目的:探讨丝氨酸-精氨酸蛋白激酶2(SRPK2)与前列腺癌细胞周期的相关性。方法:通过皮尔森相关性分析探索癌症基因组图谱(TCGA)数据库中前列腺癌和SRPK2的相关基因集，并进一步将SRPK2相关基因集导入蛋白质相互作用关系检索工具(STRING)蛋白互作网络在线分析网站，通过Cytoscape软件进行可视化，提取与SRPK2相关联蛋白子网络；将上述分析所得基因通过京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据集分析出与SRPK2潜在相关的通路，运用基因探针富集分析(GSEA)富集分析探索SRPK2所激活和抑制的相关通路；构建SRPK2敲低的前列腺癌细胞株DU145，分为空白载体组(DU145-KO-NC)和敲低组(DU145-KO-SRPK2)，通过细胞周期检测试剂盒、细胞增殖-毒性检测试剂盒、划痕实验、侵袭实验检测细胞的周期变化、增殖、迁移和侵袭能力，组间比较采用独立样本 t检验。 结果:TCGA数据库分析结果显示有2 158个基因在表达量上与SRPK2呈正相关，779个基因与SRPK2呈负相关；通过STRING蛋白互作网络在线分析，SRPK2与SF3B1、SRSF10、PRPF40A、PRPF4B、DDX46、BCLAF1、NUDT21、CLASRP等基因除了在表达量上存在统计学相关性，在蛋白层面上同样存在着相互作用的关系。对2 937个与SRPK2相关的基因进行功能和通路分析，结果显示SRPK2与细胞周期相关通路相关，如有丝分裂纺锤(Mitotic Spindle)，G 2~M期检查点(G 2~M Checkpoint)，E2F靶点(E2F Targets)，Myc-V1靶点(Myc-V1 Targets)通路。KEGG数据集表明与SRPK2潜在相关的通路有细胞周期(Cell Cycle)、核糖体(Ribosome)、线粒体自噬(Mitophagy)、凋亡(Apoptosis)等。通过进一步GSEA富集分析，结果显示SRPK2同样在前列腺癌中激活细胞周期相关通路，如有丝分裂纺锤体(Mitotic Spindle)，G 2~M期检查点(G 2~M Checkpoint)，E2F靶点(E2F Targets)(NES>0)。为了进一步验证SRPK2对细胞周期的影响，成功构建SRPK2敲低的DU145细胞株，结果提示敲低SRPK2基因后，敲低组的S期高于空白载体组(DU145-KO-NC比DU145-KO-SRPK2为27.053±0.860比33.297±0.883， t＝-7.166， P<0.01)，而敲低组的增殖(DU145-KO-NC比DU145-KO-SRPK2为0.085±0.002比0.344±0.042， t＝10.655; P<0.01)、迁移(30 h：DU145-KO-NC比DU145-KO-SRPK2为0.929±0.066比0.690±0.057， t＝6.101， P<0.01)、侵袭能力(DU145-KO-NC比DU145-KO-SRPK2为81.667±4.163比42.333±7.572， t＝5.750， P<0.05)低于空白载体组，差异均具有统计学意义。 结论:SRPK2可能通过促进细胞周期从而影响前列腺癌进展。

目的:探讨肿瘤抑制因子微小RNA(miRNA，miR)-149-5p对肾癌细胞转移潜能的影响及机制。方法:GRC-1细胞分成miR-149-5p组(转染miR-149-5p mimics)、miR-NC组(转染mimics control)、miR-149-5p＋丝氨酸-精氨酸蛋白激酶1(SRPK1)组(共转染miR-149-5p mimics、pcDNA3.1-SRPK1)、miR-149-5p＋vector组(共转染miR-149-5p mimics、pcDNA3.1)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-149-5p水平，Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力变化，蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平。利用在线靶基因预测软件发现SRPK1可能是miR-149-5p的靶基因，双荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。应用SPSS 21.0统计软件分析。结果:miR-149-5p组的GRC-1细胞中miR-149-5p(2.69±0.27比1.01±0.08)和E-cadherin(0.81±0.09比0.42±0.05)水平显著高于miR-NC组，侵袭数目[(70.81±6.35)个比(110.64±9.67)个] 、迁移数目[(108.46±9.27)个比(162.76±12.71)个]、N-cadherin(0.46±0.05比0.79±0.11)和SRPK1(0.45±0.06比0.92±0.08)蛋白水平显著低于miR-NC组，差异均有统计学意义( FmiR-149-5p＝95.385， F侵袭数目＝20.216， F迁移数目＝22.010， FN-cadherin＝15.100， FE-cadherin＝31.331， FSRPK1＝31.785， P<0.05)。共转染SRPK1野生型质粒的miR-149-5p组细胞荧光素酶活性(0.37±0.04比1.00±0.11)显著低于miR-NC组，差异有统计学意义( t＝16.150， P<0.05)。共转染SRPK1突变型质粒的miR-149-5p组细胞荧光素酶活性(0.99±0.10比1.00±0.09)与miR-NC组比较差异无统计学意义( t＝0.220， P>0.05)。miR-149-5p＋SRPK1组的GRC-1细胞中E-cadherin(0.45±0.04比0.80±0.08)水平显著低于miR-149-5p＋vector组，侵袭数目[(99.51±7.48)个比(71.84±5.37)个]、迁移数目[(145.06±11.14)个比(107.63±10.20)个]、N-cadherin(0.86±0.10比0.47±0.04)和SRPK1(0.89±0.06比0.50±0.07)蛋白水平显著高于miR-149-5p＋vector组，差异均有统计学意义( tSRPK1＝7.327， t侵袭数目＝5.205， t迁移数目＝4.292，tN-cadherin＝6.272， tE-cadherin＝6.778， P<0.05)。 结论:肿瘤抑制因子miR-149-5p靶向负调控SRPK1表达降低肾癌细胞的迁移和侵袭能力。

目的:观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并进一步探究其分子机制。方法:利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达；构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC)，包装慢病毒颗粒，分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2)；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化；采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化；采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化；采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果:Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织( P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检测结果显示病毒感染后的细胞SPRK1在mRNA和蛋白水平均明显下调；在慢病毒感染后的T24细胞中，第3~5天干扰组的吸光度值均低于阴性对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)；在慢病毒感染后的5637细胞中，第2~5天干扰组的吸光度值均低于阴性对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)；Transwell细胞迁移和侵袭实验显示：与阴性对照组比较，干扰组的迁移和侵袭的膀胱癌细胞数目均明显减少，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；Western blot结果显示，与阴性对照组比较，干扰组的E-cadherin表达量增加，而N-cadherin和vimentin的表达明显减少，同时AKT通路蛋白p-AKT及p-GSK3β明显下调，差异均有统计学意义( P<0.001)。 结论:SRPK1基因在膀胱癌组织中高表达，下调SRPK1的表达可抑制膀胱癌细胞的增殖，并降低膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。

目的 研究HL-7702、MHCC-97L、MHCC-97H细胞中的GPC3、HIF-1ɑ和SRPK2中的mRNA、蛋白表达情况,探讨其与肝细胞癌(HCC)的相关性.方法 研究这3种细胞系中GPC3、HIF-1ɑ、SRPK2 3种基因的蛋白和mRNA的表达情况,需要通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot).结果 在线网站分析结果 显示,相对这3种基因表达低的HCC患者而言,高表达的生命周期明显降低(P<0.05).体外实验证明,高表达的HCC细胞表达的GPC3和SRPK2、HIF-1ɑ的mRNA和蛋白的表达水平都比HL-7702的高,且MHCC-97H与MHCC-97L细胞相比,各基因的表达水平较高.相关性分析显示HIF-1ɑ与SRPK2呈正相关(r=0.69),GPC3与SRPK2呈正相关(r=0.23).结论 HCG的转移能力越强,GPC3、HIF-1ɑ、SRPK2 的蛋白和mRNA的表达水平也越高,而且这3种基因与GPC3的表达也呈正相关.

背景 多发性骨髓瘤发病率长期居高不下,但目前关于磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)信号通路和M2 巨噬细胞极化促进多发性骨髓瘤发生进展的研究较少.目的 探讨M2 巨噬细胞在多发性骨髓瘤患者中的表达及PI3K/AKT信号通路促进M2 巨噬细胞极化的机制研究.方法 选取 2021 年 10 月—2022年 4 月于桂林医学院附属医院血液内科确诊的多发性骨髓瘤患者 48 例为试验组,选取同期健康志愿者(血液内科骨髓移植健康供者)30 名为对照组.取 2 组研究对象外周血并分离单个核细胞,流式细胞术检测M2 巨噬细胞比例.采用细胞传代培养RPMI8226 细胞,通过佛波酯分化培养单核巨噬细胞THP-1 为巨噬细胞.根据实验需要将瘤细胞培养并采用siRNA转染沉默磷酸酶基因(PTEN)分成 3 组:空白组、siRNA-PTEN实验组、siRNA对照组;收集以上 3 组细胞培养基上清液加入巨噬细胞共培养体系后分为 4 组:M0 巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN上清液组、siRNA上清液组.采用Western blot实验检测多发性骨髓瘤细胞培养的空白组、siRNA-PTEN实验组、siRNA对照组的AKT、p-AKT、PI3K-p85、p-PI3K-p85 蛋白表达水平.采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测多发性骨髓瘤细胞培养的空白组、siRNA-PTEN实验组、siRNA对照组的基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 的mRNA表达水平.采用流式细胞术检测多发性骨髓瘤上清液共培养的M0 巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN上清液组、siRNA上清液组M2 巨噬细胞中特异性抗体CD163、CD206、F4/80 表达水平.采用荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤上清液共培养的M0 巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN上清液组、siRNA上清液组M2 巨噬细胞特异标志物精氨酸酶1(ARG-1)、白介素10(IL-10)的mRNA表达水平.结果 试验组M2巨噬细胞表达水平高于对照组(t=0.855,P<0.001).siRNA-PTEN实验组中p-AKT/AKT、p-PI3K-p85/PI3K-p85 蛋白表达水平均高于空白组和siRNA对照组(P<0.05).siRNA-PTEN实验组中MMP2、MMP9 的mRNA表达水平均高于空白组和siRNA对照组(P<0.05).siRNA-PTEN上清液组M2 巨噬细胞特异性抗体CD163+F4/80、CD206+F4/80 表达水平高于瘤细胞上清液组和siRNA上清液组(P<0.05).siRNA-PTEN上清液组M2 巨噬细胞特异标志物ARG-1、IL-10 的mRNA表达水平高于瘤细胞上清液组和siRNA上清液组(P<0.05).结论 多发性骨髓瘤患者中M2 巨噬细胞表达上调,多发性骨髓瘤细胞可通过激活PI3K/AKT信号通路促进M2 巨噬细胞极化,调控骨髓瘤细胞微环境.

胃癌是常见的恶性肿瘤之一,世界范围内发病率占恶性肿瘤第4位,病死率居第2位[1].越来越多的研究认为肿瘤的发生是一系列分子生物学作用的结果.早期诊断早期治疗,能够提高胃癌患者的生存率,因此探索敏感度和特异度较高的肿瘤标记物,早期发现胃癌,能够提高胃癌患者生存率[2].丝氨酸-精氨酸蛋白特异性激酶1 (serine-arginine protein ki-nase 1,SRPK1)是一种对精氨酸/丝氨酸富含结构域(RS结构域)有很高特异性的RNA剪接激酶,SRPK1在肿瘤的发展过程通过识别精氨酸,磷酸化丝氨酸进而导致肿瘤的进展[3].很多研究报道SRPK1在多种肿瘤的发生中起重要作用,其中在非小细胞肺癌中,Liu等[4]发现过表达的SRPK1表达可以促进肺癌细胞的增殖、侵袭、转移及促进肿瘤形成,推测SRPK1作为癌基因在非小细胞肺癌形成过程中起作用.

近年来,随着全基因组测序技术的应用,骨髓增生异常综合征(MDS)中越来越多的基因突变被研究与分析.MDS中常见的基因突变涉及RNA剪接、DNA甲基化、组蛋白修饰、转录因子、黏连蛋白复合物、信号转导通路激酶、DNA修复及RAS信号通路等.越来越多研究结果证实,相关基因突变与MDS独特的临床特征与预后相关.例如,TP53、富含精氨酸/丝氨酸丰富剪接因子(SRSF)2基因突变与MDS疾病进展相关,伴有TET2基因突变的MDS患者对去甲基化药物治疗反应较好,zeste基因增强子同源物(EZH)2、ETS变异基因(ETV)6、RUNX1等基因突变与MDS预后不良相关.笔者拟就MDS相关分子遗传学研究进展进行综述.

目的:研究微小RNA(miR-136)通过靶向CD163抑制CD68+M0巨噬细胞向CD68+CD163+ M2巨噬细胞极化的作用机制.方法:采用流式细胞术检测20例肝细胞肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织中CD68+ CD163+ M2巨噬细胞的比例,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肿瘤及癌旁组织中miR-136的水平.分离人脾脏中CD68+ M0巨噬细胞,将细胞分为对照组(Control),miRNA模拟物组(miRNA mimic)和miRNA抑制物组(miRNA inhibitor).IL-4和IL-13 10ng/mL诱导巨噬细胞M2型极化.采用流式细胞术检测CD68+ CD163+ M2巨噬细胞比例,Western blot检测细胞中CD163、TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达以及M2巨噬细胞标志物精氨酸酶(Arg1)的表达,机制研究中检测JAK/STAT信号中蛋白酪氨酸激酶1(JAK1)、信号转导子与转录激活子1(STAT1)和STAT6的水平,PI3K/AKT信号中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)的表达.荧光素酶报告基因法确定miR-136与CD163的靶向关系.结果:肝癌组织中M2型巨噬细胞比例显著高于癌旁组织,而miR-136的表达显著低于癌旁组织,两者表达具有负相关.荧光素酶报告基因结果显示CD163是miR-136的靶基因.miRNA mimic组中CD68+ CD163+ M2巨噬细胞比例显著低于miRNA inhibitor组,与Control组比较无统计学差异.机制检测中发现miRNA mimic中JAK1、STAT6、PI3K、AKT1低表达,说明miR-136可以间接抑制JAK1-STAT6以及PI3 K-AKT1的表达,抑制M2巨噬细胞极化.结论:miR-136可以靶向CD163抑制M2型巨噬细胞极化,其作用机制与JAK1-STAT6以及PI3 K-AKT1抑制有关,这是M2巨噬细胞在肝癌免疫中的调节机制之一.

目的:交泰丸为中医治疗失眠的经典方剂,目前临床采用异病同治理念治疗糖尿病,且有较好的疗效,明确其潜在作用机制具有重要意义.方法:该研究基于整合药理学策略及平台(integrative pharmacology platform of traditional Chinese medicine TCMIP)研究交泰丸的作用靶点及机制等,构建其治疗糖尿病的核心靶点网络,进一步对获取靶点进行基因功能及通路富集分析,构建可视化的“交泰丸-活性成分-核心靶点-关键通路”的多层次关联网络.结果:共得到交泰丸中活性成分28个.这些成分治疗糖尿病涉及核心靶点187个,包括疾病靶点15个,如精氨酸加压素受体2(vasopressin V2 receptor,AVPR2),受体活性修饰蛋白1(receptor activity-modifying protein 1,RAMP1),受体活性修饰蛋白1(receptor activity-modifying protein 3,RAMP3),胰岛索受体(insulin receptor,INSR)及胰岛素样生长因子受体1(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1 R)等;潜在药物靶点71个,如细胞周期蛋白依赖性激酶9 (cyclin-dependent kinase 9,CDK9),葡萄糖激酶(glucokinase,GCK),核转录因子-κB抑制剂α(NF-kappa-B inhibitor alpha,NF-κB1α),核转录因子-κB p100亚型(NF-kappa-B p100 subunit,NFKB2)及缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF1α)等.结论:交泰丸治疗糖尿病的机制涉及活化腺苷酸环化酶活性、细胞胰高血糖素反应、激活丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活性、内分泌系统、促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)信号通路、趋化因子及磷脂酰肌醇三激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-serine/threonine kinases,PI3K-Akt)等生物过程和信号通路等.该研究为深入探讨交泰丸治疗糖尿病的潜在机制提供了科学依据.

目的 探讨丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶-2(SRPK2)在胃癌组织中的表达情况与胃癌患者临床特征及预后的关系.方法 收集胃癌患者经手术切除的胃癌组织及相应的癌旁组织标本各85例,采用免疫组织化学法检测SRPK2在85例胃癌患者胃癌组织及癌旁组织中的表达情况,分析胃癌组织中SRPK2阳性表达与胃癌患者临床特征及预后的关系.结果 免疫组化染色结果显示,胃癌组织中SRPK2的阳性表达率明显高于癌旁组织(P﹤0.01).浸润深度(根据T分期)为T3～4期、有淋巴结转移、肿瘤直径﹥5 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者胃癌组织中SRPK2的阳性表达率均高于浸润深度(根据T分期)为T1～2期、无淋巴结转移、肿瘤直径≤5 cm、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期的胃癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤部位胃癌患者胃癌组织中SRPK2的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).Kaplan-Meier生存曲线显示,SRPK2阳性表达的胃癌患者的术后5年总生存率低于SRPK2阴性表达的胃癌患者(P﹤0.05).结论 SRPK2在胃癌组织中的阳性表达率较高,可能与胃癌的发生、发展有关.SRPK2阳性表达的胃癌患者的预后较差,其可能成为胃癌临床诊疗及预后评估的生物学标志物.