LC-MS、HPLC法对皂苷类成分进行定性定量分析,GC-MS法鉴定脂肪酸类成分,并与生三七进行比较.结果 共鉴定出 15 种皂苷类成分,母鸡油制三七比生三七多出人参皂苷Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、Rk1、Rg5,并且三七皂苷R1 及人参皂苷Rg1、Re、Rb1 含量更低,人参皂苷Rh1 含量更高,其中人参皂苷Rk3、Rg5 含量分别为 2.464 1、20.387 1 mg/g;共鉴定 22 种脂肪酸类成分,其中母鸡油制三七 19种,生三七 8 种,前者比后者多出棕榈油酸、肉豆蔻酸、花生四烯酸、11Z-十四碳烯酸等脂肪酸.结论 母鸡油制三七比生三七多出人参皂苷Rg6、Rg4 等成分,可为该炮制品今后开发利用及相关新药研制奠定基础.